日本鳗鲡人工催产后亲鱼恢复培养与再催产效果

日本鳗鲡(Anguillajaponica)产后亲鱼的恢复培养全过程包括:产后亲鱼的海水淡化、诱导开口以及亲鱼培育。对2种不同淡化方式的结果比较发现,日本鳗鲡亲鱼的海水淡化方式以缓慢连续的方式较好,即每天换水1次,每次淡化量为总盐度的3%～4%,总淡化时间为1个月。淡化后的亲鱼存活率分别为:自然产卵的产后亲鱼达到100%,人工授精的产后亲鱼为86.3%,而难产的产后亲鱼则为81.5%。在各种开口驯养方式中,以水蚯蚓为开口饵料的驯养效果较好。诱导亲鱼开始摄食所需时间最短,为18d;摄食量也最大,达到平均体重的2.5%。从水蚯蚓逐步转为全人工饵料后,进行日常亲鱼培育。经18个月的恢复培养后,使产后亲鱼的平均体重雌鳗330g、雄鳗150g分别恢复到765g和470g。但2次繁殖的各项指标中,催熟率、成熟系数和性腺发育情况远远低于野生鳗,而催产率和幼苗存活率则略高于野生鳗,其原因尚有待进一步研究。

低温、弱光、缺氧及恢复培养对铜绿微囊藻生理生长的影响

智能光照培养箱内模拟冬季低温、弱光、缺氧对铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)生理生长的影响及解除限制后的恢复培养实验。测定藻细胞的生物量、叶绿素及类胡萝卜素、总糖及蛋白质的变化,探讨微囊藻越冬及春季复苏机制。结果表明:(1)18d连续处理,缺氧组藻细胞一直保持缓慢生长,低温、遮光及联合作用处理组,藻细胞均受到明显抑制停止生长;恢复培养实验,各组藻细胞均能快速生长;(2)遮光及联合处理,藻细胞内类胡萝卜素合成迅速,藻体开始变黄;缺氧处理类胡萝卜素随着藻细胞缓慢增长而一直升高;低温处理类胡萝卜素含量增加较少,"低温"、"缺氧"环境下藻细胞光合作用的耐受性强于"遮光"环境;(3)藻细胞经遮光处理后细胞内蛋白质及总糖含量有所降低,低温处理却迅速累积、藻细胞密度增大,缺氧处理组含量几乎不变,联合处理组略有增加。四个处理组恢复培养后总糖和蛋白质含量又恢复接近初始状态含量。光强是影响藻细胞光合作用活性的主要因子,温度是影响藻细胞密度、导致藻细胞冬季沉降休眠、春季上浮复苏的关键因子。

肺形侧耳高温后恢复期间海藻糖代谢途径研究

【目的】探索食用菌对高温胁迫后恢复响应差异的机制,为食用菌的高温育种研究提供理论基础。【方法】以肺形侧耳热敏感型菌株CCMSSC 00494和耐热型菌株CCMSSC 00499为材料,通过测定高温胁迫后恢复培养期间菌丝体内海藻糖代谢相关酶活性和基因相对表达量的变化,研究海藻糖代谢途径的应激响应。【结果】高温胁迫后恢复培养期间,两株肺形侧耳菌株海藻糖含量迅速降至对照水平,CCMSSC 00494中海藻糖含量降低速率高于CCMSSC 00499。CCMSSC 00494中海藻糖-6-磷酸合成酶(TPS)活性随着处理时间的延长增加,而CCMSSC 00499中的TPS活性缓慢下降。两菌株中合成海藻糖反应方向海藻糖磷酸化酶(TP)活性急剧下降。降解海藻糖反应方向TP活性和中性海藻糖酶(NTH)活性分别在恢复前期和后期被激活,参与海藻糖水解。tps和tp基因的表达量变化与各自酶活性变化一致,但nth基因的高效表达与其在恢复初期的NTH活性下降不一致。【结论】高温胁迫后恢复培养期间,热敏感型菌株中TPS活性和tps基因表达量显著高于耐热型菌株,是两者海藻糖代谢途径中的最主要差异。

“两步法”体外培养山羊卵母细胞的初步研究

体外成熟培养的卵母细胞经体外受精后 ,囊胚发育率远低于体内成熟卵母细胞 .原因之一是由于体外成熟卵母细胞的不充分获能造成的 .有假说认为 :卵母细胞在体外培养过程中 ,如果延长 GV期 ,可促进卵母细胞进一步获能 ,从而提高发育潜能 .本文以山羊卵子为研究对象 ,探讨了山羊卵泡各种成分以及异种家畜卵泡液对山羊卵母细胞核成熟抑制以及抑制解除后减数分裂的影响 .结果显示 ,山羊 5 0 % Q卵泡液、1 0 0 %卵泡液、半卵泡、打孔整体卵泡以及完整卵泡对山羊卵母细胞的核成熟抑制率分别为 :0 .0 0 %、9.3 8%、60 .47%、78.2 6%和70 .0 9% .随后 ,对经山羊半卵泡、打孔整体卵泡、完整卵泡抑制培养后的卵子进行恢复培养发现 ,卵子核成熟率分别为 :64.2 9%、3 .49%和 4.1 3 % .山羊卵母细胞与半卵泡共培养 2 4h后进行 0 h、1 2 h、2 0 h、2 4h和 3 0 h的恢复培养 ,核成率分别为 :0 .0 0 %、2 0 .0 0 %、61 .90 %、64.2 9%和 43 .75 % .表明 ,山羊半卵泡可以有效抑制山羊卵母细胞使之处于 GV期 ,并且这种抑制作用可以恢复 ,恢复培养时间以 2 0 h和 2 4h较为适宜 .初步研究异种家畜卵泡液对山羊卵母细胞核成熟抑制的影响发现 ,5 0 %牛卵泡液、1 0 0 %牛卵泡液、5 0 %绵羊卵泡液、1 0 0 %绵羊卵泡液对山羊卵母细?

包埋玻璃化法超低温保存植物种质的研究进展

包埋玻璃化法是在玻璃化法和包埋脱水法基础上发展起来的超低温保存植物种质的新技术。它具有能同时处理大量材料,处理后恢复生长快,对材料的毒害作用较小及成芽率高等优点,已成功地用于辣根、山嵛菜等20余种植物,在植物种质资源的保存上显示出了巨大的应用潜力。本文介绍了包埋玻璃化法产生的背景及其优点,阐述了包埋玻璃化法的基本方法和预培养、包埋、脱水、化冻及恢复培养等过程,比较了该法冻存后的效果和冻存后所形成植株的遗传稳定性,同时指出了进一步研究的重点。

用低温诱导法制备人高分辨染色体

目的 :探讨非药物作用获得人高分辨染色体。方法 :外周血淋巴细胞在 37℃中培养 66h ,入 4℃冰箱4h ,再分别入 37℃恢复培养 0、1 0、2 0、30、4 0、50、60min ,终止培养前以低浓度 ( 0 0 8μg/ml)秋水仙素处理培养物 30min。结果 :不恢复培养 ( 0min)或短时恢复培养 ( 1 0、2 0min)组分裂指数最高 ,晚前期、前中期和早中期染色体数目最多。结论 :该法简便 ,不需药物诱导 ,便于推广。

奶山羊转基因供核细胞的再饥饿对核移植胚胎发育的影响

为提高转基因奶山羊体细胞核移植胚胎早期发育率,将经转染外源基因的山羊胎儿成纤维细胞经饥饿培养(含0.5%FCS的DMEM)5天后分成两部分:第一部分细胞-80℃或液氮冻存,试验前复苏后直接用作供核细胞(试验组Ⅰ),或复苏后恢复培养(含10% FCS的DMEM)2-5天后再饥饿5天用作供核细胞(试验组Ⅱ);第二部分细胞作传代培养(含10% FCS的DMEM)2天后再饥饿5 天用作供核细胞(试验组Ⅲ)。将上述不同处理的供核细胞进行细胞周期与存活率的检测,并将该供核细胞移入去除遗传物质的山羊MⅡ期卵母细胞的卵周隙内,经电融合、化学激活后,将核移植(NT)胚胎经0.8%琼脂糖包理后移入临时寄母输卵管内,培养6天后回收并观察NT胚胎的早期发育。结果,试验组Ⅱ所用供核细胞中G_0/G_1期细胞所占比例及其存活率分别为95.68%、99.9%,均显著地高于试验组Ⅰ(88.66%、80%);试验组Ⅱ的桑椹及囊胚期NT胚胎的发育率(66.09%)显著地高于试验组Ⅰ(22.00%)与试验组Ⅲ(50.51%)。将以上发育的NT胚胎分别移入同步发情的受体后,35 天作B超妊娠诊断,试验组Ⅱ的受体妊娠率为45.83%,显著地高于试验组Ⅰ(20.00%)与试验组Ⅲ(9.58%)。流式细胞仪分析结果表明,饥饿后的供核细胞经冷冻,复苏后恢复培养2-5天,再经饥饿处理,能显著地提高G_0/G_1期细胞的比例及细胞存活率;应用该细胞所组建的NT胚不仅具有较高的桑椹与囊胚期发育率,而且具有较高的受体妊娠率。

微弹轰击小麦幼胚愈伤组织的影响因素研究

【目的】优化小麦基因枪转化技术体系,为提高小麦基因枪转化效率提供参考。【方法】以小偃22为材料,采用基因枪法分析小麦幼胚愈伤组织诱导时间、微弹轰击金粉用量及筛选分化培养基类型对基因枪遗传转化频率的影响,并对转化植株进行了检测。【结果】在相同条件下,小麦幼胚经过9d的愈伤组织诱导时再生植株率最高,达到4.24%;同一条件下,金粉用量为60μg/枪的再生植株率最高,达到3.90%;使用1/2MS培养基添加NAA1.0mg/L和KT 1.0mg/L进行转化细胞筛选与分化的效果最好,再生植株率为3.72%;对转化抗性再生植株的特异PCR检测表明,目的基因已整合到小麦染色体组中。【结论】小麦幼胚通过9d的愈伤组织诱导,基因枪轰击金粉用量为60μg/枪,使用筛选分化培养基1/2MS+KT 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L+双丙氨膦2.0mg/L+蔗糖30g/L+Ag 5.0g/L进行转化细胞的筛选与分化,可获得较高的抗性再生植株率。

亳菊的离体保存研究

以亳菊为试材,研究了不同培养基营养成分和蔗糖浓度对其试管苗离体保存的影响,并对再生后代的遗传稳定性进行了初步形态学比较。试验结果表明：在（23±2）℃、2000～3000 lx 光照强度、12 h. d -1的光照培养条件下,MS 培养基中添加15 g. L -1蔗糖,或者1/2 MS 培养基中添加15 g. L -1蔗糖均能使亳菊连续保存365 d 以上,并且保持有较高的成活率,分别为88.9%和97.8%。保存365 d 的试管苗在 MS 培养基上均长势良好,能恢复正常生长,再生后代形态上与对照组中试管苗无差异,保持了良好的遗传稳定性。

异齿裂腹鱼人工规模化繁殖技术研究

2010年4～6月,对野生异齿裂腹鱼(Schizothorax o'connori)人工规模化繁殖技术进行研究,并初步进行产后亲鱼恢复培养技术研究。对108尾雌鱼进行干法人工授精,共采卵104万多粒,孵出仔鱼62万多尾。其中45尾雌亲鱼自然成熟,共采卵46.8万多粒,平均受精率和孵化率低于人工催产雌鱼卵。人工催产83尾雌亲鱼,催产率53.3%～86.4%,采卵57万多粒。人工催产的亲鱼部分能自然产卵、受精。催产剂组合为:混合使用地欧酮(DOM)和促黄体素释放激素类似物(LHRH-A3),采取1针注射,每kg雌鱼体重注射剂量为(10～12)mg DOM+(20～24)μg LHRH-A3;采用2针注射,第一次注射剂量为(2～3)mg DOM+(4～6)μg LHRH-A3/kg体重,第二次注射剂量为(10～12)mg DOM+(20～24)μg LHRH-A3/kg体重。野生异齿裂腹鱼雌鱼群体卵巢发育不同步,即使同批催产的雌亲鱼其人工授精的适宜时间差异明显,在13.8～16℃温度条件下,其变化范围为34.5～81.43 h。产后亲鱼平均成活率56.5%。

自然界中处于VBNC状态微生物的研究进展

自然界中大约有 90 %以上的微生物尚未被分离鉴定。 80年代初提出VBNC状态微生物的存在 ,所谓的VBNC是指微生物在自然界中生存的一种状态 ,本文综述了在实验室条件下VBNC状态的形成条件、培养性的恢复及处于VBNC状态微生物的检测方法等方面的研究进展 ,并介绍了第一个微生物生长因子Rpf。

过氧化氢灭菌快速生物指示物荧光结果可靠性

目的 通过验证快速生物指示物荧光反应结果的可靠性,指导消毒供应中心正确进行生物监测,以实现精准质量管理。方法 将36支三个批次的快速自含式生物指示物分为空白对照组、阳性对照组、不同装载方式灭菌的试验组,通过培养仪荧光判读、温箱培养观察、pH值检测、分光光度法、芽孢恢复培养、显微镜观察等方法,从多个角度研究分析和判断快速生物指示物荧光结果和残留菌量的关系。结果 试验组荧光阴性结果的生物指示物颜色变化均为阴性,其温箱培养观察、pH值检测、分光光度结果与空白对照组数据接近,芽孢恢复培养无菌生长,为真阴性;试验组荧光阳性、颜色变化阳性结果的生物指示物pH值结果及分光光度结果与阳性对照组数据接近,芽孢恢复培养有菌生长,为真阳性;试验组荧光阳性、颜色变化阴性结果的生物指示物分光光度结果与阳性对照组数据接近,pH值检测结果与空白对照组接近,芽孢恢复培养无菌生长,为处于临界状态的假阳性。结论 快速自含式生物指示物灭菌后荧光阴性结果可靠,可作为灭菌物品放行依据。荧光阳性结果需进一步验证其是真阳性还是假阳性,重新灭菌荧光结果阴性后放行为符合安全及实际需求的选择。