基于酵母β-葡聚糖载体的口服OVA疫苗(WGP-OVA疫苗)诱导体液免疫及抗原特异性T细胞免疫反应

目的:探讨口服WGP-OVA疫苗对C57BL/6小鼠体液免疫及抗原特异性T细胞免疫的诱导作用。方法:分别连续给予C57BL/6小鼠口服PBS、WGP及WGP-OVA 17 d后,使用LEGENDplexTM多因子流式检测试剂盒检测给药后小鼠血清中IgG1、IgG2a、IgG3及IgM的含量;HE染色比较各组小鼠脾脏淋巴小结的大小。取小鼠腹股沟淋巴结(ILNs)制备单细胞悬液,流式细胞仪(FACS)检测淋巴结内F4/80+巨噬细胞及F4/80+SIINFEKL+巨噬细胞比例,分析WGP-OVA对巨噬细胞在ILNs内的浸润及抗原提呈情况;同时通过MHC Tetramer染色检测抗原特异性CD8+T细胞比例,明确WGP-OVA疫苗对T细胞免疫的诱导作用。结果:与PBS组相比,WGP-OVA能显著诱导IgG1、IgG2a、IgG3及IgM的分泌,增大脾脏内淋巴小结。此外,口服WGPOVA疫苗能促进F4/80+巨噬细胞向淋巴结浸润,诱导巨噬细胞对OVA的抗原提呈,同时增加淋巴结内OVA特异性CD8+CTLs的数量。结论:口服WGP-OVA疫苗能诱导C57BL/6小鼠体液免疫及抗原特异性T细胞免疫反应。

基于HBV核心抗原CTL表位的治疗性多肽在体诱导抗原特异性细胞免疫应答的研究

目的 探讨基于表位的治疗性多肽抗原组分、结构与诱导免疫应答之间的关系。方法 用分子设计的理论和方法 ,设计基于HBV抗原免疫优势性CTL、Th及B细胞表位的 3种治疗性多肽候选疫苗分子 ,经Merrifield固相多肽合成技术合成 ,并经HPLC纯化、鉴定。以BALB c(H 2 d)纯系小鼠为实验对象 ,进行体内免疫学功能研究。结果 所设计治疗性多肽分子可在体诱导较强的抗原特异性CTL应答和适度的抗体反应。Th、B细胞表位的引入可增强CTL表位肽的效应。结论 提示在治疗性表位多肽疫苗的分子设计中 ,引入B -、Th表位可显著提高CTL表位肽的免疫原性。

结核杆菌抗原特异性激发人γδT细胞活化信号涉及Ras/Erk途径

目的 :探讨Ras Erk通路是否参与结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb Ag)启动的γδT细胞活化信号转导途径。方法 :分离获取PBMC ,用佛波醇酯 (PMA)和离子霉素 (IM) ,CD3mAb或Mtb Ag刺激不同时间 ,或PBMC先经PD980 5 9处理后再刺激培养 ;用荧光单抗染色后在流式细胞仪测定细胞CD6 9分子的表达 ;计数培养扩增 10天的细胞数量。结果 :PBMC用PMA +IM刺激 6小时 ,总T细胞和γδT细胞中的CD6 9表达均达高峰 (均 >99% ) ,用CD3mAb刺激 2 4小时 ,均达高峰 (均在 5 5 %左右 ) ,用Mtb Ag刺激 2 4小时 ,亦均达高峰 ,但总T细胞和γδT细胞中CD6 9分别为 16 .0 %和 75 2 % ;用PD980 5 9预处理PBMC ,可明显抑制Mtb Ag激活的γδT细胞CD6 9表达和γδT细胞的增殖。结论 :Mtb Ag可特异性激活γδT细胞 ,其活化信号转导需通过Ras Erk通路。

青藤碱对环瓜氨酸肽抗原特异性T细胞体外增殖的影响

目的青藤碱(Sinomenine,SN)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)治疗中有较好的临床疗效,对SN相关免疫机制的研究也越来越受到关注。但关于SN在抗原特异性T细胞(antigen special T cell,AST)机制的研究少见报道。文中观察了SN对RA患者环瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide,CCP)AST体外增殖的影响,探讨SN治疗RA的相关免疫机制。方法体外分离、培养RA患者外周血淋巴细胞,分别设对照组:不加任何干预药物;CCP组:仅加CCP干预,终浓度为20μg/ml;甲氨喋呤(Methotrexate,MTX)组:同时加CCP与MTX干预,终浓度均为20μg/ml;SN低剂量组:同时加CCP与SN干预,SN终浓度为10μg/ml,CCP终浓度为20μg/ml;SN高剂量组:同时加CCP与SN干预,终浓度均为20μg/ml;体外培养72 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖吸光度(A)值水平。结果 CCP可体外诱导RA患者外周血淋巴细胞增殖(P<0.01),在此基础上加入不同浓度的SN后,CCP诱导的淋巴细胞增殖被显著抑制(P<0.01),SN高剂量组较之SN低剂量组的抑制程度更为明显(P<0.01)。结论 SN可抑制RA患者CCP-AST的体外活化、增殖,这可能是SN临床治疗RA的免疫机制之一。

抗原特异性IgG在支气管哮喘中作用的初步研究

目的 :探讨抗原特异性IgG在支气管哮喘免疫学发病机制中的作用。方法 :复制采用通气功能作为判定指标的小鼠实验性支气管哮喘模型 ,用间接ELISA方法检测哮喘小鼠血清中特异性IgG、IgE ,通过IgG与通气功能指标—气道阻力等的相关性检验 ,初步分析IgG在支气管哮喘中的作用。结果 :支气管哮喘小鼠血清中特异性IgG增高 (t=4 5 37,P <0 0 5 ) ,IgG与气道阻力呈负相关 (r =- 0 70 8,0 0 2 <P <0 0 5 ) ,与IgE虽无明显相关 ,但有负相关倾向 (r =- 0 4 5 2 ,0 10 <P <0 2 0 )。结论 :初步分析认为抗原特异性IgG对支气管哮喘发作起抑制作用。

VIR576通过与TCR跨膜区结合抑制抗原特异性T细胞活化

目的探讨抗HIV多肽VIR576抑制抗原特异性T细胞活化的作用机制。方法OVA体外刺激分离的DO11.10小鼠抗原特异性T细胞,CCK-8法检测VIR576对其活化的影响。采用溶血试验、溶血抑制实验、荧光结合法等方法检测VIR576与TCR跨膜区序列(TCR-TMD)之间的相互作用。结果体外实验显示,VIR576能逆转HIVgp41融合多肽(FP)介导的抗原特异性T细胞活化,并且其自身也能抑制抗原特异性的T细胞活化(P<0.05)。溶血试验、溶血抑制实验、荧光结合法等方法证实,VIR576能与TCR-TMD特异性结合。结论VIR576对T细胞活化的作用是TCR依赖性的,通过与TCR-TMD结合抑制抗原特异性T细胞活化。VIR576兼具抑制HIV进入和抗原特异性T细胞活化的特性,可望作为预防HIV性传播的杀微生物剂进行研究。

慢性HBV感染患者抗原特异性CTL的肝损伤作用

目的探讨抗原表位特异性CTL在慢性乙型肝炎发病中的作用。方法用4个HBV抗原表位肽四聚体对外周血中抗原特异性CTL进行检测[HBV抗原表位肽分别为HBcAg18-27，序列为FLPSDFFPSV（C18），HBsAg183～191，序列为WLSLLVPFV（E183），HBeAg335-343，序列FLLTRILTI（E335），多聚酶P的575～583序列为FLLSLGIHL（P1575）]，检测慢性乙型肝炎患者肝炎发作时病毒抗原表位特异性CTL出现频率，分析抗原表位特异性CTL频率与血清ALT水平的相关关系，分析各组间抗原表位特异性CTL频率的差异。结果36例慢性HBV感染患者抗原表位特异性CTL检测阳性33例（92％），HBeAg183～191表位特异性CTL频率高于其他3个（P〈0．05）。统计分析抗原表位特异性CTL频率血清ALT水平相关性不显著；分组对比发现血清ALT升高5-10倍组多个抗原表位特异性CTL水平高于其他组（P〈0．05）。结论慢性HBV感染患者外周血中存在抗原表位特异性CTL，但特异性CTL的存在并不能代表保护性免疫。认为抗原表位特异性CTL在肝炎发作过程中具有肝组织损害作用，肝损伤作用可能比较轻微。

四聚体技术检测原发性胆汁性肝硬化患者血循环中抗原特异性T细胞

目的：定量检测原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者体内抗原特异性T淋巴细胞含量，探讨其在PBC发病机制中的作用。方法：采用四聚体技术检测15例HLA-A＊0201阳性（A2^＋）PBC患者外周血单个核细胞（PBMC）经抗原肽诱导生长的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）中PDC-E2 159～167aa与PDC—E2 165～174aa特异性CD8^＋T细胞频率，以A＊0201阴性（A2^-）PBC患者与A2^＋的其他慢性肝病和健康自愿者为对照组：结果：在A2^＋PBC患者PDC-E2 159～167aa与PDC-E2165～174aa诱导的CTL中可检测到其相应的四聚体／CD8^＋细胞，平均频率分别为0．42%±0．24％（0．17％～1．08％）、0．27%±0．17%（0．05％～0．56％），各对照组的四聚体阳性细胞频率均低于0．1％，差异非常显著（P〈0．001）；A2^＋PBC组中PDC-E2 159～167aa特异性的CTL频率与PDC—E2 165～174aa特异性的CTL无显著性差异（P〉0．05）：处于临床Ⅰ、Ⅱ期的A2^＋PBC患者中CD8^＋特异性CTL频率均较Ⅲ期的要高（P〈0．05）：PDC—E2159～167aa特异性CTL与PDC—E2165～174aa特异性CTL频率在抗．PDC阳性PBC组和抗．PDC阴性组之间均无显著性差异（P〉0．05）：结论：HLA—A＊0201限制性的PDC-E2159～167aa和PDC-E2165～174aa特异性CD8^＋CTL在PBC疾病进展中起重要作用，抗线粒体抗体阴性或抗-PDC阴性PBC患者与阳性患者可能有着相似的T细胞介导的免疫发病机制。

Western-blot法测定重组人纽表位肽12的抗原特异性

利用Western-blot法测定重组人纽表位肽12的抗原特异性,结果显示目标蛋白有明显的显色带.本方法灵敏、准确、简单,适用于重组人纽表位肽12抗原特异性检测.

白癜风患者外周血黑素细胞抗原特异性T细胞、调节性T细胞及自然杀伤T细胞水平及意义

目的探讨白癜风患者外周血黑素抗原特异性CD8^+T细胞、调节性T细胞及自然杀伤T细胞的变化及意义。方法采用流式细胞术对初诊123例白癜风患者(观察组)和30例正常人(对照组)外周血中黑素细胞抗原特异性T细胞(CD8^+Melan-A^+/Tyrosinase^+CTL)、调节性T细胞(CD4^+CD125^+CD127^-Tregs)及自然杀伤T细胞(CD3^+TCRα24^+β11^+NKT)进行定量分析并进行比较。结果观察组CD8^+Melan-A^+/Tyrosinase^+CTL水平显著高于对照组(P<0.05);CD4^+CD125^+CD127-Tregs、CD3^+TCRα24^+β11^+NKT水平均低于对照组(均P<0.05。不同分期白癜风患者外周血各种T细胞表达水平比较中,CD8^+Melan-A^+/Tyrosinase^+CTL在各期中均高于对照组(均P<0.05);CD4^+CD125^+CD127^-Tregs、CD3^+TCRα24^+311^+NKT水平仅在进展期中均低于对照组(均P<0.05),稳定期则无统计学差异。3种细胞水平与患者的白斑面积明显相关(r=0.929、-0.982、-0.957,均P<0.01。结论 CD8^+Melan-A^+/Tyrosinase^+CTL、CD4^+CD125^+CD127^-Tregs、CD3^+TCRα24^+β11^+NKT水平的异常导致白癜风患者体内免疫调节功能失衡,与白癜风的发生、发展有密切关系。

主要组织相容性复合体-肽四聚体技术及其在定量检测抗原特异性T细胞中的应用

四聚体(tetramer)技术是近来发展的一种可直接检测抗原特异性T细胞(antigen specific Tcells,AST)的新方法,在病毒感染、肿瘤、自身免疫病研究及抗原肽免疫优势表位筛选中有着广阔的应用前景。文章简要介绍主要组织相容性复合体(MHC)-抗原肽与T细胞表面受体作用的分子基础、四聚体分子构建及由此衍生的四聚体方法技术类型,并就该技术应用于临床疾病的AST研究现状进行综述。

普氏立克次体120kDa表面蛋白N端和C端重组蛋白的抗原特异性研究

用免疫印迹和酶联免疫吸附试验分析普氏立克次体N端和C端重组蛋白,发现2个重组蛋白除与普氏立克次体免疫血清发生特异性反应外,并与立氏立克次体免疫血清发生反应,这2种立克次体也被这2个重组蛋白免疫血清所识别,提示这2个重组蛋白含有普氏和立氏立克次体的共同抗原决定簇。

甲氨蝶呤对类风湿关节炎环瓜氨酸肽抗原特异性T细胞体外增殖的影响

目的观察甲氨蝶呤(MTX)对类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)患者环瓜氨酸肽抗原特异性T细胞(Circum-citrul-linated peptide antigen special Tcell,CCP/AST)体外增殖水平的影响。方法体外分离、培养RA患者外周血淋巴细胞,分别设:空白组:不加任何干预药物;CCP组:仅加CCP干预(CCP终浓度为20 mg.L-1);甲氨喋呤(MTX)组:同时加CCP与MTX干预(CCP与MTX终浓度均为20 mg.L-1);体外培养72 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖(OD)水平。结果CCP可以显著诱导RA患者环瓜氨酸肽抗原特异性T细胞(CCP/AST)体外增殖(P<0.01),在此基础上加入MTX后,CCP/AST增殖状态被显著抑制(P<0.01)。结论MTX对RA患者CCP/AST的增殖水平有显著的抑制作用,推断MTX做为RA临床治疗的经典用药,抑制RA患者CCP/AST的活化、增殖,可能是其治疗RA的有效途径之一。

重组人Jo-1自身抗原的克隆、原核表达及抗原特异性鉴定

目的:旨在获得高纯人Jo-1抗原(即组氨酰-tRNA合成酶)。方法:利用RT-PCR从人胎盘总RNA中获得Jo-1的编码基因,并分别用IMPACT-CN和pMAL系统的pTYB11、pMAL-c质粒,构建了表达载体,转化至大肠杆菌ER2566、BL21。结果:经筛选与鉴定,得到阳性重组子诱导表达后均获得Jo-1融合蛋白。Western blot显示,这两种融合蛋白都具有Jo-1抗原特异性,即仅与含Jo-1抗体的多肌炎和皮肌炎自身免疫病患者血清反应,而与正常人以及188例含有其他自身抗体(分别为RNP阳性、Sm阳性、Ro/La阳性和RNP/Ro阳性)的患者血清均为阴性反应。结论:在两种表达载体中,pMAL-c-Jo-1的表达量超过菌体蛋白的50%,而且以可溶性形式存在,有利于分离纯化,为临床检测创造了条件。

舌下抗原特异性免疫治疗过敏性鼻炎的临床疗效评价

目的探讨舌下抗原特异性免疫治疗过敏性鼻炎的临床疗效,为临床上过敏性鼻炎治疗方案的选择提供依据。方法选择2015年6～12月期间惠州市第三人民医院耳鼻喉科收治的122例过敏性鼻炎患者为研究对象,根据随机数表法分为观察组和对照组,每组61例,对照组患者予常规应用开瑞坦和内舒拿治疗,观察组在此基础上联合应用舌下抗原特异性免疫治疗,总疗程为2年。比较两组患者治疗前后过敏性鼻炎症状评分和药物应用评分的变化,记录治疗期间药物不良反应发生情况。结果治疗后,观察组患者的鼻炎症状评分和药物应用评分分别为(2.74±0.93)分、(0.45±0.28)分,明显低于对照组的(3.46±1.18)分、(0.96±0.42)分,差异均有统计学意义(P<0.05);两组患者治疗期间均无严重不良反应发生。结论舌下抗原特异性免疫治疗过敏性鼻炎可以有效缓解患者的临床症状,具有确切的疗效和较好的安全性。

抗原特异性免疫治疗对过敏性鼻炎的疗效及免疫功能的影响

目的探讨抗原特异性免疫治疗(SIT)对过敏性鼻炎(AR)的疗效及免疫功能的影响。方法门诊收治持续性AR患者82例,随机分为观察组和对照组,各41例。观察组给予标准化屋尘螨变应原制剂皮下注射,对照组在发病期给予鼻内吸入表面激素或全身抗组胺药物等对症治疗。结果观察组临床总有效率(95.12%)高于对照组(78.05%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组临床症状、体征总评分及用药情况评分均较治疗前下降,治疗1年后低于治疗半年时,且均低于对照组。治疗后,对照组仅IL-4水平下降;观察组IL-2、IFN-γ水平上升,IL-4、IL-5水平下降,且升高或降低的幅度均优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论对AR患者采取SIT治疗能够缓解临床症状,降低其对药品的需求,改善免疫功能。

抗原特异性T细胞活化试验对结核病鉴别诊断的价值

目的建立抗原特异性T细胞活化试验方法,用于结核病的鉴别诊断。方法采用纯化蛋白衍生物(PPD)在体外对58例结核患者和42例非结核患者外周血细胞进行刺激后,定量检测抗原特异性细胞分泌γ-干扰素(IFN-γ),比较结核患者与非结核患者免疫应答的差别。结果结核组PPD刺激培养后IFN-γ的含量显著高于非结核组(P<0.01)。结论该方法可用于结核病与其它胸部疾病的鉴别诊断。

利用结核分枝杆菌抗原特异性γ-IFN体外释放测定评估抗结核治疗疗效的临床应用价值

探讨利用结核分枝杆菌抗原特异性γ-IFN体外释放测定评估抗结核治疗疗效的临床应用价值。研究了66例培养阳性肺结核病人抗结核治疗过程中抗原特异性γ-IFN体外释放测定结果的变化,并与结核菌素皮试结果的变化相比较。结果,抗原特异性γ-IFN体外释放测定于抗结核治疗前期(满2个月)的阳性率显著高于后期(疗程满6个月)[55/66(83.3%)vs12/66(18.2%);P≤0.01],而PPD结素皮试于抗结核治疗前期及后期的阳性率分别为[50/66(75.8%)vs38/66(57.6%);P>0.05]。结论:结核分枝杆菌抗原特异性γ-IFN体外释放测定评估抗结核治疗疗效较PPD结素皮试临床应用价值更大。

受体T淋巴细胞克隆的建立及其抗原特异性的检测

目的 建立受体T淋巴细胞克隆后 ,进一步分析检测该克隆针对供体的抗原特异性。方法 供体鼠脾细胞免疫受体鼠 ,再分离、纯化受体鼠T细胞 ,克隆受体T细胞。将动物分组免疫 ,对各组受体作电镜观察淋巴细胞超微结构、MTT法测定淋巴细胞增生试验以及流式细胞分析T细胞亚群的变化 ,分析检测该克隆针对供体的抗原特异性。结果 ①受体针对供体抗原特异性T淋巴细胞克隆稳定建立 ;②经免疫组的受体T细胞超微结构改变显著 ,淋巴细胞增生试验及流式细胞分析结果与对照组的差异有显著性意义 (t>t0 0 5)。结论 成熟T淋巴细胞 ,在一定条件下仍可发生分裂和增生 ,形成克隆。通过供体脾细胞抗原特异性刺激 。