烟草青枯病拮抗芽孢杆菌的筛选、鉴定及其抑菌活性初探

【目的】从不同烟区健康烟草的根际土壤样品中筛选对烟草青枯病具有较强拮抗作用的芽孢杆菌,为防治烟草青枯病提供生防资源。【方法】随机从福建龙岩、四川德昌、陕西汉中等地健康烟草根际土壤中采集30份土壤样品,采用平板稀释法从中分离芽孢杆菌,以烟草青枯病菌为靶标菌筛选拮抗芽孢杆菌,并通过培养特性、菌体形态、生理生化特征分析及16SrDNA序列分析,对筛选的拮抗芽孢杆菌菌株进行鉴定;采用温室盆栽试验,测定拮抗芽孢杆菌的促生作用、定殖能力和抑菌活性。【结果】从健康烟草根际土壤中分离得到1株抗烟草青枯病菌活性较好的菌株LW-4,经鉴定其为甲基营养型芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus。LW-4菌悬液对烟草青枯病菌的防治效果为70.37%,其可定殖于烟草根际土壤,具有良好的定殖能力。LW-4对烟草有明显的促生作用;用饱和度为25%的硫酸铵获得的LW-4抑菌物质对烟草青枯病菌的抑菌活性较高,抑菌圈直径达37.82mm。【结论】菌株LW-4在烟草青枯病防治中具有潜在的利用价值。

番茄灰霉病拮抗芽孢杆菌LW-6-1的筛选、鉴定及抑菌活性研究

【目的】从福建、四川、陕西等地耕作土壤中筛选对番茄灰霉病有较强生防效果的拮抗芽孢杆菌。【方法】随机采集福建、四川、陕西等地耕作土壤样品30份,采用平板稀释法从中分离芽孢杆菌,以番茄灰霉病菌、稻瘟病菌、辣椒疫霉病菌、苹果轮纹病菌、小麦根腐病菌、棉花枯萎病菌为靶标菌筛选拮抗芽孢杆菌;检测拮抗芽孢杆菌菌株无菌发酵液对供试病原真菌菌丝生长、孢子萌发、菌丝形态的影响;通过形态学特征、生理生化特征及16SrDNA序列分析,对筛选出的拮抗菌株进行鉴定。【结果】从采集的30份土壤样品中分离得到273株芽孢杆菌,经病原真菌定向筛选后,得到1株对番茄灰霉病菌、稻瘟病菌、辣椒疫霉病菌、苹果轮纹病菌、小麦根腐病菌、棉花枯萎病菌有较强生防效果的芽孢杆菌LW-6-1,LW-6-1菌株无菌发酵液对番茄灰霉病菌和稻瘟病菌菌丝生长的抑制效果较好,菌丝生长抑制率分别为95.34%和92.56%,EC50分别为10.18和10.84mL/L;对抑制番茄灰霉病菌和稻瘟病菌孢子萌发的抑制率分别为93.98%和92.09%,EC50分别为2.03和2.67mL/L。经鉴定,LW-6-1为甲基营养型芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus。【结论】筛选到的拮抗芽孢杆菌LW-6-1对番茄灰霉病有较强的生防效果,能显著抑制番茄灰霉病菌的生长。

1株烟草赤星病拮抗芽孢杆菌的鉴定与活性研究

【目的】筛选对烟草赤星病具有拮抗作用的芽孢杆菌并进行鉴定,同时研究其抗菌作用。【方法】从陕西、云南、湖北和河南4省烟区采集烟草根际土壤和烟叶,从中分离筛选烟草赤星病拮抗芽孢杆菌,并对拮抗性最强的1株芽孢杆菌进行形态学、生理生化特性、16SrDNA序列鉴定及粗提物抑菌作用测定。【结果】从烟草表面及根际土壤分离得到的芽孢杆菌中有10株对烟草赤星病有拮抗效果,将其中效果最好的1株芽孢杆菌定名为M-07C2F,其抑菌条带宽度达14.2mm;通过16SrDNA测序并结合其形态和生理生化特征,鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。通过显微观察发现,M-07C2F菌株使烟草赤星病病原真菌的菌丝生长出现畸形,菌丝体内部细胞原生质体分布不均匀,部分菌丝内原生质有流出形成空壳的现象。在离体条件下采用生长速率法,测得其对烟草赤星病菌丝生长有抑制作用,EC50为12.82mg/L;在活体条件下采用田间小区试验,测得当M-07C2F菌株粗提物质量浓度为80mg/L时,其对烟草赤星病的防治效果达到86.0%。【结论】菌株M-07C2F对烟草赤星病菌的抑菌作用明显,该菌株通过抑制烟草赤星病菌菌丝生长、减少孢子萌发来抑制病菌对植株的侵染,且菌株粗提物质量浓度越高,抑菌能力越强。

小麦赤霉病的生物防治研究 Ⅲ .拮抗芽孢杆菌B4、B6菌株的防病机制

枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)B4和B6菌株对小麦赤霉病菌(Fusariumgraminearum)的作用机制主要是通过产生抗生代谢产物抑制病菌的孢子萌发和菌丝生长。抗菌物质无挥发性,主要为脂溶性和水溶物质。通过硫酸铵盐析和SDS-PGE分析,抗菌蛋白是重要的抗菌物质,蛋白组分的分子量范围在20～63kD之间。最适于两菌株产生抗菌物质的条件是:YSP培养基、pH7 0、28℃和充足的氧。产生抗菌活性物质的高峰期,分别是在培养72h(B6菌株)和96h(B4菌株)。抗菌物质在酸性和中性条件下对热稳定,在碱性条件下则不稳定。

我国水产拮抗芽孢杆菌的研究进展

拮抗芽孢杆菌是最有发展前景、可替代饲料抗生素添加剂的优良益生菌之一。如何促进拮抗芽孢杆菌在水产养殖中的应用是缓解抗生素滥用的一项重要课题。鉴于此,本文在介绍我国水产拮抗芽孢杆菌研究与应用现状的基础上,对我国水产拮抗芽孢杆菌研究与应用中存在的问题进行剖析,并提出加强水产拮抗芽孢杆菌研究的建议。

两株拮抗芽孢杆菌对灵武长枣采后致腐真菌的抑菌作用

为明确拮抗芽孢杆菌菌株YBGJ1和YBGJ2对灵武长枣采后致腐真菌的抑菌作用及其对长枣采后的保鲜效果。采用形态学、生理生化结合分子生物学的方法对2株拮抗芽孢杆菌进行鉴定;并通过皿内对峙培养和离体保鲜试验测定了2株拮抗芽孢杆菌的抑菌作用和保鲜效果。结果表明,菌株YBGJ1和YBGJ2分别为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis和解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。菌株YBGJ1和YBGJ2培养滤液对灰葡萄孢的菌丝抑制率分别为95.83%和95.79%,对交链格孢的菌丝抑制率分别为79.46%和78.56%;菌株YBGJ1和YBGJ2培养滤液体积分数为50%时,对灰葡萄孢的孢子萌发抑制率分别为85.00%和91.09%,对交链格孢的孢子萌发抑制率分别为80.98%和84.38%。离体保鲜试验中,体积分数为30%的菌株YBGJ1培养滤液和体积分数为10%的菌株YBGJ2培养滤液对灵武长枣保鲜效果最好,与无菌水对照相比腐烂率分别降低70.83%和77.08%,延长货架期15~20 d。拮抗芽孢杆菌菌株YBGJ1和YBGJ2是极有前景的果蔬保鲜剂出发菌种。

拮抗芽孢杆菌对蒙古黄芪主要药效成分的影响

探讨黄芪根腐病拮抗芽孢杆菌SXKF16-1(Bacillus atrophaeu)和SXKF16-2(B. methylotrophicus)对黄芪主要药效成分的影响,旨在为后续多功能制剂的开发提供依据。采用灌根法对健康黄芪苗浇注拮抗菌发酵液,HPLC-UV-ELSD法对10种药效成分进行测定。结果表明,毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、紫檀烷苷、异黄烷苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素和黄芪皂苷Ⅳ、Ⅲ、Ⅱ、Ⅰ在各自标准曲线相应的线性范围内线性关系良好(r≥0.9950),试验测定结果可靠。拮抗芽孢杆菌SXKF16-1和SXKF16-2处理对药效成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、紫檀烷苷、异黄烷苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅳ的含量均无明显影响,但显著促进黄芪皂苷Ⅰ和黄芪皂苷Ⅲ含量的升高。2组处理与对照相比,总黄酮含量均无明显变化,总皂苷含量显著升高。拮抗芽孢杆菌SXKF16-1和SXKF16-2对黄芪主要药效成分的含量无负面影响,可促进某些皂苷类成分的积累,具备开发为多功能制剂的潜力。

枸杞叶枯病拮抗芽孢杆菌的筛选、鉴定及防效

为获得对枸杞叶枯病有较强拮抗作用的芽孢杆菌,从农田土壤中,分离、纯化得到151株芽孢杆菌,经病原真菌定向筛选得到1株对枸杞叶枯病菌拮抗活性较好的菌株LKYLW-1,其对枸杞叶枯病菌的抑菌带宽15.2 mm,采用平板对峙法、孢子萌发法和田间药效试验测定LKYLW-1的抑菌作用。结果表明:菌株LKYLW-1对枸杞叶枯病菌菌丝有致畸作用;菌株LKYLW-1发酵液对孢子萌发有抑制作用,EC50为9.35 mL·L-1;该菌株对枸杞叶枯病具有较好的治疗和预防效果。通过形态学特征、理化分析及16S rDNA序列分析对菌株LKYLW-1进行了鉴定,检测了其代谢产物,研究发现菌株LKYLW-1为萎缩芽孢杆菌Bacillus atrophaeus,其在代谢过程中可产生纤维素酶、蛋白酶和淀粉酶等抑菌物质;证明菌株LKYLW-1在枸杞叶枯病防治中具有潜在的利用价值。

香蕉枯萎病拮抗芽孢杆菌脂肽类抗生素基因引物筛选

脂肽类抗生素(cyclic lipopeptides, CLPs)是芽孢杆菌产生的一类天然农用抗生素,在芽孢杆菌生物防治方面发挥着重要作用。本研究测定了包括解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、暹罗芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌4种共20株芽孢杆菌对香蕉枯萎病等病原真菌的拮抗能力。设计了包括Bacillomycin、Fengycins、Iturins、Surfactin等CLPs相关合成基因的引物,对供试20株芽孢杆菌及7份土壤样品进行PCR扩增,筛选出可用于对芽孢杆菌和土壤监测的CLPs引物。结果表明:共有16株芽孢杆菌表现出拮抗病原真菌的能力,显微观察到这些芽孢杆菌发酵液中的脂肽类粗提物能够破坏Foc4的生物膜系统及细胞壁,使菌丝膨胀畸形;获得12对可有效扩增芽孢杆菌CLPs基因的引物对(BamD-F/R, BamA-F/R, FenA-F/R, FenB-F/R, 61FenA-F/R,61FenB-F/R, ItuA-F/R, ItuB-F/R, ItuC-F/R, ItuD-F/R, SrfAA-F/R, SrfAB-F/R),供试芽孢杆菌中具有拮抗能力的芽孢杆菌均能扩增到ItuC基因,拮抗芽孢杆菌抑制病原菌的能力与脂肽类抗生素基因的多样性与丰富度存在正向联系;通过对土壤总DNA进行扩增,发现所设计的4对引物均能有效监测土壤环境中的芽孢杆菌的CLPs基因,这一方法可以作为常规涂板计数与高通量测序方法的重要补充。为进一步进行田间监测指导施用芽孢杆菌控制植物土传病害提供理论支持。

防治烟草赤星病拮抗根际芽孢杆菌的筛选

从健康烟草根分离到669株根际芽孢杆菌,通过平板对峙培养、代谢产物活性检测,筛选到9株抑制烟草赤星病菌(A lternaria alternata)活性较强的菌株,其菌体及粗代谢产物产生的抑菌圈直径均在10 mm以上;离体防效和田间小区防治试验表明,菌株B6、B75的含菌发酵液和粗代谢产物的离体防效分别为75.6%、76.9%和62.5%、64.7%,小区防效分别为70.3%、75.8%和60.3%、64.4%。粗代谢产物的抑菌作用试验发现,菌株B75的粗代谢产物在一定浓度范围内均能抑制赤星病菌孢子萌发、菌丝生长与产孢。

解淀粉芽孢杆菌S27的鉴定、生物学功能测定及其对马铃薯病原真菌的拮抗作用研究

试验采用平板对峙法和Salkowski比色法测定了细菌S27的生物学功能,并对其进行了形态学及16SrDNA序列鉴定.结果表明:该菌对马铃薯枯萎病菌(Fusarium tricinctum),马铃薯丝核病菌(Rhizoctonia solani)和马铃薯炭疽病菌(Colletotrichum coccodes)都有良好的抑制作用,可致菌丝膨大,断裂及溶解等;该菌株在含有色氨酸和不含色氨酸的King培养基中分泌IAA的量分别为20.15和6.16 mg/L;能有效的溶解无机磷Ca3(PO4)2,其溶磷量为505.41mg/L.通过形态学与16SrDNA基因序列同源性分析,初步确定菌株S27为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens).

斑点叉尾“腹水症”病原的分离鉴定及体外芽孢杆菌拮抗试验

为了解斑点叉尾(Ictalurus punctatus)"腹水症"的发病原因,提高防控技术,试验在佛山市某渔场患典型"腹水症"的病上分离出优势菌落,通过形态学观察、生化及分子生物学鉴定确定该细菌为温和气单胞菌(Aeromonas sobria)。通过对健康斑点叉尾的回归感染实验发现,与原感染鱼发病症状相似,且分离鉴定得到相同病原菌。体外药敏试验结果显示:该温和气单胞菌菌株对恩诺沙星、氟苯尼考等7种药物敏感,而对四环素、强力霉素耐药。本研究还探讨了4种芽孢杆菌对分离的温和气单胞菌的拮抗作用,结果表明地衣芽孢杆菌对该病原的拮抗作用最好。

黄颡鱼肠道病原拮抗性芽孢杆菌的合理应用及筛选

本文对黄颡鱼肠道病原拮抗性芽孢杆菌的合理应用及筛选的研究,从芽孢杆菌概况入手,分析黄颡鱼肠道中对病原拮抗性芽孢杆菌的筛选,然后阐述病原拮抗性芽孢杆菌在水产中应用,为水产品的生产安全与鱼类的健康养殖提供一定的帮助,对益生菌在黄颡鱼配合饲料中合理应用具有重要的现实意义。

拮抗性芽孢杆菌的筛选及发酵培养基优化

筛选出具有拮抗作用的地衣芽孢杆菌,并对该拮抗菌进行发酵优化,为探寻新型抗生素从而解决传统抗生素耐药性问题提供参考。采用枯草芽孢杆菌初筛出拮抗性能明显的菌株,编号为H29、28、30、31、32,并用滤纸片法测量抑菌圈大小,再以枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、里氏木霉作为指示菌进行复筛。同时采用单因素实验法分析各因素对筛选出的拮抗性芽孢杆菌发酵培养的影响。结果表明,以不同菌作为指示菌,地衣芽孢杆菌的抑菌圈直径不同;单因素实验表明,浓度分别为1%的葡萄糖、3%的蛋白胨、0.15%的CaCl2对拮抗性地衣芽孢杆菌的拮抗性能影响最大。

拮抗菌株Kc-t99的鉴定及其抑菌活性研究

通过传统分类与分子生物学技术相结合的方法对从京郊菜园土壤中分离筛选的拮抗菌株Kc-t99进行鉴定,并采用生物测定的方法评价其抑菌活性。结果表明,菌株Kc-t99的形态学特征和生理生化特性与枯草芽孢杆菌基本一致,其16S rDNA序列与GenBank中已鉴定的枯草芽孢杆菌的16S rDNA序列同源性高达98.06%,据此初步确定其为枯草芽孢杆菌。抑菌试验表明该菌株对供试的5种病原真菌和4种细菌均具抑菌活性,其中对甘蓝枯萎病菌、黄瓜角斑病菌和桃褐腐病菌抑制作用显著。

赞皇大枣黑腐病菌拮抗菌的室内多重筛选及发酵条件优化

以赞皇大枣（Ziziphus jujuba‘Zanhuang Dazao’）黑腐病主要病原菌茎点霉菌（Phoma sp.）为靶标,对分离自土壤中的10株芽孢杆菌（Bacillus spp.）菌株进行室内多重筛选,并通过单因素试验对筛选获得的目标菌进行发酵培养基和发酵条件优化。结果表明,芽孢杆菌菌株B01对靶标菌有明显而稳定的拮抗效果;其最佳发酵培养基配方为蔗糖20.0 g/L,花生粉26.0 g/L,酵母粉5.5 g/L,KH2PO40.3 g/L,MgSO4·7H2O0.2 g/L,CaCO30.4 g/L,FeSO4·7H2O 0.02 g/L,MnSO4·7H2O 0.02 g/L;种子液浓度1.5×10^7～2.0×10^8CFU/mL时,最佳发酵条件为接种量4%（体积比）,装液量250 mL三角瓶装20 mL,原始pH 6.0,发酵温度24℃,发酵时间48 h。

马铃薯枯萎病拮抗菌的筛选与鉴定

从河北省、内蒙古自治区及贵州省等地的16个马铃薯试验田采集根际土样,分离得到288株芽孢杆菌菌株。经筛选得到6株对尖孢镰刀菌马铃薯专化型具有较强拮抗作用的菌株NZ-4、NZ-5、NZ-6、HC-Z-18、HCY-5和HC-Y-16,其抑菌带宽度均达到6.6 mm以上,抑菌圈直径均大于20.0 mm。根据它们的菌落和菌体形态特征及gyrB基因序列分析,将其鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。抑菌谱测定结果表明,拮抗菌株NZ-4对马铃薯炭疽病和疮痂病、小麦根腐病等病原菌也具有很强的拮抗作用。

大豆疫霉拮抗菌株的筛选与鉴定

[目的]筛选具有生防潜力的大豆疫霉拮抗菌,为寻找病害防控措施、设计新的疫病控制策略提供基础。[方法]从黑龙江省3个不同地区采集大豆根围土壤样本并分离各类土壤微生物,采用对峙培养法筛选出对大豆疫霉有拮抗作用的微生物,并在此基础上测定拮抗力较强微生物对大豆疫霉菌的生长抑制率及其对大豆疫病的控制作用。[结果]从土壤中分离得到1株拮抗效果相对较好的细菌,命名为B048菌株。对峙试验结果显示,拮抗细菌B048菌株对大豆疫霉的生长抑制率达97.5%;拮抗持久力测定显示,在与大豆疫霉对峙培养21d时抑菌带宽度仍达20.0mm;在盆栽试验中,B048对大豆疫病的防治效果为100%。经形态学和16SrDNA序列分析,初步鉴定该拮抗细菌为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。[结论]拮抗细菌B048菌株具有较好的开发成大豆疫病生物防治菌的前景。

芽孢杆菌GSBM05对葡萄白腐病菌的抑菌活性及其鉴定

旨在从土壤中分离筛选出对葡萄白腐病菌有强烈抑制作用的芽孢杆菌,检测其抑菌活性并进行鉴定。采用稀释平板法从土壤中分离芽孢杆菌,利用对峙培养和菌丝生长速率等方法对抑菌活性较好的芽孢杆菌GSBM05进行初步研究。结果表明,在土壤样品中共分离出40株芽孢杆菌,经初筛、复筛后得到1株具有强烈抑制效果的芽孢杆菌GSBM05。该菌株稀释20倍的无菌发酵液对孢子萌发和菌丝生长抑制率均在90%以上,发酵液不同组分对葡萄离体果实、叶片的防治效果均可达80%以上。该菌株对葡萄白腐病菌等11种植物病原菌具有良好的拮抗作用。通过形态观察、生理生化鉴定以及16S r DNA序列分析,确定该菌株为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。实验结果表明,甲基营养型芽孢杆菌GSBM05具有良好的抑菌活性,抑菌谱较广,可为葡萄白腐病生物防治提供新资源。

南方红豆杉根腐病病原菌与其拮抗菌的鉴定分析

本文首先提出采用常规分离法对南方红豆杉根腐病病原菌进行分离,并探究其拮抗菌。通过筛选得到YB27的抑菌效果最好,对其进行稳定性分析得到:在培养的前6天,YB27对病原菌的抑制作用逐渐增强;在100℃以下,可继续抑菌30 min;对氯仿不敏感,可在有机溶剂中保持稳定,且紫外照射对YB27抑菌效果无影响。但YB27稳定性可能会受到土壤pH值、红豆杉生长情况、土壤微生物等影响。