氟暴露工人血浆抗热休克蛋白70抗体表达水平的研究

目的:检测氟暴露工人血浆抗热休克蛋白70(HSP70)抗体表达情况,探讨其与氟暴露应激反应的关系。方法:选择某铝厂氟暴露工人和非氟暴露工人各22人,用氟离子选择电极法测定血清氟、尿氟离子浓度,用Western-ELISA方法检测血浆抗HSP70抗体阳性率。结果:氟暴露组工人血清氟、尿氟离子浓度明显高于非暴露组(P<0.01);血浆HSP70抗体阳性率比较,氟暴露组抗HSP70抗体阳性率明显高于非暴露组(P<0.01)。结论:氟暴露环境下工人抗HSP70抗体阳性率明显增加,可能与氟暴露环境的应激保护反应有关。

冠心病患者血浆中抗热休克蛋白70抗体表达水平的研究

[目的 ]检测冠心病患者血浆中抗热休克蛋白 70 (HSP70 )抗体水平与正常人有无差异 ,并探讨其与冠心病发生发展之间的关系。 [方法 ]采用Western ELISA方法检测 192例冠心病患者中抗HSP70抗体水平 ,并以 192例无冠心病的个体作为对照。[结果 ] 192例冠心病患者中抗HSP70抗体阳性 7例 ,对照组 5例 ,病例组抗体阳性率与对照组之间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。 [结论 ]本研究未发现抗HSP70抗体与冠心病的发生发展有联系 ,抗HSP70抗体在冠心病发病过程中的作用有待于进一步探讨。

噪声作业工人血浆抗热休克蛋白70抗体的应用分析

目的探讨噪声作业工人血浆中抗热休克蛋白70(HSP70)抗体水平及其与累计噪声暴露量(CNE)的关系。方法采用蛋白电泳-酶联免疫吸附实验法对本市某机械制造公司380名工人(噪声暴露200名,对照180名)的血浆中HSP70抗体水平进行测定。用趋势2检验分析HSP70抗体水平与噪声暴露量的关系。结果噪声暴露组HSP70抗体阳性率(41.0%)明显高于对照组(6.6%)。HSP70抗体阳性率随CNE的增高而明显升高。结论HSP70抗体阳性与CNE有密切关系。

噪声作业工人血浆热休克蛋白60、70抗体滴度分析

目的 探讨噪声作业工人血浆热休克蛋白 (HSPs) 6 0、 70抗体滴度及其与累积噪声暴露量 (CNE)的关系。方法 用Westernblot免疫印迹法对 391名工人 (噪声暴露 2 0 7名 ,对照 184名 )的血浆HSP 6 0、 70抗体水平进行测定 ,用趋势 χ2 检验和多因素Logistic回归模型分析HSP 6 0、 70抗体水平与噪声暴露的关系。结果 除HSP 6 0抗体滴度 1∶80外 ,其他滴度观察组HSP 6 0、 70抗体阳性率与对照组间差别均有显著性意义 ;HSP 70抗体滴度为 1∶10阳性率随累积噪声暴露量 (CNE)增大而升高 ;用Logistic回归分析控制了混杂因素的作用后 ,血浆HSP 6 0、HSP 70抗体检出率与CNE呈正相关关系。结论 血浆HSP 6 0、

猪肺炎霉形体热休克蛋白Hsp70单克隆抗体的制备及鉴定

以肺炎霉体体(Mhp)Yin-1株为模板,利用所合成的引物扩增了伴侣蛋白DnaK(热休克蛋白Hsp70)C末端基因,将得到的目的片段分别克隆至表达载体pET-28a和pGEX-6P-1中,原核表达获得了重组蛋白6P-1-DnakC和28a-DnakC,经Western-blot分析,均能被Mhp抗血清识别。以28a-DnakC作为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法,以6P-1-DnakC为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠。筛选和鉴定了2株分泌抗DnaK的杂交瘤细胞株,命名为1AD10、2AF11。Western-blotting结果表明,这2株单抗与Mhp发生特异性反应而不与其他相关霉形体发生反应。抗体亚类鉴定结果显示,1AD10、2AF11分别为IgG2b和IgG2a亚类,且轻链均为κ链。相加ELISA试验表明,2株单抗能识别不同的抗原表位。

热休克蛋白70及其抗体与实验性自身免疫性内耳病

目的 了解抗原免疫对热休克蛋白 70 (heatshockprotein 70 ,HSP70 )在豚鼠耳蜗中表达的影响。方法 以同种异体内耳组织为抗原免疫豚鼠 ,用免疫组织化学方法检测豚鼠耳蜗中HSP70的表达并进行计算机图像处理 ;对豚鼠膜迷路组织进行免疫转印分析以测定HSP71 ;以纯化的人类重组HSP71为抗原 ,用免疫转印技术 (Westernblot)检测动物血浆中HSP71抗体。结果 HSP70在正常豚鼠耳蜗中呈低水平表达。抗原免疫后 ,实验组动物耳蜗HSP70免疫活性较对照组明显增强 ,两组间的吸光度值差异有显著性 (P <0 0 1 ) ;免疫后大多数动物 (1 2 / 2 0 )体内产生了抗HSP71抗体 ,实验组HSP71抗体阳性率显著高于对照组 (P <0 0 1 )。结论 同种膜迷路组织作为抗原免疫豚鼠能够诱导HSP70在耳蜗内合成增加 ;表明HSP70与自身免疫性内耳病有一定联系。

系统性红斑狼疮患者抗热休克蛋白90抗体的检测

目的通过对系统性红斑狼疮(SLE)患者抗热休克蛋白90抗体(HSP90-Ab)的检测,探讨其在SLE发病中的作用。方法采用Western blot法检测45例SLE患者抗HSP90抗体的表达情况,并分析其与HSP90蛋白表达间的相关性。另取15例健康血样进行正常对照。结果45例SLE患者血浆中HSP90 IgG抗体阳性表达23例(51.11%),HSP90 Ig M抗体阳性表达12例(26.67%)。并且HSP90蛋白与HSP90 IgG抗体间呈显著的正相关关系(χ2=4.15,P<0.05)。15例正常对照组中未见HSP90 IgG/Ig M抗体阳性表达。结论SLE患者体内高表达的HSP90可诱导产生抗HSP90自身抗体,其在SLE的自身免疫损伤机制中可能发挥重要作用。

志贺菌福氏5a M90T热休克蛋白70(DnaK)多克隆抗体的制备和鉴定

目的制备小鼠抗志贺菌福氏5a M90T热休克蛋白70(Dna K)的多克隆抗体,并鉴定其特异性和效价。方法 PCR扩增M90T中的基因dna K插入到原核表达载体p ET-24a中,获得p ET24a-dna K重组质粒,然后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中表达,通过亲和柱纯化融合蛋白Dna K-His。将纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,采集抗血清。用免疫印迹法、ELISA和免疫荧光技术鉴定抗血清的特异性和效价。结果重组质粒p ET24a-dna K在大肠杆菌BL21(DE3)中可以高效表达。用纯化的融合蛋白Dna K-His免疫小鼠制备得到的多克隆抗体能特异性低检测志贺菌福氏5a M90T Dna K蛋白,能有效地用于免疫印迹法、ELISA和免疫荧光等试验。结论成功制备了抗志贺菌福氏5a M90T Dna K蛋白的小鼠多克隆抗体。

热休克蛋白70抗体与慢性阻塞性肺疾病的关系

目的探讨热休克蛋白(HSP)70抗体与慢性阻塞性肺疾病(COPD)的关系。方法采用Western-ELISA方法检测了88例COPD与87例正常对照者血浆HSP70抗体,同时用免疫发光法检测血浆IgE的含量。结果在COPD与正常对照组中,HSP70抗体的阳性率分别为13.6%(12/88)和6.9%(6/87),两者之间差异无显著性意义(P>0.05);排除近1年使用过激素的COPD患者,未使用过激素的COPD患者HSP70抗体的阳性率为19.3%(11/57),与正常对照组之间差异有显著性意义(P<0.05)。另外,吸烟指数在HSP70抗体阳性和阴性两组之间分别为(768±485)和(798±493),差异无显著性意义(P>0.05);而IgE在两组分别为(252.8±458.7)和(73.9±131.5)U/ml,HSP70抗体阳性组明显高于HSP70抗体阴性组(P<0.05)。结论HSP70抗体可能在COPD的发病过程中起一定的作用,但尚需进一步研究并排除激素等干扰因素。

褶纹冠蚌(Cristaria plicata)热休克蛋白70的原核表达及多克隆抗体制备

构建褶纹冠蚌热休克蛋白70基因的原核表达质粒pET30a-cpHSP70,并经酶切和DAN测序鉴定。将其转入到表达宿主BL21(DE3)菌中,用IPTG诱导表达,最后用SDS-PAGE和Western-blot检测。结果显示:新表达的重组蛋白分子量约为74kD。在IPTG的诱导下,其表达量随时间的增加而增加,最适表达条件是37℃诱导8h。表达蛋白可溶性分析发现,一部分蛋白以不溶性的包涵体形式存在,一部分蛋白以可溶性蛋白形式存在。Westernblot检测显示蚌在35℃热激诱导1h后,其血、鳃、肌肉、肝胰腺和外套膜组织cpHSP70蛋白表达水平相对于蚌在20℃暂养3h后的表达量明显升高。

2型糖尿病患者外周血浆中热休克蛋白70抗体的变化

目的:探讨2型糖尿病(type 2diabetes mellitus,T2DM)患者外周血浆中热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)抗体与其病情发生发展的关系。方法:选择112例确诊T2DM的患者(T2DM组),同时选择110例非T2DM的健康体检者(对照组)。采用蛋白质免疫印迹-酶联免疫吸附法(Western blot-ELISA)检测两组患者血浆中HSP70抗体的水平。采用非条件Logistic回归分析HSP70抗体与T2DM的关系。结果:T2DM组中血浆HSP70抗体阳性者36例,对照组则为9例;两组的HSP70抗体阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归显示,HSP70抗体是T2DM的独立危险因素。结论:HSP70抗体可能是T2DM发生发展的独立危险因素。

不同路面养路工人血浆热休克蛋白70抗体滴度分析

目的 探讨不同路面养路工人血浆热休克蛋白 70 (heatshockprotein ,HSP70 )抗体水平及其意义。方法 对不同路面养路工人进行常规体检 ,并采用Westernblot ELISA检测不同稀释度血浆中HSP70水平。结果 养路工组白细胞数较对照组明显升高 (P <0 0 5 ) ;各种疾病检出率比对照组增加 ;血浆HSP70抗体总阳性率 (38 71% )较对照组 (2 5 6 4 % )明显升高 (P <0 0 5 ) ,但两组之间不同稀释度的血浆HSP70抗体阳性率相比 ,差异无显著性 ;按不同路面类型分组 ,各组养路工血浆HSP70抗体阳性率呈逐渐上升趋势 ,其顺序为水泥路工、砂石路工、混合路工和沥青路工。结论 各种职业性有害因素导致养路工人职业病危害比对照组明显增加 ,血浆中HSP70抗体可能参与了这一危害过程。因此 ,血浆HSP70抗体有可能作为评价养路工人职业病危害的生物标志物。

老年脑梗死患者热休克蛋白70及其抗体的研究

目的研究老年脑梗死患者外周血淋巴细胞热休克蛋白70(HSP70)及其抗体的变化规律、变化程度及与病情轻重、梗死部位、预后的关系。方法按《脑卒中患者临床神经功能缺损程度评分标准》将65例60岁以上老年脑梗死患者分为轻型、中型及重型脑梗死三组;选择34例健康老年人作为对照组。应用固定化蛋白质的免疫学测定(Western Blot)法测定其外周血淋巴细胞中 HSP70表达水平;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测其血浆 HSP70抗体滴度。结果在发病后24h 内,轻型、中型及重型脑梗死组 HSP70表达水平分别为708.67±193.56、585.95±165.39及421.18±123.87积分光密度,各组之间比较及其与健康对照组的86.08±34.13积分光密度比较差异有显著性(P<0.05);中、重型脑梗死抗体阳性率高于健康对照组(P<0.05)、重型脑梗死抗体阳性率也高于轻型脑梗死(P<0.05);随病程延长,HSP70表达水平逐渐下降,轻型脑梗死组下降幅度较大而重型梗死组下降幅度较小(P<0.01),抗体阳性率及滴度比例也随病程的延长逐渐下降(P<0.05)。脑梗死的部位与 HSP70表达水平及其抗体阳性率无相关关系(P<0.05)。结论测定老年脑梗死患者起病后24小时内 HSP70表达水平及其抗体滴度,可作为临床早期诊断脑梗死、估计病情轻重、判断患者预后的客观、量化指标之一。

血清热休克蛋白70自身抗体在乳腺癌中的诊断价值

目的:探讨热休克蛋白70(Hsp70)自身抗体在乳腺癌患者中的诊断意义。方法:运用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清Hsp70自身抗体在125例乳腺癌患者、33例乳腺良性肿瘤患者和127例健康体检者中的水平,诊断效能依据受试者工作特征曲线(ROC)评价。结果:乳腺癌患者组血清Hsp70自身抗体的水平比乳腺良性肿瘤组和健康对照组高,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC分析结果显示,诊断临界值为0.060时,Hsp70自身抗体在区分乳腺癌组和健康对照组的曲线下面积、敏感度和特异度分别为0.761、82.4%和62.2%,区分乳腺癌组和乳腺良性肿瘤组为0.675、80.0%和45.5%,区分乳腺癌组和乳腺良性肿瘤组+健康对照组为0.746、84.8%和56.6%。结论:Hsp70自身抗体是一种潜在的乳腺癌血清诊断标志物,有望应用于乳腺癌筛查和诊断。

卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv与鼠HSP70融合蛋白的构建、表达及鉴定

目的构建卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv与小鼠热休克蛋白70(mHSP70)融合蛋白6B11ScFv/mHSP70,并初步鉴定其免疫活性。方法根据Genebank上已发表的mHSP70基因序列(NM_010478)合成引物行PCR扩增,以扩增所得mHSP70基因插入pET30a(+)-6B11ScFv质粒后转化入E.coliDH5α,获得pET30a(+)-6B11ScFv/mHSP70重组质粒。将鉴定正确的pET30a(+)-6B11ScFv/mHSP70重组质粒转化入E.coliBL21(DE3),获得E.coliBL21(DE3)[pET30a(+)-6B11ScFv/mHSP70]重组菌株。以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并行SDS-PAGE分析,对表达产物进行复性和Ni2+-NTA柱亲和层析纯化后,采用蛋白质印迹法和ELISA方法进行鉴定和免疫活性检测。结果6B11ScFv/mHSP70融合基因测序结果基本与理论序列相符。SDS-PAGE分析显示,重组菌株表达产物相对分子质量与预期相符。复性、亲和层析纯化后的蛋白复性率达20.9%,蛋白纯度达95%以上。蛋白质印迹分析证实6B11ScFv/mHSP70融合蛋白相对分子质量为104000,ELISA检测表明其具有6B11ScFv和mHSP70的免疫活性。结论构建表达的6B11ScFv/mHSP70融合蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究其体内外抗卵巢癌活性奠定了基础。

热休克蛋白70在大鼠心肌缺血再灌注过程中的表达及其意义

目的 :探讨热休克蛋白 70 (HSP70 )在心肌缺血再灌注损伤中的表达及其意义。方法 :结扎 /松解SD大鼠左冠状动脉前降支 ,建立大鼠缺血 0min、3 0min ,再灌注 60min、12 0min动物模型。免疫组化技术和图像分析技术检测心肌细胞内HSP70、Bcl 2 /Bax基因的蛋白表达 ,硫代巴比妥酸 (thiobarbituricacid ,TBA)法测心肌组织丙二醛 (MDA)含量 ,优化紫外分光光度法测血清肌酸激酶 (CK)活性。结果 :( 1)HSP70于缺血 0min即有表达 ,再灌注 60min达高峰 ,之后下降。 ( 2 )Bcl 2蛋白再灌注组表达较缺血组明显降低 (P <0 .0 5 )。( 3 )Bax蛋白表达、MDA含量、CK活性于缺血 3 0min开始升高直至再灌注 12 0min。结论 :HSP70的异常表达与心肌缺血再灌注损伤的发生有关 ,且可能是缺血再灌注损伤细胞发展、恶化的重要标志。

卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv/鼠HSP70融合蛋白复性条件的研究

目的探讨大肠杆菌表达的卵巢癌抗独特型单链抗体/小鼠热休克蛋白70(6B11ScFv/mHSP70)融合蛋白包涵体变性、复性条件,以确定其最佳体外复性条件。方法大肠杆菌表达大量融合蛋白6B11ScFv/mHSP70:①比较不同的裂解液(8mol/L尿素和6mol/L盐酸胍)对包涵体的裂解效率及其对复性蛋白活性的影响;②探索序贯稀释方法,以及氧化还原环境和复性液中不同浓度L-精氨酸对蛋白稀释复性的影响;③比较稀释复性和柱上复性对融合蛋白复性效率及活性的影响。采用Bradford法测定包涵体裂解液与复性后蛋白浓度。所有复性蛋白活性的检测均采用ELISA方法。结果以包涵体形式表达6B11ScFv/mHSP70蛋白:①经6mol/L盐酸胍裂解包涵体的效率远高于8mol/L尿素,但前者复性所得蛋白活性低,6mol/L盐酸胍彻底裂解的包涵体经8mol/L尿素透析后再复性,复性效率显著提高;②序贯稀释方法可提高蛋白复性效率;加入0.5mol/LL-精氨酸可降低稀释复性过程中蛋白聚集物的产生,提高复性效率;加入还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSH)浓度比为1:5时,可提高复性后蛋白活性;③柱上复性可一步完成蛋白的复性和纯化,所得蛋白纯度较高,但复性效率和复性后蛋白活性较稀释复性低。结论本研究建立了6B11ScFv/mHSP70融合蛋白的最佳复性条件:包涵体经6mol/L盐酸胍彻底裂解后,再经8mol/L尿素透析,然后进行序贯稀释复性,且复性液中加入0.5mol/LL-精氨酸和GSH:GSSH=1:5以提高复性效率和蛋白活性,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。

热休克蛋白70单抗诱导胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨HSP70单抗对人胰腺癌细胞株BXPC-3的生长抑制作用和凋亡的诱导作用及可能的作用机制。方法MTT法检测HSP70单抗对人胰腺癌细胞株BXPC-3增殖的影响,流式细胞仪检测HSP70单抗诱导凋亡作用。结果MTT法检测24h,48h不同浓度HSP70单抗作用后实验组与对照组吸光度(A)值比较差异有统计学意义(P<0.05),48h的抑制率高于24h的抑制率。流式细胞仪分析显示HSP70单抗作用48h后细胞发生凋亡,且随单抗浓度的增加细胞凋亡率增高。结论HSP70单抗可以抑制BXPC-3细胞的增殖并且可以诱导其凋亡。

肉鸡HSP70的基因克隆、原核表达及单克隆抗体制备

【目的】制备高特异性的肉鸡热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)单克隆抗体,研究肉鸡HSP70与热应激损伤的关系。【方法】利用RT-PCR方法扩增肉鸡HSP70mRNA,将其扩增产物克隆到PGEM-T Easy载体和原核表达载体pET-28a(+)上,进一步转化至大肠杆菌BL-21中,用IPTG诱导表达重组肉鸡HSP70。以纯化的重组肉鸡HSP70制备多克隆抗体,免疫印迹分析说明重组肉鸡HSP70具有很好的免疫原性。以纯化的重组肉鸡HSP70免疫Balb/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。【结果】获得2株分泌肉鸡HSP70单克隆抗体的杂交瘤细胞株,进一步通过免疫印迹分析筛选出1株高特异性的肉鸡HSP70单克隆抗体,命名为BH70-1。【结论】免疫组织化学结果显示,单克隆抗体BH70-1是一种理想的抗体。