循环肿瘤细胞联合血清整合素β1对病理性乳头溢液患者乳管内恶性病变的诊断价值

目的探讨循环肿瘤细胞(CTCs)联合整合素β1(ITGβ1)对病理性乳头溢液(PND)患者乳管内恶性病变的诊断价值。方法回顾性分析2022年1月至2023年9月北京市通州区妇幼保健院及首都医科大学附属北京朝阳医院收治的212例PND患者的临床资料,根据乳管病理检查结果将研究对象分为良性病变组(187例)和恶性病变组(25例)。采用差异富集-荧光免疫染色原位杂交技术(SE-iFISH)检测PND患者CTCs数量,采用酶联免疫吸附试验检测PND患者血清ITGβ1水平。采用多因素logistic回归分析PND患者发生乳管内恶性病变的影响因素。通过受试者工作特征(ROC)曲线分析CTCs数量、血清ITGβ1水平对PND患者乳管内恶性病变的诊断效能。结果两组年龄、体质量指数(BMI)、月经状态、溢液类型、乳腺肿块比较差异有统计学意义(P<0.05)。恶性病变组CTCs数量多于良性病变组,血清ITGβ1水平高于良性病变组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,年龄>50岁、BMI>24 kg/m^(2)、血样溢液、较多的CTCs数量、较高的血清ITGβ1水平是PND患者发生乳管内恶性病变的独立危险因素(P<0.05)。CTCs数量、血清ITGβ1水平均具有诊断PND患者乳管内恶性病变的应用价值(P<0.05),且两项指标联合检测的诊断效能更优[AUC(95%CI)=0.961(0.925~0.983),P<0.001],灵敏度和特异度分别为96.00%、84.49%。结论CTCs数量、血清ITGβ1水平在乳管内恶性病变的PND患者体内显著升高,二者联合对PND患者乳管内恶性病变具有较好的诊断价值。

心肌成纤维细胞DDR2对整合素β1调控的机制研究

目的探究心肌成纤维细胞盘状结构域受体(discoid domain receptor 2,DDR2)对于整合素(integrin)β1表达的调控分子机制。方法体外培养成年SD大鼠心肌成纤维细胞,使用RNA干扰和高表达载体分别下调和上调DDR2的表达,Western blot法检测血管紧张素Ⅱ(angiogensinⅡ,AngⅡ)作用细胞后其整合素β1、细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,Erk1/2)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达水平。其后使用Erk1/2的特异性抑制剂PD98059以及TGF-β1的RNA干扰阻断相应信号通路,Western blot法再次检测AngⅡ刺激细胞后整合素β1的表达变化。结果AngⅡ可以上调心肌成纤维细胞DDR2以及整合素β1的表达水平。DDR2的RNA干扰可以阻断AngⅡ引起的心肌成纤维细胞整合素β1的升高效应,同时降低了磷酸化Erk1/2(p-Erk1/2)和TGF-β1的表达水平。使用Erk1/2的特异性抑制剂PD98059可以削弱AngⅡ引起的心肌成纤维细胞TGF-β1和整合素β1的升高效应,而TGF-β1的RNA干扰可以削弱AngⅡ引起的心肌成纤维细胞整合素β1的升高效应。高表达DDR2可以显著性升高TGF-β1和整合素β1的表达水平,而TGF-β1的RNA干扰可以削弱DDR2上调引起的心肌成纤维细胞整合素β1的升高效应。结论AngⅡ通过DDR2-Erk1/2-TGF-β1信号途径调控心肌成纤维细胞整合素β1的表达水平,该信号途径可能在心肌损伤后结构改建中起着重要作用。

针刀干预对颈椎病兔软骨终板整合素β1-FAK力学信号通路的影响

目的观察针刀干预对颈椎病兔软骨终板整合素β1-FAK力学信号通路相关因子整合素β1、磷酸化黏着斑激酶(p-FAK)mRNA和蛋白表达的影响,探讨针刀在延缓椎间盘退变恢复颈椎力学平衡过程中的可能作用机制。方法将40只新西兰雄性兔随机分为空白组、模型组、电针组及针刀组,每组10只,空白组不做干预处理,其余建立颈椎病动物模型,持续12周。造模成功后电针组于兔颈肌两侧"天柱""颈百劳""大杼"穴处行毫针干预,隔天治疗1次,每周3次,共3周;针刀组于兔颈肌硬结、条索以及棘突等处行针刀干预,每周1次,共3次。干预结束后1周,采用实时荧光定量PCR法检测椎间盘软骨终板整合素β1、p-FAK的mRNA表达水平,采用Western Blot技术检测椎间盘软骨终板整合素β1、p-FAK的蛋白含量。结果与空白组相比,模型组软骨终板整合素β1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),软骨终板p-FAK蛋白表达水平升高(P<0.05)。与模型组相比,电针组软骨终板整合素β1、p-FAK蛋白表达水平均升高(P<0.05)。针刀组软骨终板整合素β1、p-FAK mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。与电针组相比,针刀组软骨终板p-FAK mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论针刀干预可调节软骨终板整合素β1、p-FAK mRNA和蛋白表达,这可能是针刀减缓椎间盘退变,重建颈椎力学平衡,治疗颈椎病的作用机制之一。

六君子汤含药血清对TGF-β1介导的A549细胞MMP-9和整合素β1蛋白表达的影响

目的：观察六君子汤含药血清对TGF-β1介导的A549细胞MMP-9和整合素β1表达的影响,探讨六君子汤影响肺癌转移的可能机制。方法：制备六君子汤含药血清,体外培养A549细胞。实验分三组：空白血清组,空白血清＋TGF-β1组,六君子汤最佳浓度含药血清＋TGF-β1组。普通显微镜下观察TGF-β1对A549细胞的干预程度。细胞划痕实验检测六君子汤含药血清对TGF-β1介导的A549细胞迁移能力的影响。免疫细胞化学法和Western Blot技术检测MMP-9和整合素β1在蛋白表达水平上的变化。结果：TGF-β1能够明显诱导A549细胞发生上皮间质转化。与空白血清组比较,空白血清＋TGF-β1组细胞迁移程度明显增加（P〈0.05）,MMP-9和整合素β1的蛋白表达增加（P〈0.05）;与空白血清＋TGF-β1组比较,含药血清组细胞迁移程度下降（P〈0.05）,MMP-9和整合素β1的蛋白表达下降（P〈0.05）。结论：（1）六君子汤含药血清能够减缓TGF-β1介导的A549细胞的迁移能力;（2）六君子汤含药血清能够降低TGF-β1介导的A549细胞MMP-9和整合素β1蛋白的表达。

整合素β1介导的ERK/MAPK通道在人晶状体上皮细胞转分化中的作用

目的研究转化生长因子-β2(transforming growth factor β2,TGF-β2)对培养的人氉晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)整合素β1、磷酸化ERK(pERK)及F-actin表达的影响,探讨整合素β1介导的ERK/MAPK通路在HLEC转分化中的作用。方法体外培养的HLEC,加入不同浓度(0ng·L-1和10ng·L-1、33ng·L-1、100ng·L-1、333ng·L-1、1000ng·L-1)的TGF-β2处理不同时间(12h、24h、48h、72h),采用MTT法测定TGF-β2对HLEC增殖的影响,并确定最佳干涉浓度和时间用于后续实验。实验分2组,实验组用含最佳干涉浓度TGF-β2的培养基培养HLEC,对照组使用无血清培养基培养,于最佳干涉时间对2组细胞行免疫细胞化学染色检测HLEC中整合素β1、pERK及F-actin的表达,RT-PCR检测整合素β1、pERK及F-actin mRNA的表达。结果 TGF-β2抑制HLEC的增殖,呈浓度和时间依赖性,TGF-β2的最佳干涉终浓度为100ng·L-1,作用48h后达到最大抑制效果。TGF-β2增加HLEC整合素β1、pERK及F-actin的表达,相对表达量分别为0.116±0.031、0.123±0.028、0.140±0.033,均较对照组(0.045±0.011、0.025±0.009、0.079±0.024)明显升高(均为P<0.01)。RT-PCR结果显示,TGF-β2明显促进整合素β1mR-NA、pERK mRNA及F-actin mRNA的表达,相对表达量分别为0.658±0.146、0.582±0.171、0.760±0.193,较对照组(0.246±0.051、0.338±0.092、0.138±0.027)明显升高(均为P<0.01)。结论 TGF-β2抑制了HLEC的增殖,促进整合素β1、pERK及F-actin的表达,整合素β1介导的ERK/MAPK信号通路可能参与了HLEC转分化过程,导致后囊膜混浊。

牵张成骨时整合素β1在细胞内外张应力传递中的作用

目的:检测整合素β1(integrinβ1)在下颌牵张成骨过程中的分布和表达,初步探讨整合素β1在张应力信号传导过程中的作用。方法:对12只大耳白兔行双侧下颌骨骨切开术,并安置口外牵张器,经7d间歇期后,按1mm/d的速率将下颌骨延长6mm。在间歇期末,牵张结束当天及牵张结束后第7天和第14天分别处死3只动物,取牵张区新生组织作免疫组化检测不同时间点整合素β1的分布特征和表达水平,并用染色强度等级分析法对免疫组化表达水平的变化进行评价。结果:整合素β1免疫组化阳性染色主要位于牵张间隙内的间充质细胞和新生骨小梁表面的成骨细胞。间歇期末,多数间充质细胞和成骨细胞免疫组化染色呈弱阳性;牵张结束时,染色强度显著上升;然而,固定到第7天和第14天,染色强度明显弱于牵张结束时。结论:整合素β1可能在牵张成骨时将外界的张应力传递至感应细胞内并刺激成骨细胞系增殖分化的过程中起重要作用。

DS对胃癌细胞整合素β1表达及腹腔种植转移的影响

目的探讨硫酸右旋糖苷(dextran sulfate,DS)对胃癌细胞腹腔种植转移的影响。方法采用细胞培养,建立裸鼠动物模型。剖腹并行HE染色观察胃癌细胞腹腔种植转移情况,采用RT-PCR和免疫组化SP法检测DS对黏附分子整合素β1 mR-NA和蛋白的影响。结果剖腹观察瘤节数经HE染色证实,DS实验组腹腔种植转移的瘤节数明显少于对照组(P<0.05)。RT-PCR技术和免疫组化检测结果显示,DS实验组大网膜整合素β1 mRNA和蛋白表达与对照组相比均明显降低,P均=0.000。结论 DS抑制胃癌细胞的腹腔种植转移,且伴有整合素β1表达下降。DS可能是通过下调整合素β1 mRNA影响其蛋白的表达进而抑制肿瘤的种植转移,黏附分子整合素β1的mRNA和蛋白表达下降可能是DS抑制胃癌细胞种植转移的机制之一。

整合素β1与胶质瘤侵袭性的相关性研究

目的探讨整合素 β1在人脑胶质瘤细胞粘附和侵袭过程中的作用。方法用免疫组化SABC法 ,检测整合素 β1在人脑胶质瘤细胞SHG44中的表达 ;用细胞粘附实验检测其在SHG44细胞粘附中的作用。结果整合素β1可在人脑胶质瘤细胞SHG44中表达 ,抗整合素β1抗体可明显抑制人脑胶质瘤细胞SHG44对胶原蛋白I和胶原蛋白IV细胞外基质蛋白的粘附。结论整合素β1在人脑胶质瘤细胞的粘附和侵袭过程中必不可少 ,抑制其在人脑胶质瘤细胞中的表达,有助于阻止胶质瘤细胞的侵袭性生长。

整合素β1在人表皮细胞株HaCaT增殖中影响的研究

目的探讨β1整合素对表皮细胞增殖的影响。方法将重组整合素β1小干扰RNA表达载体(siIntegrinβ1)转染到HaCaT细胞株中,应用免疫印迹(Westernblotting)方法检测靶基因的抑制情况,应用细胞计数法检测表皮细胞增殖情况。结果重组siIntegrinβ1转染HaCaT细胞株能够抑制靶基因整合素β1的表达,抑制细胞增殖。结论在人表皮细胞株HaCaT中抑制整合素β1表达可抑制HaCaT增殖,为进一步研究整合素在表皮细胞中的基因表达调控奠定了基础。

腹腔液中CD44和整合素β1表达与胃癌腹膜转移的关系

目的:探讨腹腔液中CD44和整合素β1 mRNA表达与胃癌腹膜转移的关系.方法:收集50例胃癌患者的腹腔液标本,用RT-PCR法检测其中CD44和整合素β1 mRNA的表达,同时行腹腔液细胞学(PLC)检查.按病灶浸润深度、浆膜类型、PLC检查结果、腹膜转移情况和TNM分期分组,比较不同组之间CD44和整合素β1 mRNA的表达水平.结果:腹腔液CD44 mRNA表达水平与浆膜类型(F=4.59,P<0.05)、腹膜转移有关(t=2.655,P<0.05),与PLC检查(t=3.126,P<0.01)和TNM分期密切相关(t=3.453,P<0.01,);腹膜转移组的整合素β1 mRNA表达明显高于未转移组的水平(t=2.241,P<0.05).结论:腹腔液中CD44和整合素β1 mRNA表达与胃癌腹膜转移相关因素及TNM分期密切相关,检测其水平有助于估计胃癌病程进展和患者预后,对腹膜转移的早期诊断也有一定价值.

结直肠癌术后组织中Kindlin-2、整合素β1和VEGF蛋白的表达及意义

结直肠癌是一种具有高度侵袭性的肿瘤，其发生发展的分子生物学机制复杂。Kindlin．2作为黏着斑蛋白家族的重要成员，对黏附细胞可以形成有效的调节，进而对肿瘤的进展形成有效的促进。

机械应力对人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达的调节

目的观察机械力刺激对人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达的影响。方法用Forcel四点弯曲加载装置通过对体外培养的人牙周膜成纤维细胞分别施加不同动态张、压应力(强度为1000、2000、4000μstrain,加力时间为0、0.5、1、4、8、12h),采用实时荧光定量PCR法研究机械力对人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达的影响。结果施加动态的张、压应力后,人牙周膜成纤维细胞整合素β1 mRNA表达量下调,这种下调变化与所施加应力的性质、大小和作用持续时间相关。人牙周膜成纤维细胞整合素β1对张、压应力刺激的感应不完全一致,机械力刺激越强,整合素β1表达越明显。结论动态张、压应力刺激在本实验提供的微应力范围内可以促进目的基因mRNA表达改变,不同的机械力对细胞整合素β1效应不同。

慢性髓系白血病粘附相关分子整合素β1及局部粘附激酶的研究

目的研究整合素β1及局部粘附激酶(FAK)在慢性髓系白血病(CML)进展过程中的变化及干扰素治疗对FAK的可能作用。方法(1)应用流式细胞仪检测正常对照组、CML慢性期组及CML急变组骨髓CD34+细胞的胞膜表面CD29及胞质FAK表达量;(2)将正常对照及CML慢性期骨髓单个核细胞分为IFN处理组及非处理组培养48 h后提取总蛋白,应用Western blotting检测FAK含量变化。结果(1)CML慢性期骨髓CD34+细胞表面CD29的表达与对照组无显著差异,而胞内FAK含量则下降;(2)CML急变期骨髓CD34+细胞表面CD29的表达较慢性期明显升高而胞内FAK含量则较慢性期进一步下降;(3)IFN处理前后正常骨髓单个核细胞FAK的含量无明显差异;(4)IFN处理后CML骨髓单个核细胞FAK含量较未处理组明显上升。结论整合素β1及FAK表达变化可能是CML进展恶化的原因之一,而IFN-α可能通过恢复FAK含量来改善β1受体介导的粘附信号通路的缺陷。

正畸移动后大鼠牙周炎牙整合素β1 mRNA变化的实验研究

目的研究正畸移动后大鼠牙周炎牙与正常牙整合素β1mRNA表达的变化。方法选用10周龄雄性成年SD大鼠96只,随机分为正常牙组、牙周炎牙组,每组48只。分别在加力后0、1、2、3、5、7d点处死动物,制备标本,采用原位杂交检测牙周炎牙与正常牙正畸移动后β1mRNA转录水平的变化。结果正常牙组和牙周炎组加力后各时间点的整合素β1mRNA阳性强度均较加力前有明显增高(P<0.001);在加力各时间点,两组整合素β1mRNA的表达强度均无显著性差异(P>0.05)。结论在牙移动中,整合素β1mRNA牙周组织破骨细胞上有强表达,提示其与牙移动中牙周组织的稳定和改建有关。

整合素β1小干扰RNA载体构建及其在表皮干细胞干扰效应检测

目的 设计和构建整合素 β1(integrinβ1)特异性的小干扰RNA表达载体 ,并初步验证其对靶基因的抑制作用。方法 设计靶点特异性的寡核苷酸 ,连接到经BamHⅠ HindⅢ酶切线性化的pSlincer3 .1 H1质粒上。转染重组质粒到表皮干细胞 ,通过免疫印迹 (Westernblotting)实验检测靶基因的抑制情况。结果 构建的小RNA干扰质粒siIntegrinβ1转染表皮干细胞能够抑制靶基因整合素 β1的表达。 结论 成功构建了针对整合素 β1的siRNA质粒 ,为进一步研究整合素在表皮干细胞增殖与分化调控中的作用奠定了基础。

先天性肌性斜颈患儿胸锁乳突肌组织病理改变和整合素β1表达

目的研究先天性肌性斜颈(CMT)患儿胸锁乳突肌的组织病理学改变及整合素β1的表达,探讨CMT的病变过程及整合素β1的作用机制及意义。方法采用HE染色、Gomori银染观察45例CMT患儿胸锁乳突肌标本组织病理学改变,采用免疫组织化学方法检测其整合素β1表达,利用图像分析系统定量分析整合素β1表达量和分布特点。结果1.光镜观察HE染色标本显示胸锁乳突肌纤维化改变可以归纳为2类:A类改变表现为肌细胞萎缩变小,周围有大量结缔组织纤维增生,纤维排列紊乱,且伴许多血管和神经增生,最后肌细胞萎缩消失;B类肌细胞首先表现为肌原纤维结构消失(横纹或正常肌节结构消失),在纤维化改变前保持细胞轮廓,细胞膜完整,然后肌细胞原位发生纤维性病理改变,在纤维束之间有成纤维样细胞,细胞有较多突起。Gomori银染标本显示胸锁乳突肌主要改变以大量胶原纤维增生为主,A类胶原纤维排列紊乱,B类胶原纤维排列较整齐。2.免疫组织化学染色显示整合素β1在健康对照组表达为弱阳性(125.7±5.167)。病变标本表达程度分3种,A类肌细胞质中表达呈强阳性(30.15±6.543),与正常组比较有显著性差异(P<0.01);B类肌细胞表达呈阴性(177.15±13.45),与正常组比较有显著性差异(P<0.01),另外一些肌细胞肌原纤维结构基本正常,表达呈弱阳性(114.6±17.23),与正常组比较无显著性差异(P>0.05))。结论胸锁乳突肌纤维化是一个复杂渐变过程,纤维化病理过程可能有不同方式发生,整合素β1可能参与疾病的发生过程。

整合素β1亚基表达与人脑胶质瘤侵袭与复发的关系

目的 :检测脑胶质瘤中整合素 β1基因表达 ,阐明其临床意义 .方法 :应用免疫组化和原位杂交法 ,分析 5 3例人脑胶质瘤整合素 β1基因表达 ,对患者随访并比较其预后 .结果 :整合素 β1蛋白阳性率 ,在I～IV级脑胶质瘤分别为 3 6.3 %,3 8.5 %,72 .2 %和 81.8%,高级别 (Ⅲ～Ⅳ )高于低级别(Ⅰ～Ⅱ ) (P <0 .0 5 ) ,其mRNA表达同蛋白表达 .高表达整合素β1的患者预后较差 .结论 :整合素 β1的高表达与脑胶质瘤分化程度低、侵袭性强密切相关 。

整合素β1在皮肤鳞状细胞癌组织中的表达作用

目的检测整合素β1在皮肤鳞状细胞癌组织中的表达情况,探索干细胞相关因子与肿瘤的关系。方法采用免疫组织化学及细胞学染色方法检测整合素β1在人皮肤鳞状细胞癌组织及人皮肤鳞状细胞癌细胞株A431中的表达,全反式维甲酸(ATRA)诱导鳞状细胞癌细胞分化,RT-PCR检测分化前后整合素β1变化水平。结果在高分化鳞状细胞癌中,整合素β1在肿瘤团块外周基底样细胞呈连续性表达,内侧至团块中央可见散在或岛屿状阳性细胞;在低分化鳞状细胞癌组织中,岛屿状阳性细胞明显增多,呈弥漫分布;在A431细胞中,整合素β1散在表达于肿瘤细胞。ATRA诱导24 h和48 h后,ATRA处理组整合素β1与内参照β-actin的RT-PCR产物电泳光密度值之比分别为0.071±0.025和0.029±0.018,明显低于对照组的0.148±0.027和0.136±0.011(P<0.05)。结论整合素β1在皮肤鳞状细胞癌组织培养肿瘤细胞中具有异质性表达模式,并随肿瘤细胞分化程度增高而表达下降,提示整合素β1与皮肤鳞状细胞癌发生及可能存在的肿瘤干细胞具有密切关系。

丹参酮ⅡA对人胃癌MKN-45细胞整合素β1、基质金属蛋白酶-7表达影响

目的:通过观察丹参酮ⅡA对胃癌MKN-45细胞的增殖抑制及对整合素β1、基质金属蛋白酶-7(MMP-7)表达的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法:MTT法检测不同浓度的丹参酮IIA对体外培养的人胃癌MKN-45细胞增殖的影响;RT-PCR法测丹参酮IIA作用后人胃癌MKN-45细胞整合素β1、MMP-7的表达。结果:与阴性对照组相比,丹参酮ⅡA各浓度组(4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL)对肿瘤细胞增殖的抑制率有显著差异(P<0.05),其24h、48h、72h半数抑制浓度分别为42.5μg/mL、19.4μg/mL和7.4μg/mL。PCR半定量分析表明丹参酮ⅡA作用后整合素β1和MMP-7mRNA的表达受到抑制,抑制程度随着药物浓度的增加而增加。结论:丹参酮ⅡA能有效抑制人胃癌MKN-45细胞的生长,并具有明显的时间和剂量依赖性。丹参酮ⅡA可能通过降低人胃癌MKN-45细胞整合素β1和MMP-7mRNA的表达,而抑制肿瘤细胞增殖。

整合素β1、局灶粘附激酶的表达与垂体瘤的侵袭性

目的 探讨整合素(Integrin,INT)-局灶粘附激酶(Focal Adhesion Kinase,FAK)信号传导通路与垂体瘤侵袭性的关系。方法 免疫组化检测了49例不同侵袭程度垂体瘤中INTβ1和FAK的表达,分析与垂体瘤侵袭性的相关性。结果 INTβ1在46例标本中有表达(93.9％),FAK在36例中表达(73.5％),两者表达水平均与肿瘤侵袭程度密切相关,与肿瘤类型无关。结论垂体瘤中存在INT-FAK信号传导通路的作用机制,并且和肿瘤侵袭性密切相关。