深圳地区无偿献血者群体CD36抗原缺失型的表型分析

目的分析深圳地区无偿献血者群体CD36抗原缺失型的筛查和表型情况。方法应用单克隆抗体和流式细胞技术在327名献血者中检测CD36抗原缺失型个体,应用血小板单克隆抗体捕获酶联免疫技术和流式细胞术筛查献血者血浆中的血小板抗体。结果此次筛查得到的深圳献血者的CD36抗原缺失型频率为3.06%(10/327),其中Ⅰ型占0.31%(1/327),Ⅱ型占2.75%(9/327);在3名女性CD36抗原缺失型献血者的血浆中,均未检出血小板反应性抗体,包括抗-CD36。结论深圳地区献血者群体中存在CD36抗原缺失型个体,其频率与亚洲其他地区人群的频率相当;对CD36的同簇免疫应该予以重视。

Rh抗原缺失Dc-型抗体研究

目的研究Rh抗原缺失患者血清中抗体性质和效价。方法结合其临床表现和家系调查,利用血型血清学方法对RhDc-孕妇体内的抗体性质及效价进行分析。结果患者血型为B、Dc-型,其亲代血清学表型为父AB、Dccee型,母O、DCCee型,患者血清中存在IgM及IgG抗-Hr0,效价分别为128、512;IgM及IgG抗-e,效价分别为16、8。结论国内外有报道在RhD-和Rh-患者中查到IgG性质抗-Hr0,在RHDc-患者体内查出IgM和IgG性质的抗-Hr0和抗-e在国内外尚属首次报道;该患者体内RhEe缺失可能的原因为RHCE基因的遗传和变异;IgM型抗-Hr0会干扰血型检测,导致ABO正反定型不符,在临床工作中应引起注意。

3例H抗原缺失血型的血清学特点及家系调查

目的:研究济宁地区H抗原缺失血型的血清学特点及家系遗传情况。方法:利用血清学方法检测3例先证者的ABO、H和Lewis血型,并测定唾液中的血型物质;通过吸收洗脱实验证实红细胞上表达弱A或弱B。结果:3例H抗原缺失血型均为类孟买型(分泌型),2例为Bh,1例为Ah,血清中均检出抗-H或抗-HI。结论:3例H抗原缺失血型均为类孟买型,其中1例先证者父母存在近亲血缘关系。

采用Gal抗原缺失鼠评价GGTA1/B4GalNT2/CMAH基因敲除猪软骨组织的免疫原性

目的比较在Gal抗原缺失小鼠皮下分别植入GGTA1/B4GalNT2/CMAH基因敲除猪软骨组织与野生型猪软骨组织所引起的免疫反应。方法将三基因敲除猪软骨组织(KO组)与野生型猪软骨组织(WT组)分别植入Gal抗原缺失小鼠皮下4周,设立假手术组(con)作为阴性对照。4周后抽取小鼠血清检测总IgM抗体和抗Gal抗体。结果野生型猪软骨(WT)材料植入组小鼠总IgM含量平均在(0.525±0.224)mg/ml,显著高于阴性对照(Con)组小鼠总IgM平均含量(0.121±0.050)mg/ml(P<0.05),但与三基因敲除猪软骨(KO)组小鼠总IgM平均含量(0.313±0.061)mg/ml无统计学差异。野生型猪软骨组织具有比三基因敲除猪软骨组织组和对照组更高的抗α-Gal IgM水平(P<0.05),而三基因敲除组与对照组相比无统计学差异(P>0.05)。结论上述结果表明GGTA1/B4GalNT2/CMAH基因敲除猪软骨组织在体内几乎没有免疫反应,可作为软骨缺损修复材料。

α-半乳糖基抗原缺失模型兔的研制与评价

背景:有研究表明一种称为α-Gal的糖抗原是动物源性生物材料或异种器官移植引起超急性免疫排斥反应的主要靶抗原。目的:研制Gal抗原缺失兔模型,预期用于评价植入性医疗器械,其局部植入后对宿主的局部免疫反应及非特异性炎症反应风险。方法:选用SPF级6-8月龄新西兰大白兔作为模式动物蓝本,制备Gal抗原缺失兔模型。采用CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术,针对调控兔子Gal抗原表达的GGTA1基因第8外显子设计构建2条相辅的sgRNA。经转录后将GGTA1 sgRNA mRNAs与Cas9 mRNA共显微注射到体外培养的兔子受精卵中,继续短暂体外培养后植入代孕母兔体内,经自然妊娠获得仔兔。基因编辑成功与否通过凝胶电泳和基因测序进行验证。Gal抗原的表达参照行业标准给出的方法(YY/T 1561-2017)进行检测。研究经中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所动物伦理委员会批准[批准号:中检动(福)第2017(B)007号]。结果与结论:①基因编辑后的胚胎被转移至4只代孕兔体内,自然妊娠后获得15只基因编辑仔兔,仔兔的外观发育及进食行为等未见异常;②凝胶电泳及基因测序结果显示15只仔兔中有14只的靶向基因被成功编辑,但编辑的碱基并不相同;随机检测其主要脏器Gal抗原,表达均降低了99.96%以上;③结果表明,Gal抗原缺失兔子有望用于动物源性医疗器械的免疫原性风险评价和异种骨、角膜等原位植入实验,以便能够更客观科学地评价动物源性医疗器械的安全性和有效性。

重庆地区无偿献血者CD36抗原缺失的表型及基因型研究

目的探索CD36基因型与表型之间的关系。方法应用流式细胞技术对重庆地区400名献血者的CD36基因表达进行检测,并针对CD36抗原阴性的样本用聚合酶链式反应(PCR)为基础的基因测序对其外显子(exon)2—14进行测序和比对。结果重庆地区献血者CD36抗原缺失型频率为0.75%(3/400),均为Ⅱ型缺失,其频率为0.75%(3/400)。测序分析显示3个表型缺失样本在CD36基因编码区域内没有发生突变,但均在CD36基因起始密码子上游位于外显子2 nt-132(rs1049654)的位点发生了A>C突变。结论重庆地区CD36缺失型频率与中国其他地区存在一定差异,CD36基因的表达,除了编码区域外,还可能受到该基因非编码区域的影响。

基于Gal抗原缺失小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞试验敏感性初探

目的:采用腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验考察Gal抗原缺失小鼠评价动物源材料对固有免疫影响的敏感性。方法:Gal抗原缺失小鼠(GGTA1 KO)经兔血预免后,随机分为空白对照组(生理盐水)、地塞米松抑制性阳性对照组、植物血凝素刺激性阳性对照组、牛跟腱样品植入组。地塞米松阳性对照组与植物血凝素阳性对照组参照YY/T 1465.4-2017进行给药。牛跟腱植入组皮下植入牛跟腱(2.4cm2/只),周期为4周。最后所有实验组小鼠均腹腔注射鸡血红细胞,参照YY/T 1465.4-2017计数巨噬细胞和被吞噬的鸡血红细胞个数,并计算吞噬百分数和吞噬指数。结果:Gal抗原缺失小鼠的植物血凝素阳性对照组的细胞吞噬百分数和吞噬指数为39.05%和2.02,略高于空白对照组的32.15%和1.87,但无统计学差异;牛跟腱植入组的细胞吞噬百分数和吞噬指数分别为55%和2.59,均高于空白对照组,存在显著性差异(P<0.01);地塞米松抑制性阳性对照组吞噬百分数和吞噬指数分别为20.60%和1.43,低于空白对照组(P<0.05,P<0.01);研究结果表明,Gal抗原缺失小鼠对植物血凝素有一定程度的刺激反应,而地塞米松可明显降低吞噬百分数和吞噬指数,说明试验体系基本成立。牛跟腱植入物引起了吞噬细胞吞噬百分数和吞噬指数的显著升高,提示牛跟腱具有免疫原性风险。结论:在腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞试验中,Gal抗原缺失小鼠对地塞米松抑制性阳性对照表现出显著的抑制效应,而牛跟腱植入物的刺激引起了明显的刺激效应,表明Gal抗原缺失小鼠对于评价动物源性生物材料对固有免疫的影响具有一定应用价值。

Gal抗原缺失小鼠的应用示范:动物源性硬脑膜补片的免疫原性反应评价

目的:采用Gal抗原缺失模式小鼠评价动物源性硬脑膜补片残余免疫原风险,考察Gal抗原缺失模式小鼠的应用价值。方法:在经外源性Gal抗原(兔血红细胞)预免的Gal抗原缺失小鼠皮下分别植入硬脑膜补片(产品)与牛心包(原材料)4周,分析小鼠血清总抗体,特异性抗-Gal抗体,与免疫排斥反应及炎症反应相关的细胞因子表达水平,脾脏淋巴细胞亚型及胸腺、局部病理,综合考察各实验组的差异。结果:牛心包植入组与对照组相比,小鼠血清抗-Gal IgG和抗-Gal IgM水平显著升高(分别为约4倍和约1.7倍);而硬脑膜补片植入组小鼠血清抗-Gal IgG、抗-GalIgM水平与对照组相比均无明显差异。除硬脑膜补片植入组小鼠血清IL-4含量下降之外,其余细胞因子包括IL-1β、IL-10、IL-2、IL-6、IL-12P70与IFN-γ含量,血清总IgG、IgM水平在各组间均无显著差异。脾脏淋巴细胞亚型分析显示,硬脑膜补片植入组和心包植入组与对照组相比均无显著性变化。胸腺病理未见异常;局部病理显示硬脑膜补片植入组炎症:Ⅰ-Ⅱ级,纤维化:Ⅰ-Ⅱ级,较心包植入组(炎症:Ⅱ-Ⅲ级,纤维化:Ⅱ-Ⅲ级)反应减轻。研究结果表明动物源性硬脑膜补片产品的Gal抗原介导的免疫原性反应与原材料相比显著降低。然而,硬脑膜补片植入组的植入物局部仍存在一定程度的炎症反应和纤维化现象。结论:硬脑膜补片残余免疫原风险与原材料相比显著降低,与对照组无显著性差异;Gal抗原缺失模式小鼠血清抗-Gal IgG、抗-Gal IgM能够科学地评价动物源性生物材料Gal抗原相关的免疫原性,可以作为动物源性生物材料脱抗原处理工艺有效性的特异性指标之一;提示Gal抗原缺失模式小鼠对动源性生物材料的异种免疫原性风险评价具有极高的应用价值。

应用Gal抗原缺失小鼠评价可降解异种脱细胞真皮基质的免疫原性

目的:采用Gal抗原缺失小鼠评价脱细胞真皮基质及其降解过程中的残余免疫风险。方法:Gal抗原缺失小鼠经兔血预免后,随机分为对照组、T1组、T2组。T1组腿部肌肉间植入牛真皮基质(原材料),T2组肌肉间植入脱细胞真皮基质,对照组进行"假手术"操作。在植入后的4、12、52周分别取材,用ELISA方法检测小鼠血清总IgG、IgM含量和血清抗-Gal IgG、IgM水平;用流式细胞仪检测血清IL-4、IL-10、IL-12p40、IFN-γ等细胞因子含量,以及脾淋巴细胞亚型百分比等;进行脾体外淋巴细胞增殖试验,采用CCK-8试剂检测淋巴细胞增殖率;取胸腺、脾脏以及包裹植入物的局部肌肉样本,HE染色后进行组织病理学评价。通过与对照组的比较,进行牛真皮基质原材料和脱细胞真皮基质的免疫毒理学风险评价。结果:与对照组相比,小鼠植入牛真皮基质原材料的T1组小鼠血清抗-Gal IgG含量和体外脾脏淋巴细胞增殖率有统计学显著性差异。T1组小鼠在4周时,血清抗-Gal IgG平均含量是对照组的2倍;植入12周时,血清抗-Gal IgG平均含量继续升高,达到对照组的近7倍,统计学分析均有显著性差异,表明由降解引起的Gal抗原持续暴露或暴露增加,致使小鼠血清抗-Gal IgG含量升高;在植入52周时,血清抗-Gal IgG平均含量回复到对照组水平。植入12周时,T1组小鼠的脾淋巴细胞体外培养3、7d时,淋巴细胞增殖率分别是对照组的211%和243%。组织病理学分析显示T1组牛真皮基质植入后4周时局部反应为重度刺激,12周时为中度刺激,52周时为轻微刺激。植入脱细胞真皮基质的T2组在4、12、52周的不同时点,小鼠血清总IgG、IgM含量,抗-Gal IgG和IgM含量,血清细胞因子,脾淋巴细胞分型和淋巴细胞体外增殖等不同指标的检测结果与对照组相比均无统计学差异;组织病理学分析显示T2组脱细胞真皮基质植入后4周时局部反应为中度刺激,12周时为轻微刺激,52周时为无刺激。而且,脱细胞真皮基质在4、12、52周时的植入局部反应明显低于真皮基质原材料。结论:牛真皮基质(原材料)及其降解产物具有引起Gal抗原缺失小鼠血清抗-Gal IgG含量升高和脾脏淋巴细胞增殖的免疫原性;而脱细胞真皮基质在植入后降解过程中的免疫反应与对照组相比均无显著性差异。这些结果表明脱细胞处理工艺降低了脱细胞真皮基质的特异性免疫反应。

新疆地区母源CD36抗原缺失型表型的分析

目的调查新疆地区母源CD36抗原缺失情况,并分析母源CD36抗原缺失与新生儿发生同种免疫血小板减少症(NAIT)的关系。方法选取2019年5月至2020年6月我院产科门诊就诊的610例孕妇作为研究对象,于就诊当天检测孕妇CD36抗原、血小板抗体,统计新疆地区主要民族[维吾尔族、汉族]孕妇CD36抗原缺失情况及血小板抗体阳性率;于新生儿出生24h内检测其血小板计数(PLT),统计NAIT发生情况。结果纳入的610例孕妇,经检测CD36抗原阳性占98.69%,CD36抗原缺失占1.31%,均为Ⅱ型抗原缺失,无Ⅰ型抗原缺失;汉族、维吾尔族孕妇CD36抗原缺失情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。汉族、维吾尔族孕妇血小板抗体阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。汉族新生儿出生24 h内PLT高于维吾尔族,差异有统计学意义(P<0.05);两族新生儿其他资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论新疆地区孕妇存在Ⅱ型CD36抗原缺失,且汉族、维吾尔族孕妇CD36抗原缺失率无显著性差异,血小板抗体、CD36抗体阳性率无显著性差异。

CD36抗原缺失与血小板输注无效关系的研究进展

随着输血技术的发展及成分输血的出现,资源匮乏的血液得到充分利用同时也减少了输血不良反应的发生,成分输血在我国得到全面推广。血小板是血液凝固中的重要成分,血小板输注是防止大出血和提高血小板减少患者生存率的主要措施,目前多用于外伤大出血患者及血液和肿瘤患者。但是反复输注血小板会刺激免疫系统产生血小板特异性抗体或血小板表面相关抗体,

喉癌人类组织相容性抗原Ⅰ缺失与癌组织中淋巴细胞浸润的研究

目的 检测喉癌组织人类主要组织相容性抗原 (humanleucotyteantigen ,HLA)表达缺失情况 ,探讨其表达与肿瘤浸润淋巴细胞 (tumorinfiltratinglymphocyte ,TIL)及肿瘤细胞恶性度的关系。方法 2 0 0 1年 2月～ 2 0 0 1年 5月应用特异性鼠抗人HLAⅠ类分子等单克隆抗体与喉癌组织结合 ,通过免疫组化法 ,对 1993～ 1998年 6 4例手术切除喉癌标本进行检测。结果 6 4例喉癌组织中有 5 7例HLAⅠ抗原阳性表达 ,7例阴性表达 ,阴性表达率为 10 9% (7/ 6 4 ) ;HLAⅠ抗原阳性组织 ,浸润到肿瘤实质的CD+ 3 T细胞和CD+ 8T细胞数量明显多于HLAⅠ抗原阴性组织 ;随着HLAⅠ抗原表达下调 ,肿瘤细胞恶性度增加。随访 5 2例 ,3年生存率与HLAⅠ抗原缺失无关 (P >0 0 5 )。结论 部分喉癌组织存在HLAⅠ抗原丢失 ,且其丢失不利于细胞毒性T淋巴细胞向肿瘤实质浸润与杀伤。HLAⅠ抗原表达缺如 ,可能促进了细胞恶变的发生发展 。

髓系白血病导致ABO血型系统抗原减弱或缺失3例临床分析

目的探讨髓系白血病(AML)导致ABO血型系统抗原减弱或缺失的血清学特点及临床输血问题。方法对3例血型抗体减弱或缺失患者血液样本采用血清学方法进行ABO血型鉴定、直接抗人球蛋白试验、吸收放散试验,测定唾液中血型物质。结果 3例AML患者ABO血型系统抗原出现不同程度减弱或缺失,经治疗病情缓解后2,例接受复检者ABO定型恢复正常。结论某些AML白血病患者可能出现A和(或)B抗原减弱甚至缺失,如果此时只做正定型会导致血型误定。

4例急性单核细胞白血病导致ABO血型系统抗原减弱的临床分析

回顾总结4例急性单核细胞白血病患者红细胞ABO血型抗原减弱或缺失的实验室检测及临床输血情况,为输血前避免弱血型抗原的漏检及错误定型提供检测方法建议。结果同时提示,ABO血型抗原的暂时性减弱与疾病进展期有关。

检测RhE抗原诊断新生儿溶血病1例体会

Rh抗原缺失是非常罕见的由RhD基因删除、RhCE基因突变失去活性所致疾病，现在报道的有D-、De-、DCW-、-。本院收治1例由于母亲Rh血型系统中E抗原缺失导致的新生儿溶血病（hemolyticdiseaseofnewborn，HDN）患儿，现报告如下。

类孟买血型OHm^B的血型血清学及家系调查

目的：发现类孟买血型OHm^B先证者家系中其他表现型个体，为紧急输血时寻找相合供者．方法：对类孟买血型OHm^B先证者家系成员进行ABO血型正反定型、Lewis血型鉴定、吸收放散试验检测红细胞表面的ABH抗原及血清中抗-A、抗-B及抗-H，中和抑制试验检测唾液中血型物质．结果：类孟买血型OHm^B先证者及其2位同胞兄弟均被鉴定为类孟买血型OHm^B，其中2例检出抗-H抗体，1例未检出抗-H抗体，先证者及其兄弟的子女中均未发现类孟买血型OHm^B表现型个体．结论：类孟买血型符合隐性遗传规律，对于罕见的类孟买型个体的家系，尤其是同胞兄妹进行血型血清学调查，有发现新的相同表现型个体的可能，需输血时可互为供者．

广州地区伊朗献血人群CD36表型筛查及基因型鉴定

目的了解广州地区伊朗籍献血者CD36表型及基因型。方法对2016年在广州血液中心捐献机采血小板的53例伊朗人献血者标本,应用流式细胞仪分别检测血小板和单核细胞上CD36抗原的表达。对CD36抗原表达异常者提取DNA,采用PCR-SBT测序做CD36的基因型鉴定并做基因突变分析。结果本组伊朗人群的CD36抗原表达异常率7.55%(4/53),其中2例的CD36抗原在血小板上表达含量低,1例为血小板和单核细胞上均无表达(即CD36Ⅰ型缺失),1例为单核细胞上CD36表达量低,由此得出CD36缺失表达的频率为1.89%(1/53)。PCRSBT法分析:CD36抗原表达异常4例的CD36基因型中,血小板上低表达CD36抗原的2例发生基因突变,分别是exon 10-975T/G和exon11 del CTA,且均为新的基因突变;2例CD36基因型正常。结论本组伊朗献血人群里CD36抗原表达异常者中存在新的基因突变,其对CD36抗原表达的影响尚需进一步认证。

一例Ah-分泌型个体的分子生物学背景的分析

目的研究Ah-分泌型个体的分子基础。方法经血型血清学方法鉴定红细胞上H抗原缺失、但存在弱A抗原的Ah-分泌型个体,用PCR-SSP法鉴定ABO基因型,对FU-T1和FU-T2编码区域进行扩增,并对扩增产物直接测序,FU-T1进一步做克隆测序分析。结果血清学结果显示该个体红细胞不凝集抗H血清,但与抗A定型血清呈弱凝集,Lewis血型表现型为Le(a-b+),唾液中有A、H物质,ABO基因型为A102B02;FU-T1基因型为h35h328,h35等位基因(nt35C>T),使12位(Ala)丙氨酸被(Val)缬氨酸置换;h328等位基因(nt328G>A),导致110位Ala(丙氨酸)被Thr(苏氨酸)置换;FU-T2基因为正常野生型Se357Se357。结论两个错义突变C35T、G328A可能是引起该例Ah-分泌型H抗原缺失、但存在A抗原的弱表达的原因。

类孟买血型OHm^A1例的鉴定及输血安排

目的鉴定类孟买血型OHmA,为患者制定输血方案。方法对1例ABO正反定型不相符患者,用单克隆抗体检测红细胞ABH及Lewis抗原;用A、B、O型红细胞检测ABO血型抗体及不规则抗体;用吸收放散试验检测红细胞弱A、弱B抗原;用中和抑制试验检测唾液中ABH血型物质。采用自体输血,并准备37℃与患者血浆反应弱的A型异体红细胞。结果该患者为类孟买血型OHmA,手术中输入700ml自体全血即完成手术,未输异体血。结论ABO血型鉴定时坚持正、反定型可避免OHmA漏检,对OHmA的准确鉴定有赖于多种血型血清学技术;OHmA患者可采用自体输血。