忍冬不同部位提取液抑菌活性及其对酸土脂环酸芽孢杆菌的抑菌特性

本研究探究了忍冬(Lonicera japonica Thunb.)不同部位提取液的生物活性物质含量及其对12株供试菌株的抑菌活性。首先,分别测定了忍冬叶、金银花和忍冬藤中的总酚、总黄酮和绿原酸含量,并分析了它们的提取液对12株菌株的抑菌效果。然后,进一步研究了金银花和忍冬叶提取液对酸土脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus acidoterrestris)的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)、生长曲线、生物膜形成和细胞形态的影响。结果显示,忍冬叶和金银花中的总酚、总黄酮和绿原酸含量均显著高于忍冬藤(P<0.05)。此外,忍冬叶的总黄酮含量显著高于金银花(P<0.05)。三种提取液对A.acidoterrestris、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、单增李斯特氏菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌和沙门氏杆菌均具有一定的抑菌效果,且忍冬叶和金银花提取液的抑菌效果优于忍冬藤。忍冬叶和金银花提取液对A.acidoterrestris的抑菌效果最显著,MIC值均为3.91 mg/mL,MBC值均为31.25 mg/mL。此外,忍冬叶和金银花提取液能有效抑制A.acidoterrestris生长和生物膜的形成,破坏其菌体形态,抑菌效果随提取液浓度的增加而增强。本研究为阐明忍冬抑制A.acidoterrestris的机制奠定了坚实基础,同时也为开发安全高效的新型食品抑菌剂提供了新思路。

蒲公英、忍冬藤抗菌活性组分及配伍研究

为了探寻蒲公英和忍冬藤高效抗菌活性组分及其配伍活性,试验以蒲公英和忍冬藤为研究对象,通过70%乙醇提取、大孔树脂D101柱层析和抗菌活性跟踪相结合的方式优选各自的高效抗菌活性组分,并对这些组分进行总黄酮、有机酸和多酚含量分析和活性配伍研究。结果表明蒲公英和忍冬藤的高效抗菌活性组分分离工艺为:先用70%乙醇回流提取,浓缩后用大孔树脂D101柱层析,70%或50%乙醇洗脱部位即为它们的高效抗菌活性组分。这些组分对9种供试病原菌都具有较强的广谱抗菌性,蒲公英的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)分别约为1.95 mg/mL和15.63 mg/mL,忍冬藤的MIC和MBC分别约为1.95 mg/mL和31.25 mg/mL。且含量分析显示,蒲公英高效抗菌活性组分黄酮和多酚含量相对较高,忍冬藤高效抗菌活性组分多酚含量相对较高。配伍研究发现,当蒲公英高效抗菌活性部位与少量忍冬藤水洗脱部位(16∶1~4∶1)或其高效抗菌部位(16∶1~1∶1)配伍使用时,对部分供试菌的抗菌活性存在一定的相加作用。说明所得的蒲公英和忍冬藤高效抗菌活性组分提取分离工艺简单、易得,广谱抗菌作用强,合适的配伍使用可以实现更好的抗菌作用。

忍冬木层孔菌多糖的提取工艺优化及其体外抗氧化活性研究

忍冬木层孔菌(Phellinus lonicerinus(Bond.) Bond.et Sing)为湖北等地习用的桑黄品种,也是土家族常用药,多糖是其主要活性成分。为了研究忍冬木层孔菌子实体多糖(Phellinus lonicerinus polysaccharide, PLP)的提取工艺及其体外抗氧化活性,采用冷凝回流提取法在单因素实验结果的基础上,进行Box-Behnken响应面分析,确定PLP的最佳提取工艺,并通过测定忍冬木层孔菌多糖(PLP30、PLP60、PLP85、PLPA1和PLPA2)的还原能力、对DPPH、ABTS、羟基自由基的清除能力、对酪氨酸酶活性的抑制能力。结果显示PLP最佳提取工艺的参数为:料液比1∶20 g/mL、提取时间120 min、提取温度100℃,此条件下PLP提取率为(3.16±0.05)%;五种多糖对DPPH、ABTS和羟基自由基均具有较强的清除作用,且具有较强的还原力,其对ABTS自由基清除作用和还原力均与浓度呈量效关系。表明忍冬木层孔菌子实体多糖具有良好的体外抗氧化和一定的酪氨酸酶活性抑制能力。

西安地区台尔曼忍冬栽培管理技术

台尔曼忍冬是忍冬属一种具有优良观赏性状的杂交品种,缠绕木质藤本,具有生长迅速、枝繁叶茂、花色鲜艳、花期长和适应寒冷气候等优点,适宜在我国北方地区园林中栽植。国外培育至今100多年来,在世界各地广泛栽培,特别是欧美庭院中应用广泛,具有很高的观赏价值。该研究主要从形态特征、生态特性、繁殖技术及栽培管理等方面对台尔曼忍冬进行简要描述,为西安地区庭院栽培和园林推广应用提供参考依据。

灰毡毛忍冬bZIP25基因的克隆及其表达模式分析

目的克隆灰毡毛忍冬bZIP25基因序列全长,并进行生信分析及表达模式分析,以初步探索其在灰毡毛忍冬中的生物学功能。方法通过逆转录PCR技术克隆bZIP25基因的序列全长,采用生物信息学分析方法对bZIP25及其编码的蛋白进行分析。运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术测定其在茎、叶及七个花期花中的表达水平。结果克隆得到LmbZIP25基因(OR551766),其编码191个氨基酸,具有典型的bZIP家族结构,在bZIP结构域中与其他植物同源性较高。LmbZIP25基因具有组织特异性,在茎中的表达量显著高于花和叶,在七个花期中黄色花蕾期的表达量最高。结论克隆得到LmbZIP25基因全长,分析其在不同器官和不同花期的表达差异,为进一步探索其在灰毡毛忍冬中花发育中的功能奠定了研究基础。

忍冬属几种常见药用植物的鉴别

忍冬属内有多种植物以其花蕾或初开的花(称为“金银花”)入药。根据2020年版《中国药典》对金银花的界定,比较了忍冬属7种药用植物的形态特征、忍冬和盘叶忍冬的显微特征以及金银花常见伪品原植物的特征,以期为忍冬属药材的规范使用提供参考。

蓝果忍冬硬枝扦插育苗密度效应研究

【目的】通过研究密度对蓝果忍冬硬枝扦插育苗效果的影响,为实际生产中最适应用密度的确定提供理论依据。【方法】以蓝果忍冬1年生萌生枝条为试验材料,于春季萌动前在塑料大棚内设置12个密度处理,以生根、生长、苗木质量和育苗经济性为指标进行密度效应分析。【结果】结果表明:当扦插密度达到200株·m^(-2)之后,随着密度的增加苗木的生根时间拖后,生根期拉长,生根率、成苗率、整齐度、苗木质量和秋季保存率均呈下降趋势;单位面积育苗经济性呈先上升后下降趋势。低密度扦插有利于快速生根、提高生根率和优等苗比率,高密度扦插有利于增加单位面积苗木产量。【结论】当扦插密度300~400株·m^(-2)时具有更好的经济产出,300~350株·m^(-2)更具生产应用经济性。

垂红忍冬观赏特性与栽培要点

垂红忍冬是忍冬属一种具有优良观赏性状的藤本植物,其花色鲜艳、花期长、生长快,适应寒冷气候,适宜在我国北方地区园林中栽植。主要从观赏特性、生态特性、园林应用及栽培管理等方面对垂红忍冬进行简要描述,为园林推广应用提供参考。

灰毡毛忍冬MADS-box基因家族鉴定与CMB1基因克隆

目的鉴定灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides MADS-box家族基因并进行生物信息学分析与表达模式验证,克隆湘蕾型和野生型灰毡毛忍冬MADS-box家族成员CMB1全长。方法基于转录组数据,利用在线工具对灰毡毛忍冬MADS-box进行生物信息学分析,并利用qRT-PCR验证MADS-box基因在不同品种中的表达模式,通过RT-PCR、RACE技术克隆湘蕾型和野生型灰毡毛忍冬CMB1基因全长。结果28个灰毡毛忍冬MADS-box蛋白长度为89~359 aa,碱性蛋白占比85.7%,不稳定蛋白占比96.4%,亲水性蛋白占比96.4%,均定位于细胞核,均为无跨膜结构的非分泌蛋白。转录组显示,与野生型比较,湘蕾型中28个MADS-box基因有17.86%表达下调,MIKCC型基因中有18.75%表达下调。克隆得到在两个品种的灰毡毛忍冬花中高度特异性表达的CMB1基因全长,均包含一个738 bp的ORF,编码245个氨基酸。CMB1基因在两个品种的花中表达量存在显著差异(P<0.01),且与茎、叶相比,在花中高度特异性表达(P<0.01)。结论基于灰毡毛忍冬转录组数据,鉴定了28个MADS-box家族基因,克隆得到湘蕾型与野生型灰毡毛忍冬CMB1基因全长,为进一步研究灰毡毛忍冬花发育、优良表型形成的分子机制提供研究基础与理论依据。

基于MaxEnt优化模型对不同时期金银忍冬潜在适生区动态模拟分析

使用优化的MaxEnt模型,基于58个生态因子,分析历史(末次盛冰期、全新世中期)、当前和未来2050年与2070年气候背景下金银忍冬潜在适生区。结果表明:在当前气候背景下AUC值大于0.9,连续博伊斯指数(CBI)的值是0.998,表明模拟结果可靠。影响金银忍冬分布的主要环境因子是最干季平均温度(bio09)、土壤类型(SU_CODE)、紫外线最强月份平均辐射量(uvb3)。金银忍冬高适生区和最佳适生区面积是全国总面积的4.43%,主要分布在我国云南东北部、四川中部、湖北西部、重庆东部、甘肃东部、陕西、河南西部、山西南部。整体而言,未来气候变化有利于金银忍冬适生区的扩张。从末次盛冰期到当前,金银忍冬适生区向东北方向移动,在未来,金银忍冬的适生区有向北方迁移而在西南方向收缩的趋势,并且最佳适生区严重丧失。建议加强最佳适生区保护,在新增适生区,可以考虑迁地保育方法,进行合理的人工引种栽培。

细毡毛忍冬叶提取物的抗菌、抗氧化活性研究

为代替金银花花蕾作为饲料添加剂,降低饲料成本,充分利用细毡毛忍冬叶资源,因此探究细毡毛忍冬叶粗提物、工艺优化提取物及精制提取物的抗菌、抗氧化活性。测定细毡毛忍冬叶不同提取物的主要活性成分含量,并进行各提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠寒沙门氏菌及铜绿假单胞菌的体外抑菌实验,并对抑菌效果较好的细毡毛忍冬叶精制物进行MIC(最小抑菌浓度)及MBC(最低杀菌浓度)测定。使用ABTA、DPPH、FRAP三种抗氧化能力检测方法测定各提取物总抗氧化能力。(1)细毡毛忍冬叶精制产物在抑菌活性实验中表现出显著抑菌活性,抑菌能力与金银花花蕾精制产物相近,比粗提物及工艺优化产物高。(2)细毡毛忍冬叶精制物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌的MIC分别为12.5 mg·mL^(-1)、6.25 mg·mL^(-1)、1.56 mg·mL^(-1)、3.125 mg·mL^(-1),MBC分别为25 mg·mL^(-1)、12.5 mg·mL^(-1)、3.125 mg·mL^(-1)、12.5 mg·mL^(-1)。(3)细毡毛忍冬叶精制物具有较强抗氧化性,其抗氧化能力随着溶液浓度的增加而逐步升高,且抗氧化性高于粗提物、工艺优化产物及金银花精制物,表明经过富集纯化的细毡毛忍冬叶产物的抗氧化性显著增加。细毡毛忍冬叶精制产物具有较好的抗菌、抗氧化活性,具有代替金银花作为饲料添加的潜力。

灰毡毛忍冬花器官发育相关LmSOC1基因克隆及表达分析

【目的】克隆灰毡毛忍冬MADS-box家族基因SOC1(SUPPRESSOR OF OVEREXPRESSION OF CO1),对其进行生物信息学和表达模式分析,为探究灰毡毛忍冬花冠不开放机制奠定理论基础。【方法】基于花蕾型灰毡毛忍冬转录组数据,筛选到开花调控基因LmSOC1的Unigene序列并克隆全长cDNA序列,通过生物信息学分析和实时荧光定量PCR技术分析编码蛋白特性和不同品种中LmSOC1基因的表达特异性,最后将LmSOC1基因插入到原核表达质粒载体pTOPO-D1中,并在表达宿主BL21(DE3)中进行蛋白表达。【结果】LmSOC1基因包含645bp的ORF区,LmSOC1蛋白不含信号肽、无跨膜区,为稳定的亲水性蛋白。系统进化树分析表明,LmSOC1蛋白与黄花蒿、榴莲、可可等的SOC1蛋白亲缘关系更近。实时荧光定量PCR分析表明,在2个花蕾型灰毡毛忍冬品种的花蕾和叶片中均检测到LmSOC1基因的表达,而叶片中表达量明显高于花蕾。同时,在早期花蕾中LmSOC1基因的表达量高于晚期花蕾,在‘金翠蕾’品种中这一表达差异极显著(P<0.01)。最后成功在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出重组蛋白。【结论】通过对LmSOC1基因的克隆和表达分析发现,该基因可能在灰毡毛忍冬花器官发育过程中发挥重要作用,为进一步研究该基因在植物花发育中的生物学功能奠定了基础。

基于液质联用技术比较郁香忍冬花蕾与金银花化学成分

目的 比较郁香忍冬花蕾与金银花的成分差异,评估郁香忍冬花蕾药用价值,为其开发利用提供参考。方法 以70%甲醇为提取溶剂,以UPLC-TOF-MS分析成分种类,以HPLC-QQQ-MS测定成分含量,经多元统计分析确定成分差异。结果 在郁香忍冬花蕾与金银花中共鉴定出52种成分,20种定量成分含量差异显著,金银花有4种差异成分,郁香忍冬花蕾的异绿原酸C、阿魏酸、木犀草苷、芦丁含量是金银花的2倍以上,马钱酸、马钱苷含量分别是金银花的11.96、37.23倍。马钱苷、异绿原酸A、马钱酸、芦丁及断马钱酸是区分郁香忍冬花蕾及金银花的关键差异成分。结论 郁香忍冬花蕾与金银花成分种类相近,但含量差异明显,郁香忍冬花蕾具有重要药用价值,可进一步开发利用。

不同评价方法对忍冬属植物品种抗蚜性的评价

蚜虫Aphidoidea危害严重影响忍冬属Lonicera植物的产量和质量,培育忍冬属植物抗蚜性品种是解决忍冬属植物蚜虫最经济有效的手段。通过适宜忍冬属植物抗蚜性的评价方法,优选出忍冬属植物高抗蚜性品种和种质资源,用于忍冬属植物蚜虫的治理。采用感蚜指数法、改进后的感蚜指数法、创新的蜜露指数法及聚类分析法对27种忍冬属植物抗蚜性进行评价。忍冬属植物抗蚜性差异明显,百玉一号、羊角、台尔曼Lonicera×tellmanniana为高抗品种,占比为11.1%;北花一号、紫茎子、红银花、四季花为高感品种,占比为14.8%;小鸡爪花、线花子、野生金银花、九绿一号、封丘大毛花、巨鹿大毛花、长针子、华南忍冬Lonicera confusa、小毛花、九丰一号、山花子为抗性品种,红腺忍冬Lonicera hypoglauca、小针花、中金一号、秧花子、大毛花、细毡毛忍冬Lonicera similes、麻针花、金丰一号、灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides为感性品种;在4种评价方法中,蜜露指数法的评价效果接近最终判定结果且直观层次分明。蜜露指数法简便易行,适宜于忍冬属植物品种抗蚜性评价。

忍冬属植物中咖啡酰奎宁酸类成分及其吸收与代谢研究进展

迄今为止从忍冬属植物中分离出24种咖啡酰奎宁酸类化合物,此类化合物显示有多种药理活性,具备广阔的应用前景,吸收与代谢研究发现其主要吸收部位为小肠,以被动扩散为主,代谢部位主要在大肠,代谢途径有甲基化、葡萄糖醛酸结合、水解、异构化和还原反应等。本文对忍冬属植物中咖啡酰奎宁酸类成分及其吸收与代谢研究进行总结,以期为咖啡酰基奎宁酸类药物研究开发提供参考。

响应面法优化忍冬桑黄总黄酮提取工艺

为了提高忍冬桑黄总黄酮的提取率,以忍冬桑黄(Sanghuangporus lonicericola)子实体为原料,采用超声波辅助乙醇提取其总黄酮,以料液比、乙醇体积分数、超声时间和超声温度进行单因素试验,通过响应面试验对忍冬桑黄总黄酮提取工艺进行优化。结果表明,忍冬桑黄子实体总黄酮最优提取工艺:料液比1∶60、乙醇体积分数60%、超声时间60 min、超声温度76℃。在最佳工艺条件下,忍冬桑黄子实体总黄酮提取率为0.80%,与模型预测值0.83%接近,表明该提取条件合理可行,可以提高忍冬桑黄总黄酮提取率,利于忍冬桑黄产品精深加工及桑黄资源的综合利用。

灰毡毛忍冬SS基因的克隆及表达分析

[目的]克隆灰毡毛忍冬SS基因全长序列,并进行生物信息学和表达模式分析。[方法]提取灰毡毛忍冬花总RNA,通过RT-PCR和RACE技术克隆LmSS基因的全长cDNA序列;运用相关软件对该基因序列进行生物信息学分析;利用qRT-PCR测定灰毡毛忍冬茎、叶和不同花期花中该基因的相对表达量。[结果]克隆的LmSS基因开放阅读框(ORF)长度为1245 bp,编码414个氨基酸,属于亲水性蛋白,定位于细胞质中,具有典型的多聚异戊二烯基合成酶活性结构域,与其他植物SS基因具有较高同源性。LmSS基因在灰毡毛忍冬不同花期和器官中表达有组织特异性。[结论]该研究成功地克隆灰毡毛忍冬中的SS基因,为进一步研究该基因的功能奠定基础,同时为探究灰毡毛忍冬皂苷生物合成和调节机制提供了科学依据。

施硒对灰毡毛忍冬硒含量、产量及药用成分的影响

【目的】探究施硒对灰毡毛忍冬硒含量、产量和药用成分含量的影响。【方法】以灰毡毛忍冬优良品种‘金翠蕾’为试验材料,采用叶面喷施亚硒酸钠方法,设计喷施硒浓度0、50、100、150、200、250 mg/L及喷施次数0次、1次、2次、3次,测定不同喷施硒浓度和喷施次数的干花硒含量、鲜花产量、干花绿原酸和木犀草苷含量。【结果】施硒后灰毡毛忍冬的干花硒含量、鲜花产量、干花绿原酸和木犀草苷含量显著增加,喷施硒浓度150~200 mg/L比不施硒分别显著提高了192.42%~231.82%、53.14%~70.29%、16.32%~19.51%、14.61%~21.35%,喷施硒2次比不施硒显著提高了226.23%、63.41%、21.45%和22.31%。鲜花产量、干花绿原酸和木犀草苷含量均随着喷施硒浓度和喷施硒次数的增加呈现先增加后降低的趋势,干花硒含量与喷施硒浓度之间也表现出类似的趋势,但随着施硒次数的增加干花硒含量呈现递增的趋势。【结论】施硒能显著提高灰毡毛忍冬硒含量和产量,改善干花的品质,最适喷施硒浓度为150~200 mg/L,最适喷施硒次数为2次,即在花芽分化前期和花蕾初现期各喷施硒1次。

镉胁迫对忍冬抗氧化酶活性及内源激素含量的影响

为研究Cd胁迫下忍冬(Lonicera japonica Thunb.)抗氧化酶活性和内源激素水平的响应变化,采用土培试验,设置不同Cd处理(0、2.5、5、10、25、50和100 mg/kg),分析植株生物量、叶片丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性以及生长素(IAA)、赤霉素(GA_(3))、脱落酸(ABA)的含量。结果表明:2.5 mg/kg Cd处理时地下部生物量增加20.93%,超过25 mg/kg Cd处理时地下部、地上部生物量均显著下降,最多降低了28.78%和40.92%。在各Cd处理下,叶片MDA含量没有受到显著影响;SOD和POD活性显著增强,CAT活性先升高后降低,APX活性没有受到显著影响。叶片IAA、GA_(3)含量、GA_(3)/ABA和IAA/ABA先升高后降低;ABA含量升高,比对照最多增加55.88%。相关性分析表明,忍冬叶片中抗氧化酶SOD、POD活性与GA_(3)含量存在显著负相关性,与ABA含量存在显著正相关性;而CAT活性则与IAA和GA_(3)含量存在显著正相关性,与ABA存在显著负相关性。忍冬对Cd的耐受能力很强,在各Cd胁迫处理下没有受到明显的过氧化损伤,其较强的抗氧化酶活性和大量累积的ABA可能是重要保护机制。

电感耦合等离子体质谱法测定秦巴山区忍冬叶中47种无机元素

采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定秦巴山区忍冬叶中的无机元素.结果显示,从忍冬叶中检出47种无机元素,含量相对较高的无机元素有Sr,Ba,Zn,含量分别为65.949,35.972,11.870 mg/kg;检出Ce,La,Nd等14种稀土元素,Ce含量最高,为0.336 mg/kg,Lu含量最低,为0.002 mg/kg;含量稍高的8种重金属元素有Zn,Cu,Pb,Cr,Co,As,Cd,Sn,Cu和Pb含量分别为7.156,2.176 mg/kg;Bi,W,Sb 3种无机元素含量低于检出限,未能检出.此方法灵敏度较高,可实现多种元素同时检测,为忍冬叶中所含无机元素提供了实验依据.