猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制分子Ts-serpin-2对人THP-1细胞炎性细胞因子的表达影响

为了深入研究猪带绦虫丝氨酸蛋白酶抑制分子(Ts-serpin-2)对THP-1细胞炎性细胞因子分泌的调节作用,本实验通过RTPCR从猪带绦虫成虫扩增获得Ts-serpin-2(TsM_000807300)的编码序列CDS,利用毕赤酵母表达Ts-serpin-2重组蛋白。利用发色底物特异性反应检测Ts-serpin-2蛋白对猪胰蛋白酶、胰弹性蛋白酶、牛α-糜蛋白酶、猪胃蛋白酶、木瓜酶、凝血酶和组织蛋白酶G的抑制效果。重组蛋白Ts-serpin-2处理THP-1细胞24 h,应用qRT-PCR和ELISA方法检测各炎性细胞因子差异表达水平。结果显示,真核酵母表达的重组蛋白Ts-serpin-2分子量约为48 kDa,具有蛋白酶抑制活性,对牛α-糜蛋白酶、猪胰弹性蛋白酶及猪胰蛋白酶的活性均有明显的抑制作用。重组蛋白Ts-serpin-2可抑制LPS活化的THP-1细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-12α、IFN-γ和iNOS2 mRNA的转录水平,促进IL-4刺激的THP-1细胞抗炎性细胞因子IL-10的表达。ELISA结果显示,Ts-serpin-2能够抑制巨噬细胞分泌致炎因子TNF-α、IL-6和IFN-γ,刺激IL-10的分泌,与qRT-PCR检测结果基本一致。上述研究结果表明猪带绦虫Ts-serpin-2可通过调节宿主巨噬细胞分泌的炎性因子影响虫体入侵过程中宿主的免疫应答。

外周血T淋巴细胞亚群及T细胞表面共抑制分子表达水平对PD-1/ PD-L1抑制剂联合化疗治疗NSCLC疗效的预测效能分析

目的 探讨外周血T淋巴细胞亚群及T细胞表面共抑制分子表达水平对程序性死亡因子1(PD-1)/程序性死亡因子配体1(PD-L1)抑制剂联合化疗治疗非小细胞肺癌(NSCLC)疗效的预测效能。方法 选取该院2019年5月至2021年4月行PD-1/PD-L1抑制剂联合化疗治疗的NSCLC患者48例,依据治疗4个周期后的效果分为缓解组(n=22)和未缓解组(n=26)。比较两组一般资料及治疗前、治疗4个周期后外周血T淋巴细胞亚群及T细胞表面共抑制分子(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、PD-1)、肿瘤标志物[糖类抗原125(CA125)、癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)]水平,分析NSCLC患者外周血T淋巴细胞亚群及T细胞表面共抑制分子与肿瘤标志物的相关性及NSCLC患者疗效影响因素,评价外周血各指标对治疗NSCLC疗效的预测价值。结果 两组治疗4个周期后外周血CD3^(+)、CD4^(+)水平均较本组治疗前提高,且缓解组高于未缓解组,外周血CD8^(+)、PD-1、血清CA125、CEA、CYFRA21-1水平均较本组治疗前降低,且缓解组低于未缓解组,差异有统计学意义(P<0.05)。NSCLC患者治疗4个周期后外周血CD3^(+)、CD4^(+)与血清CA125、CEA、CYFRA21-1水平呈负相关,外周血CD8^(+)、PD-1与血清CA125、CEA、CYFRA21-1水平呈正相关(P<0.05)。建立Logistic预测评估模型,获取联合检测预测未缓解的曲线下面积为0.938,预测灵敏度为80.00%,特异度为90.91%。结论 PD-1/PD-L1抑制剂联合化疗治疗NSCLC后外周血T淋巴细胞亚群及T细胞表面共抑制分子表达水平可出现显著变化,且其表达水平与肿瘤恶性程度有关,对预测疗效具有较高价值。

参与卵巢癌免疫逃逸的免疫抑制分子研究进展

转化生长因子β(TGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素10(IL-10)、环氧合酶(COX)、前列腺素(PG)E2等是卵巢癌细胞分泌的主要免疫抑制分子。这些分子可通过抑制抗原提呈细胞(APC)有效提呈肿瘤抗原,阻断T细胞、自然杀伤(NK)细胞和巨噬细胞等的抗瘤活性,促进肿瘤新生血管生成等机制,使肿瘤细胞得以逃避机体免疫监视而增殖和转移。这些免疫抑制分子在卵巢癌组织中的表达及其在患者体内的含量变化可望成为辅助疗效判断、观察预后的临床检测指标,为临床最佳治疗方案的选择提供理论依据,并可作为开发抗瘤药物的新靶点,为卵巢癌的生物治疗提供新思路。

人BLyS免疫抑制分子的克隆、表达及纯化

目的用异源性T辅助细胞表位修饰人可溶性BLyS突变体(msBLyS),构建和表达BLyS的新型免疫抑制分子。方法经PCR方法构建msBLyScDNA,然后分别与鸡卵清溶菌酶(HEL)或卵清蛋白(OVA)Th表位DNA序列重组,行序列测定后,构建于高效原核表达载体pQE-80L并转化E.coliDH5α,经IPTG诱导表达,Ni-NTA层析纯化后,通过细胞增殖实验检测融合蛋白的生物学活性。结果DNA测序表明,重组HELmsBLyS和OVAmsBLyS的DNA序列与文献报道的序列完全一致。HELms-BLyS和OVAmsBLyS在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达。经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白的纯度可达90%以上。活性检测发现,重组蛋白均不能促进Raji细胞增殖。结论成功构建了BLyS的免疫抑制分子,并获得了高效表达及纯化,纯化产物已丧失了sBLyS所具有的细胞增殖活性,为进一步探讨其治疗作用打下了基础。

共抑制分子在脓毒症中的作用研究进展

根据Kevin Lafferty提出的关于T细胞激活的双信号假说， T细胞的激活不仅需要MHC-肽-TCR提供的第一信号，而且需要细胞膜上的共信号分子所传递的第二信号。其中共刺激分子传递正性信号促进T细胞的活化，而共抑制分子将传递负性信号引发T细胞的无应答、耐受或细胞凋亡。近年研究发现，共抑制分子如程序性死亡因子（ PD-1）、细胞毒性T淋巴细胞抗原-4（ CTLA-4／CD152）及B／T淋巴细胞弱化因子（ BTLA ）等在自身免疫性疾病、肿瘤、慢性感染等多种疾病中发挥作用。

脊髓损伤后髓磷脂抑制分子及作用机制的研究进展

脊髓损伤(SCI)常导致损伤平面以下运动、感觉以及括约肌永久性功能障碍。尽管国内外学者对此进行了不懈的探索,但是如何治愈SCI迄今仍是一全球性的医学难题。脊髓损伤后轴突不能再生的主要原因包括髓磷脂相关抑制分子的存在、含抑制分子的胶质瘢痕形成、硫酸软骨素蛋白多糖等。其中,髓磷脂相关神经生长抑制因子对中枢神经再生抑制起着关键作用,其相关抑制因子主要包括三种髓磷脂源性生长抑制蛋白:髓磷脂相关糖蛋白、少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白、Nogo-A。所有这些生长抑制因子都结合共同抑制蛋白受体—Nogo-66(NgR)受体复合体,激活远端的Rho信号途径。激活Rho与其下游的效应器蛋白-Rho蛋白激酶Ⅱ(ROCKⅡ),激活的ROCKⅡ作用于多种蛋白质底物而产生级联瀑布信号传递,调节生长锥内细胞骨架的重组,改变神经的生长方向,影响肌球蛋白的收缩等,引起轴突生长锥的回缩及塌陷,介导脊髓损伤后轴突的再生抑制。本文简要综述SCI后几类髓磷脂相关抑制分子及其通过Rho-ROCKⅡ信号途径传递及机制的研究进展。

原发性胆汁性肝硬化外周血Toll样受体和细胞因子信号转导抑制分子mRNA水平的表达及意义

目的探讨cytokine-TLR-SOCS通路在原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)发病机制中的作用。方法研究对象分为3组:32例PBC,30例慢性乙肝(chronic hepatitis B,CHB)和32例健康人(healthy controls,HC)。ELISA测定血清IL-6和IFNγ的变化,RT-PCR测定外周血单个核细胞的TLR和SOCS的表达。结果与HC组相比,PBC组的IL-6和IFNγ水平显著升高;PBC组的TLR4、TLR9、SOCS1和SOCS3 mRNA的水平均显著性高于HC,为HC组的1.48、2.51、3.43和1.48倍,TLR9和SOCS1的mRNA水平是CHB组的6.85倍和2.99倍(P<0.05)。结论 PBC患者处于炎性状态;TLR的过度激活可能与PBC的发生和发展有一定关系,SOCS作为通路的负调控蛋白可作为疾病免疫治疗的靶点。

mTOR抑制分子在肿瘤治疗中的作用

真核细胞对细胞外刺激产生应答,从静止期进入分裂期,是一个多步骤的过程.这一过程需要传导增殖信号,并合成、激活多种细胞内蛋白.在肿瘤细胞中由于改变了这一精密过程,造成细胞异常增生.

细胞因子信号转导抑制分子与肾脏疾病

肾脏疾病的病因及发病机制较为复杂,免疫功能紊乱、感染、炎症信号通路等共同参与其发生、发展过程。近年来研究发现,JAK/STAT途径是人体内生理和病理反应的共同通路之一,与多种肾脏疾病的发病密切相关。而细胞因子信号转导抑制分子（suppressors of cytokine signaling,SOCS）主要通过JAK/STAT信号转导通路的负性调节作用而抑制细胞因子信号转导,从而参与机体多种生理与病理的发生、发展过程。

T细胞协同抑制分子研究追踪及临床应用前景

T细胞活化需要双信号:T细胞抗原受体(T cell antigen receptor,TCR)识别由抗原提呈细胞(antigen-presenting cell,APC)通过MHC分子提呈的抗原肽形成第一信号,T细胞与APC表面的协同刺激分子(co-stimulatory molecule)相互作用形成第二信号(协同刺激信号)。T细胞活化后,出现协同抑制分子(co-inhibitory molecule)的表达或上调,负性调节T细胞的功能。协同刺激分子和协同抑制分子来源于两个家族———B7:CD28家族和TNF:TNFR家族,它们在适当的时间和部位表达,为T细胞提供正性信号和负性信号,调控T细胞的活化、增殖、分化和功能成熟。协同抑制分子在T细胞的动态平衡中起重要的作用。在移植排斥反应和自身免疫性疾病中,T细胞向着过度活化方向发展,如果能够通过诱导协同抑制分子过表达加强抑制作用,将可能在新的高度,重新建立平衡关系;反之,在肿瘤、持续性病毒感染等疾病中,T细胞的功能可能被肿瘤或病毒感染细胞表达的协同抑制分子所抑制,通过阻断抑制信号,将有利于肿瘤的治疗。因此,以协同抑制分子为靶,为上述疾病的治疗提供了新的思路。人工制备的与协同抑制分子相关的药物,包括单克隆抗体、与免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)重链形成的融合蛋白,以及病毒表达载体,将为上述疾病的治疗提供手段。目前已有多种相关药物正处于临床实验阶段。本文就新发现的协同抑制分子、协同抑制分子的新认识作一追踪并介绍其临床应用前景。

结直肠癌细胞所致免疫抑制及免疫抑制分子分泌模式的研究

目的探讨结直肠癌细胞分泌的免疫抑制物质及抑制免疫功能的模式。方法制备结直肠癌Colon26细胞培养上清,采用MTT法检测其对T细胞转化和NK细胞的影响,直接免疫荧光FCM法检测对IL-2Rα、CD3ε+ζ+及CD3ε-ζ+表达的影响;定量ELISA法测定上清中TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-6、IL-10和PGE2含量。结果 Colon26细胞可使5项免疫功能指标明显受抑制,抑制率分别为37.88%±7.38%、68.30%±10.44%、69.60%±5.15%、68.15%±2.17%、23.34%±2.86%。Colon26细胞可稳定分泌免疫抑制分子,以TGF-β1含量最高,为(1295.23±29.85)pg/ml;VEGF、IL-4、IL-6、IL-10、PGE2分泌量分别为(29.18±1.90)pg/ml、(27.70±0.70)pg/ml、(26.55±0.60)pg/ml、(29.52±2.50)pg/ml、(9.69±0.42)pg/ml。结论 Colon26细胞对T细胞增殖、活化及信号转导水平的抑制接近70%,对NK杀伤及ζ链介导的活化信号水平的抑制约30%。结直肠癌细胞可能通过分泌以TGF-β1为主的多种免疫抑制分子抑制NK细胞和T细胞免疫功能,介导肿瘤的免疫逃逸。

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中miR-155和细胞因子信号转导抑制分子1相对表达量与肝功能损伤程度的相关性

目的分析慢性乙型肝炎(chronic hepatitis C,CHB)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中miR-155和细胞因子信号转导抑制分子1(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1)的表达水平,并探讨其与肝功能损伤程度的相关性.方法连续纳入2016年3月至2018年6月于南京中医药大学附属南京医院就诊的95例CHB患者为研究对象(CHB组),根据患者肝组织病理学检查结果分为轻度CHB组(31例)、中度CHB组(38例)和重度CHB组(26例).另选取同期健康体检者50例作为对照组.采用RT-PCR检测受试者外周血PBMC中miR-155和SOCS1 mRNA相对表达量,ELISA法检测CHB患者血清肝功能指标[丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)和总胆红素(total bilirubin,TBil)],分析外周血miR-155和SOCS1 mRNA相对表达量与CHB严重程度及肝功能指标的相关性.结果 CHB组患者miR-155相对表达量(0.64±0.15)显著低于对照组(0.86±0.27),SOCS1 mRNA相对表达量(1.25±0.37)显著高于对照组(0.69±0.18),差异均有统计学意义(t=6.314,P<0.001;t=10.081,P<0.001).重度CHB组miR-155相对表达量为0.52±0.13,显著低于中度CHB组(0.65±0.16)和轻度CHB组(0.73±0.20);SOCS1 mRNA相对表达量为1.50±0.25,显著高于中度CHB组(1.21±0.33)和轻度CHB组(1.09±0.31),差异均有统计学意义(P均<0.05).CHB患者miR-155和SOCS1 mRNA表达水平呈显著负相关(r=-0.695,P<0.01).重度CHB组血清ALT、AST、TBil水平分别为(95.97±11.98)U/L、(75.93±10.27)U/L、(22.21±4.09)μmol/L,均显著高于轻度CHB组[(79.73±10.86)U/L、(61.57±9.16)U/L、(18.06±3.14)μmol/L]和中度CHB组[(86.05±12.14)、(66.66±9.38)U/L、(19.73±3.52)μmol/L],差异有统计学意义(P均<0.05),中度CHB组血清ALT、AST、TBil水平与轻度CHB组相比,差异无统计学意义(P均>0.05).CHB患者miR-155相对表达水平与ALT、AST、TBil水平呈负相关(r=-0.457、-0.531、-0.389,P均<0.05),SOCS1 mRNA与ALT、AST、TBil水平呈正相关(r=0.419、0.520、0.371,P均<0.05).结论 CHB患者PBMC中miR-155和SOCS1 mRNA的异常表达与肝功能损伤程度密切相关.

共抑制分子在自身免疫性疾病中的作用

共抑制分子如CTLA-4,PD-1和BTLA负向调节免疫应答。多项研究表明共抑制分子缺失和突变导致鼠和人自身免疫性疾病发生,表明来自共抑制分子的下调信号对于防治自身免疫起关键作用。一些情况下,在自身免疫性疾病中诱饵共抑制性受体(如CTLA-4 Ig)或抗共抑制分子的单克隆抗体会抑制自身反应性T细胞的功能。因此,对于一些未知的自身抗原所引起的自身免疫性疾病,共抑制信号调节是一个诱导产生耐受的有吸引力的途径。特别是,CTLA-4 Ig在动物自身免疫性疾病模型中已经表现出非常明确的效果,在一些人自身免疫性疾病临床研究中也得到越来越多的关注。

肿瘤预后相关免疫抑制分子概述

肿瘤机体内免疫抑制细胞、免疫抑制分子状态与肿瘤发生、发展密切相关。本文综述了肿瘤免疫过程中参与肿瘤免疫逃逸的免疫抑制分子PD-1,CTLA-4,TIM-3,LAG-3,CD160,BTLA的功能状况及最新研究进展。

共抑制分子在脓毒症免疫功能紊乱中的作用研究

近年来,对于脓毒症发病机制和治疗的相关研究已经取得了令人瞩目的成绩,但其发病率和病死率仍居高不下。脓毒症的具体发病机制异常复杂,虽然经过学者们多年的研究,但仍有很多问题尚未得到很好地解答。免疫共抑制分子在脓毒症免疫细胞活化和增殖等过程发挥至关重要的作用。本文主要归纳、总结并分析程序性死亡受体-1(PD-1)、程序性死亡受体配体1(PD-L1)、细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)、B7同源物3(B7-H3)等共抑制分子在脓毒症免疫功能紊乱中作用的研究现状,旨在为脓毒症诊疗的理论研究和临床实践提供帮助。

蜱半胱氨酸蛋白酶抑制分子研究进展

蜱是以吸血为生的体外寄生虫,能传播多种病原体。控制蜱的传统方法是使用杀虫剂,但会产生药物残留等问题。为了找到控制蜱及蜱传病的新方法,必须在分子水平上了解蜱的相关生理过程。蜱半胱氨酸蛋白酶抑制分子是一类抗蛋白酶分子,主要作用于半胱氨酸蛋白酶的抑制调控。论文介绍了蜱半胱氨酸蛋白酶抑制分子的结构和分类,以及在蜱的吸血、血液消化、蜱的先天免疫及对宿主免疫调节等生理过程的重要作用,同时也综述了半胱氨酸蛋白酶抑制分子具有抗寄生虫和抗癌的作用,为全面了解蜱半胱氨酸蛋白酶抑制分子提供参考。

以内在抑制分子SOCS3为靶点促进CNS再生的研究进展

成年哺乳动物CNS损伤后不能再生的主要原因是抑制性微环境的存在和其内在的生长能力低下^[1]。过去10多年的研究主要聚焦在抑制性微环境,可是当用遗传学方法或药理学方法阻断环境中的抑制信号,仅观察到有限的轴突再生。而且,大多数成年哺乳动物CNS神经元即使在提供允许生长的底物上也不能再生其轴突^[1]。这些研究表明,神经元内在生长能力在控制神经元再生中至关重要。

蜱源含Kunitz功能域的丝氨酸蛋白酶抑制分子研究进展

蜱是地球上仅次于蚊子的第二大病原传播媒介,可引起人和动物多种疾病。控制蜱的传统方法是使用杀虫剂,但药物残留等问题日益突出,因此寻求更加健康环保的抗蜱方法迫在眉睫。蛋白酶水解反应参与生物体大多数生理活动,该反应的调节机制亦成为研究热点。Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制分子作为一种重要的蛋白酶水解反应调节物,与蜱的多项生理功能关系密切。论文对蜱源Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制分子的结构和功能加以论述,总结近年来的相关研究进展,以期为进一步研究提供参考。