血清骨特异性碱性磷酸酶、护骨素水平与多发性骨髓瘤患者来那度胺联合VAD方案治疗效果相关性研究效果的相关性

目的 探讨血清骨特异性碱性磷酸酶(BALP)、护骨素(OPG)水平与多发性骨髓瘤(MM)患者来那度胺联合长春新碱+多柔比星+地塞米松(VAD)方案治疗效果的相关性。方法 回顾性分析2019年1月至2020年6月期间在信阳市中心医院经来那度胺联合VAD方案治疗有效的70例MM患者,将这些患者纳入有效组;另外收集信阳市中心医院同期收治的经来那度胺联合VAD方案治疗无效的70例MM患者,并将其纳入无效组。分析血清BALP、OPG水平与MM患者来那度胺联合VAD方案治疗效果的相关性。结果 无效组患者血清BALP、OPG水平均低于有效组(t=29.436,P<0.001;t=21.154,P<0.001)。Logistic回归分析显示,血清BALP、OPG水平低是MM患者实施来那度胺联合VAD方案治疗无效的风险因子(OR=10.234,P=0.001;OR=4.285,P=0.021)。受试者工作特征曲线分析显示,血清BALP、OPG水平及两者联合预测MM患者实施来那度胺联合VAD方案治疗无效的曲线下面积分别为0.795、0.809、0.861,以联合预测价值最佳。结论 MM患者实施来那度胺联合VAD方案治疗前血清BALP、OPG水平可能与其治疗效果有关,两者低水平可增加实施来那度胺联合VAD方案治疗无效风险。

不同浓度钛微粒对护骨素/护骨素配体基因表达影响的体外研究

目的: 探讨磨损微粒引起假体周围骨溶解的机理, 为人工关节假体松动的预防研究打下基础。方法: 采用不同浓度钛微粒 (粒径 <3μm) 对成骨细胞MG 63细胞进行 24h干预, 半定量RT PCR观察其对护骨素 (OPG) 及护骨素配体 (OPG- L) 基因表达的影响。结果:钛微粒能上调MG 63细胞OPG及OPG- L基因表达, 且对后者作用强于前者。结论: OPG- L/OPG比率随着钛微粒浓度的加大而增高, 引起骨溶解大于骨形成, 这可能是磨损微粒引起人工关节假体松动的重要原因, 这表明降低OPG- L/OPG比率有可能预防或逆转此病理过程。

黄芪三仙汤干预成骨细胞护骨素及护骨素配体的表达

背景:长期临床研究表明黄芪三仙汤对骨质疏松症有一定的治疗作用,基础实验研究也表明黄芪三仙汤能改善实验动物的生物力学指标。在此基础上实验拟从细胞分子水平上探讨黄芪三仙汤对成骨细胞的相关作用。目的:观察黄芪三仙汤对体外培养成骨细胞护骨素、护骨素配体基因调节的作用,探讨黄芪三仙汤治疗骨质疏松的作用机制。方法:制备黄芪三仙汤和仙灵骨葆胶囊含药血清及空白血清,对体外培养新生SD大鼠成骨细胞进行干预,应用细胞形态观察、MTT、Western blot分析法及蛋白浓度测定法,观察各含药血清对体外培养成骨细胞的增殖及成骨细胞护骨素、护骨素配体表达的影响。结果与结论:经药物干预后成骨细胞变为长梭形、条索状,融合成片,分界较为模糊,细胞生长较密集。黄芪三仙汤可明显促进成骨细胞护骨素蛋白浓度的提高(P<0.01),同时也提高了护骨素配体蛋白浓度(P<0.01),而护骨素/护骨素配体浓度比例水平明显升高(P<0.01)。结果可见黄芪三仙汤可能是通过调节成骨细胞分化调控因子护骨素、护骨素配体的表达来调节成骨细胞的增长,从而实现其对骨质疏松症的治疗作用。

护骨素及其配体与骨质疏松

护骨素及其配体是近2年来发现的两种重要蛋白质,可能是揭开骨质疏松症的发病机理的突破口。研究表明,护骨素为一种诱饵受体,本身无传导信号的作用,但在与其受体护骨素配体结合后,可阻止核因子KB受体激活物与护骨素配体结合,使核因子KB受体激活物活化受阻,不能发挥其破骨作用。因此护骨素、核因子KB受体激活物与护骨素配体共同组成了一个完整的体系,在维系骨的健康方面发挥着重要作用。保持该系统的平衡是维持骨健康的先决条件。

护骨素基因启动子区T^(950)-C多态性与骨密度及骨代谢的关系

目的探讨绝经后汉族妇女护骨素(OPG)基因启动子区T950C多态性与骨质疏松症和骨代谢的关系。方法应用PCRRFLP测定随机选取的73例绝经后骨质疏松症妇女和61例绝经后正常妇女OPG基因T950C的基因型,双能X线骨吸收方法分别测腰椎各椎体和股骨颈髋部的BMD,放射免疫分析法测骨代谢指标。结果所选人群OPG基因T950C基因型频率分布在骨质疏松症和绝经正常妇女均符合HardyWeinberg定律,而且其基因型在两组研究对象中分布差异无显著性,但汉族妇女T950C基因型分布与高加索人种妇女相比有明显差异。在骨质疏松症组CC型的股骨颈BMD低于TT型和TC型,而绝经后正常妇女三种基因型之间BMD无差异。结论OPG基因T950C基因型分布存在明显的种族差异。OPG基因T950C多态性不能作为中国汉族妇女是否发生骨质疏松症的遗传标志,但对于患有骨质疏松症的中国汉族妇女CC型却能预测骨骨质疏松症的患病程度。

杜仲总黄酮对大鼠成骨细胞护骨素表达的影响

[目的]研究杜仲总黄酮对新生大鼠颅盖骨体外培养成骨细胞护骨素的mRNA及蛋白表达的影响。[方法]分别加入浓度为10、100、200μg/ml的杜仲黄酮到SD大鼠颅骨分离培养的成骨细胞中,用Realtime-PCR法检测杜仲总黄酮对护骨素的mRNA表达的影响;采用细胞免疫荧光技术检测杜仲总黄酮对护骨素蛋白表达的影响。[结果]与对照组比较,杜仲总黄酮能明显促进成骨细胞护骨素的mRNA和蛋白质的表达。[结论]杜仲总黄酮成分能直接在RNA和蛋白质水平促进体外成骨细胞中护骨素的表达。

唑来膦酸对大鼠成骨细胞增殖、分化和护骨素/核因子κB受体激动剂配体mRNA表达的影响

背景：在应用于预防和治疗假体周围骨溶解时,唑来膦酸可在发挥抑制破骨细胞作用的同时而不影响成骨功能。目的：观察唑来膦酸对大鼠成骨细胞功能的影响,验证其应用于人工关节置换后假体周围骨溶解的可行性。设计、时间及地点：观察对照实验,于2007-03/2008-03在华北煤炭医学院中心实验室完成。材料：新生24h内SD大鼠,唑来膦酸标准品。方法：体外培养新生大鼠颅盖骨来源的成骨细胞,应用不同浓度唑来膦酸进行干预,实验组细胞培养基中唑来膦酸终浓度为10-4～10-11mol/L,对照组不加药,只加等量细胞悬液和培养基。唑来膦酸干预后分别于第1,2,3,5,7天采用四甲基偶氮唑盐比色法测定吸光度,检测唑来膦酸对成骨细胞增殖的影响;第3天和第5天分别采用荧光定量聚合酶链反应测护骨素和核因子κB受体激动剂配体mRNA表达,以硝基苯基质动力学法测定各组细胞碱性磷酸酶活性。主要观察指标：成骨细胞增殖情况和碱性磷酸酶活性,护骨素、核因子κB受体激动剂配体mRNA表达水平。结果：唑来膦酸浓度≥10-5mol/L时抑制成骨细胞增殖,10-6～10-11mol/L则不影响细胞增殖。唑来膦酸浓度为10-7～10-11mol/L时碱性磷酸酶活性无变化,而成骨细胞的护骨素mRNA表达增加,核因子κB受体激动剂配体mRNA的表达下降。结论：唑来膦酸在低浓度时不影响成骨细胞增殖及分化,通过降低成骨细胞核因子κB受体激动剂配体/护骨素的比率而抑制破骨细胞分化,可应用于人工关节置换后假体周围骨溶解。

人成骨细胞体外培养、鉴定及护骨素表达的研究

目的 用酶消化法从正常人松质骨中分离成骨细胞 ,进行体外培养和功能鉴定 ,观察用 1 7β 雌二醇 (1 7β E2 )和雌激素受体拮抗剂ICI1 82 780处理后 ,成骨细胞中护骨素 (OPG)的表达变化。方法 用胰酶 -胶原酶消化法从正常人松质骨中分离培养成骨细胞 ,I型胶原染色用VanGie son法 ,钙化结节用茜素红染色 ,用钙钴法显示成骨细胞中碱性磷酸酶的表达 ,骨钙素和OPG基因的表达用RT -PCR检测 ,OPG蛋白用WesternBlot检测。结果 用酶消化法分离的人成骨细胞 ,在体外培养时可维持合成I型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素 ,并形成钙化结节等功能 ;体外培养的人成骨细胞表达OPG ,1 7β E2 上调其表达 ,并能被雌激素受体拮抗剂ICI1 82 780阻断。结论 用酶消化法进行人成骨细胞培养 ,方便易行 ,可培养大量高纯度人成骨细胞供研究使用 ;1 7β E2 上调OPG表达 ,而绝经后雌激素缺乏时 ,OPG的表达相应减少 ,可能是骨质疏松的发病因素之一。

大鼠成骨细胞增殖及护骨素蛋白含量与甲状旁腺激素的调节效应

目的:体外观察甲状旁腺激素对大鼠成骨细胞增殖和护骨素分泌的调节作用。方法:实验于2005-06/2006-05在四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室完成。采用酶消化法和骨组织块法联合分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞,间歇加药方法将不同浓度0,10-6,10-7,10-8,10-9mol/L甲状旁腺激素作用于大鼠成骨细胞(0mol/L作为空白对照组),经碱性磷酸酶染色及钙结节茜素红染色证实培养的成骨细胞后,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖能力,蛋白免疫印迹测定护骨素的分泌量。结果:①成骨细胞的形态变化:倒置相差显微镜下可见培养的成骨细胞呈短梭形、三角形和多边形。碱性磷酸酶染色光镜下可见成骨细胞胞浆中分布特征性蓝紫色细颗粒;成骨细胞的钙结节在镜下可见部分细胞聚集一起呈"集落状"生长。②成骨细胞增殖率:10-6～10-9mol/L浓度甲状旁腺激素对成骨细胞增殖均显示刺激作用,与空白对照组相比,差异显著(P<0.05),增殖率以10-8mol/L甲状旁腺激素组最高。③成骨细胞护骨素的表达:甲状旁腺激素下调成骨细胞中护骨素的分泌,与空白对照组相比,10-6mol/L甲状旁腺激素组抑制作用最明显(P<0.01),无显著剂量依赖性。结论:甲状旁腺激素对体外培养成骨细胞的增殖具有明显促进作用,通过下调成骨细胞中护骨素的分泌,促进破骨细胞生成、活化,促进骨吸收。

绝经后女性骨质疏松患者骨密度与血脂和护骨素的相关性

目的探讨绝经后女性骨质疏松患者的骨密度(BMD)与血脂和护骨素(OPG)的相关性。方法分析2009年8月至2011年8月在我院接受诊断与治疗的50例绝经后骨质疏松患者和50例未伴发骨质疏松的绝经后妇女的临床资料,分析血脂水平与绝经女性并发骨质疏松的关系及其相关机制。结果研究组与对照组之间TC、LDL、L1～4BMD、FN BMD及OPG水平比较差异有统计学意义(t=5.68、4.82、11.24、11.08、6.18,均P<0.05),而两组的TG和HDL水平相比则无明显差异(t=1.39、0.42,均P>0.05)。OPG与TC、TG、LDL呈负相关,而与L1～4BMD和L1～4BMD呈正相关。另外,在控制绝经年限、TC、TG、LDL等因素后进行偏关性分析发现,OPG仍然与L1-4BMD和L1～4BMD呈正相关。L1～4BMD、L1～4BMD与TC、LDL呈负相关,而与TG和HDL无相关性。另外,在控制BMI、绝经年限后进行偏关性分析发现L1～4 BMD、L1～4 BMD仍然与TC和LDL呈负相关。但是,在控制OPG后进行偏关性分析发现L1～4BMD、L1～4BMD与TC和LDL无相关性。结论绝经后女性骨质疏松患者的血清TC、LDL水平较高,且与BMD呈负相关;而其血清OPG较低,与BMD正相关,与TC、TG、LDL负相关。

低频脉冲电磁场干预绝经后骨质疏松患者血清护骨素及核因子κB受体活化子配体的变化

背景:脉冲电磁场能克服传统治疗方法的缺陷,对骨质疏松引起的疼痛、骨量减少、骨密度降低具有肯定的治疗作用。目的:探讨低频脉冲电磁场治疗绝经后骨质疏松的作用机制。方法:应用双能X射线骨密度仪测量150例绝经后妇女腰椎骨密度,按WHO标准诊断,无骨质疏松患者50例、骨质疏松患者100例。将骨质疏松患者随机分为骨质疏松组和低频脉冲电磁场治疗组,分别给予钙剂口服或钙剂口服+连续14d的低频脉冲电磁场治疗。结果与结论:各组患者基线资料具有可比性。与无骨质疏松患者比较,骨质疏松患者腰椎骨密度明显降低(P<0.01),经低频脉冲电磁场治疗后无明显改变(P>0.05),但患者血清β-1型胶原C-末端肽明显降低(P<0.05)、骨钙素明显升高(P<0.01)。与骨质疏松组比较,其他两组患者血清护骨素明显升高(P<0.05);低频脉冲电磁场治疗组患者血清核因子κB受体活化子配体明显降低(P<0.05)。说明低频脉冲电磁场干预14d对骨质疏松有良好的防治作用。

肿瘤坏死因子-α对小鼠骨髓基质细胞护骨素表达的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子 -α(TNF- α)对骨髓基质细胞护骨素 (OPG)mRNA和蛋白质表达的影响以及TNF- α在骨代谢中的作用。方法 用TNF- α干预培养的小鼠骨髓基质MBA 1细胞 ,用RT PCR和Westernblot检测TNF- α不同剂量和不同作用时间时OPG表达变化。结果 ①MBA- 1细胞表达OPG ;②TNF -α对MBA- 1细胞OPGmRNA和OPG蛋白质表达有下调作用 ,但无剂量和时间依赖性 ;③ 17- β雌二醇 (17- βE2 )能阻断TNF α对MBA 1细胞OPG表达的下调作用 ;而吡咯二硫氨基甲酸酯 (PDTC ,一种核因子 κB抑制剂 )不能拮抗此作用。结论 TNF -α下调OPG表达。雌激素拮抗TNF- α,使MBA 1细胞OPG表达上调。TNF -α对OPG表达的影响与转录因子 - κB信息通路无关。

女性护骨素和转化生长因子-β水平对骨转换率的影响

目的了解女性护骨素(OPG)和转化生长因子-β(TGF-β)与骨转换指标的关系及其对骨转换指标的影响。方法研究长沙地区691名健康女性(年龄20~80岁)的血清OPG、TGF-β1和TGF-β2,以及血清骨特异性碱性磷酸酶(BAP)、骨钙素(OC)、血清I型胶原N-末端肽(sNTX)、血清I型胶原C-末端肽(sCTX)、尿NTX(uNTX)、尿CTX(uCTX)和尿脱氧吡啶酚(uDPD),并分析这些细胞因子与各种骨转换指标之间的关系。结果血清OPG和TGF-β2与血清BAP、OC、uNTX、uCTX和uDPD呈显著正相关(r=0.145~0.397,P均=0.000),血清TGF-β1与BAP、OC、sCTX、uNTX和uCTX呈显著负相关(r=-0.114^-0.286,P均=0.004~0.000)。调整年龄和BMI之后,它们之间的偏相关系数多数仍然有意义。多元线性回归分析显示,OPG和TGF-β2对BAP、uNTX和uCTX是一个正性决定因素,可分别解释这些指标0.6%~16.6%的变异。TGF-β1对BAP、OC、和uCTX是一个负性决定因素,可以分别解释这些指标变异的0.7%~7.3%。结论本研究揭示了女性OPG和TGF-β与骨转换指标的关系,提示循环中的OPG和TGF-β是骨转换速率的重要决定因素。

老年慢性阻塞性肺疾病患者骨密度减少与护骨素基因多态性的相关性研究

目的探讨兰州市汉族人群护骨素(OPG)基因多态性与老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者骨质疏松遗传易感性的关系。方法选择老年COPD患者178例和老年健康组对照195例,测定肺功能(FEV1/FVC、FEV1%pred)、体重指数、血钙、血磷、血碱性磷酸酶,用双能X射线骨密度测定仪测定受试者股骨颈和腰椎(L1～L4)骨密度,应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性方法测定OPG基因启动子区G209A与T245G基因型,并分析其与股骨颈、腰椎骨密度及骨代谢的关系。结果 COPD组OPG基因启动子区G209A与T245G基因的AAGG、GATG、GGTT三种基因型分布频率分别为2.5%、27.2%和72.3%,对照组三种基因型分布频率分别为2.2%、26.9%和70.9%,两组基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)。COPD组和对照组不同基因型亚组的体重指数、血钙、血磷、血碱性磷酸酶及骨密度差异均无统计学意义(P>0.05)。COPD不同骨量患者OPG基因型分布差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论兰州市老年汉族COPD患者OPG基因启动子区G209A与T245G基因多态性与患者肺功能下降、骨密度降低及骨代谢水平无显著相关性,可能不是COPD患者骨质疏松的易感位点。

替勃龙上调卵巢切除大鼠腰椎护骨素mRNA的表达

目的:建立绝经后骨质疏松(postmenopausalosteoporosis,PMOP)的大鼠模型,研究替勃龙对卵巢切除大鼠腰椎组织中护骨素(OPG)基因mRNA表达水平的影响,探讨其预防和治疗PMOP的作用机制。方法:6月龄未交配健康雌性SD大鼠40只,随机分为SHAM组,OVX组,OVX+戊酸雌二醇(E2)组和OVX+替勃龙(tibolone,TIB)组。灌胃13周后处死动物,第四腰椎行骨组织形态计量指标测定,第二腰椎采用RT-PCR方法,对OPGmRNA表达水平进行检测。结果:OVX组大鼠较SHAM组TBV%显著下降;OSV%明显升高(P<0·05);E2和TIB均可使OVX大鼠的TBV%明显升高,OSV%明显下降;OPGmRNA表达水平在OVX大鼠组织中下调,与SHAM组相比有显著性差异(P<0.05),E2和TIB均可上调OVX大鼠骨组织OPGmRNA表达水平(P<0.05)。结论:E2和TIB均通过抑制骨转换预防和治疗PMOP;PMOP的发生与OPG有关,TIB和E2一样,其抗骨吸收效应很可能是通过OPG介导的。

672名不同年龄段妇女骨密度和护骨素等骨代谢生化指标的变化及其意义

目的探讨女性骨密度(BMD)、血清护骨素(sOPG)、血清骨钙素(sBGP)和尿脱氧吡啶啉/尿肌酐(uDPD/Cr)与绝经的关系。方法 672例20～80岁的女性按绝经前后分3组,绝经前组344名(33.10±7.95岁),围绝经期组57名(48.02±3.08岁),绝经后组271名(59.72±7.39)岁;测定sOPGs、BGP、uDPD/Cr及腰椎正位总体、侧位中间区、左侧股骨颈和髋部的BMD。结果 (1)腰椎侧位中间区BMD的快速骨丢失期在围绝经期及绝经后10～20年;其他部位在绝经后。(2)sOPG(39.5%)、uD-PD/Cr(17.8%)在围绝经期增加最快。(3)sOPG及腰椎正位、腰椎侧位中间区、股骨颈和髋部BMD与绝经年限均呈负相关(r值为-0.234～-0.421)。结论 sOPG和uDPD/Cr的变化先于骨密度,可以预测绝经后骨丢失。

渐进性咬合紊乱对大鼠髁突软骨中护骨素及核因子-κB受体活化因子配体表达的影响

目的探讨渐进性咬合紊乱对大鼠髁突软骨中护骨素(OPG)及核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响。方法选取48只8周龄大鼠,雌雄各半,随机分为实验组和对照组。推右侧下颌、左侧上颌第一磨牙近中移动,4周后同样方式推右侧下颌、左侧上颌第三磨牙远中移动,建立渐进性咬合紊乱动物模型。实验2、4、6、8周后,每组、每性别各处死3只动物。免疫组织化学方法、阳性细胞面积百分比法分析髁突软骨中OPG、RANKL的表达特点。结果OPG和RANKL均表达于髁突软骨的肥大层,实验组OPG总体较对照组表达显著增多(P<0.05);实验2、6、8周组RANKL较对照组表达明显增多(P<0.05),实验4周组与对照组差异无统计学意义,雌雄性变化趋势相同。结论OPG和RANKL均参与了异常咬合所导致的髁突软骨病理性改建活动。

骨折患者血清中护骨素的表达及对骨折愈合过程的影响

目的探讨护骨素（OPG）在骨折愈合过程中的作用，为合理使用OPG促进骨折愈合提供依据。方法选取20～86岁新鲜骨折患者22例，于伤时及伤后1周、2周、3周抽取患者晨起空腹静脉血，通过ELISA法测定血清中OPG的含量。结果在患者骨折愈合过程中，OPG水平于伤后第2周达高峰。结论血清中OPG含量随骨折愈合有升高，提示血清OPG含量的升高与骨折愈合有密切关系，OPG可以促进骨折愈合。

1型糖尿病肾病患者血清护骨素水平与尿蛋白的相关性

目的探讨1型糖尿病肾病(T1DN)患者血清护骨素(OPG)水平与尿蛋白的关系。方法选取98例1型糖尿病(T1DM)患者作为病例组,根据尿白蛋白排泄率(UAER)分为正常白蛋白尿组(T1DM组)、尿蛋白组(T1DN组);40例同期年龄、性别相匹配的健康志愿者为对照组(NC组)。以酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清OPG含量。结果与NC组比较,T1DM组和T1DN组血清OPG增高(P<0.05);与T1DM组比较,T1DN组血清OPG增高(P<0.05)。血清OPG与空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h PG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)及UAER呈正相关。多元逐步回归分析显示,血清OPG是T1DN的独立影响因素。结论 T1DN患者血清OPG水平明显升高,血清护骨素作为重要的血管条件因子,可能在T1DN的发生中起一定作用。