肺移植治疗造血干细胞移植后肺部慢性移植物抗宿主病的临床分析

目的探讨肺移植治疗造血干细胞移植(HSCT)后肺部慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的疗效。方法回顾性分析因肺部cGVHD接受肺移植治疗的12例患者的临床资料。分析患者的术前临床表现及累及器官,对比肺移植前后肺功能,分析患者肺移植术后生存情况。结果11例患者因原发血液系统恶性疾病行HSCT,其中白血病9例、骨髓增生异常综合征1例、淋巴瘤1例。1例因系统性红斑狼疮行HSCT。12例c GVHD患者中,8例同时累及皮肤,5例同时累及口腔,4例同时累及胃肠道,3例同时累及肝脏。12例患者肺移植术前均存在严重肺部cGVHD导致的呼吸衰竭,其中表现为Ⅱ型呼吸衰竭9例;表现为Ⅰ型呼吸衰竭3例。肺移植手术方式包括右肺移植2例、左肺移植2例、双肺移植8例。从接受HSCT到接受肺移植的间隔时间为75(19~187)个月。截至投稿日,随访时间为18(7~74)个月,其中10例患者存活,1例于术后22个月死于重症肝炎,另外1例于术后6个月死于消化道大出血,存活患者均未发现原发病复发。结论肺移植是治疗HSCT后肺部cGVHD的一种有效手段,可延长患者生存时间并提高生活质量。

慢性移植物抗宿主病的发病机制和治疗前景

慢性移植物抗宿主病是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后影响患者长期生存及生活质量的主要并发症之一,发生率可达30%-70%。与急性移植物抗宿主病不同,慢性移植物抗宿主病除了由供体异常激活的T细胞和具有供体淋巴细胞浸润和宿主靶器官损害特征的细胞因子风暴外还涉及许多的免疫细胞和细胞因子。近期研究围绕相关免疫细胞和细胞因子为靶点也取得了一定进展。本文将从经典固有免疫和适应性免疫角度论述慢性移植物抗宿主病的发病机制及治疗前景。

慢性移植物抗宿主病防治进展

慢性移植物抗宿主病(cGVHD)是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后免疫重建过程中供者来源淋巴细胞攻击受者脏器产生的一种病理综合征,是allo-HSCT后主要合并症,对患者远期生存和生活质量(QoL)有严重影响。其发病机制复杂、个体差异性大,治疗手段具有多样性与特异性,较难防控。阐述cGVHD的发病机制,寻找更好的预防及治疗手段一直是研究的热点。近年来,随着研究深入cGVHD的发病机制得到了更深入的研究,也探索出更多新型潜在靶点,对其预防与评估也有重要突破。探索更多cGVHD的发生机制,设计多中心、前瞻、对照临床研究,对比不同评估防治手段提高cGVHD患者QoL,并为该合并症的预防及治疗提供新的方向和途径。

骨髓间充质干细胞移植治疗硬皮病样慢性移植物抗宿主病：4例免疫机制变化

背景:骨髓间充质干细胞由于具有免疫调节能力使其能用于治疗移植物抗宿主病,特别是治疗急性移植物抗宿主病已获临床成功,但是对于治疗慢性移植物抗宿主病,特别是硬皮病样慢性移植物抗宿主病(ScGVHD)的研究报道还很少。目的:评价骨髓间充质干细胞治疗ScGVHD的有效性及安全性,同时探讨取得疗效的免疫学机制。方法:于2006-09/2008-08在解放军307医院血液移植科接受骨髓间充质干细胞髓内注射ScGVHD患者4例,男3例,女1例;中位年龄41岁。骨髓间充质干细胞髓内注射具体方法:取右髂前上棘为穿刺注射点,注射骨髓间充质干细胞悬液,4例患者的给药剂量基本控制在(1.0～2.0)×107个细胞/次,行间断多次给药。合并用药亦有差异,但都为治疗ScGVHD的传统药物,且用量大为减少。结果与结论:经过多次骨髓内输注骨髓间充质干细胞后,Th细胞的比例发生了明显的变化,Th1的比例上调,Th2的比例相应的下调,从而使两者达到了新的平衡点。与之相应,患者的临床症状也逐渐好转。而且在骨髓间充质干细胞治疗的随访期内,患者的生命体征和实验室检查指标均未发现异常,也未出现白血病的复发。证明骨髓间充质干细胞对ScGVHD是有治疗效果的,为临床治疗ScGVHD开辟了一个新的方法,从而能提高白血病患者骨髓移植的存活率。但由于样本数较少,需要进一步扩大规模进行临床研究,以进一步证实其安全性和疗效。

脐带间充质干细胞治疗难治性慢性移植物抗宿主病

背景:慢性移植物抗宿主病是造血干细胞移植后最常见的并发症,糖皮质激素是目前一线治疗药物,对于激素耐药型慢性移植物抗宿主病患者联用免疫抑制剂治疗仍有一半患者无效。脐带间充质干细胞免疫原性低,为临床治疗移植物抗宿主病提供了可能。目的:探讨人脐带间充质干细胞治疗难治性慢性移植物抗宿主病的疗效和安全性。方法:15例难治性慢性移植物抗宿主病患者在原有免疫抑制剂的基础上接受脐带间充质干细胞治疗,观察其疗效、输注相关不良反应和存活情况,流式细胞术检测患者外周血淋巴细胞比值变化。该研究经中山大学附属第三医院伦理委员会审批。结果与结论:①15例患者中男12例,女3例,中位发病年龄29(17-52)岁,完全缓解4例,部分缓解7例,总有效11例,无效4例;②脐带间充质干细胞治疗后患者外周血中CD19^+细胞比值有低于治疗前趋势,CD19^+CD27^+、CD3^+细胞比值有高于治疗前趋势,差异无显著性意义;③未观察到脐带间充质干细胞输注相关的不良反应,无原发病复发和间充质干细胞相关的肿瘤;④结果表明脐带间充质干细胞治疗难治性慢性移植物抗宿主病安全有效。

脐带间充质干细胞治疗难治性慢性移植物抗宿主病的疗效观察

目的探讨脐带来源间充质干细胞（MSC）治疗异基因造血干细胞移植术后难治性慢性移植物抗宿主病（cGVHD）的疗效及安全性。方法 7例恶性血液病患者接受异基因造血干细胞移植术后出现cGVHD,常规免疫抑制剂治疗无效,在原有免疫抑制剂基础上给予脐带来源MSC治疗,细胞数1×10-6/kg,每周1次,共4次。观察其疗效、安全性和患者存活情况。结果 7例患者接受MSC输注后,2例获得完全缓解（CR）,3例部分缓解（PR）,总有效5例（5/7）,2例无效（NR）。未发现输注相关不良反应,无患者出现原发病复发。1例患者部分缓解后继发巨细胞病毒肺炎,死于重症肺炎,其余病例均存活。结论脐带MSC对于治疗难治性cGVHD具有一定的疗效,且输注过程安全。

单倍体相合造血干细胞移植后慢性移植物抗宿主病小鼠模型的建立及其评价

目的：因供受者主要或次要组织相容性抗原存在差异而引起的移植物抗宿主病是影响异基因造血干细胞移植效果的关键因素,目前国内尚缺乏研究此领域的实验动物模型及其评价体系。本实验拟建立半相合异基因造血干细胞移植后慢性移植物抗宿主病小鼠模型,并制定半定量评价体系。方法：实验于2007-03/08在南方医科大学实验动物中心完成。①动物：供鼠为近交系Balb/CH-2d小鼠40只,雄性,8～10周龄,体质量18～22g;受鼠为CB6F1小鼠（Balb/c×C57BL/6F1H-2d/b）48只,雌性,10～12周龄,体质量18～24g,随机数字表法分为3×10^7,6×10^7,9×10^7个脾细胞移植组及空白对照组,12只/组。小鼠均由南方医科大学实验动物中心提供,SPF级,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法：Balb/CH-2d小鼠颈椎脱臼处死,取脾脏研磨后制成脾单细胞悬液,离心弃上清,加入Tris-NH4Cl裂解红细胞,用RPMI1640调整细胞浓度为1.2×10^8L^-1,锥虫蓝染色计数脾细胞拒染率为95.6%。3×10^7,6×10^7,9×10^7个脾细胞移植组分别经尾静脉输入对应数量的MHC半相合脾细胞悬液0.5mL,空白对照组输入等体积RPMI1640培养液。③实验评估：脾细胞移植后2,5,8,12周,光镜下计数20个分裂相,检查骨髓细胞中的Y染色体数量,进行嵌合体分析。脾细胞移植18d后,每3d观察受体小鼠的临床表现,包括体质量、体形、体位、毛发变化及生存情况,并予以评分。输注脾细胞后100d观察皮肤、肝脏、回盲端小肠靶器官的病理变化,并进行评分。结果：48只受体小鼠均进入结果分析。①嵌合体检测：6×10^7个脾细胞移植组可形成较为稳定的低水平供受者混合嵌合体;9×10^7个脾细胞移植组起初可形成较高水平的供受者混合嵌合体,随时间的推移水平降低;3×10^7个脾细胞移植组未能形成稳定的供受者混合嵌合体。②慢性移植物抗宿主病的临床及病理评分：移植物抗宿主病发生时间多集中在供鼠脾细胞输注后30～80d,临床表现以皮肤改变、体质量减轻、弓背体态为主,病理损害以皮肤、肠道及肝脏明显。与3×10^7个脾细胞移植组比较,6×10^7,9×10^7个脾细胞移植组临床和病理评分均显著升高（P〈0.05）,慢性移植物抗宿主病发生率均显著升高（P〈0.01）;后2组临床和病理各项指标之间差异均无显著性意义（P〉0.05）。结论：输注6×10^7和9×10^7个脾细胞的小鼠成功诱导出半相合异基因造血干细胞移植慢性移植物抗宿主病,其临床和病理评价体系具有较高的一致性和实用性,为进一步分析慢性移植物抗宿主病的发病机制和评价干预因素的优劣奠定实验学基础。

一种实用性狼疮样肾炎动物模型──鼠慢性移植物抗宿主病的制备

目的建立一种狼疮样肾炎动物模型，为人类狼疮性肾炎（ＬＮ）实验和临床研究提供基础。方法取雌性亲代ＤＢＡ／２的淋巴细胞分４次经静脉注射雌性子代Ｆ１代杂交鼠（Ｃ５７ＢＬ６× ＤＢＡ２）。注射时间为０，３，７，１０ ｄ。每次注射淋巴细胞数为５０× １０６。结果尿白蛋白于第４次注射后２周开始升高，第１２周达高峰；血抗ｄｓ－ＤＮＡ水平于第４次注射后２周已明显升高，至第４周达高峰，各时点与对照组差异明显。普通光镜（ＰＡＳ、ＰＡＳＭ）示肾小球基底膜增厚，系膜轻度增生，小管间质炎症细胞浸润；免疫荧光示ＩｇＧ沿基底膜呈线状或颗粒状沉积，部分小管基底膜亦可见其沉积；电镜显示膜性肾炎改变，基底膜增宽，内有电子致密物沉积，上皮细胞足交融合。结论本实验所建立狼疮样肾炎动物模型，主要为膜性肾炎。

慢性移植物抗宿主病狼疮样小鼠模型的诱导

目的 诱导慢性移植物抗宿主病狼疮样小鼠模型。方法 选用 (DBA 2×C57BL 6J)F1小鼠 ,通过尾静脉注射其母鼠DBA 2淋巴细胞诱导模型 ,观察 12周。结果 F1小鼠注射母鼠淋巴细胞后 2周产生自身抗体 ,出现蛋白尿 ,4周血脂、血肌酐、尿素氮轻度升高 ,肾脏病理仅有系膜细胞轻度增生 ,未见间质损害。 8周血生化指标明显改变 ,肾脏病理示肾小球系膜细胞中度增生 ,间质炎细胞浸润和肾小管大量蛋白管型 ,10～ 12周各项观察指标改变明显 ,病理出现局灶或弥漫肾小球硬化 ,免疫荧光示IgG、IgM、C3沿毛细血管壁及系膜区沉积。结论 慢性移植物抗宿主病狼疮样小鼠模型类似人类狼疮性肾炎 。

他克莫司、霉酚酸酯和甲基强的松龙联合治疗慢性移植物抗宿主病

目的 探讨他克莫司 (FK50 6 )、霉酚酸酯 (MMF)和甲基强的松龙 (MP)联合免疫抑制剂治疗慢性移植物抗宿主病 (cGVHD)的疗效。方法 对 4例异基因造血干细胞移植后发生广泛性cGVHD的儿童患者 ,应用FK50 6 ,MMF和MP联合治疗 ,观察其毒副作用和疗效。结果 4例患者使用该联合免疫抑制方案治疗 2～ 4d后症状明显改善 ,1～ 2周后症状消失 ,有效率达 1 0 0 %。除 3例出现轻度肾功能损害外 ,未发现严重副作用。结论 FK50 6 ,MMF和MP联合治疗cGVHD为一种行之有效的方法。

慢性移植物抗宿主病的发病机制及其相关问题最新研究进展

异基因造血干细胞移植(allogenic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)是目前治疗造血系统各种恶性疾病或非恶性增殖性疾病的有效方法,但是移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)的发生限制了造血干细胞移植的成功率,其中慢性移植物抗宿主病(chronic graft versus host disease,cGVHD)是影响造血干细胞移植后受者长期生存率和生活质量的主要因素。本文从胸腺、细胞因子、T淋巴细胞各亚群和B淋巴细胞及其分泌的抗体四个方面对cGVHD的发病机理及相关领域的最新研究进展作一综述。

雷帕霉素治疗难治性广泛性慢性移植物抗宿主病

背景:难治性广泛性慢性移植物抗宿主病是异基因造血干细胞移植晚期的主要并发症,目前一线治疗药物为糖皮质激素,但对于糖皮质激素治疗无效或激素依赖的患者临床上尚缺乏有效且长期使用毒副作用较小的治疗方法。目的:观察雷帕霉素在治疗糖皮质激素无效或激素依赖的难治性广泛性慢性移植物抗宿主病中的临床疗效及毒副作用。方法:从1998年1月至2012年6月在中山大学附属第三医院血液科增加72例接受异基因造血干细胞移植患者中发现5例经糖皮质激素治疗无效或激素依赖的难治性广泛性慢性移植物抗宿主病的患者给予雷帕霉素口服,观察治疗效果及使用过程中出现的毒副作用。结果与结论:使用雷帕霉素后5例患者中1例症状获得完全缓解,3例明显改善,1例病情稳定。服用雷帕霉素最长时间为14个月,中位时间为9.4个月(4-14个月)。随访中位时间为18个月,随访期间5例患者均存活。使用过程中毒副作用轻,1例患者出现高脂血症,1例出现轻度贫血,未出现肝功能损害及高血糖。说明雷帕霉素在糖皮质激素治疗无效或激素依赖的难治性广泛性慢性移植物抗宿主病的治疗上有较好的疗效,且血液学毒性、肝功能损害、高血脂等不良反应较轻,多数患者能耐受。

补肾清热毒方对慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样小鼠模型的影响

目的 :观察补肾清热毒方对慢性移植物抗宿主病 (cGVHD)狼疮样小鼠模型的影响。方法 :模型雌鼠于诱导后第 4周 ,随机分为补肾清热毒方组、强的松组、模型组及未诱导的正常对照组 ,用药 8周后处死 ,观察小鼠血清抗dsDNA抗体、血肌酐、尿素氮、血脂及肾脏病理改变等指标。结果 :经补肾清热毒方和强的松治疗后 ,尿蛋白浓度、抗dsDNA抗体、血肌酐、尿素氮均有降低 (P <0 0 5或P <0 0 1 ) ,白蛋白升高 (P <0 0 5 ) ,而补肾清热毒方尚有降低胆固醇作用 (P <0 0 5 ) ,两药对系膜细胞增生及间质炎细胞浸润有减轻作用 (P <0 0 5 )。结论

雷帕霉素对难治性广泛型慢性移植物抗宿主病的疗效观察(附7例报告)

目的探索雷帕霉素在慢性移植物抗宿主病治疗中的作用。方法采用雷帕霉素代替前期基础免疫抑制剂治疗难治性广泛型慢性移植物抗宿主病7例。结果1例患者获得完全缓解,4例明显改善,2例病情稳定。其中5例患者最终减停激素,5例患者慢性移植物抗宿主病持续好转并无病存活,2例患者死于肺部感染。结论雷帕霉素治疗方案及该药物剂量对患者较为安全,且观察到非常好的治疗反应。

桂附地黄丸干预主要组织相容性复合物半相合移植小鼠慢性移植物抗宿主病的效应

背景:目前治疗慢性移植物抗宿主病的方法不理想且不良反应大,发现有效干预和治疗慢性移植物抗宿主病的中医药是移植学者共同关注的焦点之一。目的:观察中药桂附地黄丸对主要组织相容性复合物半相合移植小鼠慢性移植物抗宿主病的干预作用。方法:近交系Balb/cH-2d雄性小鼠作为供鼠,CB6F1雌性小鼠为受鼠,建立主要组织相容性复合物半相合造血干细胞移植小鼠的移植模型,24只受鼠按随机数字表法分为2组,桂附地黄丸组给予桂附地黄丸药液0.2mL/只,每天分2次灌胃,从移植后第1天开始用药;空白组给予等量生理盐水灌胃,用至第100天。结果与结论:桂附地黄丸组小鼠死亡5只,空白组小鼠在移植后第86天前全部死亡(P=0.004)。空白组小鼠移植后第35天、桂附地黄丸组移植后第45天开始出现精神萎靡,临床评分空白组显著高于桂附地黄丸组(P<0.05)。根据病理分级结果,桂附地黄丸组小鼠发生慢性移植物抗宿主病多为0～1级,桂附地黄丸组小鼠肝脏、皮肤、小肠组织与空白组相比,均有不同程度的改善。提示桂附地黄丸可有效减轻主要组织相容性复合物半相合移植小鼠慢性移植物抗宿主病的症状和程度,延长小鼠存活时间,改善组织病理。

0.1%他莫克司滴眼液治疗慢性移植物抗宿主病相关干眼症疗效的评估

目的探讨0.1%他莫克司(FK506)滴眼液对慢性移植物抗宿主病(c GVHD)相关干眼症的治疗效果。方法将入组患者随机分为A组(7例14只眼)和B组(7例14只眼)。A组使用0.1%FK506滴眼液、0.3%玻璃酸钠滴眼液及佩戴角膜绷带镜进行治疗。B组使用0.3%玻璃酸钠滴眼液、佩戴角膜绷带镜进行治疗。A组和B组分别于治疗前、治疗后1个月各时间点对患者进行主观指标检测:眼表疾病指数(OSDI)以及客观指标检测:Schirmer I试验(SIt)、泪膜破裂时间(BUT)和角膜荧光素染色(FL)。分析两组治疗前后主观和客观指标的改善情况。并采用独立样本t检验比较两组之间的疗效差异。结果 OSDI评分、BUT和FL在两组治疗后均较治疗前有统计学意义(P<0.05)。SIt在A组治疗前后差异有统计学意义,但B组无统计学意义。治疗后,主观指标和客观指标得到改善,A组与B组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论使用0.1%FK506滴眼液治疗c GVHD相关干眼症,在改善主观症状和客观指标方面有更显著的效果。

不同照射剂量对慢性移植物抗宿主病小鼠模型建立的影响

本研究旨在探讨不同预处理照射剂量对MHC相合脾细胞移植后cGVHD小鼠模型建立的影响。以BALB/cH-2d雄性小鼠为受者,经60Co不同剂量全身照射(TBI),而后输注MHC相合DBA/2雄性小鼠的相同数量的脾细胞,观察移植后小鼠体重、一般状态、毛发的变化,生存期以及靶器官病理改变等。结果表明,与对照组小鼠和照射剂量为7.0 Gy的小鼠相比,照射剂量为7.5 Gy和8.0 Gy的小鼠表现出明显的cGVHD的症状和体征,提示成功建立了cGVHD模型,其中照射剂量为7.5 Gy的小鼠截至实验终点(移植后60 d)存活率为100%,照射剂量为8.0 Gy的小鼠截至实验终点存活率为60%。结论:采用7.5 Gy的照射剂量,并且输注脾细胞数量为1×108/只的小鼠可成功诱导出MHC相合cGVHD模型的表型,且动物存活率为100%,为进一步研究cGVHD的发病机理、生物学特性、干预因素等打下了重要基础。

TLR4炎症通路与慢性移植物抗宿主病合并干眼症的相关性

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)信号通路与慢性移植物抗宿主病(cGVHD)合并干眼症的关系,以揭示炎症反应在该疾病发生发展中的作用。方法:纳入18例诊断为cGVHD合并干眼症的患者,并以18例移植后发生cGVHD但没有合并干眼症患者为对照。采集两组患者的干眼评分、OSDI评分和Schirmer′s实验结果。收集患者外周静脉血并应用实时定量PCR或ELISA的方法检测TLR4、NF-κB、TNF-α的表达水平。结果:cGVHD合并干眼症患者外周血中的TLR4、NF-κB、TNF-α的m RNA水平均较对照组明显升高。相关性分析显示TLR4表达水平与cGVHD合并干眼症的OSDI评分呈正相关和Schirmer′s结果呈负相关。结论:TLR4介导的炎症信号通路参与了cGVHD合并干眼症的发生、发展。

树突状细胞亚群与急慢性移植物抗宿主病的关系

目的探讨树突状细胞(DCs)亚群在急慢性移植物抗宿主病(GVHD)中的作用。方法通过三色流式细胞仪检测异基因造血干细胞移植患者7例发生aGVHD前后和8例cGVHD治疗前后外周血DC1、DC2变化。结果发生aGVHD时患者DC1、DC2百分数及绝对数均明显低于发生aGVHD前水平,二者相比DC1、DC2百分数及绝对数均具有统计学意义(P<0.05)。GVHD(+)组DC1、DC2水平均低于GVHD(-)组,其中DC2百分数和绝对数两组相比具有统计学意义(P<0.05)。aGVHD治疗后DC1、DC2百分数和绝对数均较发生aGVHD时有所增加,aGVHD治疗后与发生aGVHD时DC1、DC2百分数和绝对数对比较,均具有统计学意义(P<0.05)。发生cGVHD患者DC1、DC2百分数与正常健康人外周血DC1、DC2百分数相比具有统计学意义(P<0.05)。治疗后cGVHD患者DC1、DC2百分数明显下降,与治疗前相比具有显著统计学意义(P<0.05)。结论aGVHD患者外周血DC1、DC2是减少的,而cGVHD患者外周血DC1、DC2是增加的,尤其以DC2为显著。