托法替布通过JAK/STAT3通路抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

目的:研究泛Janus激酶(Janus kinase,JAK)抑制剂托法替布(tofacitinib)对转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的作用及机制,为临床治疗结缔组织病相关的间质性肺疾病提供理论依据。方法:(1)体外培养人胚胎肺成纤维细胞(human fetal lung fibroblast 1,HFL-1),设立6个组,分别为DMSO空白对照组、TGF-β1诱导组、TGF-β1联合不同浓度托法替布(0.5、1.0、2.0、5.0μmol/L)药物干预实验组。采用CCK-8法检测细胞活力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力。(2)采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-PCR)、蛋白免疫印迹实验(Western blotting)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,COL1)基因及蛋白的表达水平。应用RT-PCR和酶联免疫吸附试验检测各组白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的基因和细胞培养上清液中的蛋白水平。(3)在不同组的细胞培养基中加入DMSO载体对照,以1.0μmol/L和5.0μmol/L的托法替布预培养30 min,然后加入TGF-β1处理1 h、6 h和24 h。以Western blotting检测Smad2/3、信号传导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的蛋白磷酸化水平。结果:(1)托法替布抑制TGF-β1诱导的HFL-1细胞活力及迁移能力。(2)与空白对照组相比,TGF-β1诱导组HFL-1的α-SMA、COL1A1和FN1基因表达显著上调(P<0.05)。5.0μmol/L托法替布干预组的α-SMA基因表达与TGF-β1诱导组相比显著下调(P<0.05)。0.5~5.0μmol/L托法替布各干预组与TGF-β1诱导组相比均可抑制FN1基因表达(P<0.05)。各干预组与TGF-β1诱导组相比,COL1A1基因的表达无明显变化。(3)Western blotting结果提示,TGF-β1诱导组细胞α-SMA、FN1蛋白水平较对照组显著增加(P<0.05),COL1A1表达未见明显差异。托法替布不同浓度干预组与TGF-β1诱导组相比,α-SMA蛋白表达均有下降,其中2.0μmol/L和5.0μmol/L干预组与诱导组间的差异有统计学意义(P<0.05)。托法替布不同浓度干预组的FN1蛋白水平均有下降,但与TGF-β1诱导组相比差异无统计学意义。各干预组的COL1A1蛋白表达与TGF-β1诱导组相比差异无统计学意义。(4)TGF-β1诱导48 h,HFL-1细胞中IL-6基因及培养上清液中IL-6的表达水平较对照组显著升高,各浓度托法替布干预组与TGF-β1诱导组相比均有所降低。TGF-β1诱导1 h、6 h和24 h,STAT3蛋白磷酸化水平增加,托法替布预刺激抑制了6 h时Smad2/3的磷酸化水平,在1 h、6 h和24 h时均抑制了STAT3的磷酸化水平。结论:托法替布能抑制TGF-β1诱导的HFL-1细胞向肌成纤维细胞方向转化,其机制可能是通过抑制Smad2/3经典通路以及抑制TGF-β1所诱导的STAT3磷酸化,从而对肺纤维化疾病进展发挥保护作用。

黄芩素对TGF-β_1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响

目的观察黄芩素(黄芩苷元,baicalein,BAE)对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响。方法体外培养人胚胎肺成纤维细胞(WI-38),TGF-β1诱导后,通过Western blot检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)相关蛋白表达的变化,同时采用免疫组化法观察细胞形态变化。TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞WI-38成肌成纤维细胞模型,再给予不同剂量的黄芩素,检测转化过程中相关蛋白α-SMA、collagen 1、Smad 2、p-Smad 2的表达变化。结果与模型组相比,黄芩素2 000nmol.L-1～125 nmol.L-1对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化有抑制作用。黄芩素组以剂量依赖性下调α-SMA(P<0.01)、collagen 1(P<0.01)、Smad 2(P<0.05)、p-Smad 2(P<0.05)蛋白的表达。结论黄芩素对TGF-β1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化过程中有一定的抑制作用,该作用与下调α-SMA,抑制细胞内胶原合成及干预TGF-β/Smads信号通路有关。

干扰TRPM7对人肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响

目的研究干扰瞬时受体电位通道7(TRPM7)对人肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响。方法用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激人胚肺成纤维细胞WI-38和MRC-5,Western blot检测细胞平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和胶原Ⅰ的表达,来评价细胞的转化。用实时聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测细胞中TRPM7的表达。将特异性的TRPM7 si RNA转染到细胞中,并将细胞分为对照组、模型组、TRPM7 si RNA组、转染非特异性si RNA组(Scramble组)。检测转化过程中相关蛋白α-SMA、胶原Ⅰ、Smad3、p-Smad3及Smad7的表达。结果 TGF-β1(15μg/L)作用24 h后,成功诱导肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞。与对照组比较,模型组细胞中TRPM7 m RNA和蛋白高表达,且细胞中α-SMA、胶原Ⅰ、Smad3及p-Smad3的蛋白表达增多,Smad7表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,TRPM7 si RNA转染组细胞TRPM7 m RNA和蛋白低表达,且α-SMA、胶原Ⅰ、Smad3及p-Smad3的表达下降,Smad7的表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调TRPM7可在一定程度上干预肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化,该作用可能与TGF-β1/Smads信号通路有关。

Notch3表达下调在诱导心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞转化中的作用

目的:探讨Notch3在心肌成纤维细胞(CFs)向肌成纤维细胞(MFs)转化中的作用。方法:用胶原酶消化法分离培养SD仔鼠的CFs,将其于不同浓度的转化生长因子-β1(TGF-β1)孵育24 h。用Western blot检测CFs中平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)及Notch3的表达量,用ELISA法检测细胞上清羟脯氨酸含量,用Real-Time PCR检测Notch3 mRNA表达量;利用RNAi法干扰CFs中Notch3的表达,用实时PCR及Western blot检测干扰效果;Western blot检测α-SMA蛋白表达量,ELISA检测各组细胞上清羟脯氨酸含量。结果:TGF-β1可浓度依赖性地诱导CFs细胞上清羟脯氨酸含量增加和α-SMA表达增加,同时使Notch3表达下降,其中2 ng/ml,5 ng/ml,10 ng/ml 3个浓度组与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。RNAi法干扰Notch3后,干扰组与对照组相比,Notch3 mRNA及蛋白表达均下降(P<0.05),同时,干扰组细胞上清羟脯氨酸含量及α-SMA表达均增加(P<0.05)。结论:Notch3表达下调能诱导CFs向MFs转化。

N-乙酰半胱氨酸对转化生长因子β1诱导人胚肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响

目的研究 N-乙酰半胱氨酸(NAC)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HFL-F)向肌成纤维细胞(MF)转化过程的影响和对已分化 MF 的作用。方法体外培养 HFL-F,以 TGF-β1(5μg/L)诱导 HFL-F向 MF 转化,测定细胞羟脯氨酸(HYP)含量,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、α-SMA 和Ⅲ型胶原(COLⅢ)mRNA 表达水平,观察 NAC(10μg/L)对 HFL-F 向 MF 转化过程及对已分化 MF 细胞的影响。结果 TGF-β1诱导 HFL-F 96 h,诱导同时加入 NAC 可抑制 HYP 含量增高、COL Ⅲ mRNA(P 均<0.05)和α-SMA 表达上调,但是对α-SMA mRNA 表达水平无显著性影响(P>0.05)。TGF-β1诱导 HFL-F 96 h后再加入 NAC 对 HYP 含量、α-SMA 蛋白质、α-SMA 和COL Ⅲ mRNA 表达量均无显著影响(P 均>0.05)。结论 TGF-β1可诱导 HFL-F 向 MF 转化,NAC 可抑制α-SMA 蛋白质与胶原蛋白合成。对已分化的 MF,NAC 对 COL Ⅲ和α-SMA 在转录水平与转录后水平的表达均无显著影响。

CKLF1-C19多肽对TGF-β诱导原代人肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的干预作用

目的:探讨CKLF1-C19多肽(C19)对TGF-β诱导原代人肺成纤维细胞(LFB)向肌成纤维细胞(MFB)转化的干预作用。方法:培养原代人肺成纤维细胞并鉴定。用适宜的TGF-β浓度处理LFB,制备LFB向MFB转化的细胞模型。随后将实验分为对照组、TGF-β(5μg/L)组及4个浓度(1、0.1、0.01、0.001 mg/L)C19与TGF-β合用组。以细胞生长状态、细胞增殖率、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及I型胶原蛋白(collagen I)的表达变化为观察指标。结果:经显微镜检测,证实成功培养出原代人LFB。5μg/L TGF-β明显刺激LFB增殖及α-SMA和collagen I表达(P<0.05)。与TGF-β组相比,C19-0.01 mg/L+TGF-β及C19-0.001 mg/L+TGF-β组LFB的细胞增殖率、α-SMA和collagen I的mRNA及α-SMA的蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:0.01 mg/L及0.001mg/L的CKF1-C19多肽对TGF-β诱导的LFB向MFB转化有一定的抑制作用,可在一定程度上抑制气道重塑和纤维化的发生。

Notch3过表达对心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的抑制作用

目的:探讨Notch3过表达对心肌成纤维细胞(CFs)向肌成纤维细胞(MFs)转化的作用。方法:用胶原酶消化法分离培养SD仔鼠的CFs,将CFs于10ng/ml转化生长因子-β1(TGF-β1)中孵育24h,用羟脯氨酸试剂盒检测细胞上清羟脯氨酸含量,免疫荧光法检测CFs中平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,用Western-blotting检测Notch3蛋白表达;利用慢病毒转染CFs,使其过表达Notch3,确定最佳转染条件为感染复数(MOI)20,转染时间72h,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,Western-blotting检测Notch3过表达效率;用羟脯氨酸试剂盒检测细胞上清羟脯氨酸含量,免疫荧光法检测CFs中α-SMA表达。结果:10ng/ml TGF-β1可显著诱导CFs细胞上清羟脯氨酸含量及α-SMA表达增加,同时使Notch3表达下降,与空白对照组相比有统计学差异(P<0.05)。慢病毒转染CFs过表达Notch3后,与空白对照组相比,Notch3过表达组细胞上清羟脯氨酸含量及α-SMA表达均显著减少(P<0.05)。结论:过表达Notch3能抑制CFs向MFs转化。

TGF-β1通过上调Shh信号诱导大鼠脑膜成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

目的探讨TGF-β1在诱导脑膜成纤维细胞转化为肌成纤维细胞中对Shh信号的影响。方法新生24 h SD大鼠脑膜原代成纤维细胞经Ⅳ型胶原酶提取纯化。原代脑膜成纤维细胞随机分为3个组:分别为空白对照组、10 ng/mL TGF-β1处理组(TGF-β1组)、10 ng/mL TGF-β1联合20μmol/L TGF-β1受体抑制剂SB-431542组(TGF-β1+SB组)。各组细胞在药物处理前均用无血清培养基培养24 h后换用加入了药物的DMEM/F12完全培养基处理72 h。采用CCK-8法检测各实验组成纤维细胞的增殖能力;细胞划痕实验检测各实验组成纤维细胞的迁移能力;免疫荧光法检测各实验组纤维连接蛋白(Fn)的表达;Westernblotting检测各实验组Fn、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Shh蛋白的表达;q-PCR检测各实验组细胞Shh mRNA的表达。结果TGF-β1可促进原代脑膜成纤维细胞的增殖(P<0.05);TGF-β1可促进原代脑膜成纤维细胞的迁移(P<0.05)。TGF-β1可促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化并增加Fn的分泌(P<0.05)。TGF-β1处理后可上调Shh蛋白和mRNA的表达(P<0.05),TGF-β1受体抑制剂SB-431542则可抑制TGF-β1引起的原代脑膜成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化并减少纤维连接蛋白的分泌(P<0.05)。结论TGF-β1可通过上调Sonic Hedgehog信号通路中Shh蛋白的表达,诱导脑膜成纤维细胞转化为肌成纤维细胞。

增生性瘢痕中成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响因素研究

肌成纤维细胞(myofibroblast,MFB)是增生性瘢痕(hypertrophic scar,HS)形成过程中重要的效应细胞,因此TGF-β1(transforming growth factor-β1)介导的成纤维细胞(fibroblast,FB)向MFB的转化可成为预防HS的一个重要靶点。近年来,有很多关于人瘢痕组织内FB向MFB转化的影响因素的研究,旨在通过调控这些影响因素抑制该环节的发生,从而更有针对性地预防HS形成。本文就人瘢痕组织内FB向MFB转化的影响因素研究进展综述如下。

Notch1在TGF-β1诱导心肌成纤维细胞向肌成纤维细胞转化中的作用

目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)诱导心肌成纤维细胞(CFs)向肌成纤维细胞(MFB)转分化过程中Notch1的变化情况,探讨在此转分化过程中Notch1的可能作用.方法:体外分离培养CFs,以10μg/LTGF-β1诱导CFs向MFB转分化.实验分为对照组,TGF-β1作用24,48,72h组,采用消化法测定羟脯氨酸(HYP)含量;免疫荧光、免疫印迹法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;实时定量PCR、免疫印迹法测定Notch1 mRNA及蛋白表达.利用γ分泌酶抑制剂DAPT(75μmol/L)阻断Notch1受体活化.实验分对照组,DAPT作用24,48,72h组,检测SMA及胶原的表达变化.结果:TGF-β1作用后,与对照组相比较α-SMA,HYP表达量随TGF-β1诱导时间的增加呈上升趋势,而Notch1则呈下降趋势,均以72h最显著(P<0.01);加入DAPT后,与对照组相比较α-SMA,HYP表达量随DAPT作用时间增加呈上升趋势,以72h最显著(P<0.01).结论:TGF-β1可以诱导CFs向MFB转分化,Notch1在此过程中的表达呈下降趋势,而DAPT阻断Notch1活化后可以促进CFs向MFB转分化.

紫杉醇影响TGF-β1诱导的原代人肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化

目的:研究紫杉醇(paclitaxel,PTX)对重组人转化生长因子-β1(recombinant human transform growth factor-β1,rhTGF-β1)诱导人肺成纤维细胞(human lung fibroblasts,HLFs)向肌成纤维细胞转化的影响及其相关机制。方法:培养HLFs,药物处理分为对照组、TGF-β1组(5 ng/mL)、TGF-β1+PTX(0.01 nmol/L)组、TGF-β1+PTX(0.1 nmol/L)组、TGF-β1+PTX(1 nmol/L)组、PTX组(1 nmol/L)。采用CCK8法测定细胞活性;显微镜下观察并分析细胞形态学变化;Transwell实验检测细胞迁移能力;免疫荧光观察细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达及分布情况;real-time PCR和Western blot检测各组α-SMA、纤连蛋白(fibronectin)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ)mRNA水平及蛋白含量;Western blot检测各组细胞内p-Smad3、Smad3、p-p38和p38蛋白含量。结果:CCK8结果显示,1 nmol/L PTX对细胞无毒性作用,0.01 nmol/L PTX不能抑制TGF-β1诱导的HLFs活性增加,0.1和1.0 nmol/L PTX可以抑制TGF-β1诱导的HLFs活性增加;细胞形态学结果显示,0.01 nmol/L PTX不能抑制TGF-β1诱导的HLFs胞体宽度增加,0.1、1.0 nmol/L PTX可以抑制TGF-β1诱导的HLFs胞体宽度增加;Transwell实验结果显示,0.01 nmol/L PTX不能抑制TGF-β1诱导的HLFs迁移,0.1、1.0 nmol/L PTX可以抑制TGF-β1诱导的HLFs迁移;免疫荧光结果显示,0.01 nmol/L PTX不能降低TGF-β1诱导的HLFs内α-SMA荧光强度,0.1、1.0 nmol/L PTX可以降低TGF-β1诱导的HLFs内α-SMA荧光强度;real-time PCR和Western blot结果显示,0.01 nmol/L PTX不能降低TGF-β1诱导的HLFs表型转化标志物α-SMA、fibronectin、collagenⅠ、collagenⅢ含量及p38的磷酸化水平,0.1、1.0 nmol/L PTX可以降低TGF-β1诱导的HLFs表型转化标志物α-SMA、fibronectin、collagenⅠ、collagenⅢ含量以及Smad3和p38的磷酸化水平。结论:紫杉醇可以抑制TGF-β1诱导原代HLFs向肌成纤维细胞表型转化,这种作用可能与抑制TGF-β/Smad/MAPK信号通路激活有关。

血小板生成素抑制TGFβ1诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的研究

目的:探讨血小板生成素处理对TGFβ1介导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的影响。方法:CCK8法测定血小板生成素及TGFβ1组合处理后细胞生长的抑制率,采用荧光实时定量PCR及免疫荧光染色分别检测不同处理组细胞αSMA、COL1A2基因及蛋白的表达水平,应用免疫荧光染色检测细胞增殖相关蛋白Ki-67的表达水平,应用荧光实时定量PCR检测HO-1基因的表达水平。结果:TGFβ1处理能够诱导肺成纤维细胞分化为肌成纤维细胞,细胞形态发生显著变化且增殖速度提高,肌成纤维细胞标志基因/蛋白αSMA及COL1A2的表达水平随诱导时间延长显著提高(P<0.01)。在TGFβ1处理同时添加血小板生成素(TPO),αSMA、COL1A2基因和蛋白的表达水平均显著下调(P<0.01)。此外,TPO显著抑制TGFβ1诱导的细胞增殖,且增殖相关蛋白Ki-67的表达水平较TGFβ1处理组显著降低(P<0.05)。此外,发现TGFβ1处理导致HO-1的表达水平下降,而添加TPO能够挽救该基因的表达水平(P<0.05)。结论:血小板生成素能够抑制TGFβ1诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化,这一发现对肺纤维化的对症治疗具有潜在的应用价值。

巨噬细胞向肌成纤维细胞转化促进LPS诱导的急性肺损伤模型小鼠肺纤维化

目的探讨巨噬细胞向肌成纤维细胞转化(MMT)在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠肺纤维化过程中的作用。方法将21只小鼠分为7组:对照组、不同时间点LPS诱导小鼠早期肺纤维化(LPS-PF)模型组和不同时间点氯磷酸二钠脂质体(CL-LIP)干预组(n=3)。用HE、Masson染色评估各组肺纤维化程度;用免疫荧光检测MMT过程中CD68和α-平滑肌动蛋白(α-SMA)共标记阳性细胞数量。骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)分为对照(Ctrl)组和转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激组(n=3);用RT-qPCR检测各组α-SMA、纤连蛋白(FN)、人I型胶原蛋白(Col1)表达水平。用Western blot检测各组间α-SMA以及Smad同源物3(Smad3)、磷酸化的Smad3(p-Smad3)蛋白表达量。结果LPS-PF模型小鼠肺组织第7天Ashcroft评分较对照(Ctrl)组显著增高(P<0.01);但在CL-LIP组中肺纤维化程度较LPS-PF组明显减轻(P<0.05)。肺组织免疫荧光染色发现,CL-LIP组CD68α-SMA共标记阳性细胞数较LPS-PF组对应时间点明显减少(P<0.01)。体外实验中,TGF-β1刺激组48 h、96 h后α-SMA、FN、Col1较对应时间点表达量明显增加(P<0.01)。检测体内、体外实验中Smad3、p-Smad3的蛋白表达量,发现LPS-PF组(第7天、第10天)和TGF-β1刺激组(48 h和96 h)均较各自对照(Ctrl)组明显增加(P<0.01)。结论MMT具有促进LPS诱导模型小鼠肺纤维化的作用,其转化过程可能经Smad3调节。

双氢青蒿素对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞分泌胶原及激活PI3K/AKT通路的影响

心肌纤维化常由于心脏多次短暂缺血、负荷过重、心肌炎等多种有害因素所致。研究显示心肌组织中的胶原异常沉积为心肌纤维化病理学特征[1-2],引起心肌硬度增加、收缩能力下降,易发生心律失常、心室重构以及心功能不全等并发症。心肌成纤维细胞数量增多和异常活化释放大量基质成分为心肌纤维化的重要机制,也是疾病治疗的关键点[3-4]。实验表明血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)是促进心肌发生纤维化的重要因子[5-6]。本研究采用AngⅡ孵育心肌成纤维细胞制备细胞模型,经双氢青蒿素(DHA)干预后,分析细胞的数目及分泌胶原含量的变化,探究DHA抗心肌纤维化的作用机制,报道如下。

血清成纤维细胞生长因子21和脂肪酸结合蛋白4检测对急性ST段抬高型心肌梗死患者经皮冠状动脉介入治疗术后心力衰竭的预测价值

目的探究血清成纤维细胞生长因子21(FGF21)和脂肪酸结合蛋白4(FABP4)检测对急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后心力衰竭的预测价值。方法选取2020年9月至2022年9月内蒙古医科大学附属医院接诊的113例STEMI患者为研究对象,依据PCI术后1年是否发生心力衰竭(心衰),将其分为心衰组(n=32)和非心衰组(n=81)。应用ELISA法测定血清FGF21、FABP4表达水平,比较两组血清FGF21、FABP4水平,多因素logistic回归分析影响STEMI患者PCI术后发生心力衰竭的相关因素,ROC曲线评估血清FGF21、FABP4水平对STEMI患者PCI术后心力衰竭发生的预测价值。结果心衰组心率次数、C反应蛋白(CRP)、心肌肌钙蛋白(cTnI)、N末端B型利钠肽原(BNP)、利尿剂使用比例均显著高于非心衰组,左心室射血分数(LVEF)显著低于非心衰组(P<0.05)。心衰组血清FGF21、FABP4表达水平均明显高于非心衰组[(228.37±33.07)ng/L比(185.68±25.52)ng/L、(34.26±5.51)ng/ml比(26.87±4.67)ng/ml,t=7.345、7.195,P<0.05]。血清FGF21(95%CI 1.371~8.191)、FABP4(95%CI 1.176~4.090)及发病到至导丝通过时间(95%CI 1.058~8.157)是影响STEMI患者PCI术后发生心力衰竭的危险因素(OR>1,P<0.05),LVEF(95%CI 0.473~0.913)是保护因素(OR<1,P<0.05)。血清FGF21、FABP4单独及二者联合预测STEMI患者PCI术后发生心力衰竭的曲线下面积(AUC)分别为0.828、0.856、0.934,二者联合优于单一(Z二者联合-FGF21=1.971、Z二者联合-FABP4=2.417,P=0.048、P=0.015)。结论STEMI患者PCI术后发生心力衰竭血清FGF21、FABP4水平均明显升高,二者联合对STEMI患者PCI术后发生心力衰竭的风险具有更高的预测价值。

牛磺熊去氧胆酸通过调节内质网应激抑制转化生长因子β1所诱导的心肌成纤维细胞纤维化

目的探讨牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)对转化生长因子β1(TGF-β1)所诱导的心肌成纤维细胞(CFs)活化的作用及相关机制,为TUDCA治疗糖尿病心肌纤维化提供新的治疗目标。方法提取原代SD乳鼠CFs和心肌细胞,通过免疫荧光法鉴定CFs的纯度。分别将高糖培养下的CFs用不同时间的TGF-β1干预,用Western blot检测内质网应激(ERS)通路相关蛋白和纤维化指标的表达,探讨TGF-β1对CFs活化及ERS相关通路的影响。用Western blot检测CFs和心肌细胞内同型半胱氨酸内质网应激泛素样结构域1(Herpud1)的表达情况。通过沉默Herpud1的表达及用Transwell和Western blot检测沉默Herpud1后CFs纤维化指标的表达,探讨Herpud1在TGF-β1诱导的CFs活化中的作用。用CCK-8检测不同浓度的TUDCA处理下CFs的活力。用免疫荧光和Western blot检测TUDCA对TGF-β1诱导的CFs中Herpud1、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录激活因子6(ATF6)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)和Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)表达的影响。为进一步明确Herpud1在TUDCA抑制CFs活化中的作用,用Western blot检测过表达Herpud1后相关蛋白的表达情况。结果在成功构建CFs纤维化模型的基础上,TGF-β1能够诱导CFs活化及ERS通路相关蛋白的表达;Herpud1在CFs中的表达高于心肌细胞;敲除Herpud1可抑制TGF-β1所诱导的CFs活化;TUDCA能显著降低TGF-β1诱导的CFs中GRP78、ATF6、α-SMA、Vimentin和CollagenⅠ的表达水平;此外,过表达Herpud1还可逆转TUDCA对TGF-β1诱导的CFs活化的抑制。结论下调Herpud1基因的表达是TUDCA抑制TGF-β1诱导的CFs纤维化的机制之一。

活血潜阳祛痰方抑制心肌成纤维细胞增殖的机制研究

目的观察活血潜阳祛痰方(HQQR)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响及可能机制。方法分离、培养SD大鼠原代CFs,并进行鉴定。应用AngⅡ诱导CFs建立体外心肌纤维化模型。将CFs分成空白细胞组、AngⅡ组、AngⅡ+HQQR(低剂量)组、AngⅡ+HQQR(高剂量)组和AngⅡ+缬沙坦组,作用48 h。应用CCK-8法检测各组细胞增殖水平,流式细胞仪检测各组细胞ROS水平,Elisa检测各组上清中羟脯氨酸水平,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测NADPH氧化酶4(NOX4)、核因子κB p65(NF-κB p65),细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和p-ERK1/2的水平,对相关数据进行统计分析。结果HQQR可显著改善AngⅡ诱导CFs增殖。AngⅡ组上清中羟脯氨酸水平显著高于空白组(P<0.05),ROS水平和NOX4蛋白表达量亦显著升高(P<0.05)。AngⅡ刺激CFs后,细胞中NF-κB p65蛋白表达量和ERK1/2磷酸化比值高于空白细胞组(P<0.05)。HQQR治疗可以改善CFs增殖和胶原分泌,降低ROS水平,并显著减少NOX4、NF-κB p65蛋白表达量和ERK1/2磷酸化比值,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HQQR可能通过抑制氧化应激、减轻炎症反应来抑制CFs增殖,改善心肌纤维化。

针刀干预后颈椎病大鼠头夹肌成纤维细胞生长因子家族及其受体的表达

背景:针刀是治疗颈椎病的有效方法,临床疗效确切,但其关键分子机制尚不明晰。目的:观察针刀干预对颈椎病大鼠头夹肌成纤维细胞生长因子家族及其受体激酶插入域蛋白受体表达的影响,分析针刀治疗颈椎病的作用机制。方法:通过检索GEO数据库,获取符合该研究的芯片数据集GSE153761,采用生物信息学方法进行靶标初筛,然后进行动物实验。选取6月龄SPF级SD大鼠24只,随机均分为4组。模型组和针刀组大鼠采用动静力失衡性颈椎病造模方法制备颈椎病大鼠模型;假手术组不切断肌肉及韧带;针刀组造模成功后采用针刀干预,每周1次,共3次;并以正常大鼠作为对照。拍摄颈椎正侧位X射线片进行模型验证;旷场实验观察大鼠行为学变化;苏木精-伊红染色观察头夹肌病理结构;荧光定量PCR法和免疫组化法分别检测头夹肌成纤维细胞生长因子家族及其受体激酶插入域蛋白受体mRNA及蛋白的表达情况。结果与结论:①生物信息学结果表明成纤维细胞生长因子家族/激酶插入域蛋白受体是激活磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B上游的重要信号轴。②造模后大鼠椎间隙变窄,椎体前后缘、关节突骨质增生。③旷场实验中,造模后大鼠总距离、平均速度降低(P<0.05),总休息时间延长(P<0.05);治疗后针刀组大鼠总距离、平均速度大于模型组(P<0.05),总休息时间短于模型组(P<0.05)。④头夹肌病理提示颈肌受损,而针刀可改善颈肌劳损。⑤与正常组比较,模型组大鼠头夹肌成纤维细胞生长因子7、成纤维细胞生长因子9、成纤维细胞生长因子10、成纤维细胞生长因子18和激酶插入域蛋白受体mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05);与模型组比较,针刀组以上指标均降低(P<0.05)。⑥结果说明,针刀可能通过调节成纤维细胞生长因子7、成纤维细胞生长因子9、成纤维细胞生长因子10、成纤维细胞生长因子18及其受体激酶插入域蛋白受体的表达,修复劳损颈肌,从而改善椎间盘退变,这可能是针刀治疗颈椎病的关键靶点。

过表达sFRP3对小鼠原代心肌成纤维细胞活化增殖的影响

目的探讨Wnt信号通路调控剂分泌型卷曲相关蛋白3(sFRP3)在小鼠心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖中的作用。方法购入1~3 d的小鼠乳鼠,行手术对心脏取材,消化后分离CFs进行培养。细胞贴壁生长后使用转化生长因子(TGF-β1)刺激构建CFs活化增殖模型;确认模型构建成功后分别向实验组和对照组细胞转染sFRP3过表达质粒和空载质粒24~48 h。通过Western blot、qRT-PCR的方法在分子层面对sFRP3、Periostin(POSTN)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达进行检测;使用MTT法、CCK-8法和EdU染色法检测细胞增殖能力的改变。结果在TGF-β1刺激构建的CFs活化增殖模型中,相较于对照组,模型组sFRP3蛋白及mRNA表达下降,活化增殖相关蛋白PCNA、POSTN和CollagenⅠ表达上调。另外,在质粒转染sFRP3过表达组的CFs中,PCNA、POSTN和CollagenⅠ蛋白及mRNA表达相较于空载组下降。MTT、CCK-8与EdU实验表明,质粒转染sFRP3过表达组的CFs增殖活性较空载组明显下降。结论过表达sFRP3明显抑制CFs活化增殖,提示sFRP3可能是参与调控CFs活化增殖的关键基因。

红景天苷对血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞纤维化的保护作用

背景:目前已有研究表明红景天苷对多器官纤维化具有改善作用,但红景天苷对血管紧张素Ⅱ引起心肌成纤维细胞纤维化的保护作用尚不明确。目的:探究红景天苷对血管紧张素Ⅱ诱导的SD大鼠心肌成纤维细胞氧化应激及细胞外基质沉积的保护作用及其作用机制。方法:血管紧张素Ⅱ诱导心肌成纤维细胞纤维化,实验分为5组:正常对照组;模型组(培养基血管紧张素Ⅱ终浓度为1μmol/L);红景天苷低剂量和高剂量组(加入红景天苷50,100μmol/L处理2 h,再加入血管紧张素Ⅱ共同孵育48 h);SIRT1抑制剂组(加入SIRT1抑制剂EX52710μmol/L处理2 h,再加高剂量红景天苷处理2 h,再加血管紧张素Ⅱ共同孵育48 h)。使用CCK8法检测各组细胞活力,Transwell检测细胞迁移率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧水平,试剂盒检测细胞内丙二醛含量、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性;采用Western blot和qRT-PCR法检测心肌成纤维细胞纤维化相关mRNA和蛋白的表达水平。结果与结论:①经Vimentin荧光鉴定实验细胞为心肌成纤维细胞;②与正常对照组相比,模型组细胞活力、细胞迁移率、活性氧水平、丙二醛含量显著增加,超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性明显降低,LOXL2、α-SMA、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白ⅢmRNA和蛋白表达显著升高,SIRT1蛋白表达水平明显降低(均P<0.01);与模型组相比,红景天苷低、高剂量组上述指标呈现相反的变化(均P<0.05),且红景天苷呈剂量依赖性调控;与红景天苷组相比,SIRT1抑制剂组细胞迁移率、α-SMA蛋白表达水平显著增加(均P<0.001);③结果表明,红景天苷对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞具有保护作用,能够剂量依赖性地抑制氧化应激和细胞外基质沉积。