系统性红斑狼疮患者抗热休克蛋白90抗体的检测

目的通过对系统性红斑狼疮(SLE)患者抗热休克蛋白90抗体(HSP90-Ab)的检测,探讨其在SLE发病中的作用。方法采用Western blot法检测45例SLE患者抗HSP90抗体的表达情况,并分析其与HSP90蛋白表达间的相关性。另取15例健康血样进行正常对照。结果45例SLE患者血浆中HSP90 IgG抗体阳性表达23例(51.11%),HSP90 Ig M抗体阳性表达12例(26.67%)。并且HSP90蛋白与HSP90 IgG抗体间呈显著的正相关关系(χ2=4.15,P<0.05)。15例正常对照组中未见HSP90 IgG/Ig M抗体阳性表达。结论SLE患者体内高表达的HSP90可诱导产生抗HSP90自身抗体,其在SLE的自身免疫损伤机制中可能发挥重要作用。

抗热休克蛋白72多克隆抗体血清的制备和检测

目的探讨在大肠杆菌中表达人热休克蛋白72(hHSP72)与组氨酸(His)的融合蛋白并制备其抗体血清的方法。方法将hHSP72片断插入His融合表达载体pPROEX1TM,重组载体酶切鉴定后,在大肠杆菌中经异丙基βD硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得His hHSP72融合蛋白。采用纯化后的HSP72免疫新西兰白兔,制备抗血清;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测重组抗原的免疫活性。结果重组质粒酶切鉴定结果表明,hHSP72基因已正确插入到pPROEX1TM中,经IPTG诱导后,表达出分子质量约为73ku的蛋白,获得了效价为1∶100000的多克隆抗体。Western blot检测证明,所制备的多克隆抗体可以与hHSP72特异性结合,其效价高于市售的单克隆抗体。结论用hHSP72片断在大肠杆菌中能成功表达,并能制备得到多克隆抗体;这种多克隆抗体是一种新的高特异性和高灵敏度的试剂。

冠心病患者血浆中抗热休克蛋白70抗体表达水平的研究

[目的 ]检测冠心病患者血浆中抗热休克蛋白 70 (HSP70 )抗体水平与正常人有无差异 ,并探讨其与冠心病发生发展之间的关系。 [方法 ]采用Western ELISA方法检测 192例冠心病患者中抗HSP70抗体水平 ,并以 192例无冠心病的个体作为对照。[结果 ] 192例冠心病患者中抗HSP70抗体阳性 7例 ,对照组 5例 ,病例组抗体阳性率与对照组之间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。 [结论 ]本研究未发现抗HSP70抗体与冠心病的发生发展有联系 ,抗HSP70抗体在冠心病发病过程中的作用有待于进一步探讨。

氟暴露工人血浆抗热休克蛋白70抗体表达水平的研究

目的:检测氟暴露工人血浆抗热休克蛋白70(HSP70)抗体表达情况,探讨其与氟暴露应激反应的关系。方法:选择某铝厂氟暴露工人和非氟暴露工人各22人,用氟离子选择电极法测定血清氟、尿氟离子浓度,用Western-ELISA方法检测血浆抗HSP70抗体阳性率。结果:氟暴露组工人血清氟、尿氟离子浓度明显高于非暴露组(P<0.01);血浆HSP70抗体阳性率比较,氟暴露组抗HSP70抗体阳性率明显高于非暴露组(P<0.01)。结论:氟暴露环境下工人抗HSP70抗体阳性率明显增加,可能与氟暴露环境的应激保护反应有关。

噪声作业工人血浆抗热休克蛋白70抗体的应用分析

目的探讨噪声作业工人血浆中抗热休克蛋白70(HSP70)抗体水平及其与累计噪声暴露量(CNE)的关系。方法采用蛋白电泳-酶联免疫吸附实验法对本市某机械制造公司380名工人(噪声暴露200名,对照180名)的血浆中HSP70抗体水平进行测定。用趋势2检验分析HSP70抗体水平与噪声暴露量的关系。结果噪声暴露组HSP70抗体阳性率(41.0%)明显高于对照组(6.6%)。HSP70抗体阳性率随CNE的增高而明显升高。结论HSP70抗体阳性与CNE有密切关系。

抗热休克蛋白抗体H3F识别分子的分析及意义

研究目的探讨肿瘤相关抗原的表达及在肿瘤免疫中的作用。研究设计用人Hela细胞株提取含热休克蛋白的ATP结合蛋白,制取单抗,分析相应热休克蛋白在肿瘤细胞株及人体肿瘤中的表达。研究对象 Hela、W14、Brash-2等肿瘤细胞株,WFB、BALB_3T_3正常细胞株,人食管、胃等癌组织。处理方法按Garsia法将提取的ATP结合蛋白免疫BALB/c小鼠,制取杂交瘤,所得单抗对肿瘤细胞株及人体肿瘤作免疫组化及流式细胞分析。结果获取一株稳定分泌IgM的杂交瘤H3F。H3F抗原具有热及化学诱导性,是一种分子量为90kD的热休克蛋白,可在多种肿瘤细胞株及人体肿瘤细胞表面表达,并与浸润性γδT淋巴细胞呈正相关系。H3F在正常细胞株及人体细胞表面阴性。结论 H3F为一种瘤相关抗原,可介异γδT淋巴细胞对肿瘤的免疫监视作用。

高血压脑梗死与血浆热休克蛋白70抗体水平关系的研究

目的通过测定高血压脑梗死患者血浆热休克蛋白70(HSP70)抗体水平,探讨HSP70抗体与脑梗死损伤程度的关系及其在脑梗死发病机制中的作用。方法100例脑梗死患者经头颅CT或MRI确诊,其中男64例,女36例;高血压者67例,血压正常者33例。选100名社区居民作为对照组,其中男58名,女42名;高血压者35名,血压正常者65名。采用蛋白质免疫印迹酶联免疫吸附法(Western blot ELISA)测定血浆HSP70抗体,并进行Logistic回归分析。结果脑梗死组HSP70抗体阳性率明显高于对照组(69%比13%);脑梗死组高血压者HSP70抗体阳性率明显高于血压正常者(57%比12%),对照组高血压者HSP70抗体阳性率亦高于血压正常者(11%比2%)。上述结果差异均有显著性(P均<0.05)。结论HSP70抗体增多与高血压脑梗死发病相关,可作为高血压脑缺血时一种分子生物学诊断指标;HSP70抗体表达越强,脑梗死病情越严重。因此,HSP70抗体增高是反映脑组织损伤程度的标志。

噪声作业工人血浆热休克蛋白60、70抗体滴度分析

目的 探讨噪声作业工人血浆热休克蛋白 (HSPs) 6 0、 70抗体滴度及其与累积噪声暴露量 (CNE)的关系。方法 用Westernblot免疫印迹法对 391名工人 (噪声暴露 2 0 7名 ,对照 184名 )的血浆HSP 6 0、 70抗体水平进行测定 ,用趋势 χ2 检验和多因素Logistic回归模型分析HSP 6 0、 70抗体水平与噪声暴露的关系。结果 除HSP 6 0抗体滴度 1∶80外 ,其他滴度观察组HSP 6 0、 70抗体阳性率与对照组间差别均有显著性意义 ;HSP 70抗体滴度为 1∶10阳性率随累积噪声暴露量 (CNE)增大而升高 ;用Logistic回归分析控制了混杂因素的作用后 ,血浆HSP 6 0、HSP 70抗体检出率与CNE呈正相关关系。结论 血浆HSP 6 0、

猪肺炎霉形体热休克蛋白Hsp70单克隆抗体的制备及鉴定

以肺炎霉体体(Mhp)Yin-1株为模板,利用所合成的引物扩增了伴侣蛋白DnaK(热休克蛋白Hsp70)C末端基因,将得到的目的片段分别克隆至表达载体pET-28a和pGEX-6P-1中,原核表达获得了重组蛋白6P-1-DnakC和28a-DnakC,经Western-blot分析,均能被Mhp抗血清识别。以28a-DnakC作为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法,以6P-1-DnakC为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠。筛选和鉴定了2株分泌抗DnaK的杂交瘤细胞株,命名为1AD10、2AF11。Western-blotting结果表明,这2株单抗与Mhp发生特异性反应而不与其他相关霉形体发生反应。抗体亚类鉴定结果显示,1AD10、2AF11分别为IgG2b和IgG2a亚类,且轻链均为κ链。相加ELISA试验表明,2株单抗能识别不同的抗原表位。

血清抗幽门螺杆菌热休克蛋白60抗体与消化性溃疡的关系

目的 :探讨幽门螺杆菌 (Hp)感染患者血清抗幽门螺杆菌热休克蛋白60(Hsp60)抗体与消化性溃疡的关系。方法 :检测胃溃疡、十二指肠球部溃疡、慢性浅表性胃炎患者Hp感染及血清抗幽门螺杆菌Hsp60抗体表达情况。结果 :(1)血清抗幽门螺杆菌Hsp60抗体阳性表达仅见于Hp阳性患者。Hp阳性胃溃疡、十二指肠球部溃疡患者血清抗幽门螺杆菌Hsp抗体阳性率明显高于慢性浅表性胃炎患者 (均P<0.05)。(2)26例血清抗幽门螺杆菌Hsp抗体阳性的消化性溃疡患者在Hp根除及洛赛克疗程结束后4周 ,其中7例抗体转为阴性。结论 :血清抗幽门螺杆菌Hsp60抗体可能与Hp感染所致消化性溃疡的发生有关 ;血清抗幽门螺杆菌Hsp60抗体不能作为近期判断Hp根除与否的标准。

热休克蛋白70及其抗体与实验性自身免疫性内耳病

目的 了解抗原免疫对热休克蛋白 70 (heatshockprotein 70 ,HSP70 )在豚鼠耳蜗中表达的影响。方法 以同种异体内耳组织为抗原免疫豚鼠 ,用免疫组织化学方法检测豚鼠耳蜗中HSP70的表达并进行计算机图像处理 ;对豚鼠膜迷路组织进行免疫转印分析以测定HSP71 ;以纯化的人类重组HSP71为抗原 ,用免疫转印技术 (Westernblot)检测动物血浆中HSP71抗体。结果 HSP70在正常豚鼠耳蜗中呈低水平表达。抗原免疫后 ,实验组动物耳蜗HSP70免疫活性较对照组明显增强 ,两组间的吸光度值差异有显著性 (P <0 0 1 ) ;免疫后大多数动物 (1 2 / 2 0 )体内产生了抗HSP71抗体 ,实验组HSP71抗体阳性率显著高于对照组 (P <0 0 1 )。结论 同种膜迷路组织作为抗原免疫豚鼠能够诱导HSP70在耳蜗内合成增加 ;表明HSP70与自身免疫性内耳病有一定联系。

检测65KD热休克蛋白抗体对Ⅰ型糖尿病诊断的意义

利用卡介苗（BCG）65KD热休克蛋白作为抗原，ELISA法检测Ⅰ型糖尿病患者血清中64KD抗体。对30例Ⅰ型糖尿病、30例Ⅱ型糖尿病、5例系统性红斑狼疮（SLE）、8例甲状腺机能亢进（甲亢）的患者及44例健康人血清进行检测。结果表明，64KD抗体在Ⅰ型糖尿病中的检出率为83．3％，在Ⅱ型糖尿病中的检出率为13．3％，在SLE及甲亢中均为阴性，健康人仅1例阳性。此方法的批内变异系数为4．57％～8．62％，批间变异系数为5．57％～12．7％。诊断特异性为94．6％，诊断敏感性为83．3％，诊断指数为177．9％。

志贺菌福氏5a M90T热休克蛋白70(DnaK)多克隆抗体的制备和鉴定

目的制备小鼠抗志贺菌福氏5a M90T热休克蛋白70(Dna K)的多克隆抗体,并鉴定其特异性和效价。方法 PCR扩增M90T中的基因dna K插入到原核表达载体p ET-24a中,获得p ET24a-dna K重组质粒,然后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达,通过亲和柱纯化融合蛋白Dna K-His。将纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,采集抗血清。用免疫印迹法、ELISA和免疫荧光技术鉴定抗血清的特异性和效价。结果重组质粒p ET24a-dna K在大肠杆菌BL21(DE3)中可以高效表达。用纯化的融合蛋白Dna K-His免疫小鼠制备得到的多克隆抗体能特异性低检测志贺菌福氏5a M90T Dna K蛋白,能有效地用于免疫印迹法、ELISA和免疫荧光等试验。结论成功制备了抗志贺菌福氏5a M90T Dna K蛋白的小鼠多克隆抗体。

热休克蛋白60基因多态性和抗体水平及其与冠心病的关系

目的探讨热休克蛋白60(Hsp60)基因多态性和抗体水平及其与冠心病(CHD)的关系。方法采用病例对照研究,选取未治疗过的CHD患者615例,对照以年龄(±1)岁和性别以1∶1与CHD组匹配共选取615例。采用间接酶联免疫吸附法测定血浆Hsp60抗体水平;TaqM an-MGB探针检测hsp60基因上rs2340690、rs788016、rs2565163和rs2305560四个单核苷酸位点的多态性(SNPs)。结果CHD组的Hsp60抗体水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P=0.000)。上述4个SNPs的基因型频率在CHD组和对照组之间差异均无统计学意义,采用多元Lo-gistic回归分析,对年龄、性别、吸烟、饮酒、高血压史、糖尿病史和家族CHD史等因素进行校正后,未发现4个SNPs的任一基因型与CHD的危险度有关联;多因素协方差分析校正了以上混杂因素后,CHD组和对照组hsp60基因4个SNPs不同基因型之间的血浆Hsp60抗体水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论Hsp60抗体可能与CHD发病有关,hsp60基因的多态性和抗体水平与CHD风险均没有显著性关系。

大鼠高眼压模型中热休克蛋白27抗体及视网膜神经节细胞凋亡的研究

背景青光眼是一组以视网膜神经节细胞（RGCs）慢性丢失为特征的常见致盲性眼病。目前青光眼的发病机制尚不完全清楚，热休克蛋白27（HSP27）抗体可能与青光眼视神经病变有关系。目的通过建立大鼠高眼压模型，检测血清中HSP27抗体的表达及RGCs的凋亡，了解HSP27抗体与眼压及RGCs凋亡的关系。方法将51只Wistar大鼠按随机数字表法随机分为高眼压组34只和伪手术对照组17只，均取右眼为实验眼，左眼为对照眼。采用双极水下电凝器电凝高眼压组大鼠右眼巩膜表面3组静脉，建立高眼压动物模型。伪手术对照组大鼠右眼只剪开上方球结膜，不做电凝。分别于术后1、2、4、6、8周处死高眼压组大鼠6、6、6、8、8只，伪手术对照组大鼠3、3、3、4、4只。处死前测大鼠双眼眼压，并收集血清1ml测定大鼠血清HSP27抗体。10只大鼠（2个组各时间点各1只）实验眼剥离视网膜，经匀浆后提取视网膜蛋白质用于Westernblot分析。摘除剩余41只大鼠双侧眼球，制作石蜡切片。TUNEL法检测视网膜组织切片中RGCs的凋亡情况。结果大鼠造模后3d，1、2、4、6、8周实验眼眼压较术前均明显增高，各时间点的总体比较差异有统计学意义（F=318．502，P〈0．01），但伪手术对照组手术前后眼压变化差异无统计学意义（F=2．076，P〉0．05）。高眼压组大鼠实验眼视网膜HSP27蛋白水平与伪手术对照组大鼠实验眼比较均有升高。高眼压组大鼠术后1、2、4、6、8周血清中HSP27抗体各时间点总体比较差异有统计学意义（F=154．221，P〈0．01），随着造模时间的延长，血清HSP27抗体呈逐渐升高的趋势，而伪手术对照组手术前后HSP27抗体的变化差异无统计学意义（F=0．422，P〉0．05）。高眼压组造模后实验眼不同时间点RGCs凋亡阳性细胞率比较差异有统计学意义（x2=856．12，P〈0．05）。高眼压组不同时间点RGCs凋亡阳性细胞率均较伪手术对照组高（P〈0．05）。结论随着眼压的升高以及高眼压持续时间的延长，大鼠血清中的HSP27抗体水平逐渐升高，视网膜在高眼压状态下HSP27表达上调。逐渐升高的HSP27抗体水平与RGCs凋亡增加的趋势一致。

热休克蛋白70抗体与慢性阻塞性肺疾病的关系

目的探讨热休克蛋白(HSP)70抗体与慢性阻塞性肺疾病(COPD)的关系。方法采用Western-ELISA方法检测了88例COPD与87例正常对照者血浆HSP70抗体,同时用免疫发光法检测血浆IgE的含量。结果在COPD与正常对照组中,HSP70抗体的阳性率分别为13.6%(12/88)和6.9%(6/87),两者之间差异无显著性意义(P>0.05);排除近1年使用过激素的COPD患者,未使用过激素的COPD患者HSP70抗体的阳性率为19.3%(11/57),与正常对照组之间差异有显著性意义(P<0.05)。另外,吸烟指数在HSP70抗体阳性和阴性两组之间分别为(768±485)和(798±493),差异无显著性意义(P>0.05);而IgE在两组分别为(252.8±458.7)和(73.9±131.5)U/ml,HSP70抗体阳性组明显高于HSP70抗体阴性组(P<0.05)。结论HSP70抗体可能在COPD的发病过程中起一定的作用,但尚需进一步研究并排除激素等干扰因素。

褶纹冠蚌(Cristaria plicata)热休克蛋白70的原核表达及多克隆抗体制备

构建褶纹冠蚌热休克蛋白70基因的原核表达质粒pET30a-cpHSP70,并经酶切和DAN测序鉴定。将其转入到表达宿主BL21(DE3)菌中,用IPTG诱导表达,最后用SDS-PAGE和Western-blot检测。结果显示:新表达的重组蛋白分子量约为74kD。在IPTG的诱导下,其表达量随时间的增加而增加,最适表达条件是37℃诱导8h。表达蛋白可溶性分析发现,一部分蛋白以不溶性的包涵体形式存在,一部分蛋白以可溶性蛋白形式存在。Westernblot检测显示蚌在35℃热激诱导1h后,其血、鳃、肌肉、肝胰腺和外套膜组织cpHSP70蛋白表达水平相对于蚌在20℃暂养3h后的表达量明显升高。

热休克蛋白60及其抗体在扩张型心肌病患者中的表达

目的探讨扩张型心肌病(DCM)心肌组织中HSP60以及血清中抗人HSP60抗体在DCM发生、发展中的作用。方法应用免疫组织化学方法检测15例DCM患者及7例正常对照者心肌组织中HSP60的表达和分布;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测44例DCM患者和42例对照者血清中的抗人HSP60抗体水平。结果DCM患者心肌组织中HSP60的表达明显增加,HSP60几乎全部为胞浆性表达,未见核阳性颗粒。DCM患者血清中的抗人HSP60抗体水平较对照组明显升高(P<0.05)。结论DCM患者HSP60在心肌组织的过高表达及其血清抗体水平的升高,可能促进DCM的发生、发展,同时又为心肌提供一定的保护作用。

沙眼衣原体感染患者的衣原体抗体和热休克蛋白60抗体的测定

目的探讨衣原体IgG抗体(CT-IgG)和衣原体热休克蛋白60的IgG抗体(C-HSP60IgG)与生殖道沙眼衣原体感染(GCI)的关系,探求更为准确的GCI初筛指标及其组合。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测40例GCI患者和40例健康体检者的CT-IgG和C-HSP60IgG的表达,并对实验结果进行单个指标和联合指标的分析。结果 GCI患者组的40例患者的CT-IgG阳性为30例(75%),C-HSP60IgG阳性为23例(57.50%),与对照组的40例健康体检者比较,对照组的CT-IgG阳性为2例(5%),C-HSP60IgG阳性为5例(12.5%),2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。CT-IgG+C-HSP60IgG联合组合的临床诊断价值最高,该组合的敏感度达82.5%。结论 CT-IgG和C-HSP60IgG可用于GCI患者的临床检测,联合检测可提高CT检测的敏感度。