耐力训练大鼠抗动脉粥样硬化线粒体自噬通路中抗增殖蛋白2的作用

背景:运动可降低血脂,减缓动脉粥样硬化发展。动脉粥样硬化起始于线粒体功能障碍,而抗增殖蛋白2蛋白受耐力训练调控,参与线粒体自噬。目的:验证耐力训练干预动脉粥样硬化中抗增殖蛋白2蛋白在线粒体自噬通路中的作用。方法:将40只Wistar大鼠随机分为对照组、运动组、动脉粥样硬化组和动脉粥样硬化运动组,每组10只,后2组大鼠高脂饮食(9周)联合维生素D注射(第1,3,6周)构建大鼠动脉粥样硬化模型,同时2个运动组大鼠进行跑台递增训练干预9周。干预结束后进行血脂和病理检测观察造模及干预效果;酶标法和Western blot检测线粒体膜电位和自噬相关蛋白表达;免疫荧光观察主动脉中线粒体自噬蛋白的共定位情况。结果与结论:(1)血脂和病理切片显示,与动脉粥样硬化组相比,动脉粥样硬化运动组大鼠血清低密度脂蛋白胆固醇、总胆固醇水平和主动脉脂质沉积面积显著降低(P<0.001)。(2)线粒体膜电位显示,动脉粥样硬化运动组大鼠主动脉线粒体膜电位的显著降低得到逆转(P<0.01)。(3)Western blot显示,与对照组相比,动脉粥样硬化组大鼠线粒体抗增殖蛋白2、LC3Ⅱ/Ⅰ、PINK1和Parkin蛋白表达显著升高(P<0.05),PARL和PGAM5蛋白表达降低(P<0.05);与动脉粥样硬化组相比,动脉粥样硬化运动组大鼠线粒体PINK1和Parkin蛋白表达显著降低(P<0.05),抗增殖蛋白2、LC3Ⅱ/Ⅰ、PARL和PGAM5蛋白表达显著升高(P<0.05)。(4)免疫荧光结果显示,动脉粥样硬化组较对照组LC3和PINK1与TOMM20共定位显著增加(P<0.05),动脉粥样硬化运动组较动脉粥样硬化组LC3与TOMM20共定位显著增加(P<0.05);动脉粥样硬化组较对照组LC3和PARL与抗增殖蛋白2共定位显著增加(P<0.01),动脉粥样硬化运动组较动脉粥样硬化组LC3与抗增殖蛋白2共定位显著增加(P<0.01),PARL蛋白与抗增殖蛋白2共定位显著降低(P<0.01)。(5)结果表明,耐力训练可诱导线粒体内膜自噬受体抗增殖蛋白2表达,促进抗增殖蛋白2与线粒体自噬接头蛋白的结合完成线粒体自噬,恢复线粒体功能,减缓动脉粥样硬化发生。

血清抗增殖蛋白1对脓毒症患者严重程度和预后的预测价值

目的:探讨血清抗增殖蛋白1(PHB1)对脓毒症患者严重程度和预后的预测价值。方法:选择2020年6月—2023年6月我院重症监护病房收治的80例脓毒症和40例脓毒症休克患者作为研究对象。比较2组患者的临床指标、PHB1水平、急性生理与慢性健康状况(APACHEⅡ)评分和序贯器官衰竭评估(SOFA)。根据患者的28d随访期间的生存状况分为存活组和非存活组,比较2组患者的PHB1水平、APACHEⅡ评分和SOFA评分。分析血清PHB1水平与降钙素原(PCT)、APACHEⅡ评分和SOFA评分的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清PHB1对预测脓毒症相关死亡的预测效能。结果:脓毒症休克组患者的白细胞(WBC)、C反应蛋白(CRP)、PCT水平、PHB1、APACHEⅡ评分和SOFA评分均高于脓毒症组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。非存活组患者的PHB1、APACHEⅡ评分和SOFA评分高于存活组,差异均有统计学意义(P<0.05)。PHB1水平与PCT、WBC、APACHEⅡ评分和SOFA评分显著正相关(P<0.01)。ROC曲线分析显示,PHB1预测脓毒症预后的AUC为0.920,敏感度为94.7%,特异度为76.2%。结论:PHB1水平与脓毒症患者的疾病严重程度密切相关,可能是预测脓毒症患者预后的生物标志物。

抑制抗增殖蛋白2增强非小细胞肺癌细胞系A549对厄洛替尼敏感性

目的探讨抗增殖蛋白2(PHB2)在非小细胞肺癌细胞系A549对厄洛替尼(Erl)敏感性中的作用及其机制。方法在A549细胞中转染PHB2小干扰RNA(siPHB2),观察抑制PHB2表达对Erl诱导的细胞增殖和凋亡的影响。利用MitoTracker染色和感染绿色荧光蛋白-微管相关蛋白(GFP-LC3)观察微管相关蛋白(LC3)和线粒体共定位,EdU实验检测细胞增殖,平板集落检测细胞集落形成能力,TUNEL实验检测细胞凋亡,Western blot检测PHB2和LC3Ⅱ蛋白表达水平,用相应试剂盒检测线粒体膜电位、细胞色素c含量和呼吸链复合物Ⅰ/Ⅱ/Ⅴ活性。结果与siPHB2组和siCtrl+Erl组相比,siPHB2+Erl组EdU阳性的细胞数显著减少(P<0.05),集落形成数显著减少(P<0.05),TUNEL阳性的细胞数显著增加(P<0.05),线粒体膜电位显著降低(P<0.05),线粒体呼吸链复合物Ⅰ/Ⅱ/Ⅴ活性均显著降低(P<0.05),线粒体内细胞色素c减少(P<0.05),而细胞质内细胞色素c的增加(P<0.05)。结论抑制PHB2改善A549细胞对Erl的敏感性,其机制可能与抑制PHB2介导的线粒体自噬有关。

含噻吩并[3,2-d]嘧啶的查尔酮类化合物的合成及其抗增殖活性

运用药物分子片段原理及拼合原理,设计并以70.1%~83.9%的收率合成了10个含噻吩并[3,2-d]嘧啶的查尔酮类衍生物,并对该类化合物的体外抗肿瘤细胞增殖活性进行初步研究。通过1HNMR、13CNMR和HRMS(ESI)确证了目标化合物的结构。以人肺腺癌细胞株A549、人肝癌细胞株HepG2和人前列腺癌细胞株PC-33种肿瘤细胞为测试细胞株,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法评价了目标化合物的抗增殖活性。结果表明,10个化合物对3种肿瘤细胞株均具有很好的抑制活性。其中,3-{4-[4-(2-氯噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羰基]苯基}-1-(3,4-二甲氧基苯基)丙基-2-烯-1-酮(Ⅶh)活性突出,对A549、HepG2和PC-33种肿瘤细胞株的半抑制浓度(IC_(50))分别为(0.87±0.05)、(2.43±0.16)和(2.02±0.10)μmol/L,优于阳性对照药索拉非尼。

系膜细胞缺氧损伤后抗增殖蛋白、转化生长因子-β_1、α-平滑肌肌动蛋白表达变化

目的观察系膜细胞(MCs)缺氧损伤后抗增殖蛋白(PHB)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达变化。方法将体外培养的大鼠MCs随机分为模型组和正常组。正常组在常规条件下培养,不做任何处理;模型组置于缺氧小室中(充缺氧气体950 m L/L N2和50 m L/L CO2)密封48 h建立MCs缺氧损伤模型。RT-PCR法检测两组PHB1、PHB2、TGF-β_1、α-SMA mRNA,Western blotting法检测PHB1、PHB2、TGF-β_1、α-SMA、Ⅳ型胶原(COL-Ⅳ)蛋白。结果模型组PHB1、PHB2、TGF-β_1、α-SMA mRNA相对表达量分别为0.56±0.04、0.51±0.06、1.45±0.11、7.39±1.72,正常组分别为1.0±0.00、1.0±0.00、1.0±0.00、1.0±0.00,两组比较,P均<0.05。模型组PHB1、PHB2、TGF-β_1、α-SMA、COL-Ⅳ蛋白相对表达量分别为0.47±0.04、0.25±0.02、1.12±0.06、1.35±0.12、0.89±0.07,正常组分别为0.91±0.04、0.56±0.07、0.75±0.05、0.79±0.09、0.52±0.03,两组比较,P均<0.05。模型组PHB1蛋白与TGF-β_1、α-SMA、COL-Ⅳ蛋白表达均呈负相关(r=-0.924、-0.871、-0.840,P均<0.05),PHB2蛋白与TGF-β_1、α-SMA、COL-Ⅳ蛋白表达均呈负相关(r=-0.928、-0.901、-0.821,P均<0.05)。结论系膜细胞缺氧损伤后PHB表达降低,TGF-β_1、α-SMA表达升高,PHB1表达与TGF-β_1、α-SMA表达均呈负相关。

薏米多酚细胞抗氧化及HepG2细胞毒性和抗增殖作用

【目的】了解薏米多酚的体内抗氧化能力,着重分析薏米结合多酚的抗氧化能力,确定结合多酚对总抗氧化能力的贡献;研究薏米多酚对肝癌细胞的毒性和抗增殖作用,在细胞层面上对薏米多酚的功能作用进行评价分析。【方法】以贵州黑谷薏米、辽宁5号薏米、龙薏1号薏米为原料,通过对薏米样品多酚类物质游离型和结合型部分构建细胞模型,评价细胞内抗氧化能力指数,以HepG2细胞为研究对象,测定分析薏米多酚提取物对细胞毒性的中位浓度CC50值和细胞抗增殖作用的半最大效应浓度EC50值。【结果】薏米结合型多酚抗氧化能力显著高于游离型多酚。不同品种间总多酚含量和抗氧化能力差异显著,辽宁5号薏米和龙薏1号薏米明显优于贵州黑谷薏米。对于HepG2细胞,薏米品种对于人体肝癌细胞具有明显的增殖抑制作用,且基本在试验浓度范围内,薏米样品本身无细胞毒性的存在。【结论】薏米作为中国传统的药食两用全谷物食品,含有丰富的多酚类物质,具有较强的抗氧化能力,之前的研究,往往仅考虑薏米游离型多酚,实际薏米中还存在大量结合型多酚。考虑到此结合型多酚,薏米多酚的抗氧化能力明显提升,且薏米多酚对肿瘤细胞具有较明显的抗增殖作用。

基于HepG2细胞模型的香菇柄粉多酚抗氧化及抗增殖活性

以人肝癌细胞HepG2为细胞模型,经过不同粉碎条件处理香菇柄粉后,研究香菇柄粉游离酚的细胞抗氧化及多酚抗增殖活性.结果表明：香菇柄粉游离酚的细胞抗氧化活性（cellular antioxidant activity,CAA）值为9.90～24.22 μmol QE/100 g,普通粉碎组最高,纳米超微粉碎组最低,CAA值随粉体粒径减小而降低（不经磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline,PBS）清洗）;气流超微粉碎组CAA值为0.65 μmol QE/100 g,普通粉碎组和纳米超微粉碎组未表现出细胞抗氧化活性（PBS清洗）.香菇柄粉游离酚的抗增殖活性（半数有效浓度（medianeffective concentration,EC50）值）为1.888～5.213 mg/mL,结合酚的抗增殖活性（EC50值）为2.225～4.751 mg/mL,气流超微粉碎处理对香菇柄粉结合酚的抗增殖活性有增强作用.

二氢杨梅素对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的体外抗增殖作用

0引言二氢杨梅素（dihydromyricetin,DMY）,化学名为3,5,7,3′4′5′-六羟基-2,3双氢黄酮醇,是从藤茶（Ampelopsis grossedentata）等植物茎叶中提取的一种二氢黄酮醇化合物。

藏红花素对人膀胱移行细胞BIU-87细胞抗增殖作用研究

目的研究藏红花素(crocin)对人膀胱移行细胞株BIU-87增殖的作用及机制。方法MTT法测定crocin抗增殖效应,FCM分析细胞周期分布,RT-PCR技术测定CyclinD1,p27kip1mRNA表达变化,Westernblot检测CyclinD1,p27kip1蛋白表达变化。结果crocin对细胞生长有抑制作用,且呈时间-剂量依赖关系。FCM检测显示,crocin可使细胞阻滞于G0/G1期;3.2mmol/Lcrocin作用于BIU-87细胞后RT-PCR结果显示,CyclinD1mRNA表达明显下调,p27mRNA无显著变化;Westernblot结果表明CyclinD1蛋白明显下调;p27kip1蛋白表达显著增加。结论crocin对细胞有抗增殖作用,可阻滞细胞于G0/G1期,其可影响CyclinD1mRNA转录,但并不影响p27mRNA表达水平,并调控CyclinD1、p27kip1蛋白表达。

热带水果多酚提取物的抗氧化和抗增殖活性研究

为明确12种热带水果多酚提取物的总酚含量、总抗氧化能力和抗肿瘤细胞增殖活性，分别采用Folin-Ciocalteu法确定了水果提取物的总酚含量，采用ORAC和FRAP的方法确定了其抗氧化能力，采用MTT的方法确定了其抗人肝癌细胞HepG2增殖的活性。结果显示，12种水果提取物的总酚含量为26.17-229.67 mg GAE/100g 鲜重，最高杨桃的总酚含量为最低鳄梨的8.78倍；ORAC和FRAP抗氧化值分别为607.05-2631.17 μmol TE/100g 鲜重和462.12-1067.92 μmol TE/100 g鲜重，杨桃具有最高的ORAC和FRAP抗氧化值，分别是最低木瓜的4.33倍和鳄梨的2.31倍；11种水果提取物抑制肿瘤细胞HepG2增殖的IC50值为31.79-66.93 mg/mL，抑制活性最弱木瓜的IC50值为最强杨桃的2.11倍。水果提取物的总酚含量与其ORAC抗氧化值（R2＝0.7839）、FRAP抗氧化值（R2＝0.7636）和抑制HepG2细胞增殖的IC50值（R2＝0.8847）之间具有显著的相关性。

体外模拟胃肠消化过程中蒸汽爆破处理的苦荞麸皮的抗氧化及抗增殖活性

利用蒸汽爆破技术对苦荞麸皮进行预处理,并结合体外模拟胃肠消化模型,研究了汽爆处理前、后的苦荞麸皮多酚在不同胃肠消化阶段的释放量,抗氧化及抗增殖活性。结果表明:汽爆处理前后的苦荞麸皮多酚释放量及氧自由基吸收能力均有提高;汽爆处理后苦荞麸皮胃、肠消化液的细胞抗氧化性增强,EC50值分别为(19. 95±0. 37)和(150. 32±6. 43) mg/m L;汽爆处理后苦荞麸皮胃消化液对Hep G2细胞有抑制效果,EC50值为(9. 37±1. 20) mg/m L。说明蒸汽爆破处理的苦荞麸皮具有一定的抗氧化及抗增殖活性,可为科学评价苦荞麸皮的营养价值提供参考。

原白头翁素衍生物对人乳腺癌MCF-7细胞的抗增殖与诱导凋亡作用

目的探讨原白头翁素衍生物(溴甲基呋喃酮)体外对乳腺癌MCF-7细胞株的抗增殖及诱导凋亡作用。方法应用MTT法、倒置显微镜、HE染色、扫描电镜技术、吖啶橙/溴化乙锭荧光染色方法以及流式细胞技术检测原白头翁素衍生物对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞的诱导凋亡及细胞形态学改变。结果MTT法示不同浓度原白头翁素衍生物对MCF-7细胞株均有抗增殖作用,并呈时间—浓度依赖性。倒置显微镜、HE染色、扫描电镜观察示核固缩、碎裂、凋亡小体形成等典型形态学改变。AO/EB双染色结果显示细胞死亡主要以凋亡为主。流式细胞示随着药物浓度的增加细胞凋亡率亦逐渐升高,S期细胞所占比例增大。结论原白头翁素衍生物在体外对人MCF-7乳腺癌细胞株有抗增殖及诱导凋亡作用。

肾病综合征患儿血清抗增殖蛋白水平

目的研究肾病综合征患儿血清抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)蛋白水平及其在肾小管间质早期损伤中的意义。方法应用Western blot对36例原发性肾病综合征患儿血清进行PHB蛋白水平检测,同期正常体检儿童30例为对照组。同时检测两组血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、尿微量蛋白系列[白蛋白/肌酐(ALBU/Cr)、N-乙酰β-D-葡萄糖苷酶/肌酐(NAGU/Cr)、免疫球蛋白G/肌酐(IgGU/Cr)、α1微球蛋白/肌酐(α1-MU/Cr)等]。肾小球及肾小管间质损伤评分参照Katafuchi半定量法进行。结果正常对照组儿童血中未检测到PHB蛋白,肾病综合征患儿血PHB蛋白水平不同程度增高(0.203±0.032比0±0,P<0.05)。伴增生性病变肾病综合征患儿血PHB水平明显高于非增生性患儿。血PHB水平与肾小管间质损伤程度以及肾小球损伤程度均呈明显正相关(r=0.868、0.753,P均<0.001);患儿血PHB水平与尿微量蛋白NAG、IgG呈正相关(r=0.586、0.341,P均<0.001)。结论肾脏疾病患儿血PHB表达明显增高,而且血PHB水平与肾小球及肾小管间质损伤程度明显相关。血PHB水平测定可作为肾脏损伤的早期临床指标。

松果菊苷调控抗增殖蛋白表达抑制MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡

目的探讨松果菊苷(echinacoside,ECH)调控抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)表达,及对MPP^(+)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的效应及机制。方法选取SH-SY5Y细胞分为control组、MPP^(+)组、MPP^(+)+ECH组、NC+MPP^(+)组、NC+MPP^(+)+ECH组、PHB-RNAi+MPP^(+)+ECH组。CCK-8检测细胞存活率,倒置相差显微镜观察细胞形态,Hoechst33342荧光染色法观察凋亡细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率、活性氧含量及线粒体膜电位,Western blot检测PHB、Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3相对蛋白表达。结果与control组比较,MPP^(+)组细胞存活率显著下降;细胞生长状态明显变差;细胞内活性氧含量增高、线粒体膜电位降低、凋亡相关蛋白表达增加、凋亡率升高。与MPP^(+)组比较,MPP^(+)+ECH组细胞存活率显著上升;细胞生长状态明显好转;细胞内活性氧含量降低、线粒体膜电位升高、凋亡相关蛋白表达降低、凋亡率明显下降;PHB和p-Akt表达量明显上升。与NC+MPP^(+)+ECH组比较,PHB-RNAi+MPP^(+)+ECH组p-Akt水平降低,细胞凋亡率上升。结论松果菊苷能减轻MPP^(+)诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,此效应可能是通过上调PHB表达,使Akt磷酸化,从而保护细胞线粒体功能来实现的。

薰衣草精油对HepG2细胞的抗增殖作用研究

研究了薰衣草精油对HepG2细胞的生长抑制作用。用溴化二苯偶氮盐(MTT)法观察薰衣草精油和20%的薰衣草精油含药血清对HepG2的生长抑制作用;HE染色法观察薰衣草精油对HepG2细胞形态学的影响;流式细胞术检测薰衣草精油对HepG2细胞凋亡的影响。结果:薰衣草精油明显抑制HepG2细胞的增殖,并呈浓度依赖性;20%的薰衣草精油血清对HepG2细胞的抑制率与5-氟尿嘧啶血清相比无显著性差异;薰衣草精油处理HepG2后细胞数及体积减少,胞浆和细胞核浓缩;不同质量浓度的薰衣草精油作用HepG2后出现明显的凋亡细胞群及坏死细胞。结果表明,薰衣草精油可以通过诱导细胞凋亡或坏死的方式抑制HepG2细胞的生长。

抗增殖蛋白与氧化应激

抗增殖蛋白为一种高度保守、分布广泛、功能多样的蛋白,由核基因编码,定位于线粒体内膜、细胞核、细胞膜和基质中,由于其参与多种生物学进程,已引起广泛关注。由于其在线粒体上的特殊定位、结构和功能,使其近年在与氧化应激功能相关的研究中开始逐渐成为新的热点。针对抗增殖蛋白与线粒体的研究,系统阐述其在氧化应激及相关疾病和老龄化过程中的重要作用,并对其应用前景作以展望。

桦褐孔菌提取物对胃癌MGC-803细胞株的抗增殖与诱导凋亡作用

探讨了桦褐孔菌提取物对胃癌MGC - 80 3细胞株的抗增殖、诱导凋亡作用及对凋亡相关基因表达的影响。MTT比色法结果显示 ,桦褐孔菌提取物在 0 .5～ 16 0 μg/mL范围内 (其IC50 为 4 μg/mL)对胃癌MGC- 80 3细胞株均有抑制作用 ,并表现出浓度依赖性关系 ;凋亡形态学观察结果 ,药物浓度 2 μg/mL ,作用时间 12～ 2 4h后 ,细胞核染色质固缩并凝结成块 ,聚集在核膜周边 ,凋亡小体形成 ;TUNEL法检测结果 ,不同浓度药物均诱导胃癌MGC - 80 3细胞株凋亡 ,细胞凋亡率随药物浓度增加而上升 ,显示明显的量效关系。Ki- 6 7抗原检测结果 ,不同浓度药物均抑制胃癌MGC - 80 3细胞株增殖 ,表现出浓度、时间依赖性关系 ;2μg/mL桦褐孔菌提取物作用胃癌MGC - 80 3细胞株 4 8h之后 ,明显下调Bcl - 2基因蛋白表达。因此 ,通过此项研究可得出 ,桦褐孔菌提取物对胃癌MGC - 80 3细胞株有抗增殖作用和诱导凋亡作用 ,其凋亡的分子生物学机制可能与下调凋亡抑制基因Bcl 2表达有一定关系。

姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞抗增殖作用的研究

目的研究姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、细胞周期分布及基因表达情况的影响。方法MTT法测定姜黄素生物活性及姜黄素抗增殖效应、FCM分析细胞周期分布，RT-PCR技术测定bcl-2、bax、PCNAmRNA表达。结果姜黄索对MCF-7细胞的IC50值为18．5μmoL／L。各实验组的姜黄素对MCF-7细胞的生长均有抑制作用，这种抑制作用呈时间-剂量依赖方式。FCM检测结果：姜黄素20μmol／L及40μmol／L作用于MCF-7细胞24h，可阻滞细胞周期于G0／G1期，并诱导部分细胞凋产。RT—PCR测定结果：姜黄素0～80μmol／L作用MCF-7细胞24h，bcl-2、PCNAmRNA表达水平降低、baxmRNA表达水平增加。结论姜黄素可抑制MCF-7细胞生长、阻滞细胞周期于G0／G1期，对MCF-7细胞有抗增殖作用，并能诱导部分细胞凋亡，其机制可能与姜黄素抑制bcl-2、PCNAmRNA表达，促进baxmRNA表达有关。

抗增殖蛋白Prohibitin与肿瘤

抗增殖蛋白(prohibitin,PHB)是进化上高度保守的蛋白,广泛分布于不同种属的生物细胞。PHB不同的亚细胞器定位决定了它在调节细胞周期、增殖凋亡、核转录、细胞分化、细胞黏附、维持线粒体形态及功能等方面有重要作用。同时,PHB及其翻译后修饰也参与了PI3K/AKT、Ras/Raf/MAPK等信号通路的调控。近年来,PHB功能及其机制研究有助于我们揭示恶性肿瘤疾病形成的分子机制,将为预防和治疗这些疾病提供理论基础。