日本血吸虫成虫和虫卵排泄分泌抗原对Ⅰ型糖尿病模型小鼠的影响

目的观察日本血吸虫成虫排泄分泌抗原(adult-worm excretory-secretory protein,AES)和虫卵排泄分泌抗原(excretory-secretory antigen of eggs,ESA)对Ⅰ型糖尿病小鼠的影响,并初步探讨其作用机制。方法将24只雄性昆明鼠随机分为空白对照组、PBS组、AES组和ESA组,每组6只。空白对照组不作任何处理,后3组给予链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)溶液注射制备Ⅰ型糖尿病模型,建模成功后分别用PBS、AES、ESA腹部皮下多点免疫,1周免疫1次,持续免疫4周。免疫干预1周后开始检测小鼠血糖,持续检测4周;免疫干预4周后采用ELISA法测定小鼠血清中IL-4和IFN-γ水平变化,采用HE染色法检测小鼠胰腺组织病理变化。结果与PBS组相比,AES组和ESA组小鼠血糖水平从免疫后第2周起出现下降趋势,且ESA组小鼠血糖水平低于AES组,免疫后第2、3、4周小鼠血糖水平组间差异有统计学意义(F=1214.00、1055.00、683.64,P均<0.05)。各组小鼠血清IL-4和IFN-γ水平组间差异有统计学意义(F=146.84、21.11,P均<0.05),ESA组小鼠血清中IL-4水平[(61.45±6.14)pg/mL]高于PBS组[(21.96±3.98)pg/mL]和AES组[(49.31±3.19)pg/mL],IFN-γ水平[(129.48±36.75)pg/mL]低于PBS组[(316.43±66.38)pg/mL]和AES组[(212.09±70.89)pg/mL],差异均有统计学意义(P均<0.05)。PBS组小鼠的胰岛萎缩,数量减少,空泡样变性;ESA组小鼠有轻微胰岛萎缩;AES组介于PBS组和ESA组之间。结论日本血吸虫ESA对Ⅰ型糖尿病小鼠有一定保护作用,其机制可能是ESA刺激机体导致Th1反应抑制和Th2反应增强,表现为IL-4升高和IFN-γ下降,在一定程度上减轻小鼠胰腺组织的病理损伤。

旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原诱导的肠道免疫保护作用研究

目的 研究旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原(Trichinella spiralis muscle larvae excretory-secretory, Ts-Es)诱导小鼠肠道保护性免疫能力以及免疫调节作用。方法 54只BALB/c小鼠随机分为3组,空白对照组、旋毛虫感染组(Ts)、旋毛虫Ts-Es抗原免疫组(Ts-Es)。空白组小鼠腹腔注射PBS;抗原免疫组小鼠腹腔注射0.1 mL的Ts-Es抗原与等量弗氏完全佐剂;旋毛虫感染组腹腔注射PBS和弗氏完全佐剂,每隔7 d注射1次,共3次,末次注射后7 d旋毛虫感染组和Ts-Es抗原免疫组用400条/mL旋毛虫感染性幼虫灌胃攻击感染。解剖取材,检查肠道成虫及肌肉幼虫减虫率,用HE染色法观察肠道病理变化,RT-qPCR法检测小肠中目的基因mRNA表达水平。结果 与旋毛虫感染组相比Ts-Es抗原免疫组成虫和肌幼虫减虫率分别为49%(t=8.109,P<0.05)和67%(t=8.090,P<0.05);与空白对照组相比旋毛虫感染组小肠T-bet(t=5.25,P<0.05)、GATA3(t=2.50,P<0.05)、RORγ-t(t=4.71,P<0.05)、IFN-γ(t=3.17,P<0.05)、IL-4(t=2.60,P<0.05)、IL-5(t=3.05,P<0.05)、IL-17A(t=4.88,P<0.05) mRNA表达量升高,Foxp3表达量没有统计学差异(t=1.55,P>0.05);与旋毛虫感染组相比Ts-Es抗原免疫组T-bet(t=4.23,P<0.05)、RORγ-t(t=4.30,P<0.05)、IFN-γ(t=3.02,P<0.05)、IL-17A(t=3.17,P<0.05) mRNA表达量下降;GATA3(t=3.96,P<0.05)、Foxp3(t=2.76,P<0.05)、IL-4(t=5.16,P<0.05)、IL-5(t=3.69,P<0.05)、IL-10(t=2.61,P<0.05) mRNA表达量升高;与空白对照组相比Ts-Es抗原免疫组GATA3(t=6.4,P<0.05)、Foxp3(t=4.32,P<0.05)、IL-10(t=2.6,P<0.05)、IL-4(t=7.26,P<0.05)、IL-5(t=6.3,P<0.05) mRNA表达量升高均有统计学差异;RORγ-t(t=0.41,P>0.05)、T-bet(t=1.02,P>0.05)、IFN-γ(t=0.09,P>0.05)、IL-17A(t=1.80,P>0.05) mRNA表达量无统计学差异;肠道HE染色结果显示,与旋毛虫感染组相比抗原免疫组炎症好转,肠道HE染色结果显示,与旋毛虫感染组相比抗原免疫组炎症好转。结论 Ts-Es抗原免疫小鼠后可诱发转录因子GATA3,Foxp3相关的混合型免疫应答,并抑制旋毛虫感染引起的T-bet、RORγ-t所介导的炎症型免疫反应,抑制炎型细胞因子的释放,诱导宿主产生抗旋毛虫感染的免疫保护效果。

猪囊尾蚴排泄分泌抗原LRRC15蛋白对仔猪树突状细胞活化的影响

目的 探讨猪囊尾蚴排泄分泌抗原(Excretory secretory antigen, ESA)富含亮氨酸重复序列结构域(Leucine-rich repeat containing 15, LRRC15)蛋白对仔猪树突状细胞(Dendritic cell, DC)成熟活化的影响。方法 收集正常仔猪DC体外诱导、培养,获得成熟与未成熟DC(immature DC, imDC)。在正常仔猪未成熟DC中,分别加入LRRC15蛋白、ESA刺激,将LRRC15组作为实验组;同时建立ESA对照组、LPS阳性对照组、LRRC15+LPS阳性对照组、LPS+ESA阳性对照组和培养基阴性对照组。流式细胞术检测DC表面标志物MHC-Ⅱ、CD80、CD86的表达量;ELISA检测DC细胞培养上清TNF-α、IL-6、IL-10、IL-12的分泌水平。结果 与未刺激DC组相比,LRRC15蛋白组诱导DC表面标志物CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达均增加。在LPS存在情况下,LRRC15蛋白也能诱导CD80、CD86、MHC-Ⅱ分子上调;ELISA检测结果显示,与1640培养基组、LPS组和ESA组相比,LRRC15蛋白组均诱导IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α分泌降低,LRRC15蛋白组与1640培养基组相比IL-6(t=7.529,P<0.05),IL-10(t=2.780,P<0.05),IL-12(t=4.673,P<0.05),TNF-α(t=2.894,P<0.05);LRRC15蛋白组与LPS组相比IL-6(t=26.663,P<0.05),IL-10(t=12.038,P<0.05),IL-12(t=27.594,P<0.05),TNF-α(t=29.540,P<0.05);LRRC15蛋白组与ESA组相比IL-6(t=6.343,P<0.05),IL-10(t=2.579,P<0.05),IL-12(t=8.102,P<0.05),TNF-α(t=3.890,P<0.05)。ESA组与1640培养基组相比能诱导IL-12分泌(t=3.430,P<0.05),其他细胞分子分泌水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 LRRC15蛋白能诱导DC成熟活化,并抑制DC相关细胞因子的分泌,但能否通过其他途径诱导Th细胞分化还需进一步分析。

猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B1蛋白原核表达条件的优化

研究了培养基、温度、诱导时间I、PTG和氨苄青霉素终浓度以及诱导前后温度变化等不同条件对重组菌菌体生长和融合蛋白表达量的影响,以期获得猪囊尾蚴排泄分泌抗原(ES Ag)Ts8B1蛋白基因在大肠杆菌中的最大表达量。结果显示,使用TB培养基于37℃培养3 h后,采用终浓度为0.2mmol/L的IPTG和200mmol/L的氨苄青霉素在32℃过夜诱导培养,pGEX-6p-1/Ts8B1融合蛋白表达量最大,表达的融合蛋白约占菌体总蛋白的33%。SDS-PAGE表明pGEX-6p-1/Ts8B1融合蛋白大小约为33 kDa,与预计的分子量大小一致,Western blot分析表明其能与猪囊尾蚴多克隆抗体起特异性反应,并获得最大产量的融合蛋白。为研究其在猪囊尾蚴病检测中的应用价值奠定了基础。

旋毛虫肌幼虫可溶性抗原、排泄分泌抗原的电泳分析

本文报道了应用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦（ＩＥＦ）电泳及二维电泳（ＩＥＦ／ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）对旋毛虫肌动虫排泄分泌（ＥＳ）抗原和肌幼虫可溶性抗原的分析结果。肌幼虫ＥＳ抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后用考马斯亮蓝染色蛋白质，结果显示１６条蛋白带，分子量范围２１～８０ＫＤ，其中主带９条。ＩＥＦ电泳后分别用ＰＡＳ染多糖、考马斯亮蓝Ｒ－２５０染蛋白质、Ｎｉｌｅ＇ｓ蓝染脂、醋酸ａ－萘酯／坚固蓝染酪酶同工酶，结果肌幼虫ＥＳ抗原分别显示１６，２６、７及０条带；肌幼虫可溶性抗原分别显示２１、３８、４及１１条带。二维电泳后用考马斯亮蓝Ｇ－２５０染色多肤斑点，结果ＥＳ抗原显示多肽斑点６１个；肌幼虫可溶抗原显示１２２个多肽斑点。

旋毛虫排泄分泌抗原的成分及应用价值

旋毛虫病是一种重要的人畜共患寄生虫病,长期以来用于免疫诊断和免疫预防的旋毛虫抗原,尤其是排泄分泌(ES)抗原引起了国内外众多学者的关注。本文综述了近年来旋毛虫ES抗原有效成分的研究及其在免疫诊断和免疫预防方面的应用价值,并且提出应用DNA重组技术在体外大量表达ES抗原和利用多肽合成技术在体外大量合成抗原用于免疫诊断和免疫预防将是今后的研究方向。

猪囊尾蚴循环抗原和排泄分泌抗原研究进展

猪囊尾蚴病是由带科（Tacniidac）带属（Tacnia）的猪带绦虫（有钩绦虫）（Tacniaso,urn）的幼虫．猪囊尾蚴（Cysticercus cellulosac）寄生于猪的肌肉和其他器官中而引起的一种人畜共患寄生虫病，俗称囊虫病。该病主要流行于拉丁美洲、印度、亚洲和非洲，并且呈地方性流行，多呈慢性经过，临床症状不明显而易被忽略。

斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原Dot-ELISA诊断肺吸虫病研究

目的 探索斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原的免疫诊断价值。方法 采用斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原Dot-ELISA检测 2 8例斯氏狸殖吸虫病人血清、6份日本血吸虫病人血清、4份华支睾吸虫病人血清、2 0份健康人血清中抗斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原的抗体IgG。结果 斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原与 2 8例斯氏狸殖吸虫病人血清均呈阳性反应 ,与其它 2种吸虫病和健康人血清未发生反应。结论 斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原Dot -ELISA为诊断肺吸虫病敏感。

华支睾吸虫膜抗原/排泄分泌抗原酸性磷酸酶的克隆、表达、生物学特征分析及组织定位

目的:对华支睾吸虫(Clonorchis sinensis,Cs)成虫酸性磷酸酶(acid phosphatase,AP)进行克隆、表达、生物学特征分析、组织定位及膜抗原/排泄分泌抗原鉴定。方法:对Cs AP进行生物信息学、分子生物学、免疫组化及明胶酶谱分析。结果:从Cs c DNA文库中筛选出编码AP新基因,全长1 410 bp,重组并由大肠杆菌表达、纯化,得到分子量为55 k D的重组蛋白Cs AP。Western blotting分析表明,Cs AP既是膜抗原又是分泌排泄抗原;免疫组化显示,Cs AP荧光显示于成虫的表皮层和肠支,在囊蚴也有显示,在雷蚴和尾蚴未显示荧光;ELISA分析表明Cs AP识别华支睾吸虫病人和日本血吸虫病人存在吸虫间的交叉免疫反应,Cs AP及粗抗原识别轻、中、重度感染程度华支睾吸虫病人的差别不明显。重组蛋白免疫大鼠后,总Ig G抗体滴度于3周达较高峰,抗体效价大于1∶25 600。明胶降解实验表明:Cs AP具降解胶原能力。结论:上述结果表明,Cs AP在大肠杆菌中高效表达,具有较好的免疫原性,但血清诊断价值不理想;Cs AP可能既是膜抗原,又是排泄分泌抗原。

旋毛虫排泄分泌抗原53-ku重组蛋白上调M2型肺泡巨噬细胞减轻脓毒症小鼠急性肺损伤

【目的】探讨重组旋毛虫排泄分泌抗原53-ku蛋白(rTsP53)对小鼠急性肺损伤的保护作用及其机制。【方法】采用尾静脉脂多糖注射(LPS,10 mg/kg)建立BALB/c小鼠急性肺损伤模型。在肺损伤后2 h尾静脉注射rTsP53(50μg/只)治疗。统计各组小鼠72 h累计死亡率,HE染色法观察各组小鼠肺脏病理损伤情况,测量肺脏湿/干质量比(W/D),ELISA法检测各组小鼠肺泡灌洗液IL-6和IL-4浓度,RT-PCR法检测各组小鼠肺泡灌洗巨噬细胞TNF-α、iNOS、IL-10和Arg-1的mRNA表达。【结果】经rTsP53蛋白治疗可明显降低急性肺损伤小鼠72 h死亡率,减轻脓毒症小鼠肺脏组织的病理损伤,降低肺脏的湿干重比,降低Smith评分。LPS组小鼠肺泡灌洗液IL-6较空白组升高,而IL-4下降,灌洗巨噬细胞的TNF-α,iNOS的mRNA表达水平较空白组明显升高,而IL-10,Arg-1的mRNA表达水平下降,表现出M1表型极化的特点;经rTsP53蛋白治疗的脓毒症小鼠肺泡灌洗液IL-6浓度下降,IL-4水平上升,灌洗巨噬细胞向M2表型极化,表现为IL-10,Arg-1的mRNA表达水平较脓毒症组明显升高,而iNOS的mRNA表达水平下降。【结论】rTsP53蛋白通过上调M2型巨噬细胞抑制炎症反应和修复组织损伤,对脓毒症小鼠急性肺损伤发挥保护效应。

弓形虫强免疫原性排泄分泌抗原组分的鉴定

旨在筛选弓形虫排泄分泌抗原(ESA)中具有强抗原性的蛋白质组分。通过双向电泳和免疫印迹技术,对弓形虫ESA进行分析。结果共筛选到了18个免疫显性蛋白质点,并成功对其中6个具有代表性的蛋白质点进行了质谱鉴定,显示为微线体蛋白1、微线体蛋白4、包囊基质蛋白和14-3-3蛋白,共4种。本研究进一步为弓形虫病的诊断和疫苗研究提供新的实验依据。

旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠免疫保护作用的比较研究

目的 比较旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠的免疫保护作用。方法 收集人工感染大鼠小肠内的成虫， 经研磨和冻融制备成虫可溶性抗原。采用体外培养的方法从培养液中提取旋毛虫成虫排泄分泌抗原。分别用两种抗原免疫小鼠， 间隔１ 周共免疫３ 次， 末次免疫后１ 周， 每只小鼠攻击感染１００ 条旋毛虫感染性肌肉幼虫。感染后１ 周检查小鼠小肠内成虫数量和雌虫生殖力， 感染后５ 周检查肌肉幼虫负荷。结果 成虫可溶性抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别为７９５５ ％ 、６２２５ ％ 和６５０ ％ 。成虫排泄分泌抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别是９７２７ ％ 、８６６０ ％ 和９００ ％ 。结论 实验结果表明旋毛虫成虫可溶性抗原和成虫排泄分泌抗原均能够诱导宿主产生较强的抗攻击感染的免疫力， 但后者的免疫原性更强。

细粒棘球蚴原头节虫体和排泄分泌抗原抗体系统检测犬粪抗原的比较研究

用细粒棘球蚴原头节虫体及排泄分泌抗原—抗体系统进行交叉酶联免疫吸附试验的实验结果显示 :成虫虫体抗原和原头节虫体抗原呈现交叉反应 ,表明这两个发育阶段的虫体抗原具有主要的共同抗原组分 ;原头节排泄分泌抗原的免疫血清 Ig G与成虫虫体抗原之间交叉滴度很低 ,但与原头节虫体抗原之间存在完全的交叉反应 ,因而提示原头节排泄分泌抗原是原头节的期特异性抗原 ,与其相应抗体具有较高的亲合力。检测犬粪标本的结果提示感染细粒棘球绦虫的犬粪抗原是一种广谱抗原。两种抗原

旋毛虫幼虫排泄分泌抗原用于诊断人旋毛虫病的可行性探讨

作者将自行分离制备的旋毛虫肌肉期幼虫２４小时排泄分泌抗原，用间接ＥＬＩＳＡ共检测３４份旋毛虫病人血清，３２份为阳性，阳性率９４％．而８２份正常人血清均为阴性反应。且不与蛔虫病人、囊虫病人血清发生交叉反应，但与肺吸虫及血吸虫病人血清发生交叉反应。经用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及铵银染色后显示，该抗原含有１１种蛋白组份，分子量介于９６ｋＤ－１７．６ｋＤ之间。有３条主带，分子量分别为４０、４８、５３ｋＤ。酶联免疫印迹试验表明旋毛虫病人血清能特异识别分子量为４８ｋＤ蛋白。而肺吸虫及血吸虫病人血清所能识别的区带均小于４０ｋＤ。该结果表明４８ｋＤ蛋白抗原组分在人旋毛虫病上具有潜在诊断价值，而酶联免疫印迹试验不失为一种可行的人旋毛虫病的诊断方法。

SDS-PAGE分析斯氏肺吸虫幼虫和成虫排泄分泌抗原

目的 :分析斯氏肺吸虫幼虫和成虫排泄分泌抗原 (ES -Ag)的分子生物学特性 ,有利于提高免疫诊断方法的敏感性和特异性。方法 :采用SDS -PAGE分析斯氏肺吸虫幼虫和成虫排泄分泌抗原。结果 :斯氏肺吸虫幼虫排泄分泌抗原在 2 4～ 6 0KD之间可见 4条显色带 ,其中 2 4KD为主带 ,成虫排泄分泌抗原在 2 0～ 6 0KD之间可见 5条显色带 ,其中 2 0KD和 32KD为主带。结论 :斯氏肺吸虫幼虫和成虫排泄分泌抗原共有的主区带为 2 0KD。

细粒棘球绦虫排泄分泌抗原的研究——绵羊免疫后或感染后的抗体应答及细胞应答

绵羊用六钩蚴排泄分泌抗原(ES)、原头节ES抗原、原头节可溶性粗抗原、绵羊棘球蚴囊液(SHCF)或囊壁抗原免疫后,和攻击感染虫卵后,应用ELISA、酯酶染色法及瑞氏-姬姆萨染色法研究了血清抗体、T、B淋巴细胞、嗜酸性粒细胞及淋巴细胞的应答反应。初步结果表明,绵羊在感染细粒棘球绦虫虫卵后或抗原免疫后、攻击感染后都表现明显的血清抗体应答反应,T淋巴细胞、嗜酸性粒细胞及淋巴细胞数量增加,免疫应答依不同的抗原而具有不同性质。

斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原分析及其应用

目的探索斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原 (ES-Ag)的诊断价值。方法采用 SDS-PAGE和 EITB分析斯氏狸殖吸虫幼虫 ES-Ag,以幼虫 ES-Ag Dot-ELISA检测人血清抗体。结果幼虫 ES-Ag在 2 0 k D～ 60 k D间可显示 4条蛋白区带 ,主带 2 4 k D抗原蛋白对人体斯氏狸殖吸虫感染具有诊断价值。幼虫 ES-Ag Dot-ELISA检测 2 8例肺吸虫病人血清抗体均为阳性 ,最低阳性反应滴度为 1∶ 3 2 0 ,滴度倒数几何均数为 1 1 60。6份日本血吸虫病人血清、4份华支睾吸虫病人血清、2 0份健康人血清皆呈阴性反应。结论斯氏狸殖吸虫幼虫 ES-AgDot-ELISA为诊断肺吸虫病敏感。

伊氏锥虫排泄分泌抗原用于免疫预防的初步研究

以不同剂量的伊氏锥虫排泄分泌抗原（ＥＳＡ）对小鼠进行常规免疫，用同株伊氏锥虫攻击，观察并记录小鼠死亡时间、死亡只数，比较免疫后血清抗体水平。结果表明：除对照组和５μｇ组未产生特异性抗体外，其余各组均产生较高滴度的抗体，其中２００μｇ组为１∶６４００，１００μｇ组为１∶３２００。ＥＳＡ５０，１００和２００μｇ免疫组可对小鼠产生有效的保护，小鼠存活时间较对照组延长２～３倍。