一种从果树成熟叶片提取DNA的方法

针对果树成熟叶片富含多糖、多酚及其它次生代谢物质的特点,以8个果树树种的秋季成熟叶片为材料,采用改进的CTAB法对其基因组总DNA进行了提取,并对得到的DNA进行了电泳检测、含量测定和AFLP分析。结果表明,该方法从8种果树的成熟叶片中均能提取出基因组总DNA,且DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均在1.8～2.0之间,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物组合为EcoRI-TA/MseI-CTT,EcoRI-TT/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的果树成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。

适于AFLP分析用的桃成熟叶片DNA提取方法

以多个野生桃秋季成熟叶片为材料,采用改进CTAB法对其基因组总DNA的提取进行了研究,并与其相应幼叶DNA的提取效果进行了比较分析。结果表明,从野生桃成熟叶片提取的DNA除产量低于幼叶外,DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均为1.8～2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物EcoRI-TA/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的野生桃成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。

利用改良CTAB法提取澳洲坚果成熟叶片高质量DNA

澳洲坚果的成熟叶片中次生物质含量很高,因此给DNA的提取造成很大困难。CTAB法可有效去除多糖等杂质,但常规CTAB法的提取效果并不好。为此,我们在此基础上进行改进。采用改良后的CTAB法提取了7个澳洲坚果样品的总DNA。结果表明:使用CTAB free缓冲液进行前处理可去除大部分的杂质。所获得的DNA纯度较高,OD_(260)/OD_(280)均在1.7～1.9之间,RNA消化彻底,DNA无明显降解,进行ISSR分析(UBC-835)条带清晰,多态性好。说明该方法获得的基因组DNA适合于进行以PCR为基础的DNA多态性的研究。

几个杏李品种成熟叶片基因组DNA的提取

用改良的CTAB法提取几个杏李品种成熟叶片的基因组DNA,裂解细胞核前先用洗液排除细胞质中的部分多糖、多酚、丹宁和果胶等物质的干扰;裂解细胞核时,在提取液中加入乙醇进一步去除多糖,结果表明,提取的基因组总DNA的纯度和完整性都较好,OD260/OD280值在1.70-1.93之间,DNA无降解现象,没有多糖污染,可被限制性内切酶消化,所提取的基因组DNA的SRAP扩增条带清晰,多态性好。说明用此方法提取到了质量合格的杏李基因组DNA,可以用于PCR和限制性内切酶分析。

富含多糖的白桦成熟叶片DNA的提取方法

采用常规SDS方法、改良SDS法、常规CTAB法、高盐CTAB法和改良的CTAB法对富含多糖的白桦成熟叶片DNA进行提取,并对得到的DNA进行电泳分析和含量测定,结果表明:改良的CTAB法所提取的DNA纯度高,质量较好,用限制性内切酶酶切后条带均一,证明该方法适于提取白桦成熟叶片的基因组DNA,能满足进一步分析的要求。

顽拗植物澳洲坚果成熟叶片DNA提取方法比较

目的：针对澳洲坚果成熟叶片中富含多糖、多酚等杂质的特点，建立澳洲坚果成熟叶片中提取高质量DNA的方法。方法：采用改良CTAB法和改良SDS法提取澳洲坚果样品的总DNA,并对产物进行紫外、电泳及PCR扩增检测。结果：改良CTAB法的平均产率为13．6μg／g，略低于改良SDS法18．5μg/g,但改良CTAB法可有效去除多糖等杂质，获得的基因组DNA质量高。OD260／OD280均在1．7—1．9之间。进行LCSR扩增可获得清晰、多态性好的条带。结论：改良CTAB法较之改良SDS法更适合于从澳洲坚果成熟叶片中提取高质量DNA。

摘除雌花对甜瓜成熟叶片中糖及相关酶活性的影响

甜瓜有果株的成熟叶片中蔗糖、葡萄糖、果糖含量与无果株的无显著差异 ,水苏糖与棉子糖含量略低于无果株 ,肌醇半乳糖苷 (合成水苏糖的前体 )含量显著低于无果株 ,蔗糖磷酸合成酶 (SPS)和肌醇半乳糖苷合成酶活性与无果株的无显著差异 ,水苏糖合成酶活性显著高于无果株。

几种提取液对苹果成熟叶片总RNA提取质量的影响

[目的]筛选一种快速有效地提取高质量的苹果成熟叶片总RNA的提取液。[方法]以红富士苹果成熟叶片为材料,用3种不同的提取液提取苹果成熟叶片的总RNA,并通过分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和RT-RCR检测RNA质量。[结果]3种试剂中2种可以提取出总RNA。[结论]用RNAiso-mate for Plant Tissu和RNAiso Plus搭配使用和RNAiso for Polysaccharide-rich Plant Tissue单独使用均可提取出质量较好的RNA,前者质量优于后者。

改良CTAB法提取油用向日葵成熟叶片的总RNA

为从植物中提取纯度高、完整性好的RNA,采用改良过的CTAB法提取油用向日葵改HA89开花后12d成熟叶片的总RNA,并对其进行了紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分析。结果表明:得到的RNA完整性好,纯度和浓度均较高,可用于后续的RT-PCR、Northern杂交和cDNA文库的构建等分子生物学实验研究。

蚕豆成熟叶片中扩张蛋白的存在及其功能研究

以已经停止生长的蚕豆(Vicia faba L.)成熟叶片为材料,利用免疫印迹、体外重组、免疫组织化学定位和药理学实验证明:已经停止生长的蚕豆成熟叶片中存在扩张蛋白,主要分布于保卫细胞壁中,而且背壁中较多;蚕豆成熟叶片中的扩张蛋白除具有扩张蛋白的一般特性外,其活性还可被K+激活;用扩张蛋白处理蚕豆表皮条可以促进光诱导的气孔开放,提示蚕豆成熟叶片中的扩张蛋白可能参与了气孔运动的调控过程.以上结果不仅证明了在已经停止生长的叶片中存在扩张蛋白.而且为深入阐明细胞壁调控气孔运动的作用机理的研究提供了新的线索.

青钱柳幼嫩与成熟叶片代谢组学数据比较分析

采用非靶向代谢组学方法,分析了青钱柳幼嫩叶片和成熟叶片之间的代谢物质的变化,共检测到695个代谢物,其中成熟叶片相比于幼嫩叶片共有94个代谢物含量显著上升,131个代谢物含量显著下降,470个代谢物在两组样品之间并无显著差异。相比于青钱柳幼嫩叶片,成熟叶片的12种游离氨基酸显著下调;45种黄酮类化合物显著变化,其中18种显著下调,27种显著上调;16种有机酸及其衍生物中,11种显著下调,5种显著上调。研究结果表明,具有高氨基酸含量和有机酸含量的幼嫩叶片适宜作为制作青钱柳茶的原材料,而具有高儿茶素类、黄酮苷和黄酮醇苷类化合物含量的成熟叶片适宜用做原材料提取黄酮类化合物等次生代谢产物。

4种改良CTAB法提取石榴成熟叶片DNA的比较研究

为研究从成熟石榴叶片中提取高质量基因组DNA的方法,根据成熟石榴叶片组织中富含多酚、多糖的特点,以峄城中国石榴种质资源圃20种石榴成熟叶片为材料,分别采用改良CTAB法(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)4种方法提取成熟石榴基因组DNA,通过琼脂糖凝胶、紫外分光光度计分析、ISSR扩增等方法检测所提取DNA的质量。结果表明,改良CTABⅣ法能从各个石榴品种的成熟叶片中提取出基因组DNA,琼脂糖电泳胶孔干净,无拖带,且DNA的纯度和完整性都较好,OD260 nm/OD280 nm的比值均为1.8~2.0,无降解现象,其质量、产量都高于其他改良CTAB法。ISSR-PCR扩增结果表明,此方法提取的基因组总DNA完全适于ISSR分析。其主要的步骤是:在石榴叶片的研磨中添加Vc、PVP等抗氧化物质,加入CTAB提取液后65℃水浴30 min后冷却至室温,离心条件为15℃、10 000 r/min、10 min, DNA粗提液用氯仿抽提3次,可获得高质量DNA。

凤庆茶树成熟叶片面积之大

云南省凤庆县所植茶树全系云南大叶种,其叶究竟有多大?我们作了一些观察: 该县永和大队的十三龄茶园中,茶树成熟叶片叶面积为:18.1厘米×7.4厘米至29.1厘米×10.2厘米,平均叶长为20.9厘米,叶宽为8.0厘米。后山大队马鹿塘生产队有一块七十年左右茶园中,茶树的成熟叶片面积为25.2厘米×11.2厘米,可见云南大叶种其叶之大也.

成熟石榴叶片DNA提取方法研究

[目的]为了从成熟石榴叶片中提取高质量、高产量的基因组DNA。[方法]针对成熟石榴叶片含多糖、多酚的特性,用改良CTABⅠ及改良CTABⅡ法分别提取2个品种(墨石榴和青皮软籽石榴)的成熟石榴鲜叶、冻叶、干叶基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、酶切鉴定。[结果]改良CTABⅡ法提取的基因组DNA电泳时点样孔干净,无拖带,OD260 nm/OD280 nm为1.7～1.9,酶切完全,其质量、产量都高于改良CTABⅠ法。[结论]改良CTABⅡ法是提取成熟石榴叶片中高质量、高产量基因组DNA的有效方法。

大豆成熟种子萌发叶片体细胞胚的高频诱导和遗传转化

目的虽然大豆遗传转化取得了较大进展,但其转化效率仍然偏低。因此,有必要建立一个更加简单和高效的大豆转化系统。本研究的目的是以大豆成熟种子萌发产生的叶片(MSDL)为靶外植体,高频诱导和转化大豆体细胞胚(somatic embryos,SEs)。方法萌发7 d的大豆幼苗上摘取叶片,并将其切成1.2 cm×1.2 cm的外植体。将叶片外植体置于胚胎诱导培养基(EIM)上诱导体细胞胚发生。将叶片外植体浸入携带p CAMBIA1301植物表达载体的农杆菌EHA105菌液进行遗传转化。结果MSDL(包括初生叶和次生叶)均能被诱导产生SEs。大多数SE发生在叶片切口处。所试的不同基因型均能诱导SEs。SEs的最高诱导率为95.0%。β葡糖醛酸糖苷酶(GUS)染色结果表明,平均转化效率达到75.4%。DNA印迹(Southern blot)结果表明,目的基因稳定整合在大豆基因组中,拷贝数为1~3个。结论本研究建立了以大豆MSDL为靶组织的体细胞胚高频诱导和遗传转化。该系统有望在大豆基因组编辑技术的开发上得到应用。

叶片成熟度对苹果试管苗叶片再生植株的影响

试验研究了叶片成熟度与苹果试管苗叶片再生植株的关系。结果表明，同一新梢不同部位叶片再生能力存在差异，以新梢顶端将展开幼叶的植株再生能力最强；继代培养２１ｄ的新梢叶片再生植株效果最好；同一叶片。

不同成熟度茶树叶片抗逆性生理指标差异

茶树以收获芽叶为主,叶片的生理特性和抗逆能力直接决定着茶树生长势和品质成分的形成。为研究茶树不同成熟度叶片生理变化规律,以2个茶树品种为研究对象,测定茶树新梢不同成熟度叶片丙二醛(MDA)、脱落酸(ABA)、水杨酸(SA)、脯氨酸(Pro)、可溶性糖(SS)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,综合评价各成熟度叶片的生理特性和抗逆能力,并通过相关性分析、主成分分析简化茶树抗逆性评价指标。结果表明,不同成熟度叶片的MDA、SA、SOD和Pro由1芽2叶至老叶基本呈现增加的趋势,老叶的含量均显著高于其他成熟度叶片;仅ABA含量随着叶片成熟度的增加而降低;SS含量则呈现先增加后降低趋势,新梢3、4叶达到峰值,老叶最低。相关性分析表明,MDA与SA、Pro之间存在极显著或显著正相关。ABA与MDA、SOD、Pro、SA、CAT存在中度到高度负相关。7个茶树叶片抗逆性评价指标可简化为5个,即MDA、ABA、SA、SS和CAT,可应用于茶树抗逆性的鉴定,提高种质材料的筛选效率。

烤烟不同水分条件下成熟期叶片植物学特性

以烤烟品种K3 2 6为材料 ,对成熟期不同水分条件下叶片植物学特性进行研究。结果表明 :随土壤含水量的降低 ,气孔密度增加 ,气孔开度减小 ;同部位烟叶叶片增厚 ,栅栏组织加厚 ,海绵组织变薄 ,单位长度栅栏组织细胞数目增多 ,细胞变细、变长 ,排列更加紧密 ,栅栏组织发达 ,有利于进行光合作用。对于不同部位的烟叶 ,随部位的升高 ,叶片和栅栏组织都增厚 ,栅栏组织细胞和细胞数目均增大。因此生产上合理调控成熟期烟田土壤水分 ,控制叶片厚度 。

红掌叶片成熟度对愈伤诱导效果的影响

通过对9个不同红掌品种的叶片生长过程的观察,记录叶片生长的展叶期、转青期和青熟期、抽花蕾期等几个重要时期的所需天数,并比较不同生长时期叶片对愈伤诱导效果的影响。结果表明,不同的红掌品种叶片生长速度不同,不同品种叶片愈伤诱导的难易程度也不同,多数品种在叶片转青期的愈伤诱导率较高。

高效提取越橘成熟组织基因组DNA的方法

为从越橘成熟组织中提取高质量DNA,对CTAB法进行改良,并与常规CTAB法及快速CTAB法的提取效果进行比较。结果表明：改良方法提取获得的DNA产量大、纯度高,DNA产量平均为192μg/g,OD260/OD280在1.75-1.85之间,所得DNA能被限制性内切酶完全消化,以其为模板进行SRAP-PCR扩增,能得到清晰、稳定的条带,证明改良方法适于越橘成熟组织DNA的提取。