息半夏总生物碱的提取工艺优化及其生物活性分析

以息半夏的块茎为原料,乙醇为超声波辅助提取溶剂,考察乙醇体积分数、超声时间、料液比、超声温度等单因素对总生物碱提取率的影响,设计正交试验优化提取工艺,并测试总生物碱的体外抗氧化和降血糖活性。结果表明,最佳提取条件为乙醇体积分数65%、提取时间60 min、料液比1∶45、超声温度65℃,总生物碱的提取率达0.502%;总生物碱对DPPH、ABTS自由基的清除率分别达89.90%和43.60%,对α-葡萄糖苷酶的抑制率达86.40%。该工艺简单可行,总生物碱表现出良好的体外抗氧化和降血糖生物活性。

白刺花叶总生物碱通过抑制MAPK/NF-κB信号通路减轻脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应

目的探讨白刺花叶总生物碱(Sophora davidii Hance leaves total alkaloids,SDLTAs)的体外抗炎作用及可能的分子机制。方法采用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症模型,给予不同浓度(50、100、200μg/mL)SDLTAs,Griess法检测SDLTAs对细胞NO表达的影响;ELISA法检测SDLTAs对细胞因子IL-6、TNF-α和IL-1β表达的影响;RT-qPCR法检测细胞中iNOS、NF-κB p65和IκBαmRNA的表达;Western blotting法检测细胞中p-p38、p-p65和p-JNK以及细胞核内NF-κB p65的蛋白表达。结果SDLTAs显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应。SDLTAs极显著降低细胞中NO、IL-6、TNF-α和IL-1β的分泌(P<0.01),极显著下调细胞中iNOS、NF-κB p65和IκBαmRNA的表达(P<0.01),极显著降低细胞中p-p38、p-p65和p-JNK以及细胞核内NF-κB p65的蛋白表达(P<0.01)。结论SDLTAs可通过调节MAPK/NF-κB信号通路发挥抗炎作用。

黑种草子总生物碱对溃疡性结肠炎小鼠的抗炎作用

目的探索黑种草子总生物碱(TAN)对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的抗炎作用。方法通过UPLC-TOF-MS/MS对TAN化学成分进行分析。体内实验建立葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠UC模型,分别给予SASP(200mg/kg)和TAN(2.5、5.0mg/kg),连续7d。给药结束后,检测小鼠体质量、疾病活动指数、结肠长度、结肠病理损伤、IL-1β、IL-18、IL-6、NF-κB、IκBα蛋白表达及其磷酸化水平。体外实验建立LPS和Nigericin双重诱导的THP-1细胞模型,给予TAN(12.5、25、50μg/mL)和MCC950(NLRP3抑制剂,5μmol/L)处理,采用ELISA法检测细胞上清液IL-1β、IL-18、IL-6水平。结果TAN主要由多种含量较大的特征型单体生物碱组成。TAN(2.5、5.0mg/kg)能改善DSS诱导的小鼠体质量减轻、疾病指数升高、结肠缩短和病理损伤,降低DSS所致的结肠炎症因子IL-1β、IL-18、IL-6分泌及NF-κB、IκBα蛋白磷酸化水平。体外炎症模型证实,TAN可抑制LPS和Nigericin双重诱导的THP-1细胞上清中的IL-1β、IL-18、IL-6水平。结论TAN含有多种结构类似的单体生物碱,具有改善溃疡性结肠炎小鼠炎症的作用,该作用可能与其抑制NF-κB通路有关。

桑枝总生物碱和卡格列净治疗血糖控制不佳的老年2型糖尿病病人的疗效观察

近年的流行病学调查显示,中国成人T2DM发病率已达12.4%,血糖控制不佳与病人的致残率、致死率以及花费增加均密切相关。我国老龄化加剧,老年糖尿病人群增长迅速,≥65岁的老年糖尿病病人数约为3550万,居世界首位,占全球老年糖尿病病人的1/4[1]。桑枝总生物碱(sangzhi alkaloids,SZ-A)是中国首个原创降血糖天然药物,研究显示SZ-A可以从多个靶点降低血糖:延缓小肠内糖的消化吸收[2-4]、保护胰岛β细胞[5]、促进肠促胰素分泌[6]、改善胰岛素抵抗等[5,7]。

黄花棘豆总生物碱提取工艺及抗斜纹夜蛾活性研究

试验旨在优化黄花棘豆中总生物碱的提取工艺并进行抗斜纹夜蛾活性研究。在单因素试验基础之上,设计Box-Behnken响应面试验优化总生物碱的提取工艺,采用浸虫浸叶法探究总生物碱抗斜纹夜蛾活性。结果显示,最佳提取工艺条件为:乙醇浓度64.00%、提取温度81.00℃、提取2次、提取时间1.50 h、液料比11.00 mL·g^(-1),总生物碱提取率为1.79 mg·g^(-1)。此工艺条件下获取的总生物碱对3日龄斜纹夜蛾幼虫的LC_(50)值为42.10 mg·mL^(-1)。

小檗皮总生物碱的提取纯化、含量测定和急性毒性实验研究

目的:对小檗皮总生物碱进行提取纯化和含量测定,并探讨其对小鼠的急性毒性反应。方法:采用加热回流和大孔吸附树脂提取纯化小檗皮药材中的总生物碱部位。以盐酸小檗碱为对照品,采用酸性染料比色法对提取物中的总生物碱含量进行测定。采用单次给药小檗皮总生物碱提取物,观察小鼠的活动、体质量、死亡等情况;采用加权回归法计算半数致死量(median lethal dose,LD50)及95%置信区间。结果:小檗皮提取物中总生物碱的平均含量为56.84%,其对小鼠的LD50为2.34 g·kg^(-1)(95%置信区间为2.072~2.637 g·kg^(-1)),为临床用量的272.6倍;最大非致死剂量为1.32 g·kg^(-1),为临床用量的153.8倍。结论:小檗皮总生物碱提取物在临床剂量范围内使用安全可靠,为其开发利用提供了科学依据。

雪上一枝蒿总生物碱柔性脂质体凝胶膏剂的制备及体外透皮研究

目的:制备雪上一枝蒿总生物碱(简称“雪总碱”)柔性脂质体凝胶膏剂,并考察其体外透皮性能。方法:以包封率、粒径、表面Zeta电位及多分散系数(PDI值)综合评分为指标,采用Box-Behnken响应面法优化雪总碱柔性脂质体处方并对其形态进行表征。通过混料均匀设计,以均匀性、延展性、渗透性、残留量、皮肤追随性、内聚力、初黏力、持黏力及剥离强度等多因素综合评分,优选凝胶膏剂处方。采用Franz扩散池,以大鼠皮肤为透皮模型,考察雪总碱柔性脂质体凝胶膏剂的体外透皮性能。结果:优选得到的雪总碱柔性脂质体处方为:加药量11.7 mg,脂固比7.5∶1,脂表比62∶38,水化时间10 min,柔性脂质体外观为球形或类球形,包封率为(61.38±3.89)%,粒径为(56.27±0.75)nm,Zeta电位为(-27.50±0.28)mV,PDI值为(0.225±0.009)。优选得到的柔性脂质体凝胶膏剂处方为:6.24%Viscomate NP 700、19.86%高岭土、23.17%甘油、4.96%PVP、42.18%柔性脂质体溶液、3.59%甘羟铝。体外透皮结果表明,雪总碱柔性脂质体凝胶膏剂中药物的48 h累积渗透率是普通凝胶膏剂的3.8倍。结论:将雪总碱包封于柔性脂质体制成凝胶膏剂,可显著提高药物透皮速率,有望作为新型给药载体。

红花中总生物碱回流提取工艺优化

目的 筛选红花中总生物碱最优回流提取工艺。方法 以盐酸五羟色胺为对照品,红花中总生物碱含量为指标,采用单因素实验,考察了温度、时间、料液比和甲醇体积分数等对红花中总生物碱含量的影响。通过正交试验,对红花中总生物碱的提取工艺进行了优化,并对最优提取工艺进行了实验验证。结果 最佳工艺条件为温度65℃,液料比(v/w)50∶1,甲醇体积分数40%,提取时间60 min。在优化的工艺条件下,总生物碱平均含量为35.99 mg/g,RSD为0.26%(n=3)。结论 本研究所得最优提取工艺简单、易行,工艺参数可靠,提取效果良好,为红花中总生物碱进一步开发利用提供了实验依据。

猪毛菜总生物碱提取工艺优化研究

以猪毛菜总生物碱提取率为指标,通过单因素试验和响应面试验优化猪毛菜总生物碱提取工艺。以DPPH和羟基自由基清除率确认猪毛菜总生物碱抗氧化能力。结果表明,猪毛菜总生物碱最优提取工艺为液料比36∶1(mL∶g)、超声提取时间60 min、复合酶含量2%、酶解时间1.4 h、乙醇体积分数57%,在最优条件下,猪毛菜总生物碱提取率可达0.6982%。抗氧化活性实验表明,随着猪毛菜生物碱浓度增加,抗氧活性随之增加,当猪毛菜生物碱质量浓度为0.5 mg/mL时,DPPH自由基和羟基自由基清除率分别达到84.34%和75.69%。本研究优化了猪毛菜总生物碱的提取工艺,初步分析猪毛菜生物碱抗氧化活性,为猪毛菜有效药用成分的分析研究和功能性食品的开发提供科学依据。

小黄紫堇总生物碱的提取分离、结构鉴定及抗氧化活性研究

小黄紫堇为罂粟科紫堇属植物,是常用的广谱高效药物。对蒙药材小黄紫堇中的总生物碱进行提取分离,鉴别其总生物碱中化学成分并研究其抗氧化活性。首先将小黄紫堇全草醇浸后经酸化有机溶剂萃取,得到氯仿部分和正丁醇部分。其次对氯仿部分进行分离纯化并采用高效液相色谱-质谱、核磁共振等进行了表征。最终采用1,1-二苯基-2-甲基肼(DPPH)法测定了小黄紫堇总生物碱与单体生物碱对自由基的清除能力。实验结果表明,蒙药材小黄紫堇总生物碱提取率为1.185%,在总生物碱中发现一种单体生物碱,并证实了该物质为紫堇嘧啶碱(Corlumidin)。通过实验发现小黄紫堇的总生物碱与单体生物碱Corlumidine均对DPPH自由基具有较强的清除能力。采用的研究方法简单,结果准确,为小黄紫堇的提取分离及其抗氧化活性的研究提供了有效依据。

三种猕猴桃茎中总生物碱提取工艺优化及抑菌活性分析

以软枣猕猴桃、葛枣猕猴桃及狗枣猕猴桃茎作为材料,考察液料比、超声功率、超声时间及乙醇浓度对总生物碱得率的影响,并探究三种猕猴桃茎中总生物碱对灰葡萄孢菌、胶孢炭疽菌、链格孢、多主棒孢霉和丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种的抑制效果。结果表明,三种猕猴桃茎中总生物碱提取最佳工艺为乙醇体积分数为92%,液料比24 mL/g,300 W超声20 min,软枣猕猴桃、葛枣猕猴桃及狗枣猕猴桃茎中总生物碱平均得率分别为0.41、0.43和0.39 mg/g。软枣猕猴桃茎中总生物碱对丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种抑制效果明显,MIC为50 mg/L,葛枣猕猴桃及狗枣猕猴桃茎中总生物碱对丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种抑制效果不明显;对灰葡萄孢菌、胶孢炭疽菌、链格孢及多主棒孢霉无抑制效果。该研究初步证实三种猕猴桃茎中均含有生物碱类物质,且对细菌具有一定的抑菌活性,为后续三种猕猴桃总生物碱的深入研究提供了理论依据。

甘青乌头总生物碱的分离及纯化

为分离纯化制备高纯度的甘青乌头生物碱,通过对甘青乌头总生物碱的提取及含量测定,利用HPLC法测定甘青乌头酯型生物碱含量,单因素试验考察甘青乌头总生物碱和酯型生物碱提取条件。结果表明,以苯甲酸峰面积以及总生物碱的含量为参照标准,选取适宜的总生物碱提取方法,得到85℃为最佳提取温度,1.5 h为最佳提取,90%为乙醇的质量分数。高效液相色谱法精密度、重复性和稳定性良好,且操作简便,对甘青乌头质量控制理想。

百色地区野生宽筋藤总生物碱及紫丁香苷的含量分析

目的:分析测定百色地区野生宽筋藤及其不同药用部位的总生物碱、紫丁香苷含量差异和不同季节含水量区别,为产地采收加工宽筋藤提供理论支持。方法:采用紫外-可见分光光度计法测定总生物碱的含量;采用HPLC法测定紫丁香苷含量;采用烘干法测定不同季节宽筋藤的水分含量计算其折干率。结果:宽筋藤不同药用部位总生物碱的含量差异明显,皮部含量明显高于木质部;不同直径的宽筋藤总生物碱含量差异较大,中等藤与细藤差异不明显,在较粗的宽筋藤中总生物碱含量最高;不同药用部位的紫丁香苷含量差异不显著;不同直径的宽筋藤中紫丁香苷的含量差异显著,随着藤茎的直径的增加含量越高;冬季含水量较低。结论:在一定范围内,宽筋藤总生物碱与紫丁香苷含量与生长年限呈正相关;冬季采收效益最高。

正交设计法优化白英中总生物碱的提取工艺

目的:探究白英中总生物碱提取工艺,并用正交设计法进行优化。方法:以士的宁为标准对照品,用酸性染料比色法测定总生物碱含量,采取单因素对照实验,考查提取温度、提取时间、乙醇浓度和固液比4个变量,在此基础上再进行正交试验,确定最佳提取工艺条件。结果:当提取温度为70℃,提取时间为6 h,乙醇浓度为90%,固液比为1∶60(g/mL)时,提取效果最佳,提取率为12.19%。结论:该方法优选了白英总生物碱的最佳提取工艺,为白英的进一步开发利用提供了依据。

紫外分光光度法测定“建莲”莲子心中总生物碱与总黄酮的含量

检测福建所产“建莲”莲子心中的总生物碱与总黄酮的含量。方法:通过建立紫外分光光度法对目标物质总生物碱和总黄酮进行测定,选取甲基莲心碱与芦丁作为试验对照品,并以二者的最大吸收波长420 nm和500 nm下作为检测波长。结果:福建所产的“建莲”莲子心中两类主要化合物的平均含量为总生物碱1.96%和总黄酮1.15%,加样回收率为总生物碱96.7%和总黄酮98.1%。结论:该法检测莲子心总生物碱和总黄酮操作便捷、可靠,可作为其药材质量控制的方法。

响应面优化伏毛铁棒锤总生物碱微波辅助提取工艺

目的:优化微波辅助提取伏毛铁棒锤总生物碱工艺,并比较不同产地伏毛铁棒锤中总生物碱含量。方法:以单因素试验为基础,结合响应面法,以总生物碱的含量为评价指标,考察温度、料液比、时间和体积分数对提取得率的影响。结果:最佳微波辅助提取工艺参数(条件)为:温度48℃,料液比1∶19(g/mL),时间12 min,甲醇体积分数39%。结论:该提取方法稳定可靠,操作简便,可用于优化伏毛铁棒锤总生物碱提取工艺。比较不同地区伏毛铁棒锤中总生物碱含量,贵南县伏毛铁棒锤总生物碱含量最高,为0.290%。

细叶十大功劳叶中总生物碱大孔树脂纯化及抗氧化研究

为确定细叶十大功劳(Mahonia fortunei)叶中总生物碱大孔树脂分离纯化的最佳工艺条件及抗氧化活性,该研究通过比较6种大孔吸附树脂对总生物碱的静态吸附和解吸附效果,优选出最佳树脂并考察其动态纯化总生物碱的工艺条件,并采用DPPH法对纯化前后的总生物碱抗氧化性能进行评价。结果表明:(1)AB-8型大孔吸附树脂纯化效果最好,其最佳工艺条件为上样浓度50 mg·mL^(-1)(生药浓度)、上样量26 BV、上样液流速2 BV·h^(-1);吸附完成后,以3 BV水洗后再以4 BV 50%乙醇洗脱,在此条件下得到的总生物碱含量由13.33%提高到56.64%。(2)各样品对DPPH自由基的清除能力为对照品Vc(IC_(50)=10.39μg·mL^(-1))>总生物碱纯化品(IC_(50)=39.08μg·mL^(-1))>总生物碱粗品(IC_(50)=55.28μg·mL^(-1))。综上表明,AB-8型大孔吸附树脂可有效富集细叶十大功劳叶中总生物碱有效部位,细叶十大功劳叶中总生物碱具有一定的抗氧化活性。

延胡索总生物碱对慢性癫痫大鼠皮层NLRP3/caspase-1/GSDMD介导的细胞焦亡的影响

目的:研究延胡索总生物碱(TAC)对戊四氮(PTZ)所诱导的慢性癫痫大鼠的治疗作用,探讨其对大脑皮层核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/caspase-1/消皮素D(GSDMD)介导的细胞焦亡的影响及可能机制。方法:清洁级雄性SD大鼠30只,随机抽取6只大鼠作为正常组,其余大鼠采用PTZ(35 mg/kg)腹腔连续注射28 d复制慢性癫痫模型。将造模成功的18只大鼠随机分为模型组、低剂量TAC组和高剂量TAC组,每组6只。低、高剂量TAC组大鼠分别灌胃给予7和14 mg/kg的TAC,连续给药14 d,正常组和模型组大鼠灌胃给予等体积生理盐水。观察记录大鼠全面强直阵挛发作(GTCS)和极小阵挛发作(MCS)的潜伏期;采用HE染色观察颞叶皮层的病理学变化;TUNEL法检测神经细胞凋亡;免疫组化和Western blot法检测皮层组织核因子κB(NF-κB)、NLRP3、caspase-1和GSDMD蛋白表达;免疫组化检测脑组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素18(IL-18)和IL-1β蛋白表达;RT-qPCR检测各组NLRP3、caspase-1和GSDMD的mRNA表达。结果:与正常组相比较,模型组大鼠GTCS和MCS的潜伏期显著缩短(P<0.01);模型组大鼠皮层神经细胞凋亡数量显著增加,皮层组织中TNF-α、IL-18和IL-1β蛋白表达均显著增加,NF-κB、NLRP3、caspase-1 p20和GSDMD N端片段(GSDMD-N)的mRNA及蛋白表达也显著增加(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,各剂量TAC组大鼠GTCS和MCS的潜伏期显著延长,皮层神经细胞凋亡数量显著减少,皮层组织中TNF-α、IL-18和IL-1β蛋白表达均显著减少,NF-κB、NLRP3、caspase-1 p20和GSDMD的mRNA及蛋白表达也均显著减少(P<0.01)。结论:TAC可能通过NLRP3/caspase-1/GSDMD信号通路,减少炎症因子分泌,抑制神经细胞焦亡,从而对PTZ诱导的慢性癫痫大鼠起到治疗作用。

金莲花总生物碱分离及其活性研究

以金莲花为试材,使用响应面法优化总生物碱提取分离工艺,并分析测定金莲花总生物碱抗氧化和抑菌活性,以期为金莲花的深入开发和综合利用提供参考依据。结果表明:最佳提取分离工艺为90%乙醇,液料比39∶1 mL·g^(-1),超声功率400 W,超声32 min,总生物碱得率为0.844 mg·g^(-1);对DPPH、ABTS自由基及超氧阴离子清除率的IC50(半抑制浓度)值分别为0.016、0.036、4.404 mg·mL^(-1);对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC值分别为1.990 mg·mL^(-1)和1.330 mg·mL^(-1)。该研究初步证实金莲花富含生物碱类物质,且具有较强的抗氧化和抑菌活性。

桑叶中总生物碱的提取、抗氧化及抑菌性能研究

试验以桑叶为原料,采用超声辅助提取法提取总生物碱,在单因素试验基础上,采用正交试验对提取条件进行优化,并对桑叶生物碱进行抗氧化和抑菌活性研究。结果显示,桑叶中总生物碱最佳提取条件为乙醇体积分数50%、液料比25 mL/g、提取温度70℃、提取时间40 min;相同浓度下(0.2~1.0 g/L),桑叶中总生物碱对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS^(+))自由基的清除率最高分别可达85.5%和96.3%,其抗氧化性强于维生素C;桑叶总生物碱对细菌的抑制作用强于山梨酸和乙醇溶液,对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑菌圈直径大于10 mm,对细菌具有较强的抑制作用。研究表明,可以将桑叶中总生物碱作为功能性饲料添加剂应用于动物养殖行业。