间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清4型鸭疫里默氏杆菌抗体的研究

应用超声波裂解法制备的血清4型鸭疫里默氏杆菌(RA)裂解物作为抗原包被酶标板,成功建立了4型RA抗体检测的间接ELISA法。

用快速敏感的抗原捕获ELISA法定量检测肌红蛋白

纯化肌红蛋白(Mb)是骨胳肌、心肌细胞的构成蛋白,血清Mb升高是肌细胞损伤的早期标志之一。心肌梗塞(AMI)时血Mb的升高与峰值常早于多种酶与同工酶,故可作为重要的辅助诊断指标。检测Mb国内已有放射免疫药盒,但放免法有着众所周知的局限性。我们建立的反向血凝技术也难以推广。国外有关ELISA检查Mb的技术均很复杂,现将我们建立的一种抗原捕获ELISA法报告如下。本法灵敏度、准确性、精密度均符合常规试验要求,可在2小时内发出报告。材料与方法 (一)Mb与抗Mb抗体制备同以往方法。Mb自手术切除的人胸肌提取,浓度9.2mg/

乙肝表面抗原检测RPHA法与ELISA法的比较

乙型肝炎在我国感染率较高,达15％左右,而HB/-SAG是乙型肝炎病毒感染的一项重要标志,当前我国检测HBsAg的方法较多,现将我科1994年元月～1995年8月门诊、住院病人864人用酶联免疫吸附试验(ELISA法)和反问间接血凝试验(RPHA法)测及的HBsAg结果进行比较,结果如下。1 材料与方法1.1 标本:对象是门诊。

单克隆抗体Dot-ELISA检测血吸虫病循环抗原现场应用结果

嘉兴市郊区原为血吸虫病严重流行区,经30余年努力防治,已经达到消灭血吸虫病标准.粪检很难查到阳性病人.单克隆抗体Dot-ELISA检测循环抗原(以下简称Dot-ELISA)的方法具有较高的敏感性和特异性,其循环抗原的检出能反映宿主活动性感染.为此,以本法试用于现场,并同时采用IHA(红细胞间接凝集试验)及COPT(环卵沉淀试验)法比较,以评价其实用价值.

猪瘟单克隆抗体的制备及ACI-ELISA检测猪瘟病毒的研究

本研究用猪瘟石门毒(CSFV-Shimen)免疫BALB/C小鼠,按常规单克隆抗体(McAb)技术方法制作,最终获得4株McAb,分别命名为AC9、CF8、DG5和EC9,4株McAb与基因工程CSFV E2蛋白反应结果表明:AC9、CF8和EC9是抗CSFv E2蛋白的McAb。用AC9和CF8McAb对CSFV进行抗原捕获间接ELISA试验(ACI-ELISA),通过一元McAb和二元McAb CAI-ELISA试验的比较,结果表明AC9与CF8两种McAb有协同作用,其捕获CSFV的能力比一元McAb显著提高。方阵试验结果表明:McAb和血清多抗(PcAb)的最佳工作稀释度分别为1:400和1:200。特异性试验和敏感性试验结果显示本法特异性强,敏感性高。最后用ACI-ELISA与PCR对30份病料的检测结果比较,表明ACI-ELISA与PCR检测结果相符。上述结果说明本研究所获得AC9和CF8可用作猪瘟诊断试剂盒的研制,是检测CSFV的有效方法。

改良的RIHA方法定量检测PCV2 Cap抗原的研究

为提高反向间接血凝试验(reverse indirect hemagglutination assay,RIHA)定量检测PCV2 Cap抗原的稳定性和精准性,将RIHA方法改良为:1)将被检样品稀释为几个适宜稀释度,分别做RIHA检测;2)检测孔100%、75%、50%、25%、0%凝集分别记录为4、3、2、1、0分,将几个稀释度的被检样品全部检测孔的分数加和;3)同法检测参照品并将参照品分数加和;4)被检样品与参照品总分数对比计算,获得被检样品抗原含量。改良的RIHA方法进行稳定性评价并与ELISA方法做比较。结果显示,改良RIHA方法的批内差异为6.8%~19.4%、批间差异为11.4%~23.6%、检测同一个样品差异系数为8.5%,均优于常规RIHA方法。改良RIHA方法检测纯化前和纯化后的PCV2 Cap抗原共30份,与ELISA方法检测结果比较相关系数为0.9568。研究结果表明,改良的PCV2 Cap抗原RIHA定量检测方法稳定性良好,且与ELISA方法检测结果有相关性,可在PCV2 Cap抗原生产中做定量检测,也可在毒种筛选、生产工艺优化中快速定量检测PCV2 Cap抗原含量。

NSP-ELISA鉴别FMDV感染与免疫

利用大肠埃希氏菌表达的口蹄疫病毒 (FMDV)非结构蛋白 (NSP) 3ABC多肽作为抗原 ,建立了一种可区分FMDV感染与接种灭活疫苗免疫牛的间接酶联免疫吸附试验 (I ELISA)。通过对 336份正常牛血清、50 8份注射疫苗牛血清、60份人工感染牛血清和 58份豚鼠免疫血清的检测 ,确定了血清抗体阴性与阳性效价的临界值。试验证明 ,该方法简易、快速 ,灵敏度比VIAA

棉花大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)血清学检测——抗原处理的比较

分别以棉花黄萎病菌V20的菌丝研磨物、菌丝蛋白、超氧化物歧化酶酶带Ⅰ、超氧化物歧化酶酶带Ⅱ为抗原免疫家兔,制备了抗血清As1、As2、As3、As4。琼脂双扩散法(ADD)和间接ELISA方法测定其特异性,发现这4种抗血清既可与同种的抗原发生阳性反应,也可与不同种的抗原发生交叉反应。用异种抗原黑白轮枝菌和尖孢镰刀菌吸附这4种抗血清,排除其非特异性成分后,抗血清专化性明显提高,消除了交叉反应。特异性测定表明:经吸附后的4种抗血清可以准确地将大丽轮枝菌鉴定到种的水平,但仍不能区分其生理型和致病类型。另外,当分别使用菌丝研磨物或菌丝蛋白为特异性测定抗原时,ADD检测的结果虽然一致,但前者阳性反应沉淀线粗糙,轮廓不清晰,后者的沉淀线较细,且清晰、明显。因此适宜选择菌丝蛋白为抗原进行抗血清的特异性测定试验。

苦马豆素人工抗原接种和田羊的免疫学研究

为了探索苦马豆素(SW)人工抗原SW-BSA免疫接种后对和田羊的保护作用,试验通过间接血凝试验(IHA)和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)分析SW-BSA免疫和田羊后血清抗体效价的变化,并检测试验羊血清E-玫瑰花环率的变化,以及血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)、α-甘露糖苷酶(AMA)、肌酐(CRE)活性的变化,同时检测试验组尿液和血液中有无SW。结果表明:SW-BSA可以诱导和田羊产生高效价的抗SW抗体,而且这种高效价保持的时间较长,机体E-玫瑰花环率显著上升;试验组与对照组比较,血清中AST、ALT、AKP、LDH、AMA、CRE水平均差异不显著(P>0.05),尿液和血液中均未检查出SW。说明合成的人工抗原SW-BSA具有较好的免疫原性和安全性。

酶联免疫吸附试验检测血清抗中性粒细胞胞质抗体方法的建立与临床应用

目的建立总抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)的方法,初步探讨其在ANCA相关血管炎中的表达及临床应用价值。方法从人的中性粒细胞中提取总抗原,用棋盘滴定法选择ELISA测定的最佳条件,确定临界值。测定系统性红斑狼疮(SLE)、肾病、血管炎、类风湿关节炎(RA)等患者血清总ANCA,并与间接免疫荧光(IIF)法、特异性髓过氧化物酶(MPO)-ANCA及蛋白酶3(PR3)-ANCA进行分析比较。结果总抗原ELISA与IIF法检测肾病、SLE、血管炎及RA患者血清ANCA阳性率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。抗原特异性ELISA、IIF法检测肾病、血管炎、RA患者血清ANCA阳性率比较差异均无统计学意义(P>0.05),而SLE差异有统计学意义(P<0.05)。结论ELISA检测ANCA可行且具有广泛的推广应用前景。

以羊肚菌菌丝为抗原的不同免疫程序对Balb/c鼠抗体水平的影响

以羊肚菌菌丝为抗原,免疫Balb/c鼠。用建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法检测不同免疫剂量、不同免疫途径、不同免疫次数等免疫程序影响因素所对应的免疫Balb/c鼠的血清抗体水平,得出产生抗体水平较高的快捷的免疫程序。结论:70μg∕只剂量的不含佐剂的羊肚菌菌丝抗原,经由腹腔间隔4d连续3次注射的免疫程序,可以在首免的25d后产生较高水平的抗体。

酶联免疫吸附试验间接抗体夹心检测SARS-CoV抗原方法的建立和应用

目的制备和鉴定严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARSCoV)核衣壳(N)蛋白单克隆抗体(mAb)和多克隆抗体建立SARSCoVN抗原捕获抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法用于SARSCoV感染的早期诊断。方法用基因重组SARSCoVN蛋白免疫BALB/c小鼠和新西兰大白兔制备mAb和多克隆抗体,采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定,用单克隆抗体与兔多克隆抗体进行配对试验,建立抗原捕获抗体夹心ELISA法测定SARSCoVN抗原。结果获得9株特异性针对SARSCoVN蛋白的mAb和高效价的兔多克隆抗体,通过高亲和力的mAb与兔多抗的配对试验,筛选出3株单抗N1E8、N8E1和N10E4混合作为捕获抗体,与兔多克隆抗体和辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG组合作为测定抗体,建立了抗体夹心ELISA法,测定重组SARSCoVN蛋白最高灵敏度为50pg/ml,特异性达99.86%,测定420份血清学确诊的SARS患者血清,其中发病1-10天阳性检出率为90.1%,11-20天检出率为23%,21天以上均为阴性,与其他呼吸道病毒和冠状病毒无交叉反应。结论获得特异性好、亲和力高的单克隆抗体和高效价的兔多克隆抗体,经过抗体的配对和优化,建立了一种灵敏度高、特异性强的SARSCoV抗原的ELISA捕捉法,可应用于SARS早期诊断、溯源及流行病学研究。

SMD单克隆抗体的制备及测定方法的建立

用戊二醛作为偶联剂 ,将磺胺对甲氧嘧啶 (SMD )与牛血清白蛋白 (BSA )或卵清蛋白 (OVA)偶联形成完全抗原 ,经紫外分光光度计扫描鉴定。以人工抗原免疫BALB/c小鼠 ,取脾细胞与骨髓瘤细胞 (SP2 /0 -Ag1 4)融合 ,用间接ELISA联合竞争ELISA法筛选出产生针对SMD抗体的杂交瘤细胞。经克隆 ,得到 3株特异性好的阳性杂交瘤细胞 ,注入小鼠腹腔产生腹水。建立了测定SMD的ELISA法 ,其检测下限小于5ng/mL。

纯化ETEC K88菌毛特异性卵黄抗体的加工贮藏及体外抗粘附性研究

分离、纯化产肠毒素大肠杆菌(ETEC) K88ac菌毛蛋白,将其免疫产蛋鸡,经喷雾干燥制备抗ETEC菌毛抗原特异性卵黄抗体粉。间接ELISA法检测卵黄抗体效价,试验结果表明,喷雾干燥(140℃进气,65℃出气)对卵黄抗体活性无影响,加工前后抗体滴度均为1∶1280;卵黄抗体粉在90℃干热条件下处理5min后抗体效价下降50%,而90℃湿热条件下处理5min抗体效价无明显变化,但处理15min后下降75%;经过1h的干热或湿热处理,抗体均基本失活;4℃和常温下放置半年对卵黄抗体粉活性无影响;体外抑制粘附试验表明,抗K88卵黄抗体能抑制K88对肠上皮细胞的粘附。

抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

用提纯的猪流行性腹泻病毒抗原免疫BALB/c小鼠,脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,用酶联免疫吸附试验(ELISA)间接法筛选,以有限稀释法克隆化,阳性率达100％,建立了1D_8、5D_7、4B_1、2B_8、1A_4五株杂交瘤细胞系。用ELISA检测培养上清及诱生的腹水的效价。培养上清效价为1D_8 1∶1280~×、5D_7 1∶640~×、4B_1 1∶320~×、2B_8 1∶320~×、1A_4 1∶640~×,腹水效价为1D_8 10^(-7)、5D_7 10^(-7)、4B_110^(-7)、2B_8 10^(-5)、1A_4 10^(-4)。用免疫双扩散试验结果,五株单抗中有一株属IgG类,四株属IgG类。将单抗提纯后用ELISA夹心间接法及间接免疫荧光试验(IFA)对6种冠状病毒进行了特异性鉴定,除猪流行腹泻病毒外,不与其它冠状病毒发生交叉反应。取效价高而稳定的1D_8、5D_7、4B_1细胞系单克隆抗体做IFA及直接ELISA试验初步证明该McAb具有敏感性高,特异性强的优点,可作为猪流行性腹泻病毒检测的一种新试剂。

不同免疫检验方法检测抗HIV结果的可靠性分析

目的分析不同免疫检验方法检测抗HIV结果的可靠性。方法选择该院2015年1月—2018年1月确诊的82例HIV患者为研究对象,其中35例HIV抗体显示为阴性,47例HIV抗体显示阳性,分别应用ELISA法、金免疫层析试验进行检验,比较两组抗HIV检测结果。结果ELISA法检验血清2 NCU/mL、室间质量评价血清、血清4 NCU/mL的阳性率分别为100.00%、100.00%、100.00%,高于金免疫层析试验(χ~2=3.892 6、3.892 6、9.252 8,P<0.05);ELISA法对抗HIV的特异度、敏感度、准确率分别为91.43%、97.87%、96.34%,明显优于金免疫层析试验(χ~2=4.825 1;3.843 1;4.093 7,P<0.05);ELISA法假阳性率为0.00%,明显低于金免疫层析试验(χ~2=15.306 7,P<0.05)。结论相比于金免疫层析试验法,检测抗HIV应用ELISA法检验的准确率更高,具有较高的敏感度与特异度,可靠性更强。