扁柏双黄酮对肝细胞癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的研究扁柏双黄酮(HF)对肝细胞癌HepG2细胞增殖、凋亡及其作用机制的影响。方法CCK8法检测0、10、20、40、60、80、100、120μmol·L^(-1)浓度梯度的HF对肝细胞癌HepG2细胞活性的影响;平板克隆检测HF对肝细胞癌HepG2细胞增殖的影响;用DAPI染色和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测HF对肝细胞癌HepG2细胞凋亡的影响;荧光探针DCFH-DA流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平;蛋白质印迹检测凋亡相关的蛋白表达水平。结果不同浓度的HF作用于HepG2细胞后,细胞活性随着HF浓度的增加显著降低(P <0.01),并且24 h和48 h的半数抑制浓度(IC50)值分别是(59.77±2.57)μmol·L^(-1)、(48.96±4.187)μmol·L^(-1);DAPI染色显示HF可导致HepG2细胞收缩,核碎裂和染色质凝聚,出现凋亡小体;流式细胞术检测结果显示HepG2细胞早期和晚期凋亡率均随HF浓度的升高而依次升高(P <0.05);进一步的研究表明,HF处理HepG2后,显著增加细胞内ROS水平(P<0.01),并且细胞凋亡通路相关蛋白cleaved-PARP、cleaved-Caspase 3的表达也明显增加(P <0.001)。结论 HF可通过ROS/Caspase信号通路抑制HepG2细胞增殖,促进其凋亡。

HPLC法测定卷柏类药材中双黄酮成分的含量

目的:建立测定卷柏类药材中双黄酮成分的高效液相色谱方法。方法:色谱柱:Elite-ODS(5 μm,150 mm×4.6mm);流动相:甲醇-0.050 mol·L^(-1)磷酸二氢钠溶液系统,梯度洗脱,0→6 min,甲醇52.5％→70.0％;柱温:40℃;流速:1.5 mL·min^(-1),检测波长:330 nm。结果:穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮、银杏双黄酮加样回收率分别为97.05％,98.45％,96 88％(RSD=2.1％,2.8％,2.3％,n=3)。卷柏类药材均含有穗花杉双黄酮,但含量差异较大;另2种双黄酮成分在卷柏类药材中的分布与含量同样存在差异。结论:本法快捷、灵敏、准确,可作为评价卷柏类药材的参考依据。

不同产地石上柏中3种双黄酮含量测定

目的：建立HPLC-DAD法同时测定石上柏中穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮、银杏双黄酮的含量。方法：色谱柱：DikmaDiamons C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm）;流动相：乙腈-0.1%甲酸水,梯度洗脱;检测波长：330 nm;柱温：25℃;流速：0.6 mL/min;进样量：10μL。结果：3种双黄酮在上述色谱条件下分离度良好,穗花杉双黄酮的线性范围为0.68～4.08 mg/mL,标准曲线为Y=5293X-2881.8（R2=0.9995）;扁柏双黄酮的线性范围为0.45～2.69 mg/mL,标准曲线为Y=1052.1X-242.58（R2=0.9996）;银杏双黄酮的线性范围为0.70～4.13 mg/mL,标准曲线为Y=1513X-1441.6（R2=0.9995）。方法学考察,精密度、稳定性RSD〈2.0%,穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮和银杏双黄酮的平均加样回收率分别为99.03%、97.65%、93.16%,（RSD〈3.0%）。10个产地石上柏中穗花杉双黄酮的含量在0.232%～0.309%,扁柏双黄酮的含量在0.040%～0.137%,银杏双黄酮的含量在0.043%～0.074%。结论：不同产地石上柏的3种双黄酮化合物的含量有一定的差异,可能与不同地域,不同采收时间以及不同的加工方法有关。该方法操作简便,测定准确,可用于中药石上柏的质量分析。

HPLC法同时测定侧柏叶中杨梅苷等4种黄酮的含量

目的建立同时测定侧柏叶中杨梅苷、槲皮苷、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮含量的方法，为侧柏叶的质量控制和开发利用提供依据。方法采用HPLC法。色谱柱为WatersODSC18柱（150mm×4．6mm,5μm），流动相为甲醇-体积分数为0．5％乙酸溶液，梯度洗脱，流速为0．8mL·min-1，检测波长为340nm，柱温为室温。结果杨梅苷、槲皮苷、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮质量浓度分别在61．2-122．4mg·L-1（r=0．9998）、10．56—211．2mg·L-1（r=0．9998）、2．85～57．0mg·L-1（r=0．9999）和7．54—150．8mg·L-1（r=0．9998）内与峰面积呈良好的线性关系；平均加样回收率分别为97．0％（RSD=2．5％）、97．1％（RSD=2．3％）、96．8％（RSD=2．1％）和97．4％（RSD=3．4％）。结论此法操作简便、快速、灵敏、准确，样品处理简便易行，适于侧柏叶的质量控制。

五灵脂中两个黄酮成分的提取分离与薄层色谱鉴别

目的:建立五灵脂的薄层色谱鉴别方法,为五灵脂的质量控制提供依据。方法:以从五灵脂中分离得到的指标性成分扁柏双黄酮和穗花杉双黄酮为对照品,五灵脂对照药材为对照,聚酰胺薄膜为吸附剂,二氯甲烷-甲醇-冰醋酸(5∶2∶0.1)为展开剂,进行薄层色谱鉴别。结果:首次从五灵脂中分离得到扁柏双黄酮和穗花杉双黄酮,建立的五灵脂薄层鉴别方法准确、快速,能有效应用于五灵脂的鉴别。结论:该结果可为五灵脂药材的质量控制提供依据。

一测多评法测定蒙药材刺柏叶中4种黄酮的含量

目的:建立测定蒙药材刺柏叶中4种黄酮含量的一测多评法。方法:采用高效液相色谱法,以穗花杉双黄酮为内标物,建立其与槲皮苷、竹柏双黄酮A、扁柏双黄酮的相对校正因子,通过校正因子计算槲皮苷、竹柏双黄酮A、扁柏双黄酮的含量,并与外标法计算值进行比较。结果:一测多评法和外标法的计算值基本一致,相对误差均小于1.08%。结论:一测多评法用于刺柏叶中4种黄酮的含量测定是可行的。

HPLC法同时测定中药五灵脂中3种成分的含量

目的建立同时测定五灵脂中原儿茶酸、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮含量的方法,为五灵脂的质量控制和开发利用提供依据。方法采用HPLC法,色谱柱：Diamonsil ODS C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相：乙腈（A）-体积分数为0.5%的冰醋酸溶液（B）,梯度洗脱程序：0-15 min：85%-65%（B）、15-35 min：65%-40%（B）、35-40 min：40%-25%（B）、40-60 min：25%-10%（B）、60-65 min：10%-0%（B）,流速：0.8 mL.min-1,检测波长：265 nm,柱温：室温。结果原儿茶酸、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮其质量分别在0.0496-0.4960（r=0.9998）、0.1260-1.2600（r=0.9999）和0.0985-0.9850μg（r=0.9996）内与其峰面积呈良好线性关系,平均回收率分别为100.4%、99.7%和101.2%,RSD分别为2.3%、2.1%和2.0%。结论所建立的方法可用于五灵脂的质量控制。

新疆圆柏化学成分研究

从新疆圆柏枝叶中分离得到9个化合物,经理化性质和光谱解析分别为扁柏双黄酮(hinokiflavone,1)、芹菜甙元(apigenin,2)、鬼臼毒素(podophyllotoxin,3)、苦松甙(coniferin,4)、肉豆蔻酸丙酯(propionic acetate myristic acid,5)、β-谷甾醇(β-sitosterol,6)、圆柏醇(sabinal,7)、反式璎珞酸(trans-communic acid,8)、蔗糖(sucrose,9),其中化合物1～4为首次从该植物中提取分离得到.

翠云草中双黄酮类成分研究

目的研究翠云草中的双黄酮类成分。方法利用Sephadex LH-20、硅胶等色谱技术进行分离纯化,用UV,IR,NMR,MS等方法确定结构。结果分离得到5个双黄酮化合物,分别鉴定为穗花杉双黄酮(Amentoflavone,Ⅰ)、罗波斯塔双黄酮(Robustaflav-dimethyl ether,Ⅲ)、2″,3″-二氢-4′-甲氧基穗花杉双黄酮(2″,3″-dihydro-4′-O-methyl Amentoflavone,Ⅳ)、7″-甲氧基-2,3,2″,3″-四氢扁柏双黄酮(7″-O-methyl-2,3,2″,3″-tetrahydrohinokiflavone,Ⅴ)。结论化合物Ⅱ,Ⅲ为首次从该植物中分离得到,化合物Ⅳ,Ⅴ为新化合物。

鸡毛松化学成分的研究(Ⅱ)

从鸡毛松枝叶中分得５个化合物，２″Ｏ鼠李糖牡荆黄甙（Ⅰ），扁柏双黄酮（Ⅱ），蜕皮甾酮（Ⅲ），β谷甾醇十七碳酸酯（Ⅳ）和胡萝卜甙（ｄａｕｃｏｓｔｅｒｏｌ，Ⅴ）。其中Ⅰ～Ⅳ为首次从该种植物中得到。

旱生卷柏化学成分的研究(Ⅰ)

目的 研究旱生卷柏的化学成分。方法 旱生卷柏的乙醇提取物 ,经水混悬后的不溶物的醋酸乙酯提取部位 ,用硅胶柱色谱、薄层色谱制备以及 Sephadex L H- 2 0柱色谱分离纯化 ,得到 4种化学成分。结果 经理化测试和光谱分析确定了化学结构 ,分别是 :大黄素、银杏双黄酮、扁柏双黄酮、穗花杉双黄酮。结论 这些化合物均为首次从该植物中分得 ,大黄素系首次从卷柏科中分离得到。

侧柏叶炮制前后成分的对比

目的建立HPLC法测定侧柏叶及其炮制品中杨梅苷、槲皮苷、杨梅素、槲皮素、山柰酚、穗花杉双黄酮及扁柏双黄酮的含量,对比侧柏叶炮制前后7种成分的含量变化。方法采用药典法进行炮制。色谱柱为Welch Ultimate LP-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.2%磷酸水梯度洗脱,检测波长为330 nm,流速1 m L/min。结果杨梅苷、槲皮苷、杨梅素、槲皮素、山柰酚、穗花杉双黄酮及扁柏双黄酮的标准曲线呈良好的线性关系（r≥0.999 5）,各组分平均回收率在97.6%~101.1%之间,RSD≤1.14%（n=6）。炮制后,杨梅苷、槲皮苷、穗花杉双黄酮及扁柏双黄酮含量降低,而杨梅素、槲皮素及山柰酚含量相对升高。结论所建立的HPLC法简便易行,可用于侧柏叶、侧柏炭的含量测定。侧柏叶炮制前后成分种类和量的改变,表明其炮制过程存在着成分转化过程。

HPLC法同时测定侧柏叶、侧柏炭中的7种成分

目的建立HPLC法同时测定侧柏叶、侧柏炭中杨梅苷、槲皮苷、杨梅素、槲皮素、山柰酚、穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮的含有量。方法侧柏叶、侧柏炭提取液的分析采用Welch Ultimate LP-C_（18）色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱;检测波长330 nm;体积流量1 m L/min。结果杨梅苷、槲皮苷、杨梅素、槲皮素、山柰酚、穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮的标准曲线均呈良好的线性关系（r〉0.999 5）,平均回收率为97.6%-101.1%,RSD〈1.14%（n=6）。结论该方法简便易行,可用于侧柏叶、侧柏炭的含有量测定。

中华卷柏药用活性成分的分布特征

【目的】阐明我国特有植物中华卷柏中药用活性成分在不同产地、不同生育期及各器官中的分布特征。【方法】以产自太行山系(小五台山、梁沟山区、摩天岭、狮子峰和万仙山)的5种野生中华卷柏(Selaginella sinensis)为材料,于2011年7月和10月,分别采集营养叶期和孢子叶期的样品,采用HPLC法测定并分析不同生长发育期、不同产地中华卷柏中穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮的组织部位分布差异及分配比。【结果】5个产地的中华卷柏中均含有穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮,但二者的含量及分布规律不同。穗花杉双黄酮含量均高于扁柏双黄酮,且以梁沟山区中华卷柏全株中的穗花杉双黄酮含量最高,为5.498(7月)和6.624(10月)mg/g;而扁柏双黄酮含量在小五台山(7月)和梁沟山区(10月)的中华卷柏中最高,分别为1.261和1.797mg/g。在不同的生长发育期,穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮含量也有变化,随着中华卷柏孢子叶的形成(10月),穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮含量均有所提高。在中华卷柏的各组织部位中,2种双黄酮的分布规律比较一致,均以营养叶中最高,茎次之,根最低。在孢子叶中2种物质的含量均表现为空孢子穗>小孢子>大孢子;且空孢子穗和小孢子中穗花杉双黄酮的含量显著高于扁柏双黄酮,分别是扁柏双黄酮的4.10倍和2.40倍;而大孢子中的穗花杉双黄酮含量却明显低于扁柏双黄酮,不到扁柏双黄酮的1/3。穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮在中华卷柏的分配比均为根最低。【结论】产地和发育期不同的中华卷柏中穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮的分布存在部位差异。此外,中华卷柏的孢子叶中也有双黄酮存在,且在空孢子穗中的含量较高,可以用作进一步开发利用的植物资源。

侧柏叶炮制机制初探

目的:建立高效液相色谱法,以杨梅苷、槲皮苷、杨梅素、槲皮素、山柰酚、穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮为指标对侧柏叶和炮制品进行HPLC含量测定,对比侧柏叶炮制前后成分的变化。方法:采用烘法、炒法、炒法进行炮制。含测条件,色谱柱为Welch Ultimate LP-C_18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸水梯度洗脱,检测波长为330 nm,流速为1 ml·min^-1,柱温为35℃;进样量为20μl。结果:杨梅苷、槲皮苷、杨梅素、槲皮素、山柰酚、穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮的标准曲线呈良好的线性关系(r≥0.999 0)平均回收率为97.6%~101.1%,RSD≤1.14%(n=6)。侧柏叶中杨梅苷、槲皮苷、穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮经炮制后含量均降低,而杨梅素、槲皮素、山柰酚的含量相对升高。结论:所建立的HPLC法简便易行,可用于侧柏叶和炮制品的含量测定。含测结果表明,炮制过程存在成分转化过程。

多种药用裸子植物中双黄酮的定量测定

目的用HPLC法同时测定多种药用裸子植物中穗花衫双黄酮、扁柏双黄酮及银杏双黄酮的量。方法采用Hanbon Lichrospher C18（150 mm×4.6 mm,5μm）柱,甲醇-0.1%甲酸水梯度洗脱,检测波长337 nm,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃。结果所测样品中双黄酮类成分的量差异大,其中,穗花杉双黄酮的量在0.08~4.61mg/g;扁柏双黄酮的量在0.03~4.68 mg/g;银杏双黄酮的量在0.10~3.03 mg/g。穗花杉双黄酮在所测样品中存在比较普遍,而银杏双黄酮则相对较少。此方法加样回收率和线性范围均符合要求。结论本方法结果准确、灵敏度高、重现性好,可作为部分药用裸子植物中双黄酮类成分的质量控制定量方法。

本是同根生 功效各不同(12)

柏子仁与侧柏叶柏子仁与侧柏叶均来源于柏科植物侧柏,种仁称柏子仁,嫩枝与叶称为侧柏叶。柏子仁又名柏实、侧柏子,为柏科植物侧柏的种仁,始载于汉朝的《神农本草经》,被列为上品。其性平,味甘,主要含有脂肪油、挥发油、皂苷等成分,具有养心安神,润肠通便,敛汗生津之功效,用于治疗惊悸失眠、健忘、遗精、盗汗、便秘等症。《神农本草经》称其：＂主惊悸、安五脏、益气、除湿痹。久服令人润泽、美色、耳目聪明,不饥不老、累身延年。＂

藏药圆柏HPLC指纹图谱的建立及不同品种模式识别研究

目的 建立圆柏药材HPLC化学指纹图谱,并比较不同基原品种的差异。方法 采用HPLC法,色谱柱为WondaSil?C18-WR(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长为270 nm。对49批圆柏药材进行指纹图谱构建,采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件(2012年130723版)进行相似度评价,运用主成分分析(principalcomponentanalysis,PCA)、偏最小二乘法判别分析(partialleastsquares discriminant analysis,PLS-DA)和方差分析研究圆柏5个主流品种的化学成分差异。结果 建立了圆柏HPLC指纹图谱,标定15个共有色谱峰,相似度0.648~0.975,仅有26批相似度大于0.9。鉴定4个峰为槲皮苷、穗花衫双黄酮、罗汉松双黄酮A和扁柏双黄酮。圆柏5个品种之间的化学成分存在差异,并发现7个种间显著差异成分。结论 建立的化学指纹图谱稳定可靠,可为其质量控制及评价提供参考。