MEX3A对结肠癌细胞恶性表型的影响及其机制研究

目的:探讨MEX3A在结肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞恶性表型的影响并探索其机制。方法:TCGA数据库分析MEX3A在结肠癌组织及正常组织中的差异表达及其与患者临床病理分期和预后的相关性,并通过免疫组化进一步验证。采用慢病毒对结肠癌细胞中MEX3A的表达进行敲低,检测细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭能力。裸鼠皮下荷瘤后对肿瘤生长进行测量记录。Flag融合表达质粒过表达MEX3A后进行COIP实验。采用质谱进行蛋白质定性检测(Shotgun)与MEX3A互作的蛋白质。生物信息学分析后进行COIP验证,对互作蛋白表达进行挽救实验验证。结果:MEX3A在结肠癌组织中表达显著上调且与患者临床病理特征及预后相关。采用慢病毒敲减MEX3A表达后,结肠癌细胞增殖能力显著被抑制,凋亡则显著增加。细胞转移能力检测结果显示,结肠癌细胞的迁移及侵袭能力显著被抑制。小鼠体内实验结果表明,敲减MEX3A表达后,肿瘤在体内的生长明显被抑制。蛋白质定性检测及COIP验证结果显示,EIF2AK2、LAMB3及MSI2与MEX3A蛋白存在相互作用。在敲减MEX3A表达后分别过表达EIF2AK2、LAMB3及MSI2后细胞增殖能力被不同程度恢复,其中MSI2过表达后细胞增殖能力恢复最明显。MTT及细胞迁移能力验证结果显示过表达MSI2后,细胞增殖及迁移能力显著恢复。结论:MEX3A在结肠癌组织中表达上调且与患者预后呈负相关,其通过与MSI2相互作用促进结肠癌细胞的恶性表型。

PD-L1/PD-L2对食管鳞癌细胞恶性表型的影响及耐药研究

目的探讨程序性死亡配体1/2(PD-L1/PD-L2)对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及对化疗药物的敏感性。方法在体外食管鳞癌KYSE150细胞系水平上,分别构建PD-L1杂合子敲除细胞系,慢病毒转染PD-L2过表达,将细胞分为WT组(PD-L1野生型)和PD-L1^(+/-)组(PD-L1杂合子敲除)、Ctrl组(对照)和OE-PD-L2组(PD-L2过表达),用RT-qPCR和Western blot验证PD-L1杂合子敲除和慢病毒转染PD-L2过表达效果以用于后续实验。采用EdU、细胞克隆形成实验、Transwell实验检测各组细胞增殖、迁移和侵袭能力。通过CCK8法检测细胞增殖能力并计算抑制率来评估细胞对化疗药物的敏感性。结果与野生型WT组相比,PD-L1^(+/-)组细胞增殖(P<0.001)、迁移(P<0.01)和侵袭能力(P<0.05)明显降低,差异有统计学意义。与Ctrl组相比,OE-PD-L2组细胞增殖和迁移能力增加(P<0.05),而侵袭能力无明显差异(P>0.05)。在顺铂药物梯度浓度干预下,与WT组相比较,PD-L1^(+/-)组细胞增殖活力明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。当顺铂药物浓度为20μmol/L时,与Ctrl组相比,OE-PD-L2组细胞增殖活力无明显变化(P>0.05),而在40μmol/L药物浓度作用下,与Ctrl组相比,OE-PD-L2组细胞增殖活力显著上升,差异有统计学意义(P<0.001)。加入不同浓度的五氟尿嘧啶后发现,与WT组相比,PD-L1^(+/-)组细胞增殖活力显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与Ctrl组相比,OE-PD-L2组细胞增殖活力显著下降(P<0.01)。比较WT组与PD-L1^(+/-)组特异性表达差异的蛋白,共获得25个差异表达蛋白质,其中差异倍数最为显著的上调蛋白为EGFR(Ser1070),下调蛋白为Smad4。结论PD-L1能够促进食管鳞癌细胞的恶性表型;PD-L2可以促进食管鳞癌细胞(ESCC)的增殖和迁移;PD-L1/PD-L2可以影响肿瘤细胞对顺铂和五氟尿嘧啶化疗药物的敏感性。

肿瘤相关巨噬细胞PKM2表达对食管癌细胞恶性表型的影响

目的探讨肿瘤相关巨噬细胞(Tumor associated macrophages,TAMs)中M2型丙酮酸激酶(Pyruvate kinase M2,PKM2)表达对食管癌细胞迁移、侵袭恶性表型的影响。方法慢病毒转染PKM2敲低/过表达质粒至THP-1细胞并诱导分化为TAMs,随机分为PKM2敲低组(PKM2 KD组)、PKM2敲低对照组(PKM2 KD NC组)、PKM2过表达组(PKM2 OE组)和PKM2过表达对照组(PKM2 OE NC组)。qRT-PCR检测PKM2及巨噬细胞表型标志物的表达;进一步与食管癌KYSE150细胞共培养后,Transwell实验检测食管癌细胞迁移和侵袭能力变化。将共培养细胞混合接种裸鼠皮下构建裸鼠荷瘤模型,免疫组化检测PKM2和CD163的表达,ELISA检测葡萄糖和乳酸水平。结果与PKM2 KD NC组相比,PKM2 KD组TAMs细胞内PKM2表达水平显著降低,NOS2表达上调(P均<0.05),CD163轻微下调(P>0.05),CCL5表达下调(P<0.05);与PKM2 OE NC组相比,PKM2 OE组TAMs细胞内PKM2表达水平显著升高,NOS2表达下调(P均<0.05),CD163轻微上调(P>0.05),CCL5表达上调(P<0.05)。共培养后,与PKM2 KD NC组相比,PKM2 KD组KYSE150细胞迁移和侵袭能力均显著下降(P均<0.001);与PKM2 OE NC组相比,PKM2 OE组KYSE150细胞迁移和侵袭能力均显著增强(P均<0.01)。细胞混合接种后,与CO-PKM2 KD NC组相比,CO-PKM2 KD组裸鼠皮下移植瘤体积和重量均减小(P>0.05),瘤体内PKM2和CD163表达下降(P均>0.05),血清葡萄糖和乳酸水平显著下降(P均<0.05);与CO-PKM2 OE NC组相比,CO-PKM2 OE组裸鼠皮下移植瘤体积和重量均增大(P>0.05),瘤体内PKM2和CD163表达上调(P均>0.05),血清葡萄糖和乳酸水平显著升高(P均<0.05)。结论PKM2表达变化影响TAMs细胞表型分化,而TAMs细胞中PKM2的表达可能通过无氧糖酵解作用,影响食管癌细胞的恶性表型。

circGLS抑制非小细胞肺癌细胞恶性表型的作用研究

目的明确circGLS的环状RNA特性及其环化位点,研究circGLS对NSCLC细胞恶性表型的影响。方法采用Northern-Blot、RNase R耐受实验检测circGLS的耐RNase R消化特性,使用Sanger测序明确其环化位点。分别使用Vector、OE-circGLS慢病毒感染H460和H1299细胞,使用sh-NC及sh-circGLS感染A549和H1975细胞,分组为Control组、Vector组、OE-circGLS组、sh-NC组和sh-circGLS组。采用CCK-8、流式细胞术、划痕和Transwell实验检测上述分组中细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭情况。结果Northern-Blot、RNase R消化和Sanger测序实验证实了circGLS耐受RNase R消化,且环化位点为“GA”。RT-qPCR结果证实细胞模型构建成功。CCK-8结果显示,H1299和H460细胞72 h OE-circGLS组细胞活力分别为0.88和0.9;A549和H1975细胞72 h sh-circGLS组活力均为1.13(Vector组和sh-NC组细胞活力均一化为1)。划痕实验结果显示,H460和H1299细胞愈合率分别为:OE-circGLS组vs Vector组=2.42%vs 5.57%和12.09%vs 25.07%;A549和H1975细胞愈合率分别为:sh-circGLS组vs sh-NC组=19.00%vs 13.81%和30.69%vs 21.53%。Transwell实验结果显示,H460细胞和H1299细胞迁移率(OD)分别为:OE-circGLS组vs Vector组=0.94 vs 1.01和0.57 vs 0.92;H1975细胞和A549细胞迁移率(OD)分别为:sh-circGLS组vs sh-NC组=1.044 vs 0.95和1.29 vs 1.09。流式细胞术结果显示,H1299细胞和H460细胞凋亡率分别为:OE-circGLS组vs Vector组=14.45%vs 7.54%和10.74%vs 1.79%;A549细胞和H1975细胞凋亡率分别为:sh-circGLS组vs sh-NC组=8.57%vs 9.52%和2.47%vs 4.95%。上述结果表明,过表达circGLS可以显著抑制NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭,且促进其凋亡,而敲低circGLS得到相反的结果。结论circGLS是一个真实存在的环状RNA,具有抑制NSCLC细胞恶性表型的功能,是潜在的非小细胞肺癌治疗靶点。

神经酰胺激酶抑制剂NVP-231对去势抵抗性前列腺癌细胞恶性表型效应的研究

目的探讨神经酰胺激酶(CerK)抑制剂NVP-231对去势抵抗性前列腺癌(CRPC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法采用Western blotting法检测VCaP、LNCaP两株雄激素依赖性前列腺癌细胞与C4-2B、PC3两株CRPC细胞内CerK蛋白水平。用DMSO或不同浓度(500、1000 nmol/L)NVP-231分别处理C4-2B和PC3细胞。采用CCK-8法、克隆形成实验、Hoechst染色法、划痕愈合实验和Transwell小室实验分别检测处理48 h的细胞增殖、克隆形成、凋亡、迁移和侵袭能力。结果与VCaP、LNCaP两株雄激素依赖性前列腺癌细胞比较,C4-2B、PC3两株CRPC细胞中CerK蛋白水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与DMSO处理组比较,C4-2B和PC3细胞经NVP-231处理后细胞增殖能力降低,细胞克隆形成数目减少,细胞凋亡率升高,划痕愈合率降低,穿膜细胞数减少,差异均有统计学意义(P<0.05),且均具有浓度依赖性。结论CerK抑制剂NVP-231能通过抑制细胞增殖与生长,促进凋亡,降低细胞侵袭和迁移能力,进而逆转CRPC细胞的恶性表型。

中线蛋白2在胃癌中表达上调并促进胃癌细胞恶性表型

目的:研究中线蛋白2(MID2)在胃癌中的表达水平及对胃癌患者预后的影响,探讨MID2表达对胃癌细胞生物学表型的影响。方法:收集2014年1月至2016年12月温州医科大学附属第一医院胃癌根治术后患者组织标本420例,联合TCGA数据库评估MID2在胃癌组织中的表达情况及对胃癌患者预后的影响。构建靶向MID2基因的过表达质粒和小干扰RNA(siRNA),转染胃癌细胞后通过CCK-8实验评估胃癌细胞的增殖能力,Transwell实验评估胃癌细胞的迁移与侵袭能力。结果:MID2表达水平在胃癌组织中上调(P<0.05);MID2高表达预示着胃癌患者较短的总体生存期(P=0.002)、无病生存期(P=0.002)、无进展生存期(P=0.003)。上调MID2的表达可以显著促进胃癌细胞BGC-823和SGC-7901的增殖和迁移、侵袭能力(P<0.05);敲低MID2能够显著抑制胃癌细胞MGC-803的增殖和迁移、侵袭能力(P<0.05)。结论:MID2在胃癌组织中表达上调,MID2高表达与胃癌患者较差的预后相关,上调MID2的表达可以显著促进胃癌细胞恶性表型。

miR-495通过抑制RNF113A的表达调控食管鳞癌细胞恶性表型

目的:探讨微小RNA-495(miR-495)对食管鳞癌细胞恶性表型的影响及分子机制。方法:在食管鳞癌细胞Eca109中转染miR-495模拟物、miR-495抑制剂及相应的随机对照序列,分别采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测miR-495的表达,CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率变化,Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移情况,并用qPCR和Western blot检测下游靶基因RNF113A mRNA和蛋白的表达。结果:与对照组比较,转染miR-495模拟物组Eca109细胞中miR-495 mRNA水平显著升高(P<0.05),转染miR-495抑制剂组Eca109细胞中miR-495 mRNA水平显著降低(P<0.05);各组间细胞增殖能力无显著变化(P>0.05);与对照组比较,转染miR-495模拟物组细胞凋亡增多(P<0.01),迁移和侵袭能力下降(P<0.01),细胞被阻滞在G0/G1期(P<0.01);转染miR-495抑制剂组细胞凋亡减少(P<0.01),迁移和侵袭能力升高(P<0.01),进入细胞周期S期的细胞显著增多(P<0.05)。与对照组比较,转染miR-495模拟物组Eca109细胞中RNF113A蛋白水平表达下调(P<0.05),转染miR-495抑制剂组RNF113A蛋白水平表达上调(P<0.05),而RNF113A mRNA水平无显著变化(P>0.05)。结论:miR-495可促进Eca109细胞凋亡,抑制其迁移和侵袭能力,并调控细胞周期分布,miR-495可能通过调控RNF113A蛋白表达介导食管鳞癌细胞的恶性表型变化。

SLC5A12在食管鳞癌中表达的临床意义及其对食管鳞癌细胞恶性表型的影响

目的通过蛋白质谱测序筛选与食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)预后相关基因SLC5A12并探讨其对ESCC细胞恶性表型的影响。方法蛋白质谱测序筛选在ESCC中差异表达的蛋白质,公共数据库筛选差异蛋白中与ESCC预后相关的基因SLC5A12并分析数据库中ESCC患者SLC5A12表达与预后的关系。对生物样本库中随访信息完善的117例ESCC患者配对的肿瘤及正常组织制作的组织芯片进行免疫组织化学染色,分析SLC5A12在ESCC中的表达及其与患者临床病理和预后的关系。小干扰RNA敲减ESCC细胞中SLC5A12表达,检测细胞的增殖、侵袭及迁移能力。结果ESCC中共有235个蛋白质表达上调,362个蛋白质表达下调,其中SLC5A12表达显著高于正常组织(log2 fold=1.33,P=0.0004)。TCGA中ESCC患者SLC5A12表达显著高于正常组织及食管腺癌,且N分期及SLC5A12表达是患者生存的风险因素,SLC5A12表达与ESCC患者总生存[HR=2.74,95%CI:1.27~5.94,P=0.012]及疾病特异性生存[HR=3.14,95%CI:1.24~7.95,P=0.02]显著相关。组织芯片免疫组织化学染色结果证实,SLC5A12在ESCC中表达显著高于正常组织,且在淋巴结转移患者中显著高于未转移者。SLC5A12表达水平与ESCC患者总生存期(P<0.0001)、病理分期(P<0.001)及淋巴结转移(P<0.001)显著相关。敲减SLC5A12表达后,ESCC细胞的增殖、侵袭及迁移能力均显著降低。结论SLC5A12在ESCC中表达显著高于正常组织且与患者的预后、病理分期及淋巴结转移显著相关,SLC5A12能够促进ESCC细胞的恶性表型进展。

突变型Survivin逆转HeLa细胞恶性表型的研究

背景与目的:在大多数肿瘤组织中都发现了survivin的异常高表达现象,这说明survivin在肿瘤发生中具有重要作用。本文的目的在于研究突变型survivin对肿瘤细胞恶性表型的影响,并初步探讨其可能机制。方法:构建突变型survivin的表达载体,转染HeLa细胞,通过G418筛选,得到稳定表达的细胞克隆;利用流式细胞仪分析HeLa细胞的凋亡;通过Westernblot检测突变型survivin对细胞周期蛋白的影响。结果:突变型survivin表达质粒在HeLa细胞中表达良好,利用相应的抗体可以检测到其表达的蛋白;表达突变型survivin的HeLa细胞与正常对照相比,克隆形成能力明显减弱;瞬时转染突变型survivin的HeLa细胞可以自主发生凋亡;而且,突变型survivin还可以使多核HeLa细胞增多,survivin-N端的作用比survivinT34A更明显;突变型survivin可以影响周期蛋白的cyclinD1,使其蛋白水平分别下降了68%和12%。结论:突变型survivin可以部分逆转HeLa细胞的恶性表型,cyclinD1蛋白水平下降可能是其发挥作用的重要机制之一。

人端粒酶蛋白催化亚单位反义基因转染对胃癌细胞恶性表型的逆转作用

目的 探讨人端粒酶蛋白催化亚单位（ｈＴＲＴ）反义基因治疗对胃癌细胞恶性表型的逆转作用。方法 采用基因重组技术，构建ｈＴＲＴ正、反义真核表达载体，采用脂质体法导入ＳＧＣ－７９０１细胞，检测细胞生长曲线、端粒酶活性凋亡、细胞周期、软琼脂中克隆形成率及裸鼠体内成瘤性的变化。结果 成功构建ｈＴＲＴ正、反义真核表达载体，并导入ＳＧＣ－７９０１胃癌细胞株中，获得稳定表达正、反义基因的细胞系７９０１－Ｓ、７９０１－ＡＳ１和７９０１－ＡＳ２。７９０１－ＡＳ１和７９０１－ＡＳ２出现显著生长抑制现象，端粒酶活性明显下降，细胞凋亡增加，异型性减小，Ｇ０／Ｇ１期细胞增加，Ｓ和Ｇ２Ｍ期细胞减少，增殖指数减小，软琼脂中无克隆形成，裸鼠体内成瘤消失。结论ｈＴＲＴ反义基因治疗可以明显抑制ＳＧＣ－７９０１细胞的增殖，部分逆转肿瘤细胞的恶性表型，其机制可能主要是通过诱导细胞分化而非诱导细胞凋亡途径实现的，提示ｈＴＲＴ基因可以作为肿瘤治疗的靶基因。

长链非编码RNA癌易感性候选基因2在卵巢癌中的表达及其对SKOV3细胞恶性表型的影响

目的探讨长链非编码RNA癌易感性候选基因2(LnCRNA CASC2)在卵巢癌中的表达及对卵巢癌SKOV3细胞恶性表型的影响。方法 q RT-PCR检测18例卵巢癌及正常癌旁组织;5株人卵巢癌细胞株A2780、Caov3、HO8910、SKOV3、OVCAR3和人正常卵巢上皮HOEpiC细胞LnCRNA CASC2的相对表达量;通过重组质粒在人卵巢癌SKOV3细胞中过表达LnCRNA CASC2,采用MTT法、流式细胞术、侵袭实验、Western blot检测过表达LnCRNA CASC2后SKOV3细胞增殖、凋亡、侵袭及Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果 LnCRNA CASC2在卵巢癌组织、卵巢癌细胞中表达水平低于对应的癌旁组织及卵巢上皮细胞(P <0.01)。LnCRNA CASC2重组质粒转染SKOV3细胞后可显著抑制细胞的增殖能力、侵袭能力,促进细胞凋亡(P <0.05)。过表达LnCRNA CASC2后,SKOV3细胞Bcl-2表达显著降低、Bax蛋白表达显著增加(P <0.05)。结论 LnCRNA CASC2在卵巢癌组织中表达降低,卵巢癌细胞中过表达LnCRNA CASC2后细胞恶性能力降低,其在卵巢癌中可能发挥抑癌基因的作用,值得进一步研究。

5-脱氧杂氮胞苷对HepG2肝癌细胞恶性表型及caspase-3和bcl-2表达的影响

目的 观察5-脱氧杂氮胞苷(5-aza-CdR)对HepG2细胞株生长抑制和凋亡的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法检测5-aza-CdR对HepG2细胞的生长抑制;通过Giemsa染色观察细胞贴壁克隆形成率;用流式细胞术分析5-aza-CdR对细胞凋亡的影响;用免疫细胞化学方法检测caspase-3和bcl-2蛋白的表达变化。结果 5-aza-CdR可抑制HepG2细胞 株生长,并呈剂量依赖性,第4天时的抑制率最大,可达60.2%,细胞贴壁克隆形成率从36.3%下将至17.3%;流式细胞术结 果表明8μmol/L5-aza-CdR作用第4天凋亡率为10.26%,与对照相比差异有统计学意义;caspase-3蛋白表达明显增加,而 bcl 2蛋白表达则明显下调。结论 5-aza-CdR可抑制HepG2细胞增殖并能促进凋亡,其机制可能是通过恢复某些抑癌基因表 达,上调caspase-3蛋白并下调bcl-2蛋白表达。

miR-29a抑制前列腺癌细胞恶性表型的分子机制

目的:探讨微小RNA-29a(miR-29a)在前列腺癌细胞中的生物学功能及miR-29a过表达抑制前列腺癌细胞恶性表型的分子机制。方法:运用基因芯片和生物信息学技术检测并分析miR-29a在前列腺癌组织及癌旁组织中的表达;real-time PCR检测前列腺癌组织、癌旁组织、4种前列腺癌细胞(PC3、DU145、LNCa P和Ar Ca P)及正常前列腺细胞(RWPE-1)中miR-29a和赖氨酸(K)特异性去甲基化酶4B(KDM4B)mRNA的表达水平;采用瞬时转染法将p Genesil-1-miR-29a质粒转染上述4种前列腺癌细胞,MTT法、集落形成实验、Annexin V-FITC/PI及流式细胞术分别检测细胞活力、集落形成率和细胞凋亡率;Western blot检测KDM4B的蛋白表达。结果:基因芯片和生物信息学结果显示,miR-29a在前列腺癌组织和癌旁组织中存在差异表达;real-time PCR结果显示,分别与癌旁组织和RWPE-1细胞比较,miR-29a在前列腺癌组织和4种前列腺癌细胞中的表达水平均显著降低,而KDM4B的mRNA水平显著增高(P<0.05)。与阴性对照(p Genesil-1)组比较,miR-29a过表达显著抑制4种前列腺癌细胞活力和集落形成,细胞凋亡率显著增加(P<0.05);Western blot结果显示,与p Genesil-1组比较,miR-29a过表达显著抑制KDM4B的蛋白表达。上调KDM4B的表达后,细胞活力明显升高,细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论:miR-29a在前列腺癌组织和细胞中低表达,miR-29a过表达抑制前列腺癌细胞生长,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制KDM4B的表达有关。

川芎嗪诱导Bel-7402人肝癌细胞恶性表型逆转的研究

探讨川芎嗪诱导Bel- 740 2人肝癌细胞恶性表型逆转作用 ,为肝癌的分化治疗提供可借鉴的资料。选用反映肝细胞恶变的甲胎蛋白 (AFP)的分泌量、γ -谷氨酰转肽酶 (γ -GT)和醛缩酶 (ALD) ,反映肝癌细胞分化的酶学指标酪氨酸 -α -酮戊二酸转氨酶 (TAT) ,鸟氨酸氨基甲酰转移酶 (OCT)和碱性磷酸酶 (ALP)作为观察肝癌细胞恶性表型逆转的指标。Bel- 740 2人肝癌细胞经 4mmol/L川芎嗪处理后 ,AFP分泌量明显低于对照组 ,γ -GT和ALD活力也明显低于对照组 ;相反 ,OCT、TAT和ALP的活力则明显高于对照组 ,差异均具有显著性 (P <0 0 5 )和 (P <0 0 1)。证明川芎嗪是体外培养Bel- 740 2人肝癌细胞有效的分化诱导剂。

反义PTTG真核表达载体对人卵巢癌细胞SK-OV-3恶性表型的抑制作用

背景与目的:垂体肿瘤转化基因(pituitarytumortransforminggene,PTTG)是一个新的原癌基因,具有多种促肿瘤生长与转移的作用。目前研究多集中于PTTG在各种肿瘤组织中的表达及其相关的调控机制,而针对其反义阻断可能性的报道较少。本研究中,我们通过构建携带能够表达全长反义PTTGmRNA的真核表达载体,观察其对人卵巢癌细胞株SK-OV-3的反义阻断效应。方法:利用含酶切位点的PCR引物克隆全长PTTG,反向插入真核表达载体pcDNA3.1;用脂质体将重组载体转染SK-OV-3细胞,G418筛选阳性克隆后,Westernblot检测PTTG蛋白和碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)表达的改变,MTT法检测细胞增殖情况,并利用软琼脂糖集落形成实验观察细胞生物学性状的变化。结果:筛选出稳定表达重组pcDNA3.1-PTTGas的SK-OV-3细胞;转染细胞组较未转染细胞组的PTTG、bFGF表达分别减少了61.5%和52.3%;转染细胞增殖明显增强;转染细胞在软琼脂中的集落形成数(2.4±0.8)明显低于未转染组和转染空白质粒对照组(23.3±5.7和21.5±7.9)(P<0.01)。结论:反义PTTG真核表达载体作为一种新的工具,为针对PTTG的肿瘤基因治疗提供了可能性。

端粒酶反义cDNA对乳腺癌细胞恶性表型的影响

为了进一步探讨端粒酶在肿瘤发生中的作用 ,实验应用反义核酸技术研究端粒酶反义cDNA对乳腺癌细胞MCF 7恶性表型的影响 采用的方法包括 :基因重组、脂质体共转染法获得端粒酶反义重组病毒 ,病毒感染MCF 7后 ,检测细胞的生长曲线、细胞周期及集落形成能力 结果表明 ,与对照组细胞相比 ,反义病毒感染后的MCF 7细胞恶性表型明显降低 提示端粒酶RNA的反义cDNA的导入 。

nm23-H1基因在人肺癌细胞L9981恶性表型逆转中的作用

nm23-H1基因是肿瘤转移抑制基因,转染野生型的nm23-H1基因可以逆转肺癌的恶性表型,我们拟建立转染野生型nm23-H1基因的人大细胞肺癌细胞株L9981-nm23-H1,并初步探讨nm23-H1基因在逆转L9981细胞株恶性表型中的作用。应用基因克隆技术构建质粒载体pLXSN-nm23-H1-EGFP,并建立L9981-nm23-H1细胞株。同时应用Westernblot检测L9981-nm23-H1细胞中nm23-H1蛋白表达。细胞培养及改良的Boyden小室法分别检测L9981-nm23-H1细胞株的体外生物学行为,动物实验检测L9981-nm23-H1细胞株在裸鼠体内的成瘤性及肺部转移能力。结果成功构建了逆转录病毒载体pLXSN-nm23-H1-EGFP;并建立了人大细胞肺癌细胞株L9981-nm23-H1;nm23-H1基因在细胞株L9981-nm23-H1中稳定、高效表达;L9981-nm23-H1细胞体外增殖能力,克隆形成力,体外侵袭力显著降(P<0.01);L9981-nm23-H1裸鼠体内的成瘤性及肺部转移能力显著低于L9981和L9981-pLXSN(P<0.01);nm23-H1基因的抑瘤率82.56%。本研究资料提示转染野生型nm23-H1基因可以逆转人大细胞肺癌细胞株L9981的恶性表型。

γ-氨基丁酸对肝癌细胞株HepG-2恶性表型的影响

目的:研究γ-氨基丁酸(GABA)对肝癌细胞株HepG-2增殖能力及恶性表型的影响。方法:用不同浓度的GABA与人肝癌细胞HepG-2作用后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长速度,并测定其倍增时间,流式细胞仪检测细胞周期的改变,软琼脂细胞集落形式实验和裸鼠成瘤实验检测细胞的恶性表型。结果:MTT实验结果表明实验组细胞的生长速度明显快于对照组细胞的生长速度,且呈剂量依赖性,其细胞周期分布也发生改变,G1期细胞减少,S期细胞增多;对照组细胞和各浓度组细胞的平均倍增时间分别为39.0,30.6,30.0,27.3,26.6和38.2 h,软琼脂细胞集落形成率依次为3.2%,4.2%,5.4%,6.6%,6.5%,3.5%,Balb/c裸鼠成瘤实验显示,对照组和实验组的肿瘤平均质量依次为0.285和1.382 g,其差异有统计学意义(P<0.01)。结论:GABA能促进细胞增殖,并引起细胞恶化改变。

erbB-2与胃癌细胞恶性表型及其增殖调控的关系

应用基因重组、基因转染、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、细胞生长曲线测定及裸鼠成瘤观察了反义ｅｒｂＢ－２逆转录病毒重组载体的转染对人胃癌细胞中ｅｒｂＢ－２过度表达的影响及其对ＥＧＦ的反应性．研究结果显示，ｅｒｂＢ－２的表达被其反义重组子特异抑制，伴有细胞增殖能力的下降及致瘤性的下降；在ＥＧＦ的刺激下，ｅｒｂＢ－２高表达肿瘤细胞生长速度提高的幅度显著大于ｅｒｂＢ－２反义重组载体转染细胞；ＥＧＦ促细胞增殖及促基因表达的功能在ｅｒｂＢ－２反义重组子转染后受到抑制，提示ｅｒｂＢ－２在细胞增殖调控中具有重要功能．

长链非编码RNA AC005062.1通过调控结肠癌转移相关基因1的表达对结直肠癌恶性表型的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)AC005062.1通过调控结肠癌转移相关基因1(MACC1)的表达对结直肠癌(CRC)恶性表型的影响。方法应用GSE84983和GSE104364数据库,分析lncRNA AC005062.1在结直肠癌中的表达水平。收集医院肿瘤外科进行CRC手术治疗患者的肿瘤组织(肿瘤组)及癌旁组织(对照组),随机抽取8对,采用qPCR法检测两组中lncRNA AC005062.1的表达。运用小干扰RNA(siRNA)下调CRC细胞中lncRNA AC005062.1的表达后,采用CCK-8法检测两组细胞增殖,流式细胞方法检测两组细胞周期和凋亡,伤口划痕实验检测两组细胞迁移。利用数据库比较lncRNA AC005062.1和MACC1基因在染色上的定位,用qPCR和蛋白免疫印迹方法检测两组组织中MACC1转录水平和蛋白水平的表达;下调CRC细胞中lncRNA AC005062.1,qPCR和蛋白免疫印迹方法检测MACC1转录水平和蛋白水平的表达。结果GSE84983和GSE104364数据库分析及两组组织检测结果提示CRC中lncRNA AC005062.1呈高表达。下调lncRNA AC005062.1后,CCK-8实验结果显示,下调组HT29细胞增殖速度降低;流式细胞实验表明,下调组HT29细胞的凋亡数量增加、G_(1)期比例增加,S期和G_(2)期比例减少;Western blot实验显示下调组HT29细胞内cleaved-caspase-3和Bax表达升高,而Bcl-2表达降低;伤口划痕实验表明,下调组HT29细胞迁移率低于对照组。通过University of California Santa Cruz(UCSC)数据库分析比较显示两者在染色体上的定位很近,MACC1极可能是lncRNA AC005062.1的靶基因;检测结直肠癌两组组织中MACC1 mRNA水平,结果显示MACC1在CRC中高表达,且下调lncRNA AC005062.1在HT29细胞中的表达,可使MACC1表达降低。结论lncRNA AC005062.1可通过调控MACC1在CRC中表达,抑制结直肠癌细胞HT29增殖、周期及迁移,促进其凋亡。