lncRNA MALAT1通过调控miR-181a促进氧化应激模型中的心肌细胞损伤

目的在心肌细胞氧化应激模型中探究长链非编码RNA(lncRNA)转移相关肺腺癌转录物1(MALAT1)与微小RNA-181a(miR-181a)的表达及作用机制。方法qRT-PCR检测30例急性心肌梗死患者(AMI组)和30例健康对照组(Normal组)外周血中MALAT1与miR-181a的表达,Pearson相关性分析明确MALAT1与miR-181a在AMI中的相关性;lncBase在线预测数据库预测MALAT1与miR-181a之间的结合位点,并利用双荧光素酶基因报告实验进行验证;采用过氧化氢(H_(2)O_(2))处理人心肌细胞株AC16建立心肌细胞氧化应激模型,将沉默MALAT表达的siRNA(si-MALAT)和阴性对照si-NC转染入AC16细胞中,并将细胞分为:H_(2)O_(2)处理(H_(2)O_(2))组,H_(2)O_(2)+si-NC组,H_(2)O_(2)+si-MALAT组;CCK-8法检测各组细胞的增殖活性,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot实验检测各组细胞中促凋亡蛋白裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和凋亡抑制蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达水平。结果与Normal组相比,AMI组患者MALAT1的表达水平升高,而miR-181a的表达水平降低(P<0.05),且MALAT1和miR-181a表达呈负相关。lncBase在线预测数据库预测和双荧光素酶基因报告实验表明MALAT1可靶向调控miR-181a表达。与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+si-MALAT1组细胞活力升高(P<0.05),TUNEL阳性率降低(P<0.05),cleaved caspase-3和Bax表达水平降低(P<0.05),而Bcl-2的表达水平升高(P<0.05),H_(2)O_(2)+si-NC组均无明显改变(P>0.05)。结论LncRNA MALAT1在AMI患者中表达升高,可通过靶向抑制miR-181a促进氧化应激诱导的心肌细胞损伤。

丹参提取物联合瑞芬太尼通过调控Nrf2信号通路减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤

为探讨丹参提取物联合瑞芬太尼在减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤中的作用及其机制。本研究将H9c2心肌细胞分为对照组、模型组、丹参提取物组(Tan I组)、瑞芬太尼组(RPC)组和联合组。对照组细胞不做处理,模型组缺氧/复氧(HR)诱导的心肌细胞损伤模型,Tan I组在模型组的基础上给与1μmol/LTan I孵育24h,RPC组在模型组的基础上给与1μmol/LRPC孵育24h联合组在模型组的基础上同时给与1μmol/L Tan I和1μmol/L RPC孵育24 h。采用CCK-8测定各组细胞活力流式细胞术测定各组细胞凋亡率,采用Western blot测定各组细胞Nrf2和HO-1表达水平进一步转染Nrf2-siRNA分析Nrf2信号通路对Tan I联合RPC保护HR诱导H9c2心肌细胞损伤的影响。结果表明,HR诱导后H9c2心肌细胞的活力显著下降,药物处理后,Tan I组、RPC组和联合组H9c2细胞的细胞活力显著增加,且联合组的细胞活力改善与Tan I组和RPC组相比更显著;HR诱导后H9c2心肌细胞的凋亡率显著升高,药物处理后,Tan I组、RPC组和联合组H9c2细胞的细胞凋亡率显著下降,且联合组的细胞凋亡率下降水平与Tan I组和RPC组相比更显著;HR引起H9c2细胞Nrf2总蛋白表达和核Nrf2蛋白表达水平显著降低,各组给药后增加了总Nrf2蛋白和核Nrf2蛋白的表达,降低了细胞质中的Nrf2蛋白,且与Tan I组和RPC组相比联合组总Nrf2蛋白和核Nrf2蛋白的表达水平显著增高,细胞质中的Nrf2蛋白表达水平显著降低;转染Nrf2-siRNA后,Tan I联合RPC处理的H9c2心肌细胞中Nrf2和HO-1的表达均下降。丹参提取物联合瑞芬太尼可通过调控Nrf2信号通路减轻HR诱导的心肌细胞损伤。

MiR-140-3p调节PI3K/Akt通路减轻缺氧复氧心肌细胞损伤的实验研究

目的:探讨miR-140-3p靶向调节PI3K/Akt通路对缺氧复氧心肌细胞再灌注损伤的影响。方法:对大鼠来源的H9C2心肌细胞进行缺氧/复氧以诱导细胞损伤,使用miR-140-3p mimics及其对照(NC)转染H9C2心肌细胞,再使用10μmol/L LY294002处理过表达miR-140-3p的H9C2细胞。将心肌细胞分为6组,分别为对照组(CON组)、H/R组(Model组)、Model+NC组、Model+miR-140-3p mimics组、Model+miR-140-3p mimics+LY294002组、Model+LY294002组。采用荧光定量PCR(RT-PCR)法检测各组miR-140-3p相对表达量,CCK-8法检测各组心肌细胞活力,流式细胞仪检测各组心肌细胞凋亡率,Western blot检测各组磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Bax、Bcl-2、Cleaved-caspases-3表达量。结果:与CON组比较,Model组miR-140-3p表达量、细胞活力以及Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.05),Bax、Cleaved-caspases-3蛋白表达和凋亡率明显提高(P<0.05),与Model组比较,miR-140-3p过表达可上调miR-140-3p表达量、细胞活力以及Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白,下调Bax、Cleaved-caspases-3蛋白表达和凋亡率,LY294002可抑制miR-140-3p表达,下调细胞活力以及Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白,上调Bax、Cleaved-caspases-3蛋白表达和凋亡率。结论:MiR-140-3p可通过调节PI3K/Akt通路减轻缺氧复氧心肌细胞自噬和凋亡,进而减轻心肌损伤。

大黄酸对高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用及机制

目的:研究大黄酸(RH)对高糖处理的H9c2心肌细胞的保护作用及可能机制。方法:H9c2细胞分为正常葡萄糖浓度组(NG组,葡萄糖浓度为5.5 mmol/L)、高糖组(HG组,葡萄糖浓度为35 mmol/L)、高糖+大黄酸组(HG+RH 5组、HG+RH 10组、HG+RH 30组,大黄酸浓度分别为5、10、30μmol/L)。细胞增殖/凋亡检测(CCK-8)法检测各组细胞活力,蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测沉默信息调节因子1(Sirt1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)、线粒体转录因子A(TFAM)蛋白表达。H9c2细胞分为正常葡萄糖浓度组(NG组)、高糖组(HG组)、高糖+大黄酸组(HG+RH10组,RH为10μmol/L)、高糖+大黄酸+EX527组(HG+RH+EX527组,EX527为10μmol/L)。实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测Sirt1、PGC-1α、TFAM、核呼吸因子1(NRF-1)、解偶联蛋白2(UCP2)mRNA水平;Western Blot检测Sirt1、PGC-1α、TFAM蛋白表达。结果:与NG组比较,HG组细胞活力下降(P<0.05);不同浓度的大黄酸干预组细胞活力有一定程度升高,但差异无统计学意义(P>0.05);与NG组比较,HG组Sirt1、PGC-1α、TFAM蛋白水平明显下降(P<0.05);与HG组比较,浓度为10μmol/L的大黄酸干预组Sirt1、PGC-1α、TFAM蛋白水平均升高(P<0.05);与NG组比较,HG组Sirt1、PGC-1α、TFAM、NRF-1、UCP2 mRNA表达水平降低(P<0.05),与HG组比较,HG+RH10组Sirt1、PGC-1α、TFAM、NRF-1、UCP2 mRNA表达水平升高,而EX527处理组各指标表达较HG+RH10组降低(P<0.05)。结论:大黄酸对高糖诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能是通过激活Sirt1/PGC-1α通路实现的.

肿瘤坏死因子受体相关因子5对缺氧诱导心肌细胞损伤的影响及作用机制研究

目的:分析肿瘤坏死因子受体相关因子5(TRAF5)对缺氧诱导心肌细胞损伤的影响及相关分子机制。方法:体外培养H9c2细胞,以800μmol/L浓度的二氯化钴(CoCl2)处理细胞建立缺氧诱导心肌细胞损伤模型,采用脂质体转染法将TRAF5过表达质粒(pcDNA-TRAF5)和空载质粒(pcDNA-NC)转染至缺氧诱导的H9c2细胞。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞TRAF5基因表达水平,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,试剂盒法检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞中TRAF5、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达水平。结果:与Control组比较,Hypoxic组H9c2细胞中TRAF5 mRNA和蛋白表达水平均降低,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,细胞中LDH水平、MDA含量升高,SOD、GSH-Px水平降低,细胞中p-ERK/ERK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-JNK/JNK比值均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Hypoxic组比较,Hypoxic+pcDNA-TRAF5组H9c2细胞中TRAF5 mRNA和蛋白表达水平均升高,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,细胞中LDH水平、MDA含量降低,SOD、GSH-Px水平升高,细胞中p-ERK/ERK、p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-JNK/JNK比值均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:TRAF5通过介导心肌酶活性和氧化应激水平减轻缺氧诱导的心肌细胞损伤,其作用机制可能与调控MAPK信号通路有关。

松萝酸通过调节SphK1/S1P信号通路减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨松萝酸(UA)对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法 构建H9c2细胞H/R模型,使用0.5~64μmol/L UA分别预处理H9c2细胞,MTT法筛选UA浓度;H9c2细胞随机分为对照组、模型组、UA低剂量组(1μmol/L)、UA中剂量组(4μmol/L)、UA高剂量组(16μmol/L)和UA高剂量+Benzyl butyl phthalate(BBP)组(16μmol/L UA+100 nmol/L BBP),检测各组细胞增殖活力、细胞凋亡情况,白介素(IL)-1β、IL-6、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)、鞘氨醇激酶1(SphK1)、鞘氨醇-1-磷酸受体1(S1PR1)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达水平。结果 1μmol/L以上浓度UA可以显著提高H/R H9c2细胞增殖活力。与对照组相比,模型组细胞增殖能力和ATP、SOD含量下降,细胞凋亡率和IL-1β、IL-6、MDA、SphK1、S1PR1、ERK1/2表达增加(P<0.05);与模型组相比,UA低、中、高剂量组细胞增殖能力和ATP、SOD含量上升,细胞凋亡率和IL-1β、IL-6、MDA、SphK1、S1PR1、ERK1/2表达下降,干预效果呈浓度依赖性(P<0.05);BBP完全沉默UA对H/R诱导的心肌细胞的治疗作用。结论 UA减轻H/R H9c2细胞损伤与其抑制SphK1/S1P信号通路有关。

南瓜多糖调控Nrf2/γ-GCS通路对缺氧/复氧心肌细胞损伤的影响

目的:探讨南瓜多糖(PP)调控Nrf2/γ-GCS通路对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞(H9C2)损伤的影响。方法:建立HR细胞模型,确定PP给药浓度,将H9C2细胞分为Control组、H/R组、南瓜多糖组(PP组,2 mg/L PP)、Nrf2抑制剂组(ML385组,2.0μmol/L ML385)、PP+ML385组(2.0 mg/L PP+2.0μmol/L ML385),分别检测H9C2细胞凋亡、线粒体膜电位变化、氧化应激(LDH、MDA、SOD、ROS)、炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)水平及Nrf2、γ-GCS蛋白表达。结果:与Control组比较,H/R组细胞形态发生变化,细胞损伤及线粒体膜电位下降,H9C2细胞活力、SOD及Nrf2、γ-GCS蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率、LDH、MDA、ROS及TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著升高(P<0.05);与H/R组比较,PP组细胞损伤减轻,线粒体膜电位恢复,H9C2细胞活力、SOD及Nrf2、γ-GCS蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率、LDH、MDA、ROS及TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著降低(P<0.05),而ML385与PP作用效果相反,ML385可逆转PP的抗氧化、抗炎作用。结论:PP上调Nrf2/γ-GCS通路发挥抗氧化、抗炎作用,减轻H/R诱导的H9C2细胞损伤。

血浆外泌体源性miR-29b-3p靶向IGF1对七氟醚后处理低氧/复氧心肌细胞损伤的作用

目的探讨心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠血浆外泌体源性miR-29b-3p靶向IGF1在七氟醚(SEV)后处理的低氧/复氧(H/R)心肌细胞中的作用。方法借助GEO数据库筛选在MIRI中差异表达的miRNAs,通过H/R处理心肌细胞以构建MIRI细胞模型。干预经SEV后处理的MIRI细胞模型中miR-29b-3p和IGF1的表达,随后通过MTT检测心肌细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA检测各组心肌细胞中炎性因子(IL-1β和TNF-α)的变化。结果与Normal组比较,miR-29b-3p在MIRI大鼠血浆外泌体中表达增强(P<0.05),miR-29b-3p和IGF1的靶向结合关系被证实(P<0.05)。SEV后处理后,H/R刺激的心肌细胞中miR-29b-3p的表达降低,而IGF1的表达升高(均P<0.05)。血浆外泌体中miR-29b-3p过表达可明显抑制SEV后处理的H/R细胞存活率,加重细胞凋亡和炎性反应,敲减miR-29b-3p则相反(均P<0.05)。挽救实验数据表明,过表达IGF1可部分逆转过表达miR-29b-3p对SEV后处理的H/R细胞损伤的影响(均P<0.05)。结论血浆外泌体源性miR-29b-3p靶向IGF1促进SEV后处理的H/R心肌细胞损伤。

柠檬酸盐对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤及LKB1/AMPK信号通路的影响

目的:探讨柠檬酸盐对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤及肝激酶B1(LKB1)/磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)信号通路的影响。方法:将人心肌细胞(HCM)随机分为对照组(常规培养的HCM细胞)、H/R组(缺氧处理2.5 h,复氧处理2 h)、柠檬酸盐低、中、高剂量组(20μmol/mL、40μmol/mL、80μmol/mL柠檬酸盐培养液)、柠檬酸盐高剂量+抑制剂组(3 mg/kg LKB1/AMPK通路抑制剂Doxorubicin HCI、80μmol/mL柠檬酸盐培养液)。采用细胞增殖毒性检测(CCK-8)法测定各组HCM细胞增殖抑制率,生化法测定各组HCM细胞培养液中心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,流式细胞仪检测各组HCM细胞凋亡率,蛋白免疫印迹(Western Bloting)法测定HCM中凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)及LKB1/AMPK通路相关蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,H/R组HCM的细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、CK-MB、LDH及Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与H/R组相比,柠檬酸盐低、中、高剂量组HCM的细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、CK-MB、LDH及Bax蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与柠檬酸盐高剂量组相比,柠檬酸盐高剂量+抑制剂组HCM的细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、CK-MB、LDH及Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:柠檬酸盐可以促进受损的HCM细胞生存,可能与激活LKB1/AMPK信号通路有关。

丹参酮ⅡA减轻氧糖剥夺诱导心肌细胞损伤的机制

目的:丹参酮ⅡA具有广泛的心肌保护作用。AK003290是1种在心肌组织中高表达的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA),在心肌发生损伤时表达下调。本研究旨在探讨丹参酮ⅡA减轻氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)诱导心肌细胞损伤的机制。方法:以H9C2大鼠心肌细胞为研究对象,构建OGD损伤模型。采用转染siRNA的方法敲低AK003290的表达。将H9C2细胞分为6组:对照(control)组、丹参酮ⅡA(TAN)组、OGD组、丹参酮ⅡA+OGD(TAN+OGD)组、scrambled siRNA转染+丹参酮ⅡA+OGD(scrambled siRNA+TAN+OGD)组、AK003290 siRNA转染+丹参酮ⅡA+OGD(AK003290 siRNA+TAN+OGD)组。TAN组只用40μmol/L的丹参酮ⅡA预处理细胞12 h。OGD组只进行OGD处理12 h。TAN+OGD组先用40μmol/L的丹参酮ⅡA预处理12 h,再行OGD处理12 h。Scrambled siRNA+TAN+OGD组和AK003290 siRNA+TAN+OGD组在转染相应siRNA 24 h后进行后续处理。采用实时反转录PCR(real-time reverse transcription PCR,real-time RT-PCR)检测AK003290的表达,分光光度法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的水平以反映LDH漏出率,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞培养液中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)的含量,蛋白质印迹法检测磷酸化的核因子κB(phospho-nuclear factor-κB,p-NF-κB)的蛋白质表达水平。结果:与control组比较,OGD组LDH漏出率及细胞培养液中IL-1β和IL-18含量增加,p-NF-κB的蛋白质表达水平上调,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.001);与OGD组相比,TAN+OGD组LDH漏出率及细胞培养液中IL-1β和IL-18含量减少,p-NF-κB的蛋白质表达水平下调,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与control组比较,TAN组细胞中AK003290的表达水平明显上调(P<0.01),OGD组细胞中AK003290的表达水平明显下调(P<0.05);与OGD组相比,TAN+OGD组细胞中AK003290的表达水平明显上调(P<0.05)。与scrambled siRNA+TAN+OGD组相比,AK003290 siRNA+TAN+OGD组LDH漏出率及细胞培养液中IL-1β和IL-18含量增加,p-NF-κB的蛋白质表达水平上调,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:丹参酮ⅡA通过上调AK003290抑制NF-κB活性,从而减轻OGD导致的心肌细胞炎症损伤。

异氟醚对高糖诱导的H9C2心肌细胞损伤及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的探讨异氟醚对高糖诱导的H9C2心肌细胞损伤及磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的影响。方法选取对数生长期的H9C2心肌细胞,分组为:①对照组,未处理的H9C2心肌细胞;②高糖组(35 mmol/L葡萄糖);③异氟醚低浓度组(在高糖组的基础上加入1%异氟醚);④异氟醚高浓度组(在高糖组的基础上加入2%异氟醚);⑤异氟醚高浓度+LY294002组(在高糖组的基础上加入2%异氟醚+50μmol/L LY294002)。CCK-8法检测各组细胞增殖;透射电子显微镜观察各组细胞自噬情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Western印迹检测各组细胞中PI3K/Akt/mTOR通路及自噬(Beclin1)、凋亡(Bax)相关蛋白表达。结果与对照组相比,高糖组细胞中明显可见形成的自噬小体,增殖率、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR降低,细胞凋亡率、Bax、Beclin1蛋白表达显著增加(P<0.05)。与高糖组相比,经不同浓度的异氟醚处理后,细胞增殖率、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR显著增加,自噬小体减少,细胞凋亡率、Bax、Beclin1蛋白表达显著下降(P<0.05);与异氟醚高浓度组相比,异氟醚高浓度+LY294002组细胞增殖率、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR降低,自噬小体增多,细胞凋亡率、Bax、Beclin1蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论异氟醚可以抑制高糖诱导的H9C2心肌细胞自噬、凋亡,提高细胞存活率,减少细胞损伤,可能与PI3K/Akt/mTOR通路的激活有关。

瘀血痹胶囊对阿霉素诱导H9c2心肌细胞损伤保护作用的药效物质筛选研究

目的筛选瘀血痹胶囊中保护心肌细胞损伤的药效物质。方法采用HPLC法建立瘀血痹胶囊7个不同极性部位指纹图谱,共获得41个共有峰;以阿霉素建立H9c2心肌细胞损伤的体外药效模型,将心肌细胞存活率作为药效指标,开展不同极性的瘀血痹胶囊体外药效学评价;应用灰色关联度分析结合偏最小二乘回归分析,将指纹图谱共有峰相对峰面积与保护心肌细胞药效作用进行关联,筛选瘀血痹胶囊中保护心肌细胞损伤的药效物质;并对药效物质的心肌保护作用进行验证。结果筛选出瘀血痹胶囊保护心肌细胞损伤的5个药效物质,其中指认出的主要药效物质为槲皮素、隐丹参酮、丹参酮ⅡA和阿魏酸。结论瘀血痹胶囊具有心肌细胞损伤保护作用,通过建立H9c2心肌细胞损伤模型进行药效物质筛选,初步明确了瘀血痹胶囊保护心肌细胞损伤的主要药效物质。

苦碟子通过NLRP3对急性心梗大鼠心肌细胞损伤及纤维化的作用研究

目的探讨苦碟子注射液(简称“苦碟子”)对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞损伤和纤维化的影响及可能作用机制。方法随机选取8只SPF级雄性Wistar大鼠作为假手术组,剩余大鼠采用左冠状动脉(冠脉)前降支结扎法建立AMI模型,成模大鼠随机分为模型组、苦碟子低剂量组(3 ml/kg·d)、苦碟子中剂量组(6 ml/kg·d)及苦碟子高剂量组(12 ml/kg·d),每组各8只,其中假手术组及模型组大鼠每日腹腔注射等量生理盐水,连续21 d。检测心功能参数;HE染色法检测心肌组织病理学损伤情况;Masson染色法检测心肌间质纤维化情况;全自动生化分析仪测定血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白T(TnT)水平及肌酸激酶MB(CK-MB)活性;ELISA法检测大鼠心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)含量;Western blot法检测心肌组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、切割天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(C-caspase-1)、切割IL-1β(C-IL-1β)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)、波形蛋白(Vimentin)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达情况。结果与假手术组比较,模型组及3个给药组大鼠左心室收缩末期直径(LVESD)、左心室舒张末期直径(LVEDD)值、血清LDH、TnT及CK-MB水平、心肌组织中TNF-α、IL-6及IL-1β含量、NLRP3、ASC、C-caspase-1及C-IL-1β蛋白相对表达量、ColⅠ、ColⅢ、Vimentin及α-SMA蛋白相对表达量升高,缩短分数(FS)及射血分数(EF)降低(P<0.05),同时可见心肌组织发生不同程度的损伤及胶原蛋白沉积;与模型组比较,苦碟子低、中、高剂量组大鼠LVESD、LVEDD值、血清LDH、TnT及CK-MB水平、心肌组织中TNF-α、IL-6及IL-1β含量、NLRP3、ASC、C-caspase-1及C-IL-1β蛋白相对表达量、ColⅠ、ColⅢ、Vimentin及α-SMA蛋白相对表达量降低,FS、EF值升高(P<0.05),心肌组织病理损伤及胶原蛋白沉积程度均减轻;苦碟子作用效果呈剂量依赖性(P<0.05)。结论苦碟子可减轻AMI大鼠心肌细胞损伤及心肌纤维化,改善心功能障碍,其作用机制可能与抑制NLRP3炎性体途径激活有关。

基于RhoA/ROCK信号通路探讨人参皂苷Rg2对曲妥珠单抗引起的大鼠心功能及心肌细胞损伤的影响

目的:探讨人参皂苷Rg2对曲妥珠单抗引起的大鼠心功能和心肌细胞损伤的影响及RhoA/RhoA相关蛋白激酶(ROCK)信号通路在此过程中的作用。方法:将Wistar雌性大鼠随机分为对照组、曲妥珠单抗组(Trz组,50.4 mg/kg曲妥珠单抗)、曲妥珠单抗+人参皂苷Rg2干预组(Trz+Rg2组,50.4 mg/kg曲妥珠单抗+20 mg/kg人参皂苷Rg2)。将心肌细胞H9c2分为对照组、Trz组(100μg/mL Trz,37℃培养24 h)、Trz+Rg2组(100μg/mL Trz,37℃培养24 h后,于200μmol/L人参皂苷Rg2中37℃培养12 h)。给药结束后,采用超声诊断仪测量左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD),并计算左室射血分数(LVEF)和短轴缩短率(LVFS);检测大鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6含量及心肌组织匀浆上清液与H9c2细胞培养上清液丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;流式细胞术检测H9c2细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠心肌组织与H9c2细胞中Bax、Bcl-2和RhoA、ROCK蛋白表达。结果:与对照组比较,Trz组大鼠LVEDD、LVESD升高,LVEF、LVFS降低(P<0.05);血清CK-MB、LDH及TNF-α、IL-6含量升高(P<0.05);大鼠心肌组织与H9c2细胞中MDA水平和RhoA、ROCK蛋白表达升高,SOD活性降低(P<0.05),H9c2细胞凋亡率升高,H9c2细胞中Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05)。与Trz组比较,Trz+Rg2组大鼠LVEDD、LVESD降低,LVEF、LVFS升高(P<0.05);血清CK-MB、LDH及TNF-α、IL-6含量降低(P<0.05);大鼠心肌组织与H9c2细胞MDA水平和RhoA、ROCK蛋白表达降低,SOD活性升高(P<0.05);H9c2细胞凋亡率降低,H9c2细胞中Bax蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg2可能通过下调RhoA/ROCK信号通路表达,改善曲妥珠单抗引起的大鼠心功能受损及心肌细胞损伤。

海藻多糖调节Nrf2通路对过氧化氢诱导的心肌细胞损伤及铁死亡的抑制作用

目的研究海藻多糖调节Nrf2通路对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的H9C2心肌细胞损伤及铁死亡的抑制作用。方法采用H_(2)O_(2)诱导法建立心肌细胞损伤模型,设置正常对照组、氧化损伤组、海藻多糖低、中、高剂量组及阳性对照组,海藻多糖各剂量组分别加入0.3、0.6、1.2 mg/ml的海藻多糖,阳性对照组加入50μmol/L的叔丁基对苯二酚(tBHQ),继续培养72 h,使用噻唑蓝比色(MTT)法测定H9C2细胞存活率,酶联免疫吸附法(ELISA)测定H9C2细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出率,H9C2细胞Fe^(2+)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、4-羟基壬烯醛(4-HNE)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平及H9C2细胞上清液LDH、肌酸激酶(CK)水平,流式细胞法测定H9C2细胞凋亡率,实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)测定H9C2细胞Nrf2、GPX4及HO-1 mRNA水平,免疫印迹法(Western blot)测定H9C2细胞Nrf2、GPX4及HO-1蛋白水平。结果与氧化损伤组比较,海藻多糖各剂量组及阳性对照组H9C2细胞存活率、GSH水平,H9C2细胞Nrf2、GPX4及HO-1 mRNA及蛋白水平明显升高(P<0.05),H9C2细胞Fe^(2+)、ROS、MDA、4-HNE水平、LDH漏出率、上清液LDH及CK水平,H9C2细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。结论海藻多糖能够抑制过氧化氢诱导的H9C2心肌细胞氧化损伤,改善H9C2铁死亡,抑制H9C2心肌细胞死亡,其机制可能与调节Nrf2通路有关。

核转录因子-κB在热休克预处理抑制过氧化氢所致心肌细胞损伤中的作用

目的探讨热休克预处理抑制氧化应激损伤心肌细胞的分子机制。方法采用1mmol/L的过氧化氢(H2O2)作用于原代培养的新生大鼠心肌细胞;用总抗氧化能力检测试剂盒及福林酚法检测心肌细胞中总抗氧化能力的变化;用蛋白质免疫印迹法(Westernblot)检测热休克蛋白70(HSP70)、αB晶状体蛋白、核转录因子κB(NFκB)抑制物(IκB)含量;免疫组化检测NFκB及HSP70在细胞内的分布情况。结果1与H2O2(1mmol/L,3h)损伤组比,热休克预处理组(43℃1h,恢复6h)的总抗氧化能力明显增加(P均<0.01);2心肌细胞经热休克预处理(43℃1h)后3h,HSP70、αB晶状体蛋白、IκBα的表达均增加,6～12h达高峰,并可维持至24h;3与正常心肌细胞比较,H2O2(1mmol/L)处理的心肌细胞中IκBα的含量明显下降,而热休克预处理则可抑制H2O2所致的这种变化;4H2O2(1mmol/L,30min)可使心肌细胞胞质中的NF-κB及HSP70向胞核移位,若先经热休克预处理(43℃1h,恢复6h)则可使这种移位显著减少。结论热休克预处理可抑制H2O2所致的心肌细胞损伤,其保护作用可能与其诱导HSP70、αB晶状体蛋白及IκBα的表达,从而抑制NF-κB的活化有关。

槲皮素对过氧化氢所致体外心肌细胞损伤的保护作用

目的:观察槲皮素对过氧化氢所致心肌细胞损伤的保护作用及其机制。方法:①实验于2004-12/2005-05在锦州医学院药理学教研室完成。选用出生1～3d的SD大鼠15只,雌雄不拘。②采用纯化培养的心肌细胞建立过氧化氢损伤模型,实验分为6组(每6孔细胞一组):正常对照组(正常细胞培养,加入等数量的培养基,不加入任何药物),10g/L二甲基亚砜组(加入10g/L二甲基亚砜),过氧化氢损伤组(加入过氧化氢200μmol/L),过氧化氢+低浓度槲皮素组(加入过氧化氢200μmol/L和槲皮素25μmol/L),过氧化氢+槲皮素中浓度组(加入过氧化氢200μmol/L和槲皮素50μmol/L),过氧化氢+槲皮素高浓度组(加入过氧化氢200μmol/L和槲皮素100μmol/L)。过氧化氢(200μmol/L)损伤时间为12h。③采用乳酸脱氢酶试剂盒测其释放量;采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶活力;硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛含量;硝酸还原法测定一氧化氮含量;四唑盐比色法测定线粒体脱氢酶活性。④计量资料差异比较采用t检验,组间数据处理根据处理方差齐性分析结果,采用非配对t检验。结果:①心肌细胞乳酸脱氢酶活性及丙二醛含量:过氧化氢损伤组明显高于正常对照组(P<0.01),过氧化氢+高、中、低浓度槲皮素组明显低于过氧化氢损伤组(P<0.01)。②心肌细胞超氧化物歧化酶活性:过氧化氢损伤组明显低于正常对照组(P<0.01),过氧化氢+高、中浓度槲皮素组明显高于过氧化氢损伤组(P<0.01)。③线粒体脱氢酶活性:过氧化氢损伤组明显低于正常对照组(P<0.01),过氧化氢+各浓度槲皮素组明显高于过氧化氢损伤组(P<0.01)。④心肌细胞内一氧化氮含量:过氧化氢损伤组高于正常对照组(P<0.05),过氧化氢+高、中、低浓度槲皮素组低于过氧化氢损伤组(P<0.05)。结论:槲皮素具有对抗缺氧复氧损伤、明显保护心肌细胞的作用,可能与其抗氧化、抗脂质过氧化反应有关。

尼可地尔对糖尿病患者PCI术后心肌组织血流灌注及心肌细胞损伤的影响

目的:研究尼可地尔对糖尿病患者PCI术后心肌组织血流灌注及心肌细胞损伤的影响。方法:收集在本院接受PCI术治疗的冠心病合并2型糖尿病患者68例,根据单盲随机对照法分为观察组,对照组各34例。对照组接受单纯PCI术治疗,观察组在PCI术后接受尼可地尔治疗。治疗后,采用实时心肌超声造影评估两组的心肌血流灌注情况;采用血生化分析仪检测外周血心肌酶谱指标含量;采用ELISA法检测血清氧化应激指标含量;采用放射免疫法检测血清凋亡分子含量。结果:治疗后,观察组心肌组织血流灌注参数A、β、A×β的水平显著高于对照组(P<0.05);观察组外周血中心肌酶谱指标CK、LDH、cTnⅠ、GOT的含量显著低于对照组(P<0.05);观察组血清中VitE、VitC的含量显著高于对照组,MDA、AOPPs、sFas、sFasL含量低于对照组(P<0.05)。结论:尼可地尔辅助治疗能够改善冠心病合并糖尿病患者PCI术后的心肌血流灌注、减轻心肌细胞损伤。

热应激心肌细胞损伤的线粒体机制探讨

目的 :观察热应激对大鼠心肌细胞线粒体氧化磷酸化和钙代谢功能的影响、研究线粒体膜渗透性转换 (PT)的变化及其病理学意义、探索热应激心肌细胞损伤发生机制。方法 :用Klark氧电极极谱法测定线粒体呼吸功能 ,用生物发光法测定心肌ATP含量及线粒体Ca2 +。ATP酶活性 ;用电感耦合等离子 原子发射光谱仪测定线粒体内Ca2 +含量 ,用分光光度法测定线粒体膜PT。结果 :热应激大鼠心肌细胞线粒体的呼吸控制率 (RCR)及氧化磷酸化效率 (P/O)均随热应激强度的增强呈显著逐步降低趋势 ;心肌线粒体Ca2 + ATP酶活性和Ca2 +含量亦明显下降 ;暴露于Ca2 +超载和氧化应激状态的线粒体 ,膜PT发生明显变化 ,钌红、抗氧化剂及反应体系酸化状态的纠正能够有效阻抑PT变化。结论 :线粒体结构与功能的破坏在热应激机体心功能损伤的发生中有着极其重要的意义。