青海地区不同动物源志贺菌毒力相关基因的分布研究

为了解青海省不同动物源志贺菌相关毒力基因的分布情况,试验对分离自青海省不同地区的62株不同动物源志贺菌进行了DNA提取,将其作为模板对志贺菌的毒力基因set1B、virA、set1A、ial、ipaBCD、Sen、icsP、iutA、icsA、ipaH进行了PCR检测,并统计各毒力基因在不同动物源志贺菌中的检出率、不同动物源志贺菌毒力基因携带模式及携带毒力基因种类。结果表明:62株志贺菌毒力基因set1B、virA、set1A、ial、ipaBCD、icsP、Sen、iutA、icsA、ipaH的检出率分别为6.5%、43.5%、3.2%、25.8%、37.1%、0、12.9%、22.6%、50.0%、100%。在27株猪源志贺菌中,毒力基因ipaH、VirA、icsA、ipaBCD的检出率较高,然后依次为ial、iutA、Sen,未检出icsP。在27株鸡源志贺菌中,毒力基因ipaH、icsA、virA的检出率较高,然后依次为ipaBCD、ial、Sen、iutA,未检出set1B、set1A、icsP。在4株牦牛源志贺菌中,毒力基因ipaH、icsA、ipaBCD的检出率较高,然后依次为virA、ial、iutA,未检出set1B、set1A、Sen、icsP。在4株藏羊源志贺菌中,毒力基因ipaH、ipaBCD、iutA的检出率较高;然后依次为virA、ial,未检出set1B、set1A、Sen、icsP、icsA。在62株志贺菌中,有7株菌只检出毒力基因ipaH,55株菌携带两种及以上毒力基因,共呈现出30种携带模式,其中以virA-icsA-ipaH模式的菌株最多(11.3%,7/62),然后为ipaBCD-ipaH模式(9.7%,6/62);猪源和鸡源志贺菌毒力基因的携带模式均为18种,牦牛和藏羊源志贺菌毒力基因的携带模式均为4种。在62株志贺菌中,有18株菌携带2种毒力基因,15株菌携带3种毒力基因,13株菌携带4种毒力基因,7株菌携带5种毒力基因,2株菌携带6种毒力基因。27株猪源志贺菌中携带1,2,3,4,5,6种毒力基因菌株的占比分别为3.7%、40.7%、14.8%、18.5%、14.8%、7.4%,27株鸡源志贺菌中携带1,2,3,4,5,6种毒力基因菌株的占比分别为18.5%、18.5%、29.6%、22.2%、11.1%、0,4株牦牛源志贺菌中携带1,2,3,4,5,6种毒力基因菌株的占比分别为25.0%、0、25.0%、50.0%、0、0,4株藏羊源志贺菌中携带1,2,3,4,5,6种毒力基因菌株的占比分别为0、50.0%、50.0%、0、0、0。62株志贺菌单毒力基因携带率(11.3%,7/62)<多重毒力基因携带率(88.7%,55/62),其中猪源志贺菌的多重基因携带率最高(42.0%),然后依次为鸡源(35.5%)、藏羊源(6.4%)和牦牛源(4.8%)。说明青海地区志贺菌携带多种毒力基因,携带模式呈现多样性且因动物源不同有所差异,同时应重点加强青海地区猪志贺菌病的防治工作。

新疆塔额垦区牛羊粪源志贺菌耐药性、毒力基因检测及其致病性分析

为了解新疆塔额垦区牛羊粪源志贺菌的耐药性、毒力基因携带情况和致病性,对从335份牛羊腹泻粪便中分离鉴定到的32株志贺菌(10株福氏志贺菌和22株宋内志贺菌)进行药敏试验、耐药基因与毒力基因检测、生物被膜形成能力和小鼠致病性检测。结果显示,32株志贺菌对四环素、多西环素和氨苄西林等药物的耐药率较高,分别为87.50%、87.50%和84.38%;29株(90.63%)呈现多重耐药。从分离株中检测到15种耐药基因,其中blaTEM(96.88%)和blaCXT-M(68.75%)基因的检出率较高;检测到14种毒力基因,其中yijP(93.75%)、ibeB(90.63%)和ipaBCD(78.13%)基因的检出率较高。部分志贺菌具有生物被膜形成能力(2/32,6.25%),并引起小鼠死亡。说明新疆塔额垦区牛羊源志贺菌具有较强的耐药性,携带多种耐药基因和毒力基因,具有一定的致病性,在牛羊健康养殖中具有潜在威胁。

云南省猪源志贺菌分离株耐药特点和毒力基因分析

旨在研究云南省猪源志贺菌的流行情况以及耐药情况,分析志贺菌分离株耐药基因和毒力基因。采集云南省5个地州共300份猪肛门拭子样品进行志贺菌的分离、生化鉴定及PCR鉴定,通过K-B药敏纸片法和PCR分别检测分离菌的耐药性、耐药基因及毒力基因。结果:志贺菌阳性检出率20.7%(62/300),其中楚雄、红河、大理、昭通、澜沧阳性率分别为18.9%、21.8%、18.8%、21.9%和22%;62株志贺菌对14种抗生素均有不同程度的耐药,对萘啶酸耐药率最高为96.8%,对头孢西丁的耐药率最低为3.2%;以链霉素-氨苄西林耐药谱为主;喹诺酮类耐药基因gyrA的检出率最高为79%,qnrA的检出率最低为1.6%;毒力基因ipaH、ial、shet1A的检出率依次为100%、77.4%和40.3%。研究表明,云南省猪源志贺菌对多种抗生素均产生耐药性,耐药基因检出率均较高,毒力基因以ipaH为主。

以案例为导向的志贺菌属说课设计

说课是教师在内化教学内容的基础上,以自己的理解向专家或同行讲授某节课的教学设计及其理论依据的一种教学研究活动,通过听者的评议、说者的答辩,达到互相交流、共同进步的一种教学手段。文章以医学微生物学教材中志贺菌属为例,从教材分析、学情分析、教法学法、教学过程设计以及教学反思等5个方面进行说课设计,以期达到优化教学过程、提高教学质量的目的。

浙江省部分地区2003年痢疾志贺菌菌群分布和耐药性分析

目的 了解浙江省志贺菌的菌型分布及耐药情况 ,提高防治措施的针对性 ,避免抗生素的滥用。方法 15 8株志贺菌均按GB16 0 0 2 - 1995标准进行鉴定分型并采用kirby -Bauer法检测其对 14种抗生素的敏感性。结果 15 8株志贺菌中福氏志贺菌 113株 (占 71 .5 2 % ) ;鲍氏志贺菌2 2株 (占 13. 92 % ) ;宋内志贺菌 14株 (占 8 .86 % ) ;痢疾志贺菌 9株 (占 5 . 70 % ) ;91株志贺菌对氨苄西林耐药最高达 95 .6 0 % ,其次为链霉素 (72. 5 3% ) ;对头孢他啶最敏感 ,其敏感性高达 95. 6 0 %。结论 近年来浙江省志贺菌的菌型分布及其对抗生素的敏感性均发生了明显的变化 ,医疗卫生部门应加强对志贺菌菌型及耐药性监测。

小檗碱抗沙门菌、志贺菌、弧菌、分枝杆菌和克雷伯菌药理作用及其机制的研究进展

小檗碱具有广谱的抗菌作用,对大肠埃希菌、幽门螺杆菌、球菌等均有较好的抑杀作用。小檗碱通过多靶点地作用于细菌,可干扰其糖、脂、氨基酸、核酸和蛋白质的代谢,从而破坏细胞膜和细胞壁的形成;此外,小檗碱还可增强免疫细胞功能,提高机体对细菌的防卫和杀伤能力。小檗碱不仅不易被细菌耐药,还可抑制细菌对其他抗菌药物耐药的产生。本文笔者主要对小檗碱的抗沙门菌、志贺菌、弧菌、分枝杆菌和克雷伯菌药理作用及其机制进行了综述和分析,为小檗碱的进一步临床研究提供参考。

貉源志贺菌分离鉴定、致病性及耐药性分析

为鉴定引起河北地区貉腹泻的志贺菌并分析其相关生物学特性,本研究对2017年~2019年采自河北地区养殖场中患腹泻病貉的肛拭子、粪便及病料样品共计193份进行细菌分离,并经生化特性及PCR鉴定。将分离的志贺菌以0.25 mL/只(108 cfu/mL)感染小鼠分析分离菌对小鼠的致病性。采用玻板凝集试验、PCR分别检测分离志贺菌的血清型及相关毒力基因。通过K-B药敏纸片法和PCR分别检测分离菌的耐药性及相关耐药基因,采用SPSS18软件中的Fisher确切概率法分析分离菌耐药表型与耐药基因之间的相关性。结果显示,从193份腹泻病貉样品中共分离到83株志贺菌,其中65株对小鼠具有致病性,且以致小鼠死亡4只(30.1%)、5只(22.9%)的菌株为主;65株致病性志贺菌分属于9种血清型,以福氏志贺菌2a(23.1%,15/65)、3a(20.0%,13/65)和1b(18.5%,12/65)型为主要流行的血清型;65株致病性志贺菌毒力基因ipaH、ipa BCD、ial、sen、Sat、Set1A、Set1B、sigA检出率均在50.8%以上,其他毒力基因检出率在38.5%~40%,未检出毒力基因stx、Pic,且均同时携带5~6种毒力基因;对β-内酰胺类的阿莫西林、氨苄西林,氨基糖苷类的6种药物,四环素类的多西环素,磺胺类的磺胺间甲氧嘧啶,多粘菌素类的多粘菌素11种药物耐药的致病性志贺菌占40.0%~100%,对β-内酰胺类的头孢噻呋、头孢噻肟,酰胺醇类的氟苯尼考,喹诺酮类的恩诺沙星、环丙沙星,林可胺类的林可霉素,氨基糖苷类的替米考星7种药物耐药的志贺菌占9.2%~36.9%,且分离菌呈多重耐药性,以耐11(16.9%)、10(20.0%)、9(13.8%)种药物的分离菌株最多;65株致病性志贺菌四环素类耐药基因tetA、tetE、tetG,氨基糖苷类耐药基因aadAI、aac(3)-IV,磺胺类耐药基因sulI、sulII,酰胺醇类耐药基因cmlA及多粘菌素类耐药基因mcr-1的检出率在40.0%以上,部分β-内酰胺类和喹诺酮类耐药基因的检出率在12.3%~32.3%。经分析65株致病性志贺菌的耐药表型与耐药基因之间基本呈正相关(二者之间符合率最低为79.1%,最高达100%)。本研究首次报道貉源志贺菌的致病性、血清型、毒力基因及耐药性等生物学特性,为志贺菌致病机制、流行病学调查及相关疫病的防控研究提供科学依据。

鸡鲍氏志贺菌ipaH基因的克隆与序列分析

利用PCR技术扩增鸡鲍氏志贺菌侵袭性质粒抗原H基因(invasive plasmid,ipaH),并与GenBank数据库中不同菌株进行序列比对与同源性分析。结果显示,分别扩增出ipaH_1、ipaH_2、ipaH_3、ipaH_4、ipaH_5和ipaH_6等目的基因。核苷酸序列比对和同源性分析结果显示,鸡鲍氏志贺菌6个ipaH基因片段均与美国鲍氏志贺菌CP001063的核苷酸序列同源性最高,其次是中国鲍氏志贺菌CP000036,提示鸡鲍氏志贺菌可能起源于人鲍氏志贺菌。

适配体识别-化学发光技术检测福氏志贺菌

福氏志贺菌(Shigella flexneri)是一种危害人类健康的食源性致病菌。该实验首先制备鲁米诺功能化花状纳米金和氨基化磁性纳米Fe_(3)O_(4),然后将福氏志贺菌适配体的互补序列(FSZ-2HH)连接在鲁米诺功能化花状纳米金的表面构建信号探针,并将福氏志贺菌适配体(FSZ-1)通过亲和素的桥接作用修饰到氨基化磁性纳米Fe_(3)O_(4)表面构建捕获探针。当目标物存在时,目标物和信号探针会竞争性结合捕获探针,进而通过测定化学发光来达到检测目的。实验结果表明:在浓度2.6×10~2.6×10^(5) CFU/mL,福氏志贺菌的浓度与化学发光强度呈良好的线性关系,检出限为12 CFU/mL,特异性良好。该实验建立的方法为食品中福氏志贺菌的快速高灵敏检测提供了良好思路。

194株志贺菌的流行病学分析及药物敏感调查

目的 了解闵行区引发痢疾的志贺菌优势菌型及其药物敏感状况 ,为痢疾临床治疗和预防控制提供依据。方法 采用血清凝集试验、菌种ATB鉴定仪系统生化鉴定和K -B法对从腹泻病人分离的志贺菌进行流行病学分析和药物敏感试验。结果 194株志贺菌中福氏志贺菌 16 1株 ,宋内志贺菌 33株。共分为 8个血清型 ,其中福氏 1a 4 6株 ,福氏 2b 4 2株 ,福氏 2a 19株 ,福氏x变种 19株 ,福氏 4c 30株 ,还有福氏 4a、福氏 5a、福氏 5b共 5株。复方新诺明耐药率 89 .6 9%、氨苄西林耐药率 88 .14 %、氯霉素耐药率 6 0 . 31% ,头孢噻肟、丁胺卡那、头孢噻吩、头孢唑啉、庆大霉素、氟哌酸均敏感 ,耐药率均在 10 %以下。结论 本地区志贺菌感染的优势菌型为福氏 1a型和福氏2b型 ,而新型的志贺菌福氏 4c型和宋内志贺菌今后应引起足够重视。药物头孢噻肟、丁胺卡那霉素、头孢噻吩、头孢唑啉可作为目前临床治疗痢疾的常用药物。

68株志贺菌的分布及耐药性研究

夏秋季为腹泻的好发季节,志贺菌是引起腹泻的重要病原菌之一。近年来,随着广谱抗生素在临床中的广泛应用,志贺菌的耐药性也不断增强,常表现为对多种抗生素耐药,对部分抗生素甚至高度耐药。为了解本院志贺菌的分布及耐药情况.

RAPD技术在志贺菌及沙门菌鉴别中的应用

以鸡鲍氏志贺菌、鸡白痢沙门菌和痢疾志贺菌为研究对象,分别提取基因组DNA,利用6条随机引物以随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对其基因组DNA进行了分析.结果表明,4条随机引物能较好地在这3种菌中检测到多态性分子标记.共扩增出了59个DNA片段,其中3个菌株共有的谱带有7条,而显示多态性的片段有52条,占88.1%.引物P6的扩增图谱可用于3株细菌的鉴别.在对3株细菌扩增中发现,鸡鲍氏志贺菌与人痢疾志贺菌的扩增条带相同率达67%,但各有自己的特征性谱带.鸡沙门菌与志贺菌的扩增谱带相差甚远.

福氏志贺菌4C亚型生物学特性研究及ipaH基因检测

目的:了解福氏志贺菌4C亚型(F4c)的生物学特性及毒力情况。方法:以生化反应、噬菌体裂解试验、血清分型鉴定菌种;按K-B法进行药敏试验;采用PCR技术检测ipaH基因;同时观察对动物的侵袭力。结果:该菌型具有志贺菌属的基本特点,靛基质等试验传代后有变化,能被Ent噬菌体溶原化而出现型抗原变异现象,ipaH基因和动物侵袭力试验阳性,对四环素、TMP等耐药。结论:F4c是一个少见的血清型,生物学特性与F2a相近,一定条件下能出现型抗原和生化特性变异。

福氏2a志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因分型在菌痢快速诊断中的应用

目的对福氏2a志贺菌肠毒素ShET1(Shigellaenterotoxin1)和肠毒素ShET2(Shigellaenterotoxin2)进行基因分型,提高菌痢爆发流行时同源克隆的鉴定分析水平。方法对93株分离自不同地区,不同时间的福氏2a志贺菌用PCR法检测志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因,进行基因分型和同源克隆鉴定。结果93株福氏2a志贺菌按志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因可分为4种基因型,即12株ShET1(-)/ShET2(+),14株ShET1(+)/ShET2(-),59株ShET1(+)/ShET2(+),8株ShET1(-)/ShET2(-)。93株福氏2a志贺菌ShET1检出率为89.24%(83/93),ShET2为65.59%(61/93)。二者至少有一种基因被检出的检出率为91.39%(85/93)。结论福氏2a志贺菌的快速诊断可应用ShET1、ShET2双基因PCR检测,具有较高的敏感性与特异性。在应用多生物学标志进行福氏2a志贺菌同源克隆鉴定系统研究时,肠毒素ShET1/ShET2基因PCR分析是不可或缺的分析指标。

志贺菌6种毒力基因的多重PCR检测

目的:建立志贺菌6种毒力基因[志贺菌肠毒素1基因(set1)、志贺菌肠毒素2基因(sen)、侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)、侵袭相关蛋白基因(ial)、志贺毒素1基因(stx1)及调控基因(virA)]的多重PCR鉴定方法,实现多基因的同时检测。方法:选择志贺菌的6种毒力基因作为靶基因,以A群和C群4株标准及B群和D群4株临床分离株为模型,应用降落PCR方法在1个反应管中同时进行扩增,根据扩增片段大小定性判断结果。通过样本倍比稀释检验多重PCR的灵敏性,并在NCBI网站上用BLAST检索各引物的特异性。另选取河南省2001年至2007年115株志贺菌进行多重PCR检测,以验证多重PCR的可行性。结果:多重PCR能同时检测上述6种毒力基因,与单基因PCR分别检测6种毒力基因相比具有相近的灵敏度与特异性。应用多重PCR方法检测115株志贺菌,除stx1外,其余5种毒力基因的阳性率均在85%以上。结论:多重PCR鉴定志贺菌毒力基因具有简便、快速的特点,适用于毒力基因鉴定和流行病学调查研究。

门诊细菌性痢疾志贺菌检测结果分析

目的探讨与门诊细菌性痢疾临床诊断病例的粪便培养志贺菌阳性率有关的因素。方法回顾性分析453例细菌性痢疾临床诊断病例便培养志贺菌结果及其流行病学和临床特征。结果便培养志贺菌阳性率随患者年龄、职业、发病季节、每日腹泻次数、发热程度和粪便外观不同而有变化趋势[P值分别为0.030、0.001、0.029、0.017(福氏志贺菌)、0.024(宋内志贺菌)、0.002和0.011]。结论门诊细菌性痢疾临床诊断病例粪便培养志贺菌阳性率可能与患者年龄、职业、发病季节、腹泻和发热程度、粪便外观有关。

福氏和宋内志贺菌的药物敏感度测定

目的了解本地区福氏志贺菌和宋内志贺菌对临床常用抗菌药物的耐药性.方法琼脂稀释法测定2004年5-10月我院肠道门诊分离的31株福氏志贺菌和37株宋内志贺菌对多种抗菌药物的敏感性.结果福氏志贺菌和宋内志贺菌对四环素、复方磺胺甲噁唑、氨苄西林和氨苄西林-舒巴坦耐药显著,耐药率分别为100%～97.3%、90.3%～94.6%、90.3%～64.9%和67.7%～51.4%;2种细菌对氯霉素和庆大霉素的耐药性差异有显著性;2种细菌对氟喹诺酮类、第三代头孢菌素非常敏感,耐药率为6.5%～0%.结论本地区福氏志贺菌和宋内志贺菌对氟喹诺酮类和第三代头孢菌素非常敏感,对复方磺胺甲噁唑、氨苄西林、四环素等其他多种抗菌药物耐药显著,应加强耐药性监测和防治.

不同条件下分离培养粪便沙门菌、志贺菌和副溶血弧菌检出率效果观察

通过在不同条件下分离和培养粪便中沙门菌、志贺菌以及副溶血弧菌检出率的效果进行观察。方法 收集沙门菌、志贺菌以及副溶血弧菌各10例,分别将培养粪便沙门菌、志贺菌以及副溶血弧菌放置在不同温度中和不同放置时间中进行比较,不同温度分别是5℃、25℃和常温状态下,不同时间是0小时、6小时、12小时和24小时,以此不同温度和不同时间下培养出三种不同菌群的检出率。结果 沙门菌、志贺菌以及副溶血弧菌三种病原菌在不同温度中,其检出率无差异性,不具有统计学意义(p>0.05)。在不同时间检测下,分离培养粪便沙门菌、副溶血弧菌三种病原菌检出率无明显变化,但是志贺菌检出率呈现下降趋势,同时也表明志贺菌在三种病原菌试验中检出率相对较低。三种病原菌在检出率上无统计学意义(p>0.05),结论 粪便经过增菌肉汤增菌在适合的时间中进行接种和培养中选择性显色平板可以显著提升沙门菌、志贺菌以及副溶血弧菌的检出率,同时在不同温度中放置和6小时内进行培养可以直接选择性平板,同样这种试验适用于沙门菌和副溶血弧菌,菌量要大于106cfu/mL样本,同时培养志贺菌不应该单独使用麦康凯琼脂平板进行培养。不同条件下分离培养这三种病原菌需要使用不同的试验平板,从而有效分析粪便样本中三种菌群的检出率。

福氏2c(新菌型)和福氏2a志贺菌生物学关系实验研究

目的:研究福氏志贺菌2c与2a之间的生物学关系。了解新菌型的生物学特性。方法:对前述2株菌进行生化试验、噬菌体裂解试验、药物敏感试验和血清凝集试验。结果: 2株菌的生化反应、噬菌体裂解模式均相同。福氏志贺菌2c同时含有群抗原3, 4和7,对乙基西羧霉素、庆大霉素、卡那霉素耐药,而福氏志贺菌2a则对以上3种药物敏感。结论:新发现的福氏志贺菌2c与福氏志贺菌2a在药物敏感性上存在较大的差异。