乳酸对成骨样细胞成骨表型及碱性磷酸酶基因表达的影响研究

目的明确聚乳酸降解终产物乳酸对细胞成骨表型和基因表达的影响机理,为聚乳酸支架的精确设计提供参考意义。方法配制乳酸浓度为8、16、22、27 mmol/L的培养基,将不含乳酸培养基作为对照组,检测培养基的pH和渗透压。利用培养基培养大鼠成骨样细胞Ros17/2.8,观察细胞形态,测定细胞Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和骨钙素含量,盐酸四环素染色钙结节并定量分析。采用实时定量PCR法检测细胞ALP mRNA表达。结果与对照组相比,随着乳酸浓度增加,培养基pH下降,渗透压升高,成骨样细胞形态改变,数量减少。低浓度乳酸组(8、16 mmol/L)的Ⅰ型胶原量都显著高于对照组,其余组与对照组相比无显著差异。含乳酸组的细胞ALP活性都低于对照组,并且乳酸浓度越高,细胞ALP活性越低。含乳酸组的骨钙素量与对照组之间没有显著差异。随着乳酸浓度增加,含乳酸组细胞所形成的钙结节阳性面积减少,都低于对照组。低浓度乳酸组(8、16 mmol/L)的细胞ALP mRNA表达量都低于对照组。结论聚乳酸降解终产物乳酸可抑制细胞ALP mRNA的表达,降低ALP活性。随着乳酸浓度增加,乳酸抑制作用增强,最终降低细胞的成骨矿化能力。此外,乳酸不会抑制细胞分泌I型胶原和骨钙素。

黄芪甲苷和柚皮苷对成骨样细胞增殖迁移及成骨分化的影响

目的:观察黄芪甲苷和柚皮苷两种中药单体对人成骨样细胞MG-63增殖、迁移和成骨分化的影响。方法:应用CCK-8法观察两种单体对MG-63细胞增殖的影响;应用Transwell小室观察两种中药单体对MG-63细胞迁移的影响;应用茜素红染色法观察两种中药单体对细胞成骨分化的影响,应用Western Blot和qRT-PCR检测两种中药单体对成骨相关标志物I型胶原COL-I和骨钙素BGP mRNA与蛋白表达的影响。结果:黄芪甲苷和柚皮苷均能明显促进MG-63细胞增殖(P<0.01),柚皮苷的作用强于黄芪甲苷(P<0.05);黄芪甲苷和柚皮苷均能促进MG-63细胞的迁移(P<0.01),黄芪甲苷对细胞迁移能力的作用要强于柚皮苷(P<0.01);黄芪甲苷和柚皮苷均具有促进MG-63细胞成骨分化的作用,二者比较未见明显差异;黄芪甲苷和柚皮苷均能提高COL-I的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05),均不影响BGP的表达水平,两种药物比较未见明显差异。结论:本研究中黄芪甲苷与柚皮苷对成骨样细胞增殖迁移和成骨均有促进作用,但柚皮苷促进细胞增殖作用明显,黄芪甲苷促进细胞迁移作用明显,两种药物对细胞成骨分化的影响未见明显差异。

几种生药的提取部位对成骨样细胞的增殖作用

考察了石斛、骨碎补、地骨皮、槲寄生的不同提取部位对成骨样细胞UMR10 6的增殖作用。将 4种生药的水提液、乙醇提取液及其经树脂柱洗脱后的不同提取部位与UMR10 6成骨样细胞共同体外培养 ,用MTT法检测各部位对细胞的增殖作用。结果表明 :除石斛的活性部位在 6 0 %、90 %的醇层外 ,骨碎补、地骨皮、槲寄生的活性部位集中在水层、30 %的醇层。

牛膝中脱皮甾酮的含量测定及促成骨样细胞增殖活性

AIM To study the activity of ecdysterone from Achyranthes bidentata Bl. (AB) promoting proliferation of osteoblast like (OB like) UMR106 cells and to determine its content in AB by HPLC method. METHODS Ecdysterone isolated from AB was cultured with OB like cells UMR106 together in vitro and the proliferation of OB like cells was determined by MTT assay. The chromatographic conditions for determining ecdysterone included an ODS column (250 mm×4 6 mm, 5 μm), a mobile phase consisting of a mixture of water acetontrile tetrahydrofuran (86∶11∶3), detection wavelength of 243 nm, and column temperature of 27℃. Phenacetin was used as the internal standard. RESULTS The ecdysterone from AB had significant activity promoting proliferation of OB like cells, the proliferation was promoted by 41% ( n =3). The average recovery of ecdysterone was 96 2% (RSD=2 1%), the calibration was linear in the range of 30～300 μg·mL -1 (γ=0 9998). CONCLUSION Ecdysterone was screened quickly by cultivating with OB like cells together in vitro . The HPLC method is accurate, fast and reproducible for the determination of ecdysterone in AB.

牛膝提取物对成骨样细胞增殖的作用

考察了牛膝 (AchyranthesbidentataBl.)的不同提取部位对成骨样细胞UMR10 6的作用 .通过牛膝的醇提液及醇提液的不同提取部位和UMR10 6成骨样细胞共同体外培养 ,用MTT方法检测了各部位对细胞增殖的作用 ;同时考察了MTT法的实验条件 .结果表明 :牛膝的醇提液及其石油醚和乙酸乙酯萃取的混和物对细胞具有较强的促进增殖作用 ,而正丁醇层和水层对细胞增殖无影响 ;在MTT法中 ,铺板细胞浓度、检测波长和加入MTT后的孵育时间均影响吸光度值的测定 .

淫羊藿总黄酮对体外培养的人成骨样细胞增殖和骨形成功能的影响

目的 :研究淫羊藿总黄酮对人成骨样细胞增殖和骨形成功能的影响。方法 :以人成骨样细胞OS 732为实验材料 ,进行细胞生长曲线的绘制、MTT测定、形态学观察、碱性磷酸酶 (ALP)测定和染色等。结果 :d3时 ,与对照组相比 ,加药组的细胞数目明显增加 ;d6时加药组的细胞数目仍多于对照组。MTT测定得到了类似的结果。加药后d4 ,加药组与空白对照组相比细胞数目多、形态大而规则 ,染色质深而致密 ,核质比小。ALP染色结果显示 ,加药组细胞ALP颗粒染色明显深于对照组 ,并且ALP颗粒在胞浆中的分布均匀。ALP的定量测定表明加药组ALP水平明显高于对照组。结论 :淫羊藿总黄酮对体外培养的人成骨样细胞OS 732具有促增殖和分化作用 ,并表现出浓度依赖性。

杜仲对成骨样细胞增殖的作用

杜仲的水提液及水提液的不同萃取物和UMR1 0 6成骨样细胞体外共同培养 ,用MTT法检测细胞增殖 ,结果水提液在 0 4mg/ml培养 48小时具有最强的促进细胞增殖作用 ,其乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物对细胞增殖有一定促进作用 ,但无显著性差异 ,而乙酸乙酯和正丁醇萃取后的剩余水层仍保留与原水提液相似的促进细胞增殖作用。表明杜仲中极性大部位可能含有直接作用于成骨细胞的活性成分。

氟化钠对成骨样细胞功能表达影响的研究

目的 探讨氟对成骨样细胞功能表达的影响。方法 用细胞生长曲线和四唑盐比色 (MTT)法测定细胞增殖 ,对硝基苯基磷酸二钠盐比色 (PNPP)法检测碱性磷酸酶 (ALP)活性及放免法测定骨钙素分泌量 ,研究不同浓度 ( 10 -7mol/L～ 10 -3 mol/L)氟化钠 (NaF)对成骨样细胞UMR10 6增殖和分化功能的影响。结果 NaF对UMR10 6细胞增殖及早期分化呈双向调节作用 ,主要表现为低浓度促进 ,高浓度抑制。染氟一定时间后 ,与对照组相比 10 -7mol/L、 10 -6mol/L、 10 -5mol/LNaF组细胞增殖及ALP活性均增加 (P <0 0 5 ) ,而 10 -4mol/L、 10 -3 mol/LNaF组则表现为抑制细胞增殖及ALP活性 (P <0 0 5 )。但是 ,NaF对UMR10 6细胞晚期分化呈单一作用 ,上述不同浓度的NaF均可促进骨钙素分泌 ,与对照组相比有统计学意义 (P <0 0 5 )。而且 ,随NaF浓度升高骨钙素分泌量增加。结论 NaF对成骨样细胞的增殖呈双向调节 ,但对其分化因暴露时间和浓度不同而呈多样性。

地塞米松诱导原代培养的成骨样细胞凋亡的分子细胞学研究

目的 :通过干扰体外培养的成骨样细胞 ,探索糖皮质激素所致成骨样细胞凋亡的分子细胞机制。 方法 :地塞米松诱导原代培养并传代的小鼠成骨样细胞 ,应用噻唑蓝 (MTT)法检测细胞生存能力 ,流式细胞仪检测细胞凋亡 ,比色法检测半胱天冬酶Caspase 3的活性以及EMSA检测核因子KappaB(NF κB)活性。 结果 :地塞米松使成骨样细胞存活数量下降 ,Caspase 3活性升高 ,NF κB活性下降。 结论 :地塞米松对原代未转化的成骨细胞有诱导凋亡的作用 ,并且是Caspase 3依赖性的 ,但NF κB似乎不参与该过程。

流动剪切力作用下原代大鼠成骨样细胞PGE_2的表达

目的 :探讨流动剪切力调节成骨细胞增殖和分化的信号转导过程中PGE2 的作用机制。方法 :对体外培养的大鼠成骨样细胞施加 0 12mN cm2 的流动剪切力 ,采用放射免疫法检测细胞受力 5、10、15、30、6 0、12 0min后不同时段的PGE2 的表达。结果 :大鼠成骨样细胞受到 0 12mN cm2 流动剪切力作用后PGE2 的生成与空白对照组相比明显提高 (P <0 0 1) ,PGE2 的生成在受力后 10min开始显著增加 (P <0 0 1) ,6 0min后达到高峰 (P <0 0 1)。结论 :PGE2 途径是将流动剪切力刺激信号转导进入成骨细胞 ,促进骨改建的信号转导途径之一。

1α，25双羟维生素D_3对成骨样细胞增殖与分化的影响

采用同位素掺入，细胞周期、细胞化学和扫描电镜等方法观察了１α，２５双羟维生素Ｄ３［１，２５（ＯＨ）２Ｄ３］对人及大鼠成骨样细胞ＯＳ－７３２和ＲＯＳ１７／２．８增殖及分化的影响。结果表明：１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对ＯＳ－７３２细胞增殖的抑制作用呈明显的时效和量效关系。在给１０－７ｍｏｌ／Ｌ的１，２５（ＯＨ）２Ｄ３后第４和第６天，对ＯＳ－７３２细胞生长的抑制率分别为４０％和６０％；对ＤＮＡ，ＲＮＡ和蛋白质合成的抑制作用分别为５９％，４１％和２２％。流式细胞计测定结果表明：１，２５（ＯＨ）２Ｄ３使ＤＮＡ合成受阻；扫描电镜显示：１，２５（ＯＨ）２Ｄ３有抑制ＲＯＳ１７／２．８细胞表面微绒毛的作用。此外，细胞化学染色表明：该激素有增加成骨样细胞碱性磷酸酶活性和促进骨形态形成蛋白合成的作用，即刺激骨形成的作用。

不同流动剪切力调节大鼠成骨样细胞增殖的体外研究

目的 从细胞水平探索机械应力刺激调节骨改建的机制 ,并探讨促进骨改建的最适生理应力值。方法 对体外培养的大鼠成骨样细胞施加一系列不同大小的流动剪切力 ,利用流式细胞技术衡量其细胞的分裂增殖能力。结果 大鼠成骨样细胞受到流动剪切力后 ,细胞与流动方向一致的长轴被拉长 ,细胞沿流动方向排列。随着剪切力的增加 ,成骨样细胞的增殖指数 (PI)不断增加 ,当剪切力为 12 dyn/cm2 时 ,PI值与对照组相比有显著性差异 (P<0 .0 5 )。随剪切力的继续增加 ,PI值开始下降 ,当剪切力大于 14dyn/cm2 时 ,PI值与对照组相比显著下降 (P <0 .0 1)。结论 机械应力对骨改建的调节作用与成骨细胞受到应力诱导产生的流动剪切力的刺激有关 ,低剪切力对细胞的增殖影响不大 ,中等大小的剪切力 (12 dyn/cm2 )明显刺激细胞的增殖 ,高剪切力将抑制细胞的增殖。

染料木素促成骨样细胞增殖作用及其机制研究

目的观察染料木素(genistein)对成骨样细胞MC3T3-E1细胞增殖及骨形成蛋白-2(BMP-2)、β-连环素(β-catenin)表达的影响。方法培养成骨样细胞MC3T3-E1,加入不同浓度的染料木素(1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6和1×10-5mol·L-1),以1×10-9mol·L-1雌激素(β-estradiol,E2)作为阳性对照组,采用MTT比色试验法和碱性磷酸酶(ALP)活性检测法,观察染料木素作用后MC3T3-E1的增殖及分化情况,以Westernblot方法检测成骨样细胞中BMP-2和β-catenin蛋白的表达。结果染料木素可促进MC3T3-E1细胞增殖,染料木素作用后细胞的ALP值也明显升高,呈浓度依赖性;染料木素可增加BMP-2和β-catenin表达,且呈浓度依赖性。结论染料木素促进MC3T3-E1细胞增殖与分化,可通过调节BMP-2和Wnt/β-catenin信号通路而影响成骨样细胞的活性。

青娥丸提取物对成骨样细胞UMR106增殖分化作用的研究

目的 :研究青娥丸提取物对成骨样细胞UMR10 6增殖分化的作用 ,筛选青娥丸防治骨质疏松的有效部位。方法 :利用MTT法和对硝基磷酸盐法 ,考察青娥丸不同提取液对UMR10 6的增殖和分化作用。结果 :青娥丸乙醇提取物在 4.8× 10 -4mg/ml和 4.8× 10 -3 mg/ml浓度时 ,有最强的促细胞增殖和分化的活性 ,萃取后的各个部分均有显著地促细胞增殖作用 ,而只有乙酸乙酯层具有显著的促细胞分化作用。结论 :青娥丸乙醇提取物具有显著促细胞增殖和分化的活性 ,乙酸乙酯层是青娥丸促细胞增殖和分化的主要活性部位。

阿仑膦酸钠对人成骨样细胞增殖和分化的影响

目的 :研究阿仑膦酸钠对人成骨样细胞增殖和分化的影响。方法 :进行OS 732人成骨样细胞生长曲线的绘制、MTT测定、形态学观察、碱性磷酸酶 (ALP)测定、ALP染色等。结果 :①d3时 ,与对照组相比 ,10 - 6 mol·L- 1 浓度组的细胞数目增加 2 2 .6 % ;而 10 - 5mol·L- 1 浓度组的细胞数目明显低于对照组。d 6时 10 - 6 ,10 - 7,10 - 8mol·L- 1 三种浓度组细胞数目比对照组分别增加 2 4 .7% ,2 4 .7%和 31.0 %。 10 - 5mol·L- 1 浓度组的细胞数目仍明显低于对照组。MTT测定得到了类似的结果。②加药后d4 ,10 - 6 ,10 - 7,10 - 8mol·L- 1 三种浓度组的细胞与空白对照组相比细胞数目多、形态大而规则 ,染色质深而致密 ,核质比小。③ALP染色结果显示 ,10 - 6 ,10 - 7mol·L- 1 浓度组细胞ALP颗粒染色明显深于对照组 ,并且ALP颗粒在胞质中分布均匀。ALP的定量测定结果表明 ,10 - 6 ,10 - 8mol·L- 1 浓度组细胞ALP水平明显高于对照组。结论 :阿仑膦酸钠对体外培养的OS 732人成骨样细胞具有促增殖和分化作用 ,并且这种作用具有最适合的浓度。

成骨样细胞体外培养法筛选杜仲叶防治骨质疏松症的药效成份

目的 探讨杜仲叶提取成份对体外培养的成骨样细胞代谢功能的影响,筛选杜仲叶防治骨质疏松的药效成份。方法 从杜仲叶提取分离出4个化合物,以不同浓度(10-4g/L、10-6g/L、10-8g/L)加入体外培养的MG-63成骨细胞株中,并设空白组和对照组。培养4 d后,MTT比色法测定细胞增殖,对硝基磷酸盐法测定培养基中ALP活性。结果 细胞增殖数量与对照组比较,成份I 10-6g/L浓度组、Ⅱ、Ⅲ10-8g/L浓度组和成份Ⅳ10-4g/L、Ⅲ10-8g/L浓度组显著提高(P<0.05);成份Ⅱ、Ⅲ的10-4g/L、10-6g/L浓度组和成份Ⅳ10-6g/L浓度组极显著提高(P<0.01)。ALP活性与对照组比较,成份I 10-6g/L浓度组、成份Ⅱ10-4g/L、10-8g/L浓度组、成份Ⅲ10-8g/L浓度组和成份Ⅳ的10-4g/L、10-8g/L浓度组有显著性增强;成份Ⅱ10-6g/L浓度组和成份Ⅲ的10-4g/L、10-6g/L浓度组均极显著增强(P<0.01)。结论 4个成份均有一定的促进成骨细胞增殖、调节成骨细胞代谢的作用,以Ⅱ和Ⅲ效果明显。

生长因子网络调节对骨形成作用的研究Ⅰ.TGF-β对人胚成骨样细胞增殖及分化的影响

在对人胚成骨样细胞分离培养的基础上，进一步探讨不同剂量转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）对人胚成骨样细胞ＤＮＡ、胶原蛋白和碱性磷酸酶合成的影响。结果表明：ＴＧＦ－β对体外培养的人胚成骨样细胞ＤＮＡ合成有抑制作用，对胶原蛋白和碱性磷酸酶合成有促进作用。这两方面的作用在ＴＧＦ－β０．０１～１ｎｇ／ｍｌ间呈剂量依赖性，１ｎｇ／ｍｌ时的作用达到最强。本研究提示ＴＧＦ－β在骨形成中的主要作用可能在于介导机体系统因素对骨细胞的作用。

TGF-β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用

目的 :探讨TGF β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨作用。方法 :显微相差动态观察、细胞增殖计数、ALP活性测定及骨结节计数观察TGF β体外成骨作用。结果 :TGF β对该细胞的增殖 ,低剂量有促进作用 ,高剂量有抑制作用。TGF β(在 3～ 7d)对ALP活性有促进作用 ,并呈一定的时效和量效关系。TGF β低剂量对骨结节形成有促进作用 ,高剂量时为强有力的抑制作用 ,与剂量有相关关系。结论 :TGF β对胎兔颅骨成骨样细胞体外成骨表现为双相作用。

张力对成骨样细胞PGE_2表达的影响

目的:探讨不同应变强度的机械张力刺激对体外培养的成骨样细胞PGE2表达的影响。方法:采用四点弯曲细胞力学加载仪对人成骨样细胞MG 63分别以 1 000、2 000、3 000、4 000、6 000、8 000μstrain的力学应变强度进行张力刺激,采用放射免疫法对受不同强度张力作用后成骨样细胞PGE2 的表达分别进行检测并相互比较。结果:成骨样细胞MG 63在受到强度为 1 000μstrain的张力刺激后,其PGE2 的生成量略降低但与对照组无显著性差别,随着张力强度的增加,其PGE2 的生成量显著升高。结论:不同强度的机械张力刺激能够不同程度的增强成骨样细胞PGE2 的表达,PGE2 信号转导途径是将力学刺激信号转入成骨细胞并促进成骨样细胞增殖的重要信号转导途径。

17β-雌二醇对人成骨样细胞OS-732增殖和分化的影响

采用绘制生长曲线３Ｈ－ＴＤＲ掺入、ＡＬＰ、ＢＧＰ的定量测定、免疫组化、原位杂交等和光镜等方法，探讨了１７β－雌二醇对ＯＳ－７３２细胞增殖和分化的影响及对骨粘连蛋白（ＯＮ）ｍＲＮＡ表达的影响。结果显示：１７β－雌二醇以剂量依赖性促进ＯＳ－７３２细胞的增殖，其中以１０－８ｍｏｌ／Ｌ浓度作用最强；１７β－雌二醇可以轻度降低ＡＬＰ的活性和ＢＧＰ的分泌，对ＯＳ－７３２细胞分化有轻微抑制作用。免疫组化实验结果表明ＯＳ－７３２细胞上存在ＥＲ受体，且给药后核内ＥＲ增多，为雌激素直接作用于成骨样细胞提供了一个例证。原位杂交结果表明ＯＳ－７３２上存在（ＯＮ）ｍＲＮＡ的表达，而给药后无明显变化。