^(188)Re标记CEA嵌合人源化抗体在荷人结肠癌裸鼠的放射免疫显像研究

背景与目的:癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)在多种肿瘤,尤其是在结肠癌中高表达,抗CEA抗体在人结肠癌的诊断治疗中具有良好的应用前景。本研究采用188Re标记CEA嵌合抗体,研究其在荷人结肠癌裸鼠体内的生物分布及放射免疫显像。方法:用氯化亚锡还原法标记CEA嵌合抗体及其亲本鼠单抗C50,薄层层析法鉴定标记抗体的标记率、放化纯度及体外稳定性,ELISA鉴定标记后的免疫活性,研究188Re-CEA嵌合抗体在荷人结肠癌裸鼠体内的分布及放射免疫显像效果,并与C50鼠单抗的显像效果进行比较。结果:188Re-CEA嵌合抗体的放化纯度大于95%;比活为356MBq/mg;免疫活性为61%;薄层层析示其在体外稳定。188Re-CEA嵌合抗体的生物学分布显示:注射后24h,肿瘤与肾脏、血液的放射性比值分别为0.75、0.99,与其余各脏器的放射性比值均大于1.78;48h,肿瘤与肾脏、血液的放射性比值分别为1.02、1.12,与其余各脏器的放射性比值均大于2.08。20h后,肿瘤显影清晰。CEA嵌合抗体的放射生物学特性及显像效果与C50鼠单抗基本相同。结论:188Re-CEA嵌合抗体在裸鼠体内放射免疫显像显示出良好的肿瘤特异性,且显像速度较快,可显示的肿瘤最小可达0.5cm。CEA嵌合抗体降低了免疫原性,在人体内显像更优于其亲本鼠单抗C50。

基于外标记的图像配准在放射免疫显像图像融合中的应用

目的:本研究旨在验证外基准标记物在肿瘤患者单光子发射计算机断层术(single photon emission computed tomo-graphy,SPECT)放射免疫显像与CT图像融合中的临床应用价值。方法:将外标记物固定于6例肿瘤患者背部体表后,分别行SPECT放射免疫显像和CT扫描,并行图像配准融合。结果:6例患者的放射免疫显像图像能够精确地与CT图像进行融合,肿瘤病灶定位准确。结论:通过外标记物配准可以实现放射免疫显像与解剖显像图像进行融合,提高诊断定位的精确性。

肺动脉血栓放射免疫显像实验研究

目的 通过动物实验探讨肺动脉血栓放射免疫显像在肺栓塞诊断及血栓性质鉴别中的价值。方法 选取杂种犬 7只 ,制成肺动脉血栓栓塞模型。静脉注射99Tcm 标记的活化血小板单克隆抗体SZ 5 1,进行活体γ显像。完整取出心肺后行离体心肺显像。分别观察血栓部位及周围组织的放射性分布 ,计算栓塞部位与周围组织的放射性比值。随后取出血栓及周围部分组织 ,称重后测定单位质量的放射性计数及单位质量血栓与周围组织的放射性比值。结果 注入显像剂后 1h ,血栓部位开始显影并逐渐清晰。新鲜血栓放射性摄取明显高于周围肺组织 ,注入显像剂后 3h ,活体显像和完整心肺离体显像新鲜血栓与周围肺组织的放射性比值分别为 2 .8± 0 .6和 3.5± 1.2。形成 1d的新鲜血栓的放射性摄取明显高于形成 1周左右的血栓 ,单位质量新鲜血栓与周围组织的放射性比值达 17.5± 1.3,是形成 1周左右血栓的 2 .6倍。结论 99Tcm SZ 5 1肺动脉血栓放射免疫显像对诊断急性肺栓塞的形成及鉴别新鲜与陈旧血栓具有较好的应用前景。

DTPA放射免疫显像预定位技术的建立及其临床应用

为了使常规短半衰期放射性核素Ｉｎ－１１３Ｍ能够用于ＲＩＩ研究，作者对传统ＲＩＩ方法进行改进，建立了ＤＴＰＡ预定位技术，即首先将抗肿瘤抗体在体外偶联，注入体内，待３天后抗体与肿瘤结合，再注入游离Ｉｎ－１１３Ｍ。Ｉｎ－１１３Ｍ可与Ａｂ上的ＤＴＰＡ结合，从而可在注射Ｉｎ－１１３Ｍ后２小时达到肿瘤显像效果。ＤＴＰＡ预定位技术的建立，简化了ＲＩＩ的研究方法，有利于ＲＩＩ研究从科研阶段走向临床应用。

抗小细胞肺癌单克隆抗体2F_7F(ab′)_2片段的肺癌放射免疫显像

目的 探讨抗小细胞肺癌单克隆抗体99Tcm 2F7F(ab′) 2 放射免疫显像对肺癌诊断的可行性及用药安全性。方法 1 8例肺癌患者静脉注射99Tcm 2F7F(ab′) 2 1～ 2mg约 1 1 1 0MBq ,7～ 8h后行胸部平面前后位及断层显像 ,2 4h再行平面显像。显像结果与X线胸片对照 ,以病灶区与正常对照区的计数比 (T/N) >1 .2为阳性。结果 1 8例患者从注药到显像结束以及随后的随访均未发现任何不良反应。未经治疗或正在化疗的小细胞肺癌患者 9例显像均呈阳性 ;化疗超过 1 0d或多次化疗者计 5例 ,4例显像阳性 ,临床均为治疗效果较差者 ,余 1例显像阴性 ,治疗效果好。 2例腺癌、1例鳞癌显像阴性 ,另 1例腺癌显像阳性。 2 4hT/N比值比 7～ 8h大。结论 99Tcm 2F7F(ab′) 2 显像阳性率高 ,无不良反应。

^(131)I标记抗CD20单克隆抗体在荷瘤裸鼠体内的放射免疫显像

目的探讨131I-anti-CD20McAb经瘤内注射后在荷人Burkitt’s淋巴瘤细胞系Raji细胞移植瘤裸鼠体内的放射免疫显像。方法131I标记物的标记采用IODO-GEN碘化标记;注射标记物后第1、3、7、15天将荷瘤裸鼠SPECT显像后活杀,定标器测量并计算瘤、血等12种器官或组织的%ID/g值,根据MIRD委员会推荐的公式计算肿瘤累积吸收剂量。结果131I-anti-CD20McAb瘤内注射组的SPECT显像结果优于腹腔注射组和131I-IgG瘤内注射组,该组肿瘤%ID/g值在给药后第1、3和7天分别为后两组的1.4～17倍和1.7～3.7倍,肿瘤累及吸收剂量在给药后第3、7和15天分别为后两组的1.5～2.5倍和6.0～12.6倍。结论131I-anti-CD20McAb经瘤内途径给药可以使肿瘤获得最高的放射性药物摄取率,为下一步运用该途径进行放射免疫治疗提供了实验依据。

抗人卵巢癌单域抗体V_H 基因的克隆、表达及放射免疫显像

为研究小分子抗体作为导向载体的作用 ,制备抗人卵巢癌单克隆抗体COC1 83B2 单域抗体(重链可变区 ,VH) ,并进行放射免疫显像 (RII) .利用PCR技术从COC1 83B2 杂交瘤细胞中扩增COC1 83B2 的VH 基因片段 ,并将其克隆入高效表达载体pTHA90中 .重组子转化大肠杆菌TOP10 ,IPTG诱导表达VH 融合蛋白 ,经改进氯化亚锡法进行锝 ( 99mTc)的标记 ,在卵巢癌裸鼠皮下瘤模型上进行RII.结果表明 :( 1 )VH 融合蛋白以包涵体形式获高效表达 ;( 2 )改进氯化亚锡法成功进行VH 融合蛋白99mTc的标记 ,标记率达 96%以上 ;( 3)用99mTc标记VH 融合蛋白进行RII,肿瘤显像早 ,图像清晰 .说明99mTc可用于小分子抗体标记 ,应用单域抗体VH

大肠癌术后腹内复发的放射免疫显像研究

用１３１Ｉ标记抗癌胚抗原单克隆抗体（ＣＥＡＭｃＡｂ）对临床难于诊断和处理的大肠癌腹内复发病变行放射免疫显像（ＲＩＩ）．１１例患者中１０例为阳性，ＲＩＩ共检出≥２ｃｍ的癌症灶１７／１８处，假阳性、假阴性各１处．故其对≥２ｃｍ癌症灶的探测灵敏度和阳性图像的实际符合率均为９４．４％．ＲＩＩ对血ＣＥＡ阴性、隐匿性复发和腹内广泛播散者均有较高的诊断价值．ＲＩＩ还能判断复发癌是否侵犯膀胱．

抗HIF-1α肺腺癌人源单链抗体的制备和放射免疫显像

目的利用噬菌体抗体库技术制备特异性的抗缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor,HIF-1α)肺腺癌人源单链抗体(scFv),并用于荷人肺腺癌裸鼠体内放射免疫显像(radioimmunoimaging,RII)研究。方法利用噬菌体抗体库技术筛选特异性抗HIF-1α肺腺癌人源scFv,并将其感染大肠杆菌HB2151,进行scFv的可溶性表达。接种肺腺癌A549细胞复制荷瘤裸鼠模型,尾静脉注射131I标记可溶scFv,于注射后24、48、72、120h进行SPECT平面静态检查,观察肿瘤内放射性浓聚情况,用感兴趣区(region of interest,ROI)技术分析T/NT值,取平面静态检查肿瘤显影清晰时进行SPECT/CT图像融合。结果经鉴定证实制备出特异性的抗HIF-1α肺腺癌人源scFv,荷瘤裸鼠体内RII结果显示131I-可溶scFv可以选择性地积聚于肿瘤组织,肿瘤区放射性浓聚、T/NT值均在72h达到高峰,利用ROI技术得到的T/NT值此时最大可达3.19。72h时融合图像肿瘤显像良好,图像清晰。结论成功制备特异性抗HIF-1α肺腺癌人源scFv,131I标记后荷人肺腺癌裸鼠RII肿瘤显影良好。

^(131)I-泡球蚴多抗在泡球蚴大鼠体内的放射免疫显像

背景:泡球蚴病早期不易被发现,各种影像及免疫试验手段不能降低其误诊率。目的:观察131I-泡球蚴多抗在泡球蚴大鼠模型的生物学分布及放射免疫显像。方法:36只Wistar大鼠随机分为3组,每组12只。A组:肝带虫大鼠;B组:正常大鼠;C组:肝带虫大鼠。A、B组大鼠腹腔注射131I-泡球蚴多抗1mL(37MBq),C组大鼠腹腔注射131I1mL(37MBq),注射后24,48,72,96h进行ECT静态显像,测定泡球蚴感兴趣区值。96h后测量3组大鼠各组织器官单位质量每分钟放射性计数,A组大鼠计算虫/非虫比值。结果与结论:A组大鼠肝脏接种泡球蚴部位可见放射性分布,解剖后观察位置相符,72h泡球蚴感兴趣区值最高,显像效果最好。B组和C组大鼠肝区均未见明显放射性分布,3组大鼠均见甲状腺部位及胃部有放射性聚集。96h后处死3组大鼠,A组大鼠体外放射性计数测定,泡球蚴虫体为(18.610±3.401)×103cpm/g,高于体内除甲状腺及胃外的脏器,差异具有显著性意义(P<0.001)。将泡球蚴组织与其他器官比较计算虫/非虫比值可以看出,除甲状腺和胃组织其余组织虫/非虫值均大于1.28。3组大鼠除虫体组织外,其余各组织器官的单位质量脏器每分放射性计数差异无显著性意义(P>0.05)。证实131I-泡球蚴多抗能成功作用于泡球蚴并与之结合。

人绒癌裸鼠移植瘤模型的建立及其放射免疫显像

将人绒癌新鲜组织碎块接种于Ｂａｌｂ／ｃ裸鼠皮下，成功地建立了移植瘤模型，并已传代１６～６８代，荷瘤裸鼠腹水或瘤内血ｈＣＧ达４００～２００００ｍＩＵ／ｍｌ以上。利用１３１Ⅰ标记的小鼠抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体（抗ｈＣＧＭｃＡｂ）对荷瘤裸鼠进行放射免疫显像，结果标记抗体能够特异性地聚集于肿瘤部位，使肿瘤显像，最佳显像时间为注入标记抗体后７２～９６ｈ。

供放射免疫显像用荷瘤动物模型──家兔肾被膜下移植人肿瘤组织

为解决放射免疫显像研究中缺乏合适荷瘤动物模型的难题，参照用于药敏检测小鼠肾被膜下（ＳＲＣ）移植人肿瘤组织模型的实验方法及理论基础，建立家兔ＳＲＣ移植人肿瘤组织模型。结果发现肿瘤移植后第３天血管建立，第６天肿瘤细胞生长，免疫组化呈阳性结果。在肿瘤移植后第３天注入标记单抗，第６天显像即可得到肿瘤清晰影像。家兔ＳＲＣ肿瘤模型，具有方法简单、应用范围广、静脉注射容易，适于γ相机显像等优点。为放射免疫显像研究提供了较为理想的荷瘤动物模型。

^(131)I标记的抗甲状腺髓样癌人源单链抗体在荷瘤裸鼠的体内分布和放射免疫显像

目的测定^(131)I标记的抗甲状腺髓样癌(MTC)人源单链抗体(scFv)的放射化学纯度,并研究荷MTC细胞(TT cells)裸鼠^(131)I-scFv体内分布和体外放射免疫(RII)显像特点。方法氯胺T法对scFv进行^(131)I标记,Sephadex G200纯化标记抗体,三氯醋酸沉淀法测定标记率,纸层析法测定标记抗体在1、6、12、24h的放射化学纯度、室温稳定性和血清稳定性。构建荷TT细胞裸鼠模型,尾静脉注射^(131)I-scFv,分析^(131)I-scFv在裸鼠重要组织器官的分布情况,并于注射药物12、24、48、72h行SPECT正位静态显像,观察肿瘤内放射性浓集情况,肿瘤组织显像清晰时行SPECT/CT融合图像。结果标记抗体经纯化后,测得标记率为(78.60±0.08)%,放射化学纯度为(87.10±0.78)%,各个时间点的放射化学纯度均在90%以上。荷瘤裸鼠体内研究结果显示,^(131)I-scFv的放射性瘤/血、瘤/肌肉比值随时间的增长逐渐增高,48h达最高。RII显示,^(131)I-scFv可选择性聚集于肿瘤组织,48h时肿瘤显像与全身组织对比最清晰,此时融合图像可清晰显示肿瘤部位的放射性浓聚情况,体内分布和体外显像结果一致。结论成功标记了抗MTC人源scFv,生物活性较高,荷瘤裸鼠肿瘤的RII较好。

^（99m）Tc－C50肠癌放射免疫显像的初步临床应用

目的：探索肠癌及其转移灶的诊断方法。方法：使用高汝桢改良的Ｓｃｈｗａｒｚ方法进行９９ｍＴｃ标记抗ＣＥＡ单克隆抗体（Ｃ５０），对临床疑肠癌患者２２例、肠癌术后患者５例静脉注射标记抗体后６小时和（或）２４小时进行放射免疫显像（ＲＩＩ），并与手术和病理结果进行对照。结果：２４例肠恶性病变手术和病理发现４３个癌灶，ＲＩＩ发现３４个，灵敏度为７９．１％。９例肝外腹腔内转移灶２０个，ＲＩＩ阳性１５个，灵敏度为７５％；２０例原发性肠癌中，１６例原发灶出现放射性浓集，灵敏度为８０％。１８例无肝外腹腔内转移中１５例显像阴性，特异性为８３．３％。结论：９９ｍＴｃ－Ｃ５０ＲＩＩ对原发性肠癌、肠癌术后复发的诊断以及肠癌转移灶的发现均有意义。

^(99)Tc^m-抗人粒细胞单克隆抗体对兔炎症的放射免疫显像

目的 评价99Tcm 抗人粒细胞单克隆抗体 (McAb)SZ 10 2在实验性炎症家兔放射免疫显像中的价值。方法 以 2 亚氨基噻吩盐酸盐 (2 IT)修饰SZ 10 2 ,99Tcm 葡庚糖酸钠 (GH)配体交换法标记SZ 10 2。兔左下肢炎症模型经耳缘静脉注入99Tcm SZ 10 2 ,行SPECT显像 ,99Tcm 标记非特异性鼠IgG作阴性对照。显像完毕处死动物 ,测定99Tcm SZ 10 2离体炎症肌肉 血液和对侧正常肌肉 血液放射性比值。结果 99Tcm SZ 10 2对家兔炎症部位显影清晰 ,其最佳显像时间为注射后 2～ 4h,而99Tcm标记非特异性鼠IgG对家兔炎症部位未能显影。血液半清除时间 :99Tcm SZ 10 2T1 2α为 (0 .10± 0 .0 4 )h ,T1 2 β为 (3.19± 0 .4 1)h。99Tcm SZ 10 2显像离体炎症肌肉 血液和对侧正常肌肉 血液放射性比值分别为 0 .2 2± 0 .0 2和 0 .0 2± 0 .0 1。结论 99Tcm SZ 10 2具有活体内炎症定位导向能力 ,显像时间短 。

(131)~碘标记抗人AFP-R-LCA McAb对原发性肝癌的放射免疫显像

目的:探讨抗人小扁豆凝集素结合型甲胎蛋白异质体单克隆抗体（AFP－R－LCAMcAb）对原发性肝癌细胞的特异性亲和力及放射免疫显像。方法：应用(131)Ⅰ标记的AFP－R－LCAMcAb对11例AFP阳性肝癌、6例AFP阴性肝癌及4例肝炎后肝硬化患者进行放免显像，观察不同时间肝癌显像情况。结果：11例AFP阳性肝癌患者中有9例肿瘤区显像，而6例AFP阴性肝癌及4例肝炎后肝硬化患者无1例出现肝肿瘤区及肝内局部显像。且小剂量(131)I－AFP－R－LCAMcAb对人体肝功能及凝血酶原时间无明显影响（P＜0．05）。结论：AFP－R－LCAMcAb对人AFP阳性肝癌细胞有较强的特异性亲和力，有希望成为肝癌放免检测及治疗的理想载体。

125^I标记抗人CD40 mAb 5H6在荷人卵巢癌(HO8910)BALB/c裸鼠体内分布及放射免疫显像

目的:研究125I标记抗人CD40单克隆抗体(mAb)5H6同卵巢癌细胞HO8910体外结合的生物学特性以及在荷瘤鼠体内的分布和放射免疫显像。方法:氯胺-T法进行mAb 5H6 125I标记(125I-5H6),Lindmo法计算125I-5H6的免疫活性分数;细胞结合饱和实验进行Scatchard分析计算解离常数Kd及最大结合位点数Bmax;建立荷人卵巢癌(HO8910)裸鼠模型,分析125I-5H6在体内的分布,并用SPECT进行放射免疫显像。结果:mAb 5H6标记率为(85.4±5.2)%,放射化学纯度为(99.2±0.5)%,125I-5H6免疫活性分数为(38.6±5.4)%,与HO8910细胞的亲和力Kd=(0.711±0.06)nmol/L。在荷瘤鼠体内特异性结合HO8910肿瘤,48小时达到高峰,放射免疫显像肿瘤清晰可见。结论:125I-5H6同卵巢癌HO8910细胞在体外结合具有很高亲和力,在体内能特异性结合HO8910肿瘤,能获得优质的放射免疫图像。

^(99m)Tc-EGFR-McAb用于荷人肺腺癌裸鼠的放射免疫显像研究

目的:评价99mTc标记的表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体(Monoclone antibody,McAb)用于荷人肺腺癌裸鼠的放射免疫显像(Radioimmunoimaging,RII)效果,并进行相关比较分析。方法:①建立荷人肺腺癌裸鼠动物模型;②采用99mTc直接标记法标记抗EGFR的单克隆抗体,并对标记抗体的特性进行鉴定;③利用99mTc-EGFR-McAb进行荷人肺腺癌裸鼠模型的RII及体内分布研究。结果:99mTc对EGFR-McAb的标记率为91.5%±3.8%,标记抗体比活度为(2.8±0.2)MBq/μg,放射化学纯度为96.5%±3.2%。放射免疫显像结果显示,99mTc-EGFR-McAb对肿瘤组织有较高的亲和性,通过感兴趣区(Regional interest,ROI)技术测得T/NT比值为2.74±0.5,明显高于对照组(P<0.05)。标记抗体的体内分布结果与显像结果基本一致。结论:99mTc-EGFR-McAb用于荷人肺腺癌裸鼠的放射免疫显像能得到较理想的靶/非靶比值,EGFR是肺腺癌放射免疫显像研究值得推荐的目标抗原。

^(131)I-Herceptin放射免疫显像用于Herceptin相关心脏毒性机制的实验研究

目的探讨Herceptin相关心脏毒性的机制。方法131I-Herceptin采用Iodogen法制备。取家兔5只,注射131I-Herceptin 3h～5d,以放射免疫显像观察Herceptin的分布,以肌肉为参照,计算并比较各组织、器官的计数与肌肉计数的比值(O/M)。于注射后第5天处死家兔,取心、肺等组织,称重并测定放射性计数,计算并比较每克组织摄取分数(%ID/g)。以免疫组化测定并比较家兔各脏器HER2表达。结果注射后3h心脏O/M比值显著高于肺(P=0.032)和肝(P=0.019),但24h后显著降低(P=0.001)。各组织器官的每克组织的摄取分数以血液最高,为12.6%ID/g;其次为肝,为8.6%ID/g;心肌、肺和脾的摄取分数相近;肌肉最低,为1.6%ID/g。血液的摄取分数与其它脏器比较,除肝脏外(P=0.098),其它均显著低于血液。心肌摄取仅高于肌肉(P=0.041)和小肠(P=0.034),数值上甚至低于肝、肾、脾。心肌、肺和脾的摄取分数相近。心肌HER2表达水平与肝、肺、肾等组织未见显著差异(H=3.236,P=0.172)。结论心肌属于HER2低表达组织,对Herceptin的摄取量并不高于其它组织器官。