成人骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为胰岛样细胞团的研究

体外扩增和定向诱导成人骨髓间充质干细胞(MSC)向胰岛样细胞分化,从正常成人骨髓中分离MSC,在含10％胎牛血清的αMEM培养基中对其进行纯化和扩增,用bFGF,EGF等因子诱导MSC向nestin阳性的祖细胞(NIP)分化;用高糖无血清培养基和β细胞调节素、尼克酰胺等诱导NIP向胰岛样细胞分化,用RT-PCR法检测诱导前后nestin,ngn3,IPF-1,胰岛素,胰高血糖素基因的表达;双硫腙染色鉴定胰岛样的细胞团;免疫组织化学法检测诱导前后nestin,胰岛素,胰高血糖素,生长抑素蛋白的表达;放射免疫分析法检测诱导前后细胞分泌胰岛素情况。结果表明MSC经第一阶段的诱导后可分化成NIP,继续诱导6d后变圆的细胞逐渐增多,并聚集成团,双硫腙染色阳性,免疫组化实验证明经两阶段诱导后的细胞表达胰岛素、胰高血糖素、生长抑素等内分泌激素,放免分析结果表明诱导的胰岛样细胞团可以分泌胰岛素,糖反应性较弱。以上结果表明成人骨髓间充质干细胞在体外可以被诱导分化为胰岛样细胞团,这将为解决糖尿病细胞治疗所面临的供者细胞不足、移植排斥反应等问题提供一个新的方案。

碱性成纤维细胞生长因子等体外诱导成人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的 成人骨髓间充质干细胞 (h MSCs)体外定向诱导分化为神经元样细胞。方法 采用 Percoll分离液离心分离 h MSCs,体外扩增 ,分别采用含碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)和 2 -巯基乙醇 (2 - ME)等无血清DMEM诱导 h MSCs分化为神经元。免疫组化鉴定神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结果 h MSCs在体外扩增传至 5代后 ,流式细胞仪显示 99.5 % ,97.8% ,98.8% h MSCs表面抗原 CD2 9、CD4 4、CD90 表达阳性。接种到 12孔板 ,3d后加入 b FGF和 2 - ME联合或 2 - ME单种诱导剂诱导后 ,h MSCs胞体收缩 ,突起伸出 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞 NSE、 NF表达阳性 ,GFAP阴性。

两种体外分离成人骨髓间充质干细胞方法的比较

目的:目前尚缺乏标准的骨髓间充质干细胞分离方法,虽然Percoll密度梯度离心法被认为是较经典的方法,但该方法操作较复杂。比较全骨髓培养法与常用的Percoll密度梯度离心法分离成人骨髓间充质干细胞的差异,以寻找一种简便、经济、实用的人骨髓间充质干细胞体外分离方法。方法:实验于2006-09/2007-06在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。实验材料:行自体干细胞移植治疗的糖尿病患者骨髓由青岛大学医学院附属医院内分泌科提供,患者对实验知情同意,并经医院伦理委员会批准。实验方法:采用全骨髓培养法与Percoll密度梯度离心法从成人骨髓中分离骨髓间充质干细胞,比较两种方法所获得的贴壁细胞克隆数、细胞形态、细胞表面标志及向脂肪细胞的分化情况。结果:①全骨髓培养法获得的贴壁细胞克隆数明显多于Percoll密度梯度离心法(P<0.05)。两种方法获得的人骨髓间充质干细胞形态无明显差异,均为长梭形,克隆样生长。②免疫荧光显示,全骨髓培养法分离培养的第3代骨髓间充质干细胞CD44阳性表达率和CD34阴性表达率均略低于Percoll密度梯度离心法,但两者之间的差异无统计学意义(t=2.639,P<0.01)。③两种方法获得的第3代骨髓间充质干细胞经地塞米松、胰岛素诱导后均可分化脂肪细胞。结论:与传统的Percoll密度梯度离心法比较,全骨髓培养法获得的骨髓间充质干细胞贴壁较快,传代时间略早,细胞数量多。

成人骨髓间充质干细胞体外培养扩增的初步研究

目的:建立成人骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)体外培养和扩增的方法,探讨其生物学特性,建立稳定的MSCs体外培养扩增体系。方法:取正常成人骨髓,用含10%新生牛血清的LG-DMEM培养液培养、扩增后,进行倒置显微镜观察,测定生长曲线,流式细胞仪行细胞表面抗原检测。结果:培养扩增获取的成人骨髓MSCs形态均一,增殖能力强。所获得细胞CD44表达阳性,CD19、CD15、CD45、CD34、CD38、CD4、CD8表达阴性。结论:所建立的分离和培养方法可获取骨髓黏附细胞中一组独特的细胞群,具有MSCs的生物学特性。

成人骨髓间充质干细胞的体外分离培养和生物学特性

目的:建立一种成人骨髓间充质干细胞体外分离、培养和扩增的方法,并探讨其部分生物学活性及向脂肪细胞诱导分化的方法,并以此鉴定所获细胞。方法:采用1.073g/ml的Percoll分离液分离成人骨髓间充质干细胞。接种于纤维连接蛋白包被,含有表皮生长因子和血小板原性生长因子BB的2%胎牛血清培养液中,并利用其贴壁性进行纯化;观察其形态学变化及超微结构,流式细胞仪检测其表面标记物;采用10%胎牛血清和尼克酰胺诱导其向脂肪细胞的分化。结果:原代和传代培养均保持较强的增殖能力,超微结构显示了干细胞的幼稚特性,流式细胞仪检测示CD34、CD45、CD19、组织相容性抗原-DR阴性,CD44、CD10、CD29、CD13阳性。体外能够分化成为脂肪细胞,油红O染色阳性。结论:采用该方法骨髓间充质干细胞生长稳定,扩增较快;一定条件下能够定向分化成为脂肪细胞;我们所获得的细胞具有间充质干细胞的特性。

成人骨髓间充质干细胞的分离、鉴定和生物学特性

背景：骨髓间充质干细胞具有自我复制的能力、多向分化和增殖的潜能，但骨髓中间充质干细胞的含量极少，因此体外纯化和扩增极其重要。目的：拟建立体外体分离培养、纯化骨髓间充质干细胞的方法，观察其增殖及生长特性。设计、时间及地点：单一样本观察实验，于2006—05／2007—12在北京协和医院胸心外科实验室和桂林医学院刚属医院中心实验室完成。材料：骨髓血来源于成人肋骨骨髓。方法：收集成几骨髓血，采用密度为1．077的Ficoll淋巴细胞分离液提取成体人骨髓单个核细胞，根据骨髓间充质干细胞易于贴壁的特性除去未贴壁细胞获取骨髓间充质干细胞。取第2～3代细胞在-80℃条件下冻存，24h后复苏，观察活细胞数，按2×10^3／cm。种值扩增，扩增时保持细胞密度为2×10^3/cm^2～8×10^3/cm^2。主要观察指标：倒置显微镜和相差倒置显微镜观察细胞形态变化，流式细胞仪检测细胞抗原表达，采用细胞计数方法绘制原代培养和传代培养细胞生长曲线。结果：原代培养接种三四小时后细胞开始贴壁，24h后贴壁细胞数量明显增多，3d后贴壁细胞为单个或几个细胞克隆，散在分布，大部分细胞呈纺锤形。7-9d后集落迅速增多细胞融合，细胞数量约增加了10倍；10～12d，细胞数量增加了约20倍，铺满了全层，细胞排列也有一定的方向性，呈旋涡样生长，旋涡中心细胞呈多层分布。骨髓间充质干细胞表达KDR、CD105，不表达CD34、CD45、CD11a、CD14、HLADR等。原代细胞培养曲线显示，第2-6天为生长潜伏期，第8～10天进入对数增长期，第12-14天进入个平台期；传代培养的潜伏期为24～48h，对数增长期为4-6d，细胞的增殖、生长逐渐缓慢，接种后8到9天进入平台期。结论：利用密度悌度离心和贴壁的方法获取的骨髓间充质干细胞具有大量增殖的能力，表达CD105、KDR，不表达HLA—DR、CD34、CD45、CD11a、CD14。

成人骨髓间充质干细胞分化为血管内皮细胞的研究

目的研究成人骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)体外分化为血管内皮细胞的能力并探讨其诱导条件。方法分离成人骨髓单个核细胞,经贴壁法获取MSCs。所获细胞分4组进行诱导组1、2以5×103/cm2细胞密度接分别接种于含2%和15%胎牛血清的L-DMEM培养基;组3、4以5×104/cm2细胞密度分别接种于上述两种血清浓度的培养基,各组细胞经血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)辅以牛脑提取物的诱导,对照组为正常传代培养的MSCs。在诱导的第14、21天分别测定表面分子CD34、VEGFR-2、CD31和因子相关抗原(factor-relatedantigen,又称vonWillebrandfactor,vWF)以及体外成血管实验对分化细胞进行鉴定,同时测定不同诱导条件下的细胞增殖指数(proliferationindex,PI)。结果组3细胞经诱导后,内皮系表面分子CD34、VEGFR-2、CD31、vWF于第14天均有不同程度表达,分别为8.5%、12.0%、40.0%、30.0%,其中CD34、VEGFR-2在第21天表达上调,为15.5%、20.0%,余各诱导组细胞未表达上述表面分子;诱导后的组3细胞呈低增殖状态(PI值约为10.4%),在半固体培养基中还可形成血管腔样结构。结论从成人骨髓中分离培养的MSCs,在较高细胞接种密度和低增殖状态下,经VEGF、牛脑垂体提取物诱导后,可分化为血管内皮细胞,可作为治疗性血管生成及组织工程理想的种子细胞。

成人骨髓间充质干细胞体外多向分化潜能特性的研究

目的 研究体外不同诱导条件下成人骨髓间充质干细胞向成骨细胞、脂肪细胞、神经细胞分化的能力。方法 用细胞化学方法对诱导后的骨髓细胞进行脂肪细胞特异油红 O染色 ;Von Kossa及改良的钙钴法进行成骨细胞鉴定 ;免疫组化方法检测诱导后的骨髓细胞神经元特异性烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 M(NF M)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)表达。结果 在不同的诱导条件下 ,诱导后的细胞油红 O染色胞浆内可见橙红色脂滴 ;Von Kossa染色可见细胞间布满黑色颗粒 ,提示有矿化基质沉积 ;改良钙钴法碱性磷酸酶染色胞浆呈深棕色或深黑色。免疫组化染色显示向神经细胞方向诱导后细胞 NSE(+)、NF M(+)、GFAP(- )。结论 成人骨髓间充质干细胞在体外具有多向分化的潜能。

成人骨髓间充质干细胞的体外诱导培养及向脂肪细胞的定向分化

目的 :确定人骨髓的间充质干细胞 (MSCs)体外培养扩增、培养 ,向脂肪细胞表型转化的方法 ,并了解其生物学特性变化。方法 :用 Percoll分离液 (1.0 73g/ ml)分离成人 MSCs,传代培养。流式细胞仪检测表面标记物CD14 ,CD34,CD4 5 ,CD4 4,VLA- 1,HLA- DR和细胞周期 ,用 1-甲基 - 3-异丁基 -黄嘌呤、吲哚美辛、牛胰岛素、地塞米松实现向脂肪细胞的定向诱导分化。油红 O染色 ,光镜下观察橙红色脂滴沉着的细胞比例。结果 :分离培养获得贴壁细胞 ,流式细胞仪检测 CD14 ,CD34,CD4 5 ,HL A- DR阴性 ,CD4 4阳性 ,VLA- 1表达微弱。G0 / G1期细胞约为86 %。诱导 72 h后出现脂滴 ,第 3周油红 O染色示 85 %以上细胞转变为脂肪细胞。结论 :从人骨髓分离、体外诱导培养间充质干细胞 ,可定向促进向脂肪细胞表型转化。

成人骨髓间充质干细胞的鉴定与体外BrdU标记

背景:目前尚未发现骨髓间充质干细胞独有的标志分子,给其鉴定带来一定困难。BrdU标记不存在放射性污染,有研究认为在不受到紫外线照射的条件下,BrdU标记后对细胞功能无损害。目的:探讨成人骨髓间充质干细胞体外鉴定和标记的方法,并观察其生物学特性。设计、时间及地点:细胞观察,于2007-06/12在解放军兰州军区兰州总医院完成。材料:成人骨髓来自5例健康志愿者。BrdU为美国Sigma公司产品。方法:采集成人骨髓10mL,密度梯度法分离单个核细胞,加入含10%胎牛血清的DMEM培养基,调整细胞密度为2×108L-1进行扩增培养。取第3代骨髓间充质干细胞,加入成骨诱导培养基,行碱性磷酸酶染色;加入成脂诱导培养基,行油红O染色;加入终浓度为5,10,15μmol/LBrdU溶液,孵育12,24,48,72,96h后行免疫细胞化学染色。主要观察指标:倒置光学显微镜下观察细胞生长及增殖情况,流式细胞仪鉴定细胞表型,成骨及成脂诱导分化结果。BrdU阳性标记率及标记后细胞生长情况。结果:①体外培养的成人骨髓间充质干细胞形态均一,为梭形或纺锤形的成纤维细胞样外观;表达CD44和CD71,不表达CD34和HLA-DR;可定向诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞。②大部分骨髓间充质干细胞标记后核抗BrdU染色阳性,随着标记浓度的升高和标记时间的延长,BrdU阳性率逐渐增高,终浓度10μmol/LBrdU标记72h后阳性率达90%以上,且连续传9代均可检测到BrdU阳性细胞。第3代骨髓间充质干细胞90%处于G0/G1期,BrdU标记后88.62%处于G0/G1期,标记前后细胞生长周期无明显变化。结论:通过形态学特征、表面标记和多向分化潜能可以鉴定体外分离培养的细胞为成人骨髓间充质干细胞;BrdU标记可用于成人骨髓间充质干细胞移植入体内后存活、生长和分化的动态示踪观察;BrdU最佳标记浓度和时间分别为10μmol/L和72h。

成人骨髓间充质干细胞体外低氧培养及生物学特征

目的建立人骨髓间充质干细胞(human marrow mesenchymal stem cells,hMSCs)体外低氧培养及向成骨细胞分化的生物模型,研究其生物学特征,为骨组织工程提供实验依据。方法采用人淋巴细胞分离液分离健康成人hMSCs,DMEM-LG(含20%胎牛血清)中培养,10～14d后传代培养。取第2代细胞,根据培养氧浓度及培养基类型分为4组:正常氧组(20%O2加DMEM-LG,A组)、低氧组(1%O2加DMEM-LG,B组)、正常氧成骨诱导组(20%O2加条件培养基,C组)及低氧成骨诱导组(1%O2加条件培养基,D组),通过细胞计数、细胞增殖测定(MTT法)、集落形成检测、RT-PCR检测、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测及茜素红染色,研究低氧环境对hMSCs生物学行为的影响。结果与A组相比,B组及D组中的hMSCs有较高的增殖速度,并且不受条件培养基的影响,比较差异有统计学意义(P<0.01)。B组中的hMSCs生成的集落逐渐增多,A组9d后生成的集落数基本不发生变化。D组培养的hMSCs的ALP活性逐渐增高,但明显低于C组,两者差异有统计学意义(P<0.01)。定量RT-PCR检测,C组ALP、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白及骨粘连蛋白mRNA表达量明显增加(P<0.01)。培养4周后,与其他3组相比,C组可见到明显的钙盐沉积和染成红色的钙结节。结论低氧使hMSCs增殖率增加,集落形成能力增强,抑制向成骨细胞分化。

成人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的体外研究

目的 探索成人骨髓间充质干细胞在体外定向分化为神经元样细胞的条件。方法 采用Ficoll paque( 1 0 77g/ml)分离液密度梯度离心从人的骨髓分离出骨髓间充质干细胞 ,体外扩增到第 10代 ,选择 4组不同组合的神经分化诱导条件 ,分别诱导骨髓间充质干细胞向神经元细胞分化 ,通过免疫细胞化学鉴定诱导后细胞神经元烯醇化酶、神经丝蛋白、胶质纤维酸性蛋白的表达情况。结果 各组诱导剂诱导后 ,骨髓间充质干细胞分化为具有典型的神经元形态的细胞 ,免疫细胞化学显示、NF M呈强阳性反应 ,NSE表达强度提高 ,在最佳的分化条件下 ,即加入bFGF、ATRA、BME、BHA、DMSO诱导条件下 ,大约 80 %细胞表达NF M ,86%的细胞为NSE强阳性。结论 成人MSCs在体外可定向诱导分化为神经元样细胞 。

成人骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学特性

目的:观察成人骨髓间充质干细胞体外分离培养方法及其生物学特性,为骨髓间充质干细胞的临床应用奠定技术基础。方法:实验于2005-12在吉林省四平市中心医院中心实验室进行。实验材料:人骨髓间充质干细胞,Ficoll淋巴细胞分离液,胎牛血清,牛血清白蛋白,α-MEM培养基,胰蛋白酶,FITC标记的CD44和CD90。实验方法:①人骨髓间充质干细胞的分离与培养:采集成人骨髓,密度梯度法分离单个核细胞,条件培养基培养和扩增,倒置光学显微镜下观察细胞形态及生长情况。②人骨髓间充质干细胞生长曲线的测定:取生长良好的P1,P5,P10细胞,用胰酶消化,接种于24孔板培养,每天各取3孔消化计数细胞,取平均值,连续培养7d,绘制生长曲线。③人骨髓间充质干细胞表面标志的测定:取生长良好P5细胞进行免疫荧光染色鉴定(CD44,CD90并设同型对照)。④人骨髓间充质干细胞的冻存及复苏:收集生长良好细胞,计数细胞密度及冻前存活率。将细胞加入到细胞冻存液中液氮冷冻保存。30d后复苏细胞,每日倒置光学显微镜下观察细胞生长状况。结果:①倒置显微镜下观察细胞形态:倒置显微镜下观察细胞呈纤维形,漩涡状生长。②人骨髓间充质干细胞的生长曲线分析:传代的细胞生长较原代要快,从第10代开始细胞生长开始出现缓慢征象。③细胞表面标记检测结果:免疫荧光染色后细胞膜着色明显,CD44,CD90阳性率均大于90%。④细胞冻存及复苏生长特性分析:椎虫蓝计数细胞存活率90%以上,增殖能力强,和未冻存过的传代细胞具有同样的生长特性。结论:应用密度梯度法分离法能获得较高纯度的骨髓间充质干细胞,能在体外长期培养,在传代培养5代内生长旺盛且生物学特性稳定。

成人骨髓间充质干细胞定向诱导为血管内皮样细胞

目的通过体外分离和纯化成人骨髓间充质干细胞,体外定向诱导分化为血管内皮样细胞,探讨为组织工程血管的构建提供种子细胞的可能性。方法收集骨髓血,提取单个核细胞进行体外培养扩增,用含10μg/L VEGF培养液诱导细胞,利用免疫组织化学、流式细胞仪技术、电镜技术、放射免疫技术鉴定和观察细胞特性。结果分析了5个标本,每个标本体外扩增10代可获细胞数为8×1010个左右;诱导14 d后细胞VWF强阳性表达,接近汇合的细胞外观呈现特征性的鹅卵石样形态,透射电镜显示胞质内可见大量吞饮小泡,细胞接种在细胞外基质凝胶(ECM-gel)中可形成毛细血管样结构,细胞上清液中6-酮-前列素F1α含量为(29.939±19.935)μg/(109.L)。结论实验结果提示利用本实验方法,可以获得足够量较为单一、具有较强增殖能力的间充质干细胞,间充质干细胞可以在体外定向分化为具有内皮血管细胞特性的细胞。

成人骨髓间充质干细胞体外培养方法的建立及生长特性分析

目的建立成人骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MMSCs)体外分离培养和扩增方法,观察MMSCs在体外培养的生物学特性,为MMSCs的临床应用奠定技术基础。方法采集成人骨髓,密度梯度法分离单个核细胞,利用DMEM/F12培养基添加自体血清进行黏附培养和扩增MMSCs,光镜观察MMSCs生长和形态变化,计数和MTT法观察原代和传代培养的增殖及生长特征,免疫组化法分析MMSCs纯度。结果MMSCs贴壁生长,呈典型MMSCs形态和生长特征,原代及传代5代内的MMSCs均有活跃的增殖能力,其中CD105阳性细胞>98%。结论密度梯度离心结合贴壁培养法可获得高纯度和高增殖活性的MMSCs,成人MMSCs至少在传代培养5代内生长旺盛并维持其生物特性,可满足临床治疗和人体生物组织研究要求。

冲击波干预成人骨髓间充质干细胞后IGF-Ⅰ和TGF-β1的表达及意义

[目的]在体外成功分离培养骨髓间充质干细胞(hMSCs)和测得理想冲击波(ESW)干预能量的基础上,观察体外冲击波干预后成骨活性因子IGFⅠ和TGFβ1表达,探讨其促进成骨作用。[方法]将5kV、100频次的体外冲击波作用于第1代骨髓间充质干细胞,采用免疫细胞化学法隔代观察(P1P11)胰岛素样生长因子Ⅰ(IGFⅠ)和转化生长因子β1(TGFβ1)的表达,计数阳性率;并进行统计学分析,设定P<0.05为有统计学差异。[结果]ESW干预后的第3代细胞IGFⅠ染色,胞浆及胞核中出现大量黄色棕黄色颗粒,对照组无明显着色;第7代干预组IGFⅠ呈强阳性(87.9%);TGFβ1出现较晚,第9代细胞TGFβ1阳性率为72.2%,随后开始下降;与对照组差异显著(P<0.01)。[结论]ESW干预能够提高hMSCs增殖活性,IGFⅠ和TGFβ1等的不同时期和不同程度表达是体外冲击波促进hMSCs成骨活动的适时信号和有力证据。

成人骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的研究

目的:通过成人骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)体外定向诱导为成骨细胞,探讨理想而有临床实用价值的成人骨髓MSC体外诱导培养体系。方法:体外分离、扩增成人骨髓MSC,流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达。采用基础诱导培养液[地塞米松、β-甘油磷酸钠、L-抗坏血酸加不同浓度的重组人转化生长因子-β1(recombinanthumantransforminggrowthfactor-beta1,rhTGF-β1)]诱导成人骨髓MSC体外分化为成骨细胞。利用倒置光学显微镜、透射电镜、四甲基偶氮唑盐(MTT)比色、碱性磷酸酶(ALP)染色、ALP活性测定等方法研究成人骨髓MSC增殖和分化情况。结果:成人骨髓MSC的增殖和分化作用和rhTGF-β1有剂量依赖关系,低浓度时促进增殖,高浓度抑制增殖,5μg/L浓度达到高峰,其浓度升高促进MSC分化。结论:含有rhTGF-β15μg/L的基础诱导培养液是理想且有临床实用价值的成人骨髓间充质干细胞体外诱导为成骨细胞的培养体系。

成人骨髓间充质干细胞体外培养及诱导分化的研究进展

目的探讨成人骨髓间充质干细胞体外培养及诱导分化的研究现状及发展前景。方法查阅国内外公开发表的相关文献,进行分析、归纳、总结。结果成人骨髓间充质干细胞可在体外大量扩增,并诱导分化为骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞等多种组织细胞。结论成人骨髓间充质干细胞具有成为种子细胞的潜力,在细胞移植方面有广阔前景。

绿色荧光蛋白标记成人骨髓间充质干细胞的超微结构特征

背景:研究表明,绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞免疫学表型、细胞周期、分化潜能等均未发生明显改变。目的:进一步观察绿色荧光蛋白标记对骨髓间充质干细胞超微结构的影响。方法:分离培养成人骨髓间充质干细胞,抗CD34、抗CD105免疫细胞化学染色鉴定,选第3代细胞进行绿色荧光蛋白标记,超薄切片后用透射电镜观察细胞超微结构,以未经绿色荧光蛋白标记骨髓间充质干细胞为对照。结果与结论:骨髓间充质干细胞表达CD105,不表达CD34。绿色荧光蛋白标记后,骨髓间充质干细胞细胞质发出绿色荧光,绿色荧光主要集中于细胞核周围的胞浆内,远离细胞核的胞浆内荧光强度逐渐减弱。相对于未标记的骨髓间充质细胞,经绿色荧光蛋白标记后细胞粗面内质网、高尔基体等细胞器较多,而线粒体相对较少;另外,脂滴和"空泡"样结构也多一些。结果证实绿色荧光蛋白对骨髓间充质干细胞性状的影响较为局限,是一种较为理想的细胞标记示踪剂。

成人骨髓间充质干细胞对造血干细胞体外增殖的影响

目的研究骨髓间充质干细胞(MSC)对脐带血(CB)CD34+细胞体外增殖和造血重建能力的影响。方法取人骨髓单个核细胞贴壁培养,梭形细胞完全融合后传代,用流式细胞仪检测免疫表型;将CBCD34+细胞接种到MSC或其他培养液中,比较不同培养条件对造血干细胞扩增能力、集落形成能力及黏附分子表达的影响。结果在加入IL-3的培养体系中,在MSC和细胞因子作用下,CD34+细胞扩增7d和14d后,有核细胞(NC)、CD34+细胞和CD133+细胞数,实验组均显著多于对照组。CD34+细胞在未加入IL-3的培养体系中培养8d后,实验组NC、CD34+细胞、CD34+CD38-细胞和造血祖细胞集落扩增倍数均显著高于对照组。扩增后CD34+细胞的ALCAM、VLA-α4、VLA-α5、VLA-β1、HCAM、PECAM和LFA-1表达较扩增前无显著变化。结论MSC可为造血干细胞(HSC)体外扩增提供适宜的微环境,有助于CD34+细胞体外增殖并抑制HSC分化,保持其造血重建潜能和归巢能力。