目的克隆、表达青海省藏羊源细粒棘球蚴（Echinococcus granulosus）抗原B8/2（Eg Ag B8/2）基因,并进行免疫学鉴定。方法用RT-PCR扩增Eg Ag B8/2基因c DNA,构建原核表达载体pET-Eg Ag B8/2,转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中诱导表达,十...目的克隆、表达青海省藏羊源细粒棘球蚴（Echinococcus granulosus）抗原B8/2（Eg Ag B8/2）基因,并进行免疫学鉴定。方法用RT-PCR扩增Eg Ag B8/2基因c DNA,构建原核表达载体pET-Eg Ag B8/2,转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）对诱导表达后的蛋白进行鉴定。结果克隆的Eg Ag B8/2基因长335 bp,序列分析表明与已报道的Eg Ag B8/2 c DNA序列的同源性为98%~100%,原核表达载体pET-Eg Ag B8/2构建正确。诱导表达后,通过SDS-PAGE检测,上清中有大量目的蛋白表达。纯化的蛋白经Western blotting鉴定为目的蛋白。结论成功克隆了青海省藏羊源Eg Ag B8/2基因,构建了原核表达载体,诱导表达后的蛋白为目的蛋白。展开更多
文摘目的克隆、表达青海省藏羊源细粒棘球蚴（Echinococcus granulosus）抗原B8/2（Eg Ag B8/2）基因,并进行免疫学鉴定。方法用RT-PCR扩增Eg Ag B8/2基因c DNA,构建原核表达载体pET-Eg Ag B8/2,转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白质印迹（Western blotting）对诱导表达后的蛋白进行鉴定。结果克隆的Eg Ag B8/2基因长335 bp,序列分析表明与已报道的Eg Ag B8/2 c DNA序列的同源性为98%~100%,原核表达载体pET-Eg Ag B8/2构建正确。诱导表达后,通过SDS-PAGE检测,上清中有大量目的蛋白表达。纯化的蛋白经Western blotting鉴定为目的蛋白。结论成功克隆了青海省藏羊源Eg Ag B8/2基因,构建了原核表达载体,诱导表达后的蛋白为目的蛋白。
