不同抑菌剂对枯草芽孢杆菌芽孢动态生长的影响

目的研究不同抑菌剂对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)芽孢生长的影响及作用阶段。方法本研究选取枯草芽孢杆菌芽孢为研究对象,考查了茶多酚、Nisin、亚硝酸盐、双乙酸钠、乙二胺四乙酸盐5种抑菌剂对枯草芽孢杆菌芽孢存活量、萌发特性、内容物泄漏量、结构变化的影响。结果5种抑菌剂均能降低枯草芽孢杆菌芽孢的存活率,且不同抑菌剂对枯草芽孢杆菌芽孢生长的主要抑制阶段存在差异。其中乙二胺四乙酸盐、茶多酚在芽孢萌发阶段的作用效果相对较为显著,与芽孢悬浊液共孵育60 min后吸光度分别下降至90.61%、90.74%,2,6-吡啶二羧酸释放量分别为21.18%、21.92%,孵育12 h后仍有部分芽孢保持“相亮”状态。亚硝酸盐、双乙酸钠、Nisin主要在萌发后发挥抑制作用,其中亚硝酸盐、双乙酸钠能使芽孢在后期生长过程中内膜通透性增大,并导致芽孢核内物质发生泄漏。拉曼光谱显示茶多酚、亚硝酸盐能够使得芽孢生长过程中蛋白质、脂质等成分及其结构发生变化,使萌发后的芽孢无法继续生长形成营养体。结论乙二胺四乙酸盐、茶多酚在芽孢萌发阶段发挥主要作用,亚硝酸盐、双乙酸钠、Nisin在萌发后及营养体形成阶段发挥主要抑制作用。本研究为揭示不同抑菌剂对芽孢生长的抑菌机制提供重要信息和参考。

基于高通量测序技术开发酱卤鸡爪复配抑菌剂

为开发一款延长酱卤鸡爪货架期的天然复配抑菌剂,采用基于Illumina MiSeq PE300平台的高通量测序技术,以酱卤鸡爪为研究对象,对其15℃贮藏期内微生物菌群结构进行研究,确定优势腐败菌,并选择乳酸链球菌素、ε-聚赖氨酸和茶多酚3种天然抑菌剂,以优势腐败菌抑菌圈直径为指标,采用单因素试验和响应面试验确定最优复配配方,并对最终产品进行理化指标、菌落总数和感官评价的验证。结果表明,酱卤鸡爪腐败优势菌为食窦魏斯氏菌(Weissella cibaria)和乳明串珠菌(Leuconostoc lactis)。抑制优势菌最佳天然复配抑菌剂配方:乳酸链球菌素浓度0.34 g/kg、ε-聚赖氨酸浓度0.13 g/kg、茶多酚浓度0.20 g/kg。在15℃下添加复配抑菌剂的酱卤鸡爪品质劣变速度明显减缓,且从微生物指标角度,货架期延长48 h。

4种抑菌剂对油茶炭疽病和软腐病的防效

筛选环保型抑菌剂,为油茶炭疽病和软腐病绿色防治提供依据。采用室内生长速率法和喷雾法测定了4种抑菌剂对油茶炭疽病菌和软腐病菌抑制作用及油茶炭疽病苗期防治效果。实验室抑菌试验结果表明,纳米氧化铁悬浮剂及油茶壳醋液对油茶炭疽病菌和油茶软腐病菌均有较好的抑制作用,其中含有壳聚糖的纳米氧化铁悬浮剂的抑制效果最好,1%纳米氧化铁悬浮剂处理对油茶炭疽病抑制率为100%,4%的油茶壳醋液处理对油茶炭疽病抑制率为100%;0.3%的纳米氧化铁悬浮剂处理对油茶软腐病的抑制率为100%,0.4%的油茶壳醋液处理对油茶软腐病的抑制率为100%。苗期试验结果显示,4种抑菌剂对油茶炭疽病菌均有很好的防治效果,以纳米氧化铁和油茶壳醋液防治效果最好,防治效果达90%左右,与电解质水溶液等处理差异显著,对照多菌灵和波尔多液防治效果亦较好,达59%以上。

UPLC-PDA测定鲜竹沥中4种抑菌剂的含量

目的:建立超高效液相色谱-二极管阵列检测器法(UPLC-PDA)检测市售鲜竹沥中苯甲酸、山梨酸、羟苯甲酯、羟苯乙酯4种常用抑菌剂的含量。方法:采用ACQUITYUPLCHSST3色谱柱(100mm×2.1mm,1.8µm),以乙腈(A)-0.02mol·L^(-1)乙酸铵溶液(B)为流动相梯度洗脱,流速0.3 mL·min^(-1),采用223 nm(苯甲酸)、254 nm(山梨酸、羟苯甲酯、羟苯乙酯)作为检测波长,进样量1µL,柱温30℃。结果:4种抑菌剂在其测定波长下均完全分离,4种抑菌剂平均加样回收率分别为97.9%、104.0%、99.2%、103.0%;重复性试验苯甲酸和羟苯乙酯峰面积的RSD(n=6)均小于1%;4种抑菌剂质量浓度与峰面积均呈良好线性关系(r均大于0.99945);且样品的稳定性较好,48 h内苯甲酸峰面积的RSD为1.47%,羟苯乙酯峰面积的RSD为0.2%,对13批鲜竹沥中的抑菌剂进行了检测,9批鲜竹沥检出苯甲酸(质量分数为0.07%~0.29%),2批鲜竹沥检出山梨酸(质量分数为0.21%~0.24%),2批鲜竹沥检出苯甲酸(质量分数为0.21%~0.22%)和羟苯乙酯(质量分数为0.025%~0.027%),均符合《中华人民共和国药典》2020版(四部)通则0181合剂项下要求。结论:建立了基于UPLC-PDA测定鲜竹沥中的4种常用抑菌剂含量的方法,该方法专属性、重复性、准确度良好,为鲜竹沥这一冷背品种的质量控制提供了参考。

HPLC-DAD法测定康复新液中10种抑菌剂含量

目的:建立同时测定康复新液中10种抑菌剂的高效液相色谱分析方法。方法:采用Thermo Acclaim TM 120(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.1%冰醋酸-0.02 mol·L^(-1)乙酸铵溶液和甲醇,梯度洗脱,流速为1 mL·min^(-1),扫描波长为200~700 nm。结果:在相应的浓度范围内,10种抑菌剂质量浓度与峰面积的线性关系良好,r≥0.9998;精密度试验良好,RSD在0.33%~0.38%;重复性试验与稳定性试验的RSD<0.5%,加标回收范围为97.4%~101.1%,RSD在0.4%~1.8%之间。按拟定方法测试样品苯甲酸含量在0.15%~0.34%范围,山梨酸含量在0~0.48%范围,羟苯乙酯含量在0~0.02%范围、羟苯丙酯含量再0~0.02%范围。结论:该方法灵敏快速、专属性强、准确度高,可用于康复新液中抑菌剂的含量测定。

季铵盐类抑菌剂在药物制剂中的应用进展

季铵盐类抑菌剂是一类具有广谱抗菌活性的阳离子抑菌剂,主要包括苯扎氯铵、苯扎溴铵、聚季铵盐-1、苄索氯铵和西曲溴铵等,被广泛作为药物制剂中的抑菌剂或药品生产及医疗环境控制的消毒剂使用。本文对常用的季铵盐类抑菌剂在药物制剂中的使用剂量、应用范围、抑菌性能和安全性等进行综述,以期对该类抑菌剂的性质有更全面的了解,为药物制剂中合理选用季铵盐类抑菌剂提供参考。

天然抑菌剂在鲜食微藻中应用的可行性分析

微藻营养丰富,目前市售产品主要以高温干燥处理后的微藻粉制得,然而干燥过程会导致活性成分大量流失,营养价值大打折扣,因此,基于新鲜微藻开发的鲜食产品极具市场价值。在鲜食微藻保藏过程中,防腐且保留藻细胞活性是面临的首要问题。天然抑菌剂因为绿色安全已经被应用于水产品、肉制品、奶制品等食品中,具有良好的防腐保鲜效果。文章分析了几种天然抑菌剂的抑菌机制及其应用现状,并分析了将其应用于鲜食微藻的可行性。

基于高通量测序技术开发酱肘子天然香料抑菌剂

目的在不影响酱卤肉制品口感情况下开发天然香料抑菌剂,并延长酱肘子的货架期。方法基于高通量测序技术确定了酱肘子在储藏过程中的优势腐败微生物,并选择3种天然食品香料百里香酚、丁香酚、肉桂醛作为复配抑菌剂,以优势腐败菌抑菌圈直径为指标,进行单因素与响应面实验。同时,选择效果最好的抑菌剂配方比例进行抑菌效果验证检验。结果酱肘子贮藏中优势腐败菌为阴沟肠杆菌(Enterobacter inguinarum)、蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)和费格森埃希菌(Escherichia fergusonii)。效果最好的天然香料抑菌剂复配比例为百里香酚5.577 g/kg、丁香酚20.710 g/kg、肉桂醛2.667 g/kg。加入复配抑菌剂后,腐败菌的生长得到控制,产品变酸速率变慢,感官品质劣变速率变慢。以微生物为指标,25℃贮存条件下的货架期延长了38 h。结论本研究开发的抑菌配方可以很好的解决酱肘子储藏过程中的腐败问题,为酱卤肉制品抑菌剂的开发提供了参考。

离子色谱法测定滴眼剂中抑菌剂苯扎氯铵和苯扎溴铵

目的采用离子色谱法测定滴眼剂中抑菌剂苯扎氯铵和苯扎溴铵的含量。方法采用SH-AC-11色谱柱(250 mm×4.6 mm),电导检测器,淋洗液为23 mmol/L氢氧化钾溶液,流速为0.6 ml/min,抑制器电流为56 mA,进样量为25μl。结果苯扎氯铵和苯扎溴铵分别在1.25~62.50μg/ml和1.02~51.00μg/ml范围内线性关系良好(r分别为0.9997和0.9998),加样回收率分别为100.6%(RSD=1.7%)和100.4%(RSD=1.6%)。结论该方法准确性高,专属性强,可用于滴眼剂中抑菌剂苯扎氯铵和苯扎溴铵的质量控制。

杀线虫抑菌剂研究进展

杀线虫抑菌剂在农药中占比很小,但是非常重要。随着呋喃丹、克百威、二溴氯丙烷等农药品种的禁限用,市场上可供选择的杀线虫抑菌剂屈指可数,因此,研发低毒高效的杀线虫抑菌剂具有重要的应用前景。综述了国内外常用杀线虫抑菌剂的合成方法,为杀线虫抑菌剂的开发提供参考。

HPLC法同时测定滴眼剂中羟苯酯类和季铵盐类抑菌剂含量的方法研究

目的:建立同时测定滴眼剂中羟苯酯类和季铵盐类抑菌剂含量的通用型方法。方法:采用Agilent C 18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以1%三乙胺溶液(用磷酸调pH至5.0)为流动相A,以甲醇为流动相B,梯度洗脱,柱温为40℃;检测波长为214 nm,流速为1 mL·min^(-1),进样体积20μL。结果:羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯、苯扎氯铵及苯扎溴铵分别在0.11~559.0、0.10~513.0、0.10~258.8、0.11~270.5、1.07~537.0及1.03~512.8μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r>0.999),羟苯乙酯、苯扎溴铵、苯扎氯铵的平均加样回收率分别为104.7%(RSD=1.3%)、102.6%(RSD=1.1%)、100.9%(RSD=1.1%)。对12家企业36个品种的100批次滴眼液中抑菌剂含量进行测定,得到了较为准确的结果。结论:本法可为滴眼剂中抑菌剂含量测定质量控制和安全评价提供参考。

大蒜蒜瓣中细菌多样性分析及抑菌剂筛选

微生物的生长会限制大蒜蒜瓣的贮藏期。通过分离纯化,结合菌落形态、菌体形态和PCR序列比对,分析大蒜蒜瓣中细菌多样性;测定抑菌圈直径、最小抑菌浓度和最小杀菌浓度,比较常用生物抑菌剂和化学防腐剂对大蒜蒜瓣中常见细菌的抑菌能力。结果表明,从大蒜蒜瓣中分离得到的菌株主要有水生拉恩菌、土生拉乌尔菌、表皮葡萄球菌、肠膜明串珠菌、乳酸明串珠菌、苏云金芽孢杆菌、成团泛菌、柠檬酸杆菌。生物抑菌剂肉桂醛和化学防腐剂双乙酸钠对4种指示菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、土生拉乌尔菌和水生拉恩菌)的抑菌效果最好,肉桂醛和双乙酸钠联用对大蒜蒜瓣中菌落总数的抑菌率达到98.4%,对大肠菌群的抑菌率达到100%。

6种抑菌剂在蓝莓开放组培初代培养中的应用试验

为简化蓝莓组培生产工序、降低生产成本、提高接种效率和加快优质种苗培育进程,探究了蓝莓开放组培初代培养的适用抑菌剂配方。以南高丛蓝莓品种珠宝茎段为外植体进行初代培养,将开放式组培专用的6种植物源杀菌剂清菌易、ZP抗菌素、菌杀光、植培净Ⅱ型、植菌灵、植菌素/清应用于蓝莓开放式组培培养基中,比较各抑菌剂不同浓度的抑菌效果及对试管苗初代培养污染率和苗高的影响。结果表明:除使用抑菌剂菌杀光不同浓度的污染率都在30%以上外,其他5种抑菌剂按低于推荐浓度使用后均可有效控制污染,污染率均在10%以下,实现了蓝莓开放式组培。综合考虑抑菌效果、对植物组织生长的影响及成本因素,认为植菌素/清2毫升/升在蓝莓开放式组培中为最佳抑菌剂使用浓度。

国产硫酸庆大霉素滴眼液中抑菌剂的使用现状分析

目的分析国产硫酸庆大霉素滴眼液中抑菌剂使用现状及存在的问题。方法采用新建的硫酸庆大霉素滴眼液中抑菌剂含量测定方法,结合抑菌剂影响因素试验、抑菌剂与包材的相容性对23批次国产硫酸庆大霉素滴眼液中的抑菌剂进行检测,分析该产品中抑菌剂使用的合理性。结果硫酸庆大霉素滴眼液中羟苯乙酯的含量随产品剩余效期减少而降低,产品使用的低密度聚乙烯滴眼剂瓶对抑菌剂羟苯乙酯存在吸附作用。结论目前国产硫酸庆大霉素滴眼液中抑菌剂羟苯乙酯的使用存在一定问题,建议企业重视处方中抑菌剂种类和含量的筛选以及抑菌剂稳定性的考察,并改进包装材料,以确保产品的安全有效。

高效液相色谱法同时测定生脉饮中9种抑菌剂含量

目的 建立同时测定生脉饮中9种抑菌剂含量的高效液相色谱法,并考察该制剂抑菌剂添加情况。方法 色谱柱为Shiseido Capcell Pak MGⅡC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.02 moL/L乙酸铵溶液-甲醇(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为230 nm(苯甲酸)、254 nm(山梨酸钾、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯丁酯、4-羟基苯甲酸异丁酯、4-羟基苯甲酸戊酯、4-羟基苯甲酸苯酯),柱温为30℃,进样量为20μL。选取16家生产企业38批次样品(均为2022年江苏省评价性抽验样品),按不同倍数稀释后检测9种抑菌剂含量。结果 9个待测成分进样量分别在0.011~1.062μg,0.010~1.001μg,0.010~0.971μg,0.011~1.047μg,0.010~0.956μg,0.010~1.039μg,0.010~0.958μg,0.011~1.108μg,0.010~1.032μg范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.998 3);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%;平均加样回收率为91.47%~97.16%,RSD为0.15%~1.24%(n=6)。16家生产企业38批次产品中个别存在添加处方外抑菌剂、超标准限量添加抑菌剂的情况。结论 该方法准确性、专属性良好,可用于生脉饮中抑菌剂的测定。

盐渍竹笋致腐细菌及相关天然抑菌剂价效分析

为明确导致盐渍竹笋腐败的细菌并寻找有效天然抑菌剂,通过传统培养技术结合16S rDNA技术,对保质期末期涨袋盐渍竹笋中分离的致腐细菌进行鉴定,并以最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)为指标,探索茶多酚、植酸、竹叶提取物、ε-聚赖氨酸、乳酸链球菌素、溶菌酶、纳他霉素、壳聚糖对致腐细菌抑制效果。结果表明,盐渍竹笋致腐细菌为枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、霍氏肠杆菌、黄单胞菌、短小芽孢杆菌、沃氏葡萄球菌。在8种天然抑菌剂中,ε-聚赖氨酸的抑菌和杀菌效果最好,MIC和MBC分别为3.91~62.5μg/mL和31.25~500μg/mL。本研究深度揭示了导致盐渍竹笋败坏的细菌群体,并揭示ε-聚赖氨酸对此具有卓越的抑制效能,对指导盐渍蔬菜延缓腐败变质具有一定的理论指导价值。

抑菌剂对白掌‘维美’组培苗生长的影响

[目的]探究不同抑菌剂对白掌‘维美’组培苗生长及污染率的影响,以期为白掌标准化生产提供技术支持。[方法]以植菌清、菌杀光、ZP抗菌素为抑菌剂,分别设置5种浓度梯度,以清水培养基为对照(CK)。在诱导、增殖分化和壮苗生根培养基中分别添加不同浓度的抑菌剂,比较不同抑菌剂处理下‘维美’诱导、增殖分化和壮苗生根阶段的抑菌效果,并探讨其对组培苗生长的影响。[结果]1.8 mL·L^(-1)植菌清处理下,‘维美’外植体诱导的污染率为10%,且组培苗的长势与CK差异不大;0.6 mL·L^(-1)菌杀光处理下,‘维美’的增殖系数与CK相同,均为4.2,且其污染率与畸变率均为0;10 mL·L^(-1) ZP抗菌素处理下,‘维美’生根培养的污染率为0,根长2.46 cm、根粗1.08 mm、生根数2.2,生根率达100%。[结论]适合‘维美’组培苗外植体诱导阶段、增殖分化阶段及壮苗生根阶段的抑菌剂分别为1.8 mL·L^(-1)植菌清、0.6 mL·L^(-1)菌杀光和10 mL·L^(-1) ZP抗菌素。在不同的培养阶段选择适宜的抑菌剂能够明显降低‘维美’组织培养的污染率。

HPLC法同时测定盐酸丙卡特罗口服溶液中主成分及3种抑菌剂的含量

目的建立HPLC法同时测定盐酸丙卡特罗口服溶液中主成分盐酸丙卡特罗以及3种抑菌剂(苯甲酸钠、羟苯乙酯、羟苯丁酯)的含量。方法采用CAPCELL PAK MGⅡC_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.02 mol·L^(-1)磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至3.0)为流动相A,以乙腈为流动相B,柱温为30℃,检测波长为259 nm,进样量为100μL。结果主成分盐酸丙卡特罗及3种抑菌剂均得到较好的分离,盐酸丙卡特罗在0.0503~0.7548μg·mL^(-1)内线性关系良好(r=1.000),A厂家回收率范围为98.92%~101.00%(RSD=0.63%),B厂家回收率范围为101.09%~102.45%(RSD=0.51%);苯甲酸钠在20.4684~307.0262μg·mL^(-1)内线性关系良好(r=0.9996),A厂家回收率范围为100.11%~101.33%(RSD=0.50%),B厂家回收率范围为101.45%~102.24%(RSD=0.32%);羟苯乙酯在0.5091~7.6364μg·mL-1内线性关系良好(r=0.9999),A厂家回收率范围为99.68%~100.70%(RSD=0.33%);羟苯丁酯在0.2648~3.9720μg·mL-1内线性关系良好(r=1.000),A厂家回收率范围为99.24%~100.38%(RSD=0.44%)。结论本法简便,快速,能同时准确测定盐酸丙卡特罗口服溶液中主成分与3种抑菌剂的含量。

斛参增免合剂抑菌剂效力研究与抑菌剂筛选

目的:建立斛参增免合剂的抑菌效力检测方法,筛选适用于斛参增免合剂的抑菌剂。方法:依据《中华人民共和国药典》2020年版4部(通则1121),以金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、白色念珠菌和黑曲霉菌为试验菌株,确定菌落计数方法,建立样品的抑菌效力测定方法;并对添加不同浓度(0.10%、0.15%、0.20%、0.25%、0.30%)苯甲酸钠和山梨酸钾的斛参增免合剂进行抑菌效力测定。结果:添加苯甲酸钠、山梨酸钾浓度分别为0.20%、0.25%、0.30%的斛参增免合剂对5株试验菌的抑菌效力均达到《中华人民共和国药典》2020年版抑菌效力检查法的规定,但添加苯甲酸钠、山梨酸钾浓度分别为0.10%和0.15%的斛参增免合剂的抑菌效力达不到药典要求;0.20%山梨酸钾对大肠埃希菌的抑制作用较同浓度的苯甲酸钠弱。结论:0.20%苯甲酸钠可作为斛参增免合剂抑菌剂的最低添加量。

药物制剂中抑菌剂的要求及检测方法探讨

抑菌剂作为药物制剂重要的辅料,对防止或减少制剂受微生物污染保证药品质量起着重要的作用。抑菌剂都具有一定的毒性,科学规范的控制用法用量凸显重要。笔者梳理了中国药典、食品安全国家标准和化妆品安全技术规范对于抑菌剂(防腐剂)的种类、要求和测定方法,及ICH、EMA对于抑菌剂的要求和规定。对药品标准关注抑菌剂测定方法和限度要求的必要性等问题进行探讨,旨在规范抑菌剂的使用。