慢性HBV感染患者抗原特异性CTL的肝损伤作用

目的探讨抗原表位特异性CTL在慢性乙型肝炎发病中的作用。方法用4个HBV抗原表位肽四聚体对外周血中抗原特异性CTL进行检测[HBV抗原表位肽分别为HBcAg18-27，序列为FLPSDFFPSV（C18），HBsAg183～191，序列为WLSLLVPFV（E183），HBeAg335-343，序列FLLTRILTI（E335），多聚酶P的575～583序列为FLLSLGIHL（P1575）]，检测慢性乙型肝炎患者肝炎发作时病毒抗原表位特异性CTL出现频率，分析抗原表位特异性CTL频率与血清ALT水平的相关关系，分析各组间抗原表位特异性CTL频率的差异。结果36例慢性HBV感染患者抗原表位特异性CTL检测阳性33例（92％），HBeAg183～191表位特异性CTL频率高于其他3个（P〈0．05）。统计分析抗原表位特异性CTL频率血清ALT水平相关性不显著；分组对比发现血清ALT升高5-10倍组多个抗原表位特异性CTL水平高于其他组（P〈0．05）。结论慢性HBV感染患者外周血中存在抗原表位特异性CTL，但特异性CTL的存在并不能代表保护性免疫。认为抗原表位特异性CTL在肝炎发作过程中具有肝组织损害作用，肝损伤作用可能比较轻微。

抗原特异性CTL检测新技术——可溶性MHC-肽四聚复合物法的功能和应用

可溶性MHC 肽四聚复合物法是近年来发展起来的一种定量检测抗原特异性CTL的新方法。该法将特异性抗原肽段、可溶性MHC分子及 β2 微球蛋白在体外正确折叠构建四聚体 ,并结合流式细胞仪定量检测外周血及组织中抗原特异性CTL的比率 ,广泛用于感染性疾病、肿瘤及自身免疫性疾病的研究 ,是一种很有前景的科研工具。

MHCI—肽四聚复合物:检测抗原特异性CTL的新技术

以MHCI—肽四聚复合物标记CTL的FACS检测法 ,是新近建立及发展的检测CTL的新技术。该技术以MHCI类分子、β2 m、特异性抗原多肽和生物素 亲和素构建四聚复合物 ,模拟特异性靶细胞膜表面的MHCI类分子—肽复合物 ,识别并结合T细胞群中的特异性CTL ,以流式细胞仪荧光检测和分拣CTL。该技术不仅可定性检测CTL ,还可定量测定T细胞群中特异性CTL的百分率 ,将在病毒感染、肿瘤等疾病的细胞免疫学研究中起重要作用。

抗原表位特异性CTL在慢性HBV感染肝损伤和抗病毒中的作用研究

目的:探讨抗原表位特异性CTL在肝炎发作中的抗病毒和肝损害作用.方法:用四个HBV抗原表位肽四聚体对外周血中抗原特异性CTL进行检测,(HBV抗原表位肽分别为HBcAg18-27,序列为FLPSDFFPSV(C18),HBsAg183-191序列为WLSLLVPFV(E183),HBeAg335-343序列FLLTRILTI(E3.35),多聚酶P的575-583序列为FLLSLGIHL(P575))检测慢性乙型肝炎患者肝炎发作时病毒抗原表位特异性CTL出现频率,统计分析抗原表位特异性CTL频率与病毒载量和血清ALT水平的相关关系.将所有检测的病例按照血清ALT水平高低重新分组进行对比,分析各组间抗原表位特异性CTL频率的差异.结果:36例慢性HBV感染患者抗原表位特异性CTL检测阳性33例(91.7%),HBeAg183-191表位特异性CTL频率高于其他三个(P<0.05).统计分析抗原表位特异性CTL频率与病毒载量和血清ALT水平相关性不显著;分组对比发现血清ALT升高5-10倍组多个抗原表位特异性CTL水平高于其他组(P<0.05).结论:慢性HBV感染患者外周血中存在抗原表位特异性CTL,但特异性CTL的存在并不能代表保护性免疫.认为慢性HBV感染肝炎发作时抗原表位特异性CTL反应增强,抗原表位特异性CTL在肝炎发作过程中具有抗病毒和肝组织损害双重作用,肝组织损害可能比较轻微,严重的肝损害可能是非特异性细胞造成.

sHLA-A*0201-抗原肽四聚体的构建与功能检测

目的:构建有功能的sHLA-A*0201-抗原肽四聚体,建立一套HLAⅠ类分子/抗原肽的四聚体制备技术。方法:利用基因工程及体外折叠技术构建sHLA-A*0201-LMP2A426-434复合物分子,并在BirA酶的作用下生物素化,与荧光标记的亲和素衍生物以分子数4∶1结合而形成HLA-A*0201-LMP2A426-434四聚体。获得的四聚体对长期混合淋巴细胞培养中增殖的抗原特异性CTL进行检测,同时用细胞毒实验验证。结果:荧光标记的亲和素与生物素化的HLA-A*0201-抗原肽复合物分子正确结合,制备的四聚体能够与长期混合淋巴细胞培养出的特异性T细胞结合。结论:从结构与功能上证实成功地获得有功能的HLA-A*0201-抗原肽复合物四聚体。为进一步研究T细胞识别机制与功能奠定了基础,也为过程复杂的HLA-抗原肽四聚体制备提供了可行的免疫学监控方法。

交叉呈递-树突状细胞行使功能的重要途径

树突状细胞 (DC)是天然免疫和获得性免疫的重要调节剂。DC的一重要特征是通过交叉呈递使外源性抗原进入MHCⅠ类途径 ,从而将外源性的蛋白质抗原呈递给CD8+ T细胞 ,以诱导机体产生抗原特异性CTL。本文从主要的交叉呈递细胞DC入手 ,阐述了影响交叉呈递的因素 ;交叉呈递中细胞之间的相互作用及交叉呈递的最终结果交叉激活和交叉耐受。对宿主抵抗病原微生物感染、诱导抗肿瘤免疫反应、疫苗研制和维持外周耐受有重要的指导意义。

sH-2K^d-HBc四聚体的构建及其初步的检测应用

目的:sH-2Kd-HBc复合物四聚体的构建与检测,为进一步检测抗原特异性T细胞,探讨免疫发病机制奠定基础。方法:将四个生物素化的可溶性复合物单体与荧光标记的亲和素结合形成四聚体。采用HBcAg真核表达质粒(pcDNA3-C)通过不同的途径免疫小鼠,获得针对核心抗原的特异性CTL,与制备的四聚体共孵育,结合流式细胞仪术进行检测。结果:三种免疫方法所得到的细胞中,抗原特异性CTL频数较对照组都有明显提高(0.24%,0.26%,0.36%vs 0.07%,P≤0.05)。显示制备的四聚体能与抗原特异性T细胞结合,具有检测功能。三种不同的免疫途径所引起的抗原特异性的体液免疫应答和细胞免疫应答强度各有不同。与传统的肌肉注射组相比,基因枪免疫组的体液免疫应答水平较弱而细胞免疫应答水平较强。高压水注射(HDI)组的体液免疫应答和细胞免疫应答水平都要明显高于肌肉注射组结论:获得了功能性的sH-2Kd-HBc复合物四聚体,为进一步检测抗原特异性T细胞奠定基础。