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烟草甲攻击素基因LsAttacin2的表达及其在抗细菌胁迫中的作用
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作者 夏鹏亮 严毅 +2 位作者 宋兴宜 黄勇 杨文佳 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期501-509,共9页
【目的】本研究旨在阐明烟草甲Lasioderma serricorne幼虫体内攻击素(attacin)基因LsAttacin2在响应细菌侵染过程中的功能。【方法】利用RT-PCR扩增烟草甲LsAttacin2的cDNA全长序列;利用RT-qPCR检测LsAttacin2在烟草甲不同发育阶段(卵... 【目的】本研究旨在阐明烟草甲Lasioderma serricorne幼虫体内攻击素(attacin)基因LsAttacin2在响应细菌侵染过程中的功能。【方法】利用RT-PCR扩增烟草甲LsAttacin2的cDNA全长序列;利用RT-qPCR检测LsAttacin2在烟草甲不同发育阶段(卵、低龄幼虫、高龄幼虫、蛹、低龄成虫和高龄成虫)、4龄幼虫不同组织(头、表皮、前肠、中肠、后肠、脂肪体和马氏管)、大肠杆菌Escherichia coli和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus侵染及其肽聚糖处理4龄幼虫后的相对表达量;通过注射法利用RNAi沉默烟草甲4龄幼虫LsAttacin2的表达后,检测大肠杆菌和金黄色葡萄球菌侵染烟草甲4龄幼虫后的死亡率。【结果】克隆获得烟草甲LsAttacin2(GenBank登录号:MT635176)的cDNA全长序列,其开放阅读框长504 bp,编码167个氨基酸残基,LsAttacin2 N端存在信号肽,C端具有Attacin_C超家族的保守结构域。RT-qPCR结果表明,LsAttacin2在烟草甲测试的各发育阶段均有表达,且在高龄幼虫和蛹中高表达;LsAttacin2主要在4龄幼虫中肠、表皮和脂肪体等免疫组织中表达;大肠杆菌和金黄色葡萄球菌及其肽聚糖均诱导了烟草甲4龄幼虫体内LsAttacin2的上调表达。RNAi结合细菌生物测定结果表明,ds LsAttacin2注射组4龄幼虫中LsAttacin2的表达量在注射24和48 h时较对照组(注射ds GFP)分别显著下降了72.8%和80.4%;RNAi后48 h,与注射ds GFP的对照组相比,ds LsAttacin2注射组大肠杆菌和金黄色葡萄球菌侵染24 h时4龄幼虫的死亡率分别提高了21.1%和24.4%。【结论】本研究结果表明LsAttacin2可能在烟草甲抗细菌的免疫应答过程中起着重要作用。 展开更多
关键词 烟草甲 攻击素 基因表达 细菌侵染 免疫 RNA干扰
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家蝇攻击素(Attacin)基因的克隆与表达 被引量:17
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作者 耿华 安春菊 +2 位作者 郝友进 李德森 杜荣骞 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1344-1350,共7页
通过同源克隆策略并结合cDNA末端快速扩增 (RACE)技术 ,克隆到了编码家蝇攻击素 (Attacin)基因的全长cDNA序列 (GenBank登陆号 :AY4 6 0 10 6 ) ,并对相应的氨基酸序列进行了序列比对 ,对系统关系等进行了生物信息学分析。家蝇Attacin的... 通过同源克隆策略并结合cDNA末端快速扩增 (RACE)技术 ,克隆到了编码家蝇攻击素 (Attacin)基因的全长cDNA序列 (GenBank登陆号 :AY4 6 0 10 6 ) ,并对相应的氨基酸序列进行了序列比对 ,对系统关系等进行了生物信息学分析。家蝇Attacin的cDNA全长 778bp ,其中包括 6 2 7bp的开放式读码框 (ORF) ,4 4bp的 5′末端非编码区 (5′UTR)和 10 7bp的 3′末端非编码区 (3′UTR) ,相应的蛋白产物含 2 0 8个氨基酸 ,与其他双翅目昆虫的Attacin具有很高的相似性 ,约 5 0 %~ 70 %。以邻接法 (Neighbor Joining ,NJ)所构建的系统关系表明 ,家蝇的Attacin与其他双翅目昆虫的Attacin起源于共同的祖先。应用半定量RT PCR的方法 ,研究家蝇幼虫在受到外源刺激后Attacin基因的表达 ,结果表明 ,在家蝇幼虫体内Attacin基因呈诱导型表达 。 展开更多
关键词 家蝇 攻击素 同源克隆 RT—PCR
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用cDNA末端扩增法克隆柞蚕攻击素(attacin)基因及序列分析 被引量:5
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作者 张波 王林美 +3 位作者 叶博 李树英 赵振军 范琦 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期333-339,共7页
利用cDNA末端扩增(RLM-RACE)方法,克隆了柞蚕攻击素(attac in)基因cDNA序列(GenBank登陆号:AY960680)。柞蚕攻击素基因cDNA序列全长912 bp,其中699 bp的蛋白质编码区可编码233个氨基酸。预测蛋白质分子量为25 kD,等电点(pI)为7.54。柞... 利用cDNA末端扩增(RLM-RACE)方法,克隆了柞蚕攻击素(attac in)基因cDNA序列(GenBank登陆号:AY960680)。柞蚕攻击素基因cDNA序列全长912 bp,其中699 bp的蛋白质编码区可编码233个氨基酸。预测蛋白质分子量为25 kD,等电点(pI)为7.54。柞蚕攻击素基因中包含2个内含子。S ignal P 3.0 Server程序分析结果显示,柞蚕攻击素第1-17位氨基酸为信号肽序列。蛋白质功能区分析预测,柞蚕攻击素在第47-112氨基酸之间为攻击素-N(attac in-N)功能区,第113-233位氨基酸之间为攻击素-C(attac in-C)功能区。以邻接法(ne igh-bor-join ing,NJ)建立了与其它昆虫攻击素的系统关系图。 展开更多
关键词 柞蚕 攻击素 末端扩增
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家蝇抗菌肽Attacin-2基因的克隆、序列分析和诱导表达 被引量:12
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作者 柳峰松 孙玲玲 +1 位作者 唐婷 王丽娜 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期27-33,共7页
攻击素(attacin)作为昆虫抗菌肽之一,在昆虫的先天免疫中起着重要作用。本研究通过家蝇Musca domesticaEST序列筛选并结合RACE技术克隆了家蝇的Attacin-2基因(Mdatta2)cDNA序列。其全长819 bp,包含一个726 bp的完整开放阅读框(open read... 攻击素(attacin)作为昆虫抗菌肽之一,在昆虫的先天免疫中起着重要作用。本研究通过家蝇Musca domesticaEST序列筛选并结合RACE技术克隆了家蝇的Attacin-2基因(Mdatta2)cDNA序列。其全长819 bp,包含一个726 bp的完整开放阅读框(open reading frame,ORF),以及42 bp的5'末端非翻译区(5'UTR)和51 bp的3'末端非翻译区(3'UTR),编码241个氨基酸残基,推导的多肽N端22个氨基酸残基为信号肽序列。同源性分析表明,其氨基酸序列与嗜凤梨果蝇Drosophila ananassae的Attacin一致性最高(46%)。以邻接法(Neighbor-Joining,NJ)构建的系统关系表明,家蝇的Attacin-2与其他双翅目昆虫的Attacin起源于共同的祖先,属于Attain_C超家族。应用实时荧光定量PCR的方法研究家蝇幼虫在受到外源细菌刺激时Mdatta2基因的表达,结果显示,在大肠杆菌Escherichia coli和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus分别刺激后3 h和6 h,家蝇幼虫Mdatta2表达量出现显著上调。Mdatta2基因在家蝇幼虫体内呈诱导型表达,表达水平随诱导时间的不同而变化,提示Mdatta2基因可能在家蝇免疫防御过程中起着重要作用。 展开更多
关键词 家蝇 抗菌肽 攻击素 基因克隆 基因表达
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家蝇抗菌肽Attacin在毕赤酵母中的异源表达 被引量:6
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作者 李小波 王婷婷 +3 位作者 马艳 朱家勇 刘漫宇 金小宝 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期332-336,共5页
目的构建家蝇抗菌肽(攻击素,attacin)成熟肽的重组表达质粒并转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,诱导attacin表达。方法 PCR扩增家蝇抗菌肽attacin基因成熟肽编码区,克隆至酵母表达载体pPIC9K中,将重组质粒pPIC9K-attacin用Sac... 目的构建家蝇抗菌肽(攻击素,attacin)成熟肽的重组表达质粒并转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,诱导attacin表达。方法 PCR扩增家蝇抗菌肽attacin基因成熟肽编码区,克隆至酵母表达载体pPIC9K中,将重组质粒pPIC9K-attacin用SacⅠ酶切线性化后,采用电转化法将其转入毕赤酵母GS115中,通过抗性、表型和PCR筛选多拷贝整合株。甲醇诱导毕赤酵母GS115/pPIC9K-attacin的表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定表达产物,采用琼脂糖孔穴扩散法检测其对大肠埃希菌K12D31的抑制作用。结果重组表达质粒pPIC9K-attacin构建成功,电转化获得多拷贝整合转化子毕赤酵母GS115/pPIC9 K-attacin,表达产物经SDS-PAGE和Western-blotting鉴定,在约Mr22000处有蛋白条带,表达产物可抑制E.coli K12D31的生长。结论家蝇抗菌肽attacin在巴斯德毕赤酵母中成功进行了表达。 展开更多
关键词 家蝇 抗菌肽 攻击素 巴斯德毕赤酵母 异源表达
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荒漠昆虫小胸鳖甲抗菌肽Attacin基因的克隆及低温表达模式分析 被引量:3
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作者 李洁琼 陆雪莹 +1 位作者 刘小宁 马纪 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1381-1390,共10页
昆虫在低温冷驯化过程中会发生很多基因表达的改变, 从转录组层面上开展广泛的研究有助于全面认识昆虫对冷响应的分子机制。为了对荒漠昆虫小胸鳖甲Microdera punctipennis的 4℃低温转录组数据中一个上调表达的Attacin基因(MpAttacin... 昆虫在低温冷驯化过程中会发生很多基因表达的改变, 从转录组层面上开展广泛的研究有助于全面认识昆虫对冷响应的分子机制。为了对荒漠昆虫小胸鳖甲Microdera punctipennis的 4℃低温转录组数据中一个上调表达的Attacin基因(MpAttacin1)进行深入了解并分析其对低温诱导的响应情况, 本研究通过生物信息学分析对该基因进行了鉴定, 并利用实时荧光定量PCR对其在低温下的mRNA水平进行了检测。结果表明: 获得的MpAttacin1 cDNA长度为523 bp, 包含一个456 bp的开放阅读框和67 bp的5′端非翻译区。MpAttacin1编码含有151个氨基酸残基的多肽, N端含有17个氨基酸的信号肽序列。同源性分析表明, 其氨基酸序列与其他鳞翅目、 双翅目和鞘翅目昆虫的抗菌肽Attacin具有30%~40%的一致性。以邻接法(neighbor-joining, NJ)构建的系统进化树表明, 小胸鳖甲Attacin1与其他鞘翅目昆虫的Attacin起源于共同的祖先, 属于Attacin_C超家族。实时荧光定量PCR分析结果显示, 在4℃与-4℃低温胁迫时, MpAttacin1基因的转录都呈现先升高后降低的应激反应趋势, 但在对低温的响应时间和强度上有所不同。在4℃处理5 h和9 h后, MpAttacin1的表达量分别为对照组的2.3和3.8倍, 而在-4℃处理7 h和9 h后, 分别为对照组的2.4和1.5倍。这些研究表明, 除已知的抗菌功能外, Attacin在昆虫的低温适应过程中可能也发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 荒漠昆虫 小胸鳖甲 冷响应基因 攻击素 低温 抗菌肽 表达谱
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A Website Security Risk Assessment Method Based on the I-BAG Model
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作者 Lin Liu Liang Liu +2 位作者 Cheng Huang Zhao Zhang Yong Fang 《China Communications》 SCIE CSCD 2016年第5期172-181,共10页
In order to protect the website and assess the security risk of website, a novel website security risk assessment method is proposed based on the improved Bayesian attack graph(I-BAG) model. First, the Improved Bayesi... In order to protect the website and assess the security risk of website, a novel website security risk assessment method is proposed based on the improved Bayesian attack graph(I-BAG) model. First, the Improved Bayesian attack graph model is established, which takes attack benefits and threat factors into consideration. Compared with the existing attack graph models, it can better describe the website's security risk. Then, the improved Bayesian attack graph is constructed with optimized website attack graph, attack benefit nodes, threat factor nodes and the local conditional probability distribution of each node, which is calculated accordingly. Finally, website's attack probability and risk value are calculated on the level of nodes, hosts and the whole website separately. The experimental results demonstrate that the risk evaluating method based on I-BAG model proposed is a effective way for assessing the website security risk. 展开更多
关键词 web security risk assessment attack graph Bayesian network
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Controlling the decision to fight or flee: the roles of biogenic amines and nitric oxide in the cricket 被引量:1
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作者 Paul A. STEVENSON Jan RILLICH 《Current Zoology》 SCIE CAS CSCD 2016年第3期265-275,共11页
Aggression is a common behavioral strategy employed by animals to secure limited resources, but must be applied with restraint to limit potential costs including injury. How animals make the adap- tive decision to fig... Aggression is a common behavioral strategy employed by animals to secure limited resources, but must be applied with restraint to limit potential costs including injury. How animals make the adap- tive decision to fight or flee is barely known. Here, we review our work on crickets that reveals the roles of biogenic amines, primarily octopamine (the insect analog of noradrenaline) and nitric oxide (NO). Using aminergic drugs, we found that amines are not essential for actually initiating aggres- sion. However, octopamine is necessary for mediating the aggression-promoting effects of poten- tially rewarding experiences including stimulation with a male antenna, physical exertion, winning, and resource possession. Hence, octopamine can be considered as the motivational component of aggression. Imposed handicaps that impede aggressive signaling revealed that the agonistic actions of an opponent perceived during fighting act to reduce aggression, and that crickets make the deci- sion to flee the moment the accumulated sum of such aversive experiences exceeds some critical level. Treatment with nitridergic drugs revealed that the impact of the opponent's aggressive actions is mediated by NO. NO acts to suppress aggression by promoting the tendency to flee and is primarily responsible for the depressed aggressiveness of subordinates after social defeat. Octopamine and dopamine can each restore aggression in subordinates, but only dopamine is necessary for normal recovery. The role of serotonin remains unclear, and is discussed. We conclude that octopamine and NO control the decision to fight or flee by mediating the effects of potentially rewarding and aversive experiences, respectively. 展开更多
关键词 agonistic behavior agonistic signals assessment DECISION-MAKING experience-dependent plasticity INSECTS neuro-modulation OCTOPAMINE social behavior.
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Relative reactivities of halogen-substituted substrates (R-Br,R-C1) toward the halophilic attack by a carbanion
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作者 傅伟敏 张晓军 蒋锡夔 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 2001年第4期337-343,共7页
Relative reactivities of bromine-substituted substrates (R-Br) or chlorine-substituted substrates (R-CI) toward bromophilic or chlorophilic attack by a carbanion have been evaluated by the intermolecular competition k... Relative reactivities of bromine-substituted substrates (R-Br) or chlorine-substituted substrates (R-CI) toward bromophilic or chlorophilic attack by a carbanion have been evaluated by the intermolecular competition kinetics. Relative reactivity orders are CF3CFBr2 >CF3CBr3≥CBr4 > CHBr3 > CF3CFBrCF2Br > CF2Br2 > BrCF2CF2Br > BrCH2CO2Et≥ BrCF2CFHBr > CH2Br2 > BrCH2CH2Br, and CI3CNO2 > CI3CCN > CI3CCOPh > cyclo-C5CI6> CI3CCOCI > CCI3CF2CI > CCI3CF3 ≥ CCI4 > CCI3CCI3 ≥ CCI3(CF2)2CI > CI3CCOCCI3 > CCI3(CF2)6CI > CI3CCO2Et > CI3CF > CI3CPh>CI3CCH2O2CCH3. 展开更多
关键词 relative reactivities halogen-substituted substrates relative rates of halophilic attacks intermolecular competition kinetics
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