哈茨木霉抗多菌灵突变株对大豆菌核病的诱导抗性生理

通过测定接种菌核病菌后不同时间大豆植株抗逆酶活性的变化,研究了土壤中施用拮抗真菌哈茨木霉菌及其抗多菌灵突变株对植株抗逆生理的影响。结果表明:哈茨木霉突变菌株的处理对SOD酶的诱导出现较早,在接种4 h后酶活开始增强,而接种后36 h相比对照可提高67%以上;接种72 h后POD酶活比对照提高27.3%;而MDA含量与对照相比,却始终处于相对较低水平。表明哈茨木霉菌抗多菌灵突变株的应用具有诱导植株抗逆酶活性提高及增强植株抗病能力的作用。

白僵菌抗多菌灵突变株的诱变及生物学特性研究

采用菌丝生长速率法测定了球孢白僵菌对多菌灵的敏感性和最低完全抑制浓度(MIC)。结果显示,在供试的球孢白僵菌菌株中,Bb06菌株对多菌灵最敏感,其EC50值为1.0688μg/ml,多菌灵对球孢白僵菌菌丝生长的MIC为9μg/ml。通过菌丝块诱变法和分生孢子诱变法获得球孢白僵菌抗多菌灵突变株,并测定球孢白僵菌不同抗性突变株对多菌灵的抗性水平。结果表明,在抗性突变株中,BC-4菌株的EC50值最大,为258.7711,对多菌灵的抗性水平最高,达到242.11;BC-3菌株的EC50值最小,为18.6311,抗性水平最低。同时对球孢白僵菌抗多菌灵突变株的菌丝生长速率和产孢能力差异的研究表明,Bb06菌株(亲本菌株)的生长速率最大,为1.78mm/d,BC-8菌株的生长速率最小,为1.41mm/d。球孢白僵菌不同抗性突变株的产孢能力均比对照敏感菌株强,但不同菌株间存在一定差异,在抗性突变株中,BC-4菌株的分生孢子产生量最大。

用等位基因特异性寡核苷酸(ASO)-PCR快速检测抗多菌灵的油菜菌核病菌

通过3对兼并性引物扩增获得与S.sclerotiorum抗药性相关的β-微管蛋白基因,全长1 685 bp,包含4个内元,相应的编码447个氨基酸。该基因与其它6种线状真菌的β-微管蛋白基因相比,氨基酸序列同源性达95.78%～97.66%,但内元数目和大小不同。比较S.sclerotiorum敏感型和抗药性菌株的β-微管蛋白基因,发现该基因第198位氨基酸由谷氨酸突变为丙氨酸,从而导致田间抗药性的产生。为了快速、准确监测田间抗药性频率,根据S.sclerotiorumβ-微管蛋白基因的突变位点设计了2对等位基因特异性寡核苷酸(ASO),直接以菌核的基因组DNA为模板扩增,所需时间约为6 h,抗药性检出率为100%,与传统菌丝直径法的测定结果相比检测准确率为96%,而传统的检测方法至少需要1～2周。

两株解淀粉芽孢杆菌的鉴定及对抗多菌灵可可球二孢菌的拮抗作用

海南地区芒果蒂腐病主要由可可球二孢菌(Botryodiplodia theobromae)引起,从海南芒果上分离获得2株拮抗细菌(HBW和HBR),采用形态学、生理生化特性和分子检测等方法对菌种进行鉴定,通过离体活性测定法评估其对10种植物病原真菌的拮抗活性,并进一步比较了细菌悬液和无菌培养滤液对具有不同多菌灵抗性的可可球二孢菌株的抑菌效果。结果表明,拮抗细菌HBW和HBR均属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),对10种植物病原真菌均具有较强的抑制作用。HBW和HBR的细菌悬液和无菌培养滤液对具有不同多菌灵抗性的可可球二孢菌均有较好的抑制效果,且培养滤液的抑菌效果优于悬浮液。其中,20%的稀释滤液最高抑制率可达100%。由此表明,解淀粉芽孢杆菌HBW和HBR菌株具有较高的开发应用潜力。

多菌灵抗性基因在球毛壳中的转化

利用PEG方法将多菌灵抗性基因通过质粒 pRB12 9转化到球毛壳原生质体 ,并在含 0 .5 μg/ml多菌灵浓度下筛选转化子 ,转化率可达 6～ 7个转化子 / μgDNA。转化子可在 10 0 0 μg/ml多菌灵处理条件下正常生长。将转化子在非选择压力下连续培养 10代 。

葡萄白腐病菌对多菌灵不同抗性菌株生理生化特性研究

研究结果表明:多菌灵农药可促进葡萄白腐病菌苯丙氨酸解氨酶(PAL)的增加,抗药性菌株PAL活力始终大于敏感菌株,初步证明PAL活性与菌体抗药性有关;不同抗药性菌株之间的细胞膜透性之间存在差异,抗性菌株电导率均高于敏感菌株。初步明确了测定苯丙氨酸解氨酶和细胞膜透性可以作为鉴别不同抗药性菌株和检测病原菌抗药性的指标。

影响球毛壳菌原生质体转化的因素

采用PEG介导的原生质体转化法研究了含有多菌灵抗性基因的质粒pRB129转化球毛壳菌的影响因素。结果表明,最佳转化条件为:以1.0mol/L山梨醇作为渗透压稳定剂,20mol/L Ca^(2+)和终质量分数为50％的PEG4000作为转化介质,于25℃转化10min,采用缓慢逐步稀释的方法,转化后1.5d筛选转化子,此时,转化率最高,且有较高的重复性,DNA平均转化率为5.6个/μg。该结果对球毛壳菌其他性状的改进及其他丝状真菌的遗传转化具有重要参考价值。