乌头提取物通过调控蛋白激酶C信号通路对心力衰竭大鼠钙转运及心肌线粒体呼吸功能的影响

目的探究乌头提取物通过调控蛋白激酶C(Protein kinase C,PKC)信号通路对心力衰竭大鼠钙转运及心肌线粒体呼吸功能的影响。方法将30只雄性SD大鼠随机分为3组,假手术组9只、模型组9只和药物组9只(假手术组大鼠造模时死亡1只,造模组造模失败1只,死亡1只)。根据人临床应用剂量及大鼠换算系数折算给药剂量,药物组大鼠灌胃乌头提取液0.04 mg/kg,其余两组大鼠均灌胃等量的生理盐水干预。均连续干预28 d后,观察比较3组大鼠心功能指标[左心室收缩压(Left ventricular systolic pressure,LVSP),左心室舒张末压(Left ventricular end diastolic pressure,LVEDP);左室内压上升最大速率(LV+dp/dt_(max));左室内压下降最大速率(LV-dp/dt_(max))];RT-PCR检测心肌细胞中DAG-β、PKC-εmRNA和心肌组织中钙转运蛋白mRNA表达;检测线粒体呼吸功能;蛋白质印迹检测线粒体呼吸链复合酶Ⅰ~Ⅴ的蛋白表达。结果模型组大鼠LVSP、LV+dp/dt_(max)、LV-dp/dt_(max)及心肌钙转运蛋白RyR2、SERCA2A mRNA表达较假手术组降低,LVEDP及DAG-β、PKC-εmRNA表达较假手术组升高,差异有统计学意义(P<0.05);药物组大鼠LVSP、LV+dp/dt_(max)、LV-dp/dtma及心肌钙转运蛋白RyR2、SERCA2A mRNA表达高于模型组,LVEDP及DAG-β、PKC-εmRNA表达较模型组低,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠态3呼吸、最大呼吸、RCR1、RCR2值及线粒体呼吸链复合酶Ⅲ、Ⅳ表达较假手术组均降低,态4呼吸较假手术组升高,差异有统计学意义(P<0.05);模型组比较,药物组大鼠态3呼吸、最大呼吸、RCR1、RCR2值及线粒体呼吸链复合酶Ⅲ、Ⅳ表达均升高,态4呼吸降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论乌头提取物能抑制PCK信号通路的激活,修复心室细胞钙转运,改善线粒体呼吸功能,进而修复心衰。

疲劳运动条件下对大鼠心肌线粒体膜结构的研究

本文以耗竭跑步和耗竭游泳的大鼠为急性运动实验模型,观察了其心肌线粒体膜的脂质过氧化水平,测定了其心肌线粒体膜的流动性及心肌组织和线粒体的钙含量。两种方式运动后心肌线粒体膜脂质过氧化水平显著高于安静组,心肌线粒体膜流动性也低于安静组。耗竭跑后心肌组织和心肌线粒体的钙含量均高于安静组。结果说明,极度疲劳运动后大鼠心肌线粒体有自由基伤害,心肌膜及线粒体膜离子通透性改变。

牛磺酸对大鼠力喝运动时第二信使及心肌线粒体中钙离子含量变化的影响

以大鼠力竭运动为模型，研究了牛磺酸对心肌中环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）、环磷酸鸟普（ｃＧＭＰ）水平和心肌线粒体钙离子含量的影响。结果发现：力竭运动可造成大鼠心肌中ｃＡＭＰ和cＧＭＰ水平显著升高，心肌线粒体Ｃａ２＋含量显著增加，造成心肌线粒体和心肌的损伤，而牛磺酸可显著抑制力竭运动后大鼠心肌中ｃＡＭＰ、ＧＭＰ的升高，抑制心肌线粒体的钙超载。结果提示：牛磺酸可显著抑制力竭运动后大鼠心肌第二信使水平的升高及心肌线粒体中钙超载现象，说明牛磺酸有减轻和防止力竭运动后心肌损伤的作用。

川芎嗪对缺血-再灌注损伤兔心肌线粒体结构及功能的影响

为了探讨川芎嗪对心肌缺血 再灌注损伤 (MIRI)时心肌细胞线粒体功能及结构的影响。本实验选用日本大耳白兔 30只 ,随机分为正常对照组 (A组 )、心肌缺血 再灌注损伤组 (B组 )和心肌缺血 再灌注损伤 +川芎嗪治疗组(C组 )。复制MIRI模型 ,分别观察心肌线粒体呼吸功能、Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]m)、丙二醛浓度 (MDA)、超氧化物歧化酶活性 (SOD)及超微结构的改变和心肌组织三磷酸腺苷 (ATP)、二磷酸腺苷 (ADP)、一磷酸腺苷 (AMP)含量、总腺苷酸量 (TAN)、能荷 (EC)的变化。结果发现 ,C组与B组比较 ,线粒体呼吸控制率 (RCR)、Ⅲ态呼吸速率 (ST3)、SOD、面密度 (Sv)、比表面 (δ)明显升高 ,Ⅳ态呼吸速率 (ST4 )、[Ca2 + ]m 、MDA、体密度 (Vv)、横径 (Hd)显著降低 ,心肌组织ATP、ADP、TNA及EC均明显增高 ;且与A组比较 ,ST3、ST4 、SOD、Vv、Sv、δ、数密度 (Nv)、纵径 (Vd)及ADP、AMP、TNA无明显差异。可见 ,川芎嗪可通过降低氧自由基水平和减轻钙超载 ,而改善缺血 再灌注损伤心肌的线粒体功能及结构。

长期运动训练对老年小鼠心肌线粒体抗氧化能力的影响

采用小鼠跑转笼运动方式，研究了从５月龄开始为期８个月的运动训练对小鼠心肌抗氧化应激能力的影响。结果发现，随年龄的增长心肌线粒体ＭｎＳＯＤ和ＧＳＨ－ｐｘ活性有升高趋势，而运动训练组小鼠心肌线粒体ＭｎＳＯＤ和ＧＳＨ－ｐｘ活性又显著高于对照组。这表明，衰老过程中心肌线粒体自由基的产生增加，从而诱导抗氧化酶产生增加。而长期有规律的适量运动训练能适量增强机体抗氧化能力，抑制脂质过氧化。

低硒大鼠心肌线粒体CytC含量的动态变化及其在心肌细胞凋亡中的作用

目的检测低硒大鼠心肌线粒体中细胞色素C(CytC)的蛋白含量及心肌细胞凋亡情况,探讨低硒时CytC在线粒体介导的细胞凋亡中的作用机制。方法构建低硒大鼠模型,于喂养20、30、40周时提取心肌线粒体,Western Blot法检测线粒体中CytC的蛋白表达;免疫组织化学技术(SP法)对死亡结构域蛋白FADD进行原位染色,统计阳性细胞指数,并对CytC与心肌细胞凋亡指数进行相关性分析。结果低硒组CytC的表达与相应时段的对照组相比均降低,且随低硒喂养时间延长,降低更为明显,差异均有统计学意义(P<0.05);各时间对照组间心肌线粒体中CytC的表达无明显差异;免疫组化染色显示,随着喂养时间的延长,低硒组大鼠心肌细胞凋亡加重;相关性分析显示,线粒体内CytC表达与心肌细胞凋亡指数呈负相关(rs=-0.858,P<0.01)。结论低硒可影响大鼠心肌线粒体中CytC蛋白的表达;CytC表达与心肌细胞凋亡指数具有相关性,提示CytC在线粒体介导的心肌细胞凋亡中起重要作用。

油茶皂甙对缺血大鼠心肌线粒体Na^+、Ca^(2+)、Mg^(2+)含量及ATPase活性的影响

目的观察大鼠心肌缺血时心肌线粒体Na +、Ca2 +、Mg2 +含量、ATPase活性的变化及油茶皂甙(SQS)对它们的影响。方法以皮下多点注射异丙肾上腺素(ISO4mg·kg-1)诱导心肌缺血损伤为模型 ,测定Na +、Ca2 +、Mg2 +含量及ATPase活性。结果心肌缺血时线粒体Mg2 + 含量明显减少 ,Na+ 、Ca2 + 含量显著增多 ;Na+ _K + _ATPase、Ca2 + _Mg2 +_ATPase活性显著下降。SQS(0 2mg·kg-1,iv)能显著对抗缺血心肌线粒体Na +、Ca2 +、Mg2 + 含量及Na+ _K + _ATPase、Ca2 + _Mg2 + _ATPase活性的上述改变。结论SQS具有抗钠钙超载的心肌细胞保护作用。

活血祛痰法对自发性高血压大鼠心肌线粒体膜的影响

【目的】探讨活血祛痰法对自发性高血压大鼠 (SHR)心肌线粒体超微结构及其Ca2 +-Mg2 +ATP酶、膜脂质过氧化的作用。【方法】以正常Wistar大鼠为对照组 ,将SHR分为 14周龄组、 2 8周龄组和中药治疗组 ,分别在 14周和 2 8周取材 ,透射电镜分析线粒体膜形态计量 ,并测定线粒体膜Ca2 +-Mg2 +ATP酶活性、膜丙二醛含量。【结果】SHR各组线粒体比表面小于对照组 ,心肌线粒体Ca2 +-Mg2 +ATP酶活性均低于正常对照组 ,而丙二醛含量高于正常对照组 ,且随着SHR病程延长而呈上升趋势 ;中药治疗能降低该趋势。

中药干预心肌线粒体氧化应激损伤的疗效-基于动物模型的系统评价

目的:系统评价中药对动物心肌线粒体氧化应激损伤的干预疗效。方法:计算机检索Pub Med(1966—2015.7)、Embase(1966—2015.7)、CBM(1978—2015.7)、CNKI(1915—2015.7)、VIP(1989—2015.7)及Wanfang(1990—2015.7)等数据库,纳入中药干预心肌线粒体氧化应激损伤的动物实验,由两名研究者独立评价纳入研究的质量、提取数据并交叉核对,使用Rev Man 5.2软件进行Meta分析。结果:共纳入17个研究。系统评价及Meta分析结果显示:中药可上调模型动物心肌线粒体超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平、改善线粒体脂质过氧化损伤相关谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性及丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量,减轻线粒体DNA(mitochondrial deoxyribonucleic acid,mt DNA)损伤。结论:中药可通过干预心肌线粒体氧化应激损伤发挥临床疗效。

丙泊酚对Ca^(2+)诱导大鼠离体心肌线粒体损伤的影响

目的探讨丙泊酚对Ca2+诱导大鼠离体心肌线粒体损伤的影响。方法Wistar大鼠35只,断头处死迅速取出心脏制备线粒体悬液后,随机均分为五组:空白对照组(C组);CaCl2组(Ca2+组),加入CaCl2100nmol/mg prot;P25组,加入丙泊酚25μmol/L;P50组,加入丙泊酚50μmol/L;P100组,加入丙泊酚100μmol/L。P25、P50、P100组也加入CaCl2100nmol/mg prot。20min后采用Western blot法测定线粒体释放细胞色素C(CytC)和凋亡诱导因子(AIF)的水平。结果与C组比较,其他四组CytC和AIF释放增加(P<0.01);与Ca2+组比较,P25组、P50组、P100组CytC、AIF释放减少(P<0.01);P50组、P100组又较P25组Cyt-C释放减少(P<0.01)。结论丙泊酚25、50、100μmol/L均可减轻Ca2+诱导大鼠离体心肌线粒体损伤,从而产生心肌保护作用。

增龄对大鼠心肌线粒体DNA氧化损伤的影响

目的 探讨增龄对大鼠心肌线粒体 DNA(mt DNA)缺失、线粒体呼吸链酶复合体及 ATP合成的影响。方法 Wistar雄性大鼠分为 3组 :幼年组 (1月龄 )、青年组 (6月龄 )各 1 2只和老年组 (2 4月龄 ) 1 0只。心肌线粒体 DNA缺失、线粒体呼吸链酶复合体及腺苷三磷酸 (ATP)合成分别用聚合酶链反应 (PCR)、酶动力学和生物发光技术进行测定。结果 3组大鼠均有不同程度 mt DNA缺失。老年组 mt DNA缺失 (2 .0 9± 1 .62 )较幼年组 mt DNA缺失 (0 .77± 1 .1 6)明显增高 (P<0 .0 5) ;较青年组 mt DNA缺失 (1 .54± 1 .1 7)也有升高的趋势 (P>0 .0 5)。老年组心线粒体呼吸链复合酶 活力 (2 347.2 1± 62 3.33)均较青年组 (3 859.1 2± 70 3.53)、幼年组 (4776.90± 548.63)明显降低 (P<0 .0 1 )。老年组心线粒体 ATP合成量 (1 96.95± 33.2 6)较青年组 (337.53± 62 .1 8)明显降低 (P<0 .0 1 )。心线粒体呼吸链复合酶 活力 3组间无明显性差异 (P>0 .0 5)。结论 大鼠线粒体 DNA氧化损伤与衰老有一定的相关性。

茶多酚对大强度耐力训练大鼠心肌线粒体抗氧化能力及ATP酶活性影响的实验研究

目的:探讨茶多酚对大强度耐力训练大鼠心肌线粒体抗氧化能力及ATP酶活性的影响,为茶多酚作为运动补剂的开发提供实验依据。方法:选取24只大鼠,随机分为安静组、训练组和训练加药组,训练组和训练加药组按照训练模型进行为期6周的耐力训练,最后一次训练进行一次力竭运动,力竭运动后取心肌组织并进行样本处理。内容:通过建立大强度耐力训练大鼠模型,测定心肌线粒体ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及过氧化氢(H2O2)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量,研究茶多酚对大强度耐力训练大鼠心肌线粒体的保护作用。结论:茶多酚可明显提高大鼠心肌线粒体在大强度耐力运动中的能量供给、抗氧化能力,防止心肌线粒体的氧化损伤,保证了运动中心脏的正常生理功能。

大强度运动对大鼠心肌线粒体膜通透性转换孔状态的影响

目的:观察大鼠一次性大强度游泳运动后不同时相心肌线粒体膜通透性转换孔(PTP孔)的性状和心肌超微结构等指标的变化情况,探讨线粒体损伤与PTP孔变化之间的关系。方法:将32只成年雄性SD大鼠随机分为A组(空白对照组,n=8)和B组(大强度运动组,n=24)。B组又随机分为运动后即刻组(B1组,n=8),运动后12h组(B2组,n=8)和运动后24h组(B3组,n=8)。检测各组大鼠线粒体前向角散射(FSC)、线粒体90°侧向角散射(SSC)和线粒体内Rhodamine123的荧光强度值(FL1);电镜观察各组大鼠左室前壁心肌纤维超微结构变化情况。结果:B2组FSC值显著高于其他3组(P<0.05),B2组SSC值和FL1值显著低于其他3组(P<0.05)。电镜结果表明,大强度运动可造成大鼠心肌线粒体损伤,以运动后12h损伤最为严重。结论:大强度游泳运动可能诱发大鼠心肌线粒体膜通透性转换孔的开放,促使线粒体外的物质内流并影响线粒体内结构的改变;大面积的线粒体损伤可能与心肌线粒体膜通透性转换孔的开放有重要的关联性。

富硒板党对力竭运动大鼠心肌线粒体抗氧化作用的影响

目的:探讨富硒板党对力竭运动大鼠心肌线粒体抗氧化作用的影响。方法:建立力竭运动大鼠动物模型,测定心肌线粒体超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的活性以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)和过氧化氢(H2O2)的含量。结果:力竭运动引起大鼠心肌线粒体抗氧化酶GSH-Px、SOD、CAT活性显著下降,心肌线粒体MDA、H2O2含量显著升高(P<0.01);运动加药组大鼠心肌线粒体GSH-Px、SOD、CAT活性均有明显升高,心肌线粒体MDA、H2O2含量明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:富硒板党可明显提高力竭运动大鼠心肌线粒体的抗氧化能力,对心肌线粒体有保护作用。

心功能衰竭大鼠模型心肌线粒体蛋白的差异表达分析

利用差异蛋白质组的方法识别心功能衰竭大鼠心肌代谢的异常 ,以期发现新的治疗靶点。对大鼠行冠状动脉左前降支结扎 ,术后 4周 ,左心室射血分数达 4 6 .4 %± 10 .9% ,成功建立心功能衰竭大鼠模型。实验动物分心功能衰竭组 (n =8)和对照组 (n =8) ,分别取左心室进行线粒体抽提。利用双向凝胶电泳技术显示差异蛋白的表达谱。再经胶内酶解 ,行质谱鉴定和蛋白数据库分析。结果发现 ,双向电泳显示 3个蛋白位点表达有显著差异 ,其中一条蛋白被证实为乙醛脱氢酶 2 ,它在心功能衰竭心肌中的表达显著下降。在心肌梗死后 3、7、14及 2 8天心肌乙醛脱氢酶 2mRNA的表达呈逐渐下降趋势。结果提示 ,在心功能衰竭大鼠的心肌线粒体中乙醛脱氢酶 2表达显著下调 ,而乙醛脱氢酶与硝酸甘油的转化有关。这为临床心功能衰竭患者使用硝酸甘油提供了很有价值的依据。

大鼠严重烧伤早期心肌线粒体Ca^(2+)转运变化及其机制研究

目的 探讨严重烧伤早期心肌线粒体Ca2 +转运变化及其发生机制。方法 复制 30 %Ⅲ度烫伤大鼠模型 ,测定伤后1、3、6、1 2、2 4h大鼠心肌线粒体Ca2 +转运速率 ,同时检测影响Ca2 +转运的相关指标———心肌细胞胞浆Ca2 +浓度 ( [Ca2 +]c)、线粒体膜电位及ATP含量。结果 伤后 1h心肌线粒体Ca2 +摄取速率明显升高 ,而Ca2 +释放速率无明显改变 ,但 3、6、1 2、2 4h心肌线粒体Ca2 +摄取与释放速率、线粒体膜电位、ATP含量均显著降低 ,且烧伤后线粒体Ca2 +摄取速率与膜电位呈明显正相关 ,Ca2 +释放速率与线粒体ATP含量呈显著正相关。而伤后 3、6、1 2、2 4h心肌 [Ca2 +]c均明显高于正常对照组。结论 ①烧伤初始心肌线粒体Ca2 +摄取加强 ,伤后续阶段线粒体Ca2 +转运紊乱 ;②线粒体膜电位下降、ATP含量降低是烧伤后续阶段心肌线粒体Ca2 +转运紊乱的主要原因 ,伤后 [Ca2 +]c升高或有升高趋势也参与严重烧伤早期心肌线粒体Ca2 +转运变化的发生。

硒缺乏和运动对大鼠心肌线粒体心磷脂含量和细胞色素C氧化酶活性的影响

本研究的目的是通过建立硒缺乏动物模型，观察硒缺乏和运动的联合作用对心肌线粒体心磷脂含量和细胞色素Ｃ氧化酶活性的影响。结果显示：安静状态下硒缺乏大鼠的心肌线粒体心磷脂含量和细胞色素Ｃ氧化酶活性与硒充足大鼠没有显著性差别。急性运动后，①硒缺乏大鼠的心磷脂含量呈降低趋势，并显著低于同组补硒大鼠，②补硒大鼠的细胞色素Ｃ氧化酶活性增加，并显著高于安静补硒大鼠，但硒缺乏大鼠没有呈现这种变化，并低于补硒大鼠。长期训练的硒缺乏大鼠的心磷脂含量显著低于补硒训练大鼠。这些结果提示，具有良好硒营养状态的机体在运动应激中提高能量代谢酶的活性以适应机体的需要，而硒缺乏的机体对运动应激不能作出适应性改变。

氧化苦参碱对感染性休克大鼠心肌线粒体结构和功能的保护作用

目的探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对感染性休克大鼠心肌线粒体结构和功能的保护作用。方法采用大鼠盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)复制大鼠感染性休克模型,随机将56只SD大鼠分为假手术组、OMT对照组、模型(CLP)组、CLP+OMT(52、26、13 mg/kg)组、阳性药物对照(CLP+地塞米松10mg/kg)组。观察OMT对感染性休克大鼠心肌线粒体超微结构改变的影响。采用比色法测定各组大鼠心肌组织琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenase,SDH)活性以及心肌钙含量的改变。结果不同剂量的OMT能明显升高感染性休克大鼠心肌组织中SDH活性(P<0.01)及降低心肌钙含量(P<0.01),改善感染性休克所致的心肌线粒体超微结构损伤,并且该作用在OMT 52、26 mg/kg剂量组与阳性药物对照组的结果相一致。结论 OMT(52、26、13mg/kg)能对抗大鼠感染性休克引起的心肌线粒体结构和功能损伤,其机制与OMT改善感染性休克过程中心肌细胞能量代谢状况、减少心肌细胞内钙超载有关。

黄精提取物对大强度耐力训练大鼠心肌线粒体抗氧化能力及ATP酶活性影响的实验研究

目的:探讨黄精提取物对大强度耐力训练大鼠心肌线粒体抗氧化能力以及ATP酶活性的影响,为黄精作为运动补剂的开发提供试验依据。方法:通过建立大强度耐力训练大鼠模型,测定心肌线粒体ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及过氧化氢(H2O2)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量,研究黄精提取物对大强度耐力训练大鼠心肌线粒体的保护作用。结果:黄精提取物可明显提高大鼠心肌线粒体在大强度耐力运动中的能量供给、抗氧化能力,防止心肌线粒体的氧化损伤,保证了运动中心脏的正常生理功能。

分光光度法检测心肌线粒体渗透性转换

目的 :线粒体渗透性转换 (mitochondriapermeabilitytransition ,MPT)是反映线粒体膜完整和功能的重要指标。它的测定是根据MPT增大时线粒体膜内外渗透失衡 ,导致吸光度明显减少的原理。我们参照国外文献资料 ,结合本实验室的条件 ,采用UV 2 40分光光度计 ,建立了分光光度法测定心肌线粒体渗透性转换。方法 :以其在 5 40nm波长下吸光度减少的幅度及达到平衡所用的时间ΔA/min值反映MPT的变化。结果和结论 :通过观察测定体系中不同 pH值 ,不同线粒体蛋白量 ,以及不同温度条件下对线粒体PT的影响 ,认为pH7.4、0 .5mgpro/ml线粒体以及 2