抗体酶催化的不对称反应

本文综述了抗体酶催化的不对称反应,并讨论了抗体酶的应用前景。

含硒抗体酶清除羟自由基作用的ESR研究

m1c8和m4G3是自制的含硒抗体酶 ,它具有与谷胱甘肽过氧化物酶相可比拟的生物催化活性 ,本文用自旋俘获方法研究这两种含硒抗体酶在含铁的黄嘌呤氧化酶 /次黄嘌呤自由基诱生体系中对羟自由基的清除作用 ,发现两种抗体酶清除羟自由基的能力均优于天然谷胱甘肽过氧化物酶 ,其中m1c8清除HO·自由基的能力最强 .

新型分子印迹模拟抗体酶对羧酸酯的催化水解

以甲基膦酸对硝基苯酯作为分子印迹聚合物的模板分子,N-苯基-苯甲酰胺作为功能基,通过嵌埋ZnO纳米材料合成了具有“纳米通道”的新型分子印迹模拟抗体酶MIP-3.研究该酶对羧酸对硝基苯酯催化水解动力学结果表明,这类模拟抗体酶不仅具有很好的结构选择性,而且催化羧酸酯水解的能力大大提高.为合成分子印迹模拟酶和纳米材料的应用提供了新途径.

梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验作为初筛方法的梅毒逆向筛查程序的可行性分析

目的:探讨TP-ELISA作为初筛方法的梅毒逆向筛查程序的可行性分析。方法:选择2016年1月至2017年6月在大连大学附属中山医院各门诊及病房就诊的梅毒筛查者,并收集其标本15378份,采用梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)与甲苯胺红不加热血清学试验(TRUST)筛选分析。以TPPA为标准,比较各种方法的特异性、灵敏度以及总符合率,统计TP-ELISA的S/CO值与TPPA阳性结果的相关性。结果:TPPA筛查阳性率为3. 57%,TP-ELISA筛查阳性率为3. 83%,TRUST筛查阳性率为2. 38%。TP-ELISA的灵敏度(98. 9%)明显优于TRUST(64. 3%),差异具有统计学意义(P <0. 01)。TP-ELISA与TRUST特异性与符合率差异无统计学意义(P> 0. 05)。梅毒筛查时,TP-ELISA与TPPA在梅毒筛查时有较好的一致性(K=0. 945),TRUST与TPPA一致性不明显(K=0. 639)。根据梅毒抗体检测的特点以及实验室TP-ELISA的检测方法,当≤1. 0时,S/CO为阳性,> 1. 0时S/CO为阳性。TP-ELISA检测结果的假阳性样本率为75. 00%(54/72),其主要是发生在S/CO值1. 0～2. 99之间。随着TP-ELISA的S/CO的数值增高,TPPA的符合率也依次增加,S/CO> 5. 0时,TPPA的阳性率为100%。TRUST的检测阳性样本有13例,患者主要有妇产科正常妊娠8例,口腔科牙周炎3例,心内、呼吸2例。TP-ELISA假阴性6例,其中分布为泌尿科患者3例,骨科患者1例,妇产科患者2例,其被疑为梅毒早期。TP-ELISA假阳性患者72例。结论:TP-ELISA的灵敏度和特异性显著优于TRUST,有利于梅毒筛查效果,值得临床上大样本筛查。

丙型肝炎病毒抗体酶标诊断试剂及国家质控参考品的关系

目的对丙型肝炎病毒(HCV)抗体酶联免疫诊断试剂和抗HCV国家质控参考品的过去﹑现在和未来进行回顾和展望。方法根据HCV抗体酶联免疫诊断试剂和抗HCV国家质控参考品的研制过程,对国产和进口抗-HCV酶联试剂的检测灵敏度、特异性进行论述,阐明国家质控参考品所起到的作用。结果与结论目前我国的丙型肝炎病毒抗体酶标诊断试剂已接近或达到国际发达国家同类产品的质量水平。与之相伴的HCV抗体国家质控参考品也随之不断完善,对抗HCV酶联免疫诊断试剂的质量控制起到了重要的作用。

梭曼单链抗体酶EP_6一级结构的确定和三维结构的模建

以梭曼水解反应过渡态类似物 O1-甲基 - O2 -(1 ,2 ,2 -三甲基丙基 ) - 2 -羟基 - 5-硝基苯基甲基膦酸为半抗原得到了梭曼单链抗体酶 EP6.对这一株抗体进行了核苷酸序列的测定 ,测序结果表明这一单链抗体基因全长 71 4bp,其中重链长 351 bp,编码1 1 7个氨基酸 ,轻链长 31 8bp,编码 1 0 6个氨基酸 ,二者由编码 (Gly4 Ser) 3的 45bp的连接肽基因相连 .重 ,轻链均为开放读框 ,有明确的四个框架区和三个互补决定区 (CDR)以及抗体特征性的两个半胱氨酸残基 ,表明重 ,轻链的氨基酸序列符合鼠抗体可变区特征 .在 SGI工作站上对 EP6的三维结构进行了同源模建 .计算机模型显示 EP6表面包含一个由重轻链 CDRs围成的 ,可能用于半抗原结合和催化活性的长裂缝 ,其中轻链的 CDR3(L- CDR3)和重链三个 CDRs(H- CDRs)都可能参与抗原或半抗原的接触 ,L- CDR3和 H- CDR2的贡献较大 。

具有乙酰胆碱酯酶催化活性的抗体酶的研究

目的 :研制具有乙酰胆碱酯酶 (AchE)活性的抗独特型抗体。方法 :AchEmAb是一种IgG1抗体 ,先用木瓜蛋白酶酶切 ,然后采用AchE Sepharose 4B和SPA亲和层析柱进行提取纯化 ,获得纯化的mAbFab段。以Fab作为抗原免疫小鼠 ,制备抗Fab片段的独特型抗体 (AIdAb)。结果 :酶催化ELISA法检测证明 ,抗mAb 3F3片段的AIdAb具有AchE活性。结论 :成功地制备了一株具有AchE活性的AIdAb 。

疏水腔修饰法及高活力GPX抗体酶的研究──Ⅱ.半抗原及全抗原的制备和表征

The thiol group of glutathione (GSH) was protected by 2, 4-dinitrochlorobenzene(DNCB). The product GSH-S-DNP was reacted with 2-methyl-1-propanol and 3-methyl-1-butanol respectively to obtain hapten6 and 7. Their structures were determined by 400 MHz1H NMR and IR. The two haptens were then covalently crosslinked with bovine serum albu-min(BSA) hy using glutaraldehyde as coupling agent to obtain antigen 6 and 7. The resultsof gel electrophoresis analysis gave the average molecular weight of 1. 27 ×10-22 kg for eachantigen. The average connected ratio of BSA to hapten was 1: 12. Other UV and fluores-cence spectral properties of the antigens are reported.

具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的含硒单链抗体酶制备

利用RT PCR从分泌有谷胱甘肽结合部位的单克隆抗体杂交瘤细胞株 2F3中 ,扩增出单抗重链可变区和轻链可变区基因 .经DNA测序后 ,用Linker(Gly4 Ser1) 3 构建成单链抗体 (scFv)表达载体pTMF scFv ,将重组质粒pTMF scFv转化到大肠杆菌BL2 1(DE3) ,实现了单链抗体的高效表达 .表达的单链抗体占菌体总蛋白 2 5%～ 30 % .该重组蛋白以包涵体形式存在 ,分子量为 30kD .经过金属螯合亲和层析纯化、复性和凝胶过滤纯化 ,得到电泳均一的单链抗体 .再经化学诱变 ,得到含硒单链抗体酶 ,其谷胱甘肽过氧化物酶活性为 330 0U μmol.

单克隆抗体酶标法检测人血清真胰岛素及其应用

目的 建立灵敏、特异的检测人血清中真胰岛素的酶联免疫吸附试验并应用于临床与流行病学研究。方法 选择两种单克隆抗体并引入生物素与亲合素系统来建立酶联免疫分析方法 ,一种单克隆抗体包被到酶反应板上作为固相抗体 ,另一种单克隆抗体经生物素化后作为液相抗体。该检测方法被应用于流行病学研究 ,检测了江苏省邳州市的 1196名 3 5～ 5 9y成人的真胰岛素水平。结果 该方法的灵敏度为 0 .63 0 6mIU/L ,与 142pmol/L的胰岛素原、3 960 pmol/L的C肽无交叉反应 ,平均回收率为 99.3 0 % ,批内同一板孔间和板间平均变异系数分别为 8.2 3 %与 3 .74% ,线性范围为 0～ 0 .63mIU/L。研究结果显示真胰岛素的浓度在男、女性别中的中位数分别为 4.2 4(2 .5 7～ 6.5 7)、5 .45 (3 .5 0～ 7.46)mIU/L ,有统计学差异 ,在不同的年龄组间分布无统计学差异。流行病学研究结果显示真胰岛素的含量与体质指数、腰围、收缩压、舒张压、胆固醇、三酰甘油、危险因素聚集呈正相关 ,与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关。结论 本方法适用于在临床研究及流行病学研究中检测人血清中真胰岛素的含量。非酯化脂肪酸 (nonesterifiedfattyacids ,NEFA)

通过快速定点突变表征人源含硒单链抗体酶的底物结合部位

为了对人源含硒单链抗体酶Se-scFv-B3的底物结合部位和催化基团进行研究,在理论预测的基础上,通过快速定点突变法分别在2个理论预测的底物结合部位(位点1和位点2)内选定Ala180和Ala44定点突变为丝氨酸(Ser).2个突变体蛋白经化学修饰将Ser转变成谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的催化基团硒代半胱氨酸(Sec)后,前者的GPX活力达到了Se-scFv-B3的2倍多,而后者的GPX活力没有明显提高,这表明位点1可能是主要的底物结合部位,与理论预测的结果一致.

抗体酶的研究及应用

抗体酶是具有催化活性的免疫球蛋白,它既具有抗体的高效选择性,又能像酶那样高效催化化学反应,开创了催化剂研究的崭新领域.本文从抗体酶的作用机理、设计利制备、应用领域、存在的问题和研究展望等多个角度进行综述.

具有cGPX活力的含硒抗体酶的酶学及动力学性质研究

通过单克隆抗体制备技术得到三株特异结合半抗原 4 ( GSH-S-DNP二苄酯 )的单克隆抗体 HB4 ,HB5和 HB7.抗体经两步化学诱变得到具有细胞谷胱甘肽过氧化物酶 ( c GPX)活性的含硒抗体酶 m HB4 ,m HB5和 m HB7,活力分别为 1 70 ,1 867,32 U/μmol.其中 m HB5的活力是天然兔肝 c GPX的 0 .32倍 ,m 4 A4的1 .51倍 .等离子体 -质谱 ( ICP/MS)测得每分子含硒抗体酶分子中大约存在 2个硒原子 .m HB5的最适 p H为8.6～ 8.8.在 p H值范围为 7.0和 37℃条件下 ,m HB5催化 GSH和 H2 O2 或 t-ROOH反应的二级速率常数为 :k+ 1 ( H2 O2 ) 9.71× 1 0 6 L /( mol· min) ,k+ 1 ( t-ROOH) 5.99× 1 0 5 L/( mol· min) . m HB5使非酶催化反应速率提高了 9.8× 1 0 6和 3.7× 1 0 5倍 .

抗体酶催化Oxy-Cope重排反应的研究

经七步反应合成了Oxy-Cope重排反应的过渡态类似物-2-对羧丙氧基苯基环已醇(3),并以此为半抗原联接载体蛋白BSA制成抗原后免疫动物,从动物血清中分离纯化得到多克隆抗体。在200mmol/L的MES(4-吗啉乙磺酸)和200mmol/L的NaCl缓冲液中(pH=6.0),底物和抗体的摩尔比为100:1及37℃条件下,该抗体能催化3-对甲氧苯基-4-羟基-1,5-已二烯(1)重排生成6-对甲氧苯基-5-烯-已醛(2),v_(max)=15μmol/L·min,K_M=1025μmol/L,K_(cat.)=10min^(-1)。

检测睾酮、孕酮、雌酮与雌三醇的双抗体酶免疫分析法

本文报道了自制的试剂建立了检测睾酮、孕酮、雌酮和雌三醇的双抗体酶免疫分析法。实验表明 ,这些测定具有很高灵敏度 (最小可测量为 0 1～ 1pg 孔 ) ,标准曲线范围为 0～ 40pg 孔 ;同相关类固醇激素 (孕酮、孕烯醇酮、睾酮、雄酮、雌酮、雌三醇和皮质酮等 )的交叉反应率一般在 0 1 %以下。测定的批内和批间变异系数分别在5 8%～ 7 2 %与 9 5%～ 1 0 5% (n =8)范围内。向血中添加激素标准品后的回收率在 94%～ 1 1 0 %范围内。用自制防腐剂处理后 ,液态抗体 (包括第二抗体 )、酶标记物和已包被第二抗体的滴定板可保持活性 5～ 1 2个月或更久 ( 4℃～ -2 0℃ )。此测定可节约激素特异抗体 4～ 1 0倍。初测人和动物的血、奶、尿样品表明所建立的 4种测定方法可分别用于人和动物体液中睾酮、孕酮。

抗体酶

根据酶活性部位的结构用免疫及其它方法得到的抗体酶具有催化活性,为酶的结构功能研究和抗体与酶的应用等方面开辟了一个新的研究领域。

抗体酶研究的新进展

抗体酶研究的新进展冯雁（吉林大学酶工程实验室，长春１３００２３）杨同书（白求恩医科大学应用基础生物研究所，长春１３００２１）抗体酶（Ａｂｚｙｍｅ）或催化抗体（Ｃａｔａｌｙｔｉｃａｎｔｉｂｏｄｙ）是一种新型人工酶制剂，它是依据对酶分子催化反应机制的理...

抗体酶的研究与应用进展

抗体酶是一类以过渡态类似物为半抗原通过诱导免疫系统产生的具有类似天然酶催化活性的免疫球蛋白。它可促进许多用普通化学方法很难完成 ,或者天然酶尚未能催化的新奇转变。最近 ,抗体酶也显示出在许多领域的潜在应用价值。文章扼要介绍了抗体酶的设计策略 。