免疫鸡血清新城疫病毒抗体水平与攻毒保护效果的相关性研究

为了明确不同血清新城疫病毒(NDV)抗体水平对鸡的保护效果,本研究采用重组NDV灭活疫苗(A-Ⅶ株)对鸡进行免疫,通过交叉血凝抑制(HI)试验比较A-Ⅶ株与La Sota株间的血清学差异,并采用NDV标准强毒株F_(48)E_(8)和基因Ⅶ型强毒株JSC0804对不同抗体水平免疫鸡进行了攻毒保护试验。结果显示:抗A-Ⅶ株血清用A-Ⅶ株抗原测得的平均HI抗体效价显著高于La Sota株抗原(P<0.01),约高1.5log2,而抗La Sota株血清用La Sota株抗原测得的平均HI抗体效价稍高于A-Ⅶ株抗原,但无显著差异(P>0.05),表明2种疫苗株存在一定的血清学差异。在试验条件下,所有免疫鸡经点眼滴鼻攻毒后均未表现明显临床症状,但存在不同程度的排毒现象,排毒率总体上随抗体效价升高呈逐渐下降趋势。A-Ⅶ株疫苗免疫鸡血清HI抗体效价分别达≥13log_(2)和≥14log_(2)时可完全阻止F_(48)E_8株和JSC0804株排毒。免疫鸡排毒一般仅限于攻毒后5 d内。本研究阐明了免疫鸡的抗体水平和免疫保护效果的相关性,为新城疫免疫控制提供了依据。

鸡新城疫的流行现状和防控措施

鸡新城疫是养鸡业中常见的急性、高发传染性疾病,主要是由于新城疫病毒感染所致,此类疫疾发病率和致死率都较高,未经免疫接种的鸡群在生长过程中极易患病,且传染性强;受过免疫的鸡群依然存在感染病毒的风险。新城疫病毒引发的急性和亚急性死亡病例,严重影响着养鸡户的经济收益。因此,积极了解和掌握新城疫的发病特点以及防控措施,对于降低养殖户的经济损失有着重要意义。

2018—2023年新疆乌鲁木齐市主城区鸽新城疫流行情况实验室调查

为了解主城区近年鸽散养户新城疫的免疫情况和养殖环境中的流行情况,2018—2023年分别采集4个主城区25个散养户的鸽血清样本1972份、鸽舍环境棉拭子150份、鸽双腔棉拭子750份,通过血凝及血凝抑制试验和荧光定量PCR的方法,进行新城疫抗体水平监测和新城疫病毒核酸检测。结果表明,乌鲁木齐市4个主城区免疫合格率呈逐年上升的趋势,仅2022年鸽新城疫免疫抗体均低于农业农村部规定的70%,其它均高于该标准;4个主城区中环境棉拭子新城疫病毒核酸群体阳性率2018—2023年分别为28%、20%、16%、28%、36%和20%;鸽双腔棉拭子新城疫病毒核酸个体阳性率2018—2023年分别为12.8%、11.2%、8.8%、8%、9.6%和4%。

鸡新城疫防控失败的原因及应对策略

新城疫是新城疫病毒(NDV)引起的禽类的一种急性、高度接触性传染病。近年来疫苗免疫技术的提高临床上新城疫非常少见,但是由于鸡场或者禽病从业者对新城疫病毒和其免疫知识了解有欠缺,造成部分鸡场还会发生新城疫疫情,笔者从事兽医实验室工作20多年,现将新城疫的临床症状和免疫失败的原因进行分析,供鸡场借鉴。1病原学新城疫病毒为(NDV)副粘病毒科(Paramyxoviridae)副粘病毒亚科(Paramyxovirinae)腮腺炎病毒属(Rubulavirus),是禽Ⅰ型副粘病毒的代表株。新城疫病毒粒子有囊膜,呈圆形,直径100~250纳米,常呈现不规则形态,也可见横断面直径100纳米左右的不同长度的细丝。

鸡新城疫抗体检测技术在诊断中的应用分析

随着养殖业的不断发展,现阶段鸡养殖工作广泛开展。但在外界环境等多种因素的影响下,鸡群可能受到病毒的感染。其中鸡新城疫属于常见类型的病毒,由新城疫病毒引发,会影响鸡群的存活率与养鸡场的经济效益、社会效益,需要采取合理措施加以诊断与防治。因此鸡新城疫抗体检测技术在诊断中的应用分析受到广泛关注,相关理论研究及实践探索大量涌现。基于此,简单分析鸡新城疫的主要临床症状,深入探讨相关的检测诊断技术与防治措施,以供参考。

七彩山鸡新城疫感染的诊治

山鸡新城疫是由Ⅰ型副粘病毒引起的一种高度接触性传染病,主要通过呼吸道和消化道传播,发病率和死亡率都很高。近年来,随着本地区乡村振兴的发展,农民大量回乡创业,特色养殖迅速增长,很多养殖户利用山地养殖七彩山鸡,但七彩山鸡新城疫病时有发生,并呈不断扩散蔓延的趋势。

塔里木鸽新城疫免疫程序的优化

为优化塔里木鸽新城疫免疫程序,本研究分别采集7、14、21、28日龄塔里木鸽血液各10份,分离血清进行新城疫母源抗体检测;选择60只28日龄塔里木鸽平均分为A1~A4组,A1~A3组分别用新城疫弱毒疫苗、灭活疫苗及三联灭活疫苗免疫,A4组为空白对照。每组在首免前、首免后7 d、14 d、28 d各采集10份鸽血液,分离血清进行HI抗体检测;选择60只28日龄塔里木鸽用新城疫灭活疫苗首免后平均分为B1~B4组,首免后28 d,B1~B3组分别用新城疫弱毒疫苗、灭活疫苗及三联灭活疫苗二免,B4组为空白对照。每组在二次免疫前,二次免疫后7 d、14 d、28 d各采集10份鸽血液,分离血清进行HI抗体检测;选择45只28日龄塔里木鸽用新城疫灭活疫苗首免后平均分为C1~C3组,分别在首免后7 d、14 d、21 d用新城疫灭活疫苗二免。每组在二次免疫前,二次免疫后7 d、14 d、28 d各采集10份鸽血液,分离血清进行HI抗体检测,并将结果与B2组比较,采用GraphPad prism5软件对试验结果进行统计学分析。结果显示,塔里木鸽母源抗体在21日龄~28日龄时下降至3 log2以下;首免后28 d,A1、A2、A3组鸽HI抗体水平极显著高于A4组(P<0.01);A2组鸽抗体水平显著高于A1组(P<0.05),且峰值最高(4.8 log2);二次免疫后14 d、28 d,B2和B3组鸽抗体水平均极显著高于B1组和B4组(P<0.01),B2组抗体水平最快达到峰值且峰值最高(9.1 log2);二次免疫后28 d,C2、C3、B2组鸽抗体水平极显著高于C1组(P<0.01),C3组鸽抗体水平显著高于C2组(P<0.05),B2组抗体水平最快达到峰值,C3组抗体水平峰值最高(9.3 log2)。综上所述,塔里木鸽于21日龄~28日龄时用新城疫灭活疫苗首免,间隔21 d~28 d后,用新城疫灭活疫苗二免,可达到最高抗体水平。本实验填补了目前塔里木鸽新城疫免疫程序相关研究的空白,可为相关标准制定提供有效参考。

竹叶黄酮对鸡胚接种新城疫疫苗免疫效果的影响

【目的】探究竹叶黄酮(bamboo leaf flavonoid,BLF)作为疫苗佐剂对新城疫(ND)疫苗鸡胚接种的免疫效果影响。【方法】试验选取18胚龄SPF种蛋108枚,随机分为3组:Control组(不注射任何物质)、TS组(注射0.1 mL 103.0 EID 50/0.1 mL的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)TS09-C疫苗株)和BLF+TS组(注射0.1 mL含2%BLF和103.0 EID 50/0.1 mL的NDV TS09-C疫苗株的混合液),每组36枚种蛋。试验期间,统计种蛋的孵化率和雏鸡的存活率,在雏鸡7、14、21、28日龄时,每组随机选取3只进行屠宰,采集脾脏、法氏囊、胸腺组织,统计免疫器官指数;采集雏鸡翅下静脉血液,测定血清抗体和细胞因子水平;在雏鸡28日龄时使用NDV强毒株F48E9进行攻毒保护试验,攻毒后每天观察试验雏鸡状态,记录体重变化情况,并于攻毒后第3天每组随机选取3只雏鸡进行屠宰,取十二指肠、肺脏和气管组织并检测雏鸡不同组织病毒载量。【结果】鸡胚接种后,BLF+TS组雏鸡孵化率为100%,存活率为97.22%。与TS组相比,21~28日龄时BLF+TS组雏鸡的脾脏、法氏囊和胸腺指数以及血清中白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)含量均显著升高(P<0.05)。攻毒试验结果显示,攻毒后BLF+TS组雏鸡存活率为100%,攻毒后2~4 d BLF+TS组雏鸡体重增长速度显著低于健康对照组(P<0.05);攻毒后3~7 d时BLF+TS雏鸡体重增长速度显著高于TS组(P<0.05)。BLF+TS组雏鸡攻毒后呼吸道和消化道组织的病毒载量显著低于TS组(P<0.05)。【结论】BLF作为免疫佐剂可安全进行鸡胚接种,而且能够帮助雏鸡建立早期免疫保护,进一步提高ND疫苗免疫效果,研究结果为开发高效鸡胚免疫疫苗佐剂提供借鉴和参考。

新城疫病毒La Sota株热损伤靶点的初步分析

为探索新城疫病毒不耐热毒株La Sota热损伤靶点,以期为新型耐热疫苗研发提供理论依据,试验通过检测加热前后La Sota株的吸附及内化功能,考察纤突蛋白HN和F活性变化情况,以及核衣壳完整性,综合分析新城疫病毒热损伤靶点。结果显示:37℃加热24 h后F蛋白活性首先受损,表现为内化功能显著下降(0.01<P<0.05),56℃加热15 min后HN和F蛋白活性几乎丧失,表现为吸附及内化功能均极显著下降(P<0.01);高温加热后,病毒核衣壳完整性显著降低,病毒粒子破损且失去纤突结构,表现为吸附及内化功能极显著下降(P<0.01)。研究表明,La Sota株热损伤靶点与加热温度和时间密切相关:中温下(≤56℃)病毒热损伤靶点主要在HN和F蛋白,高温下(≥80℃)病毒热损伤靶点为纤突蛋白和核衣壳;纤突蛋白的热敏感性高于核衣壳,且F蛋白受损早于HN蛋白。

从江县2021—2023年鸡新城疫免疫抗体监测分析

为研究贵州省从江县近3年鸡新城疫疫苗免疫效果,采用血凝和血凝抑制试验对2021—2023年在全县养殖鸡群中采集的血清样品3894份进行检测。从全县整体来看,2021年样品数1174份,平均合格率73%,低于国家规定标准(平均合格率70%)的乡(镇、街道)有9个,分别是丙梅街道、丙妹镇、庆云镇、停洞镇、加鸠镇、加勉乡、宰便镇、刚边乡、翠里乡;2022年检测样品1340份,全县平均合格率为79.63%,低于70%的乡镇有4个,分别是丙妹镇、庆云镇、加勉乡和翠里乡。2023年总计检测样品1380份,新城疫抗体平均合格率为85.58%,低于平均合格率70%的乡镇有丙妹镇和洛香镇。按不同饲养条件统计,规模养殖场2021—2023年免疫抗体合格率均在90%以上,但散养户平均合格率较低,2021年抗体平均合格率为11.57%,2022年合格率为55.38%,2023年合格率为67.57%,均未达到国家规定标准。由试验结果可知,虽然近三年从江县整体新城疫免疫抗体合格率达到了国家规定最低标准,但仍有部分乡镇鸡群平均合格率低于70%,尤其散养鸡群抗体合格率较低,因此应对免疫抗体合格率不达标的乡镇、散养鸡群加强补免,防止新城疫疫情发生。

新城疫病毒Mukteswar株感染鸡巨噬细胞入胞及胞内转运途径研究

新城疫病毒(NDV)可以通过多种内吞途径入侵不同宿主细胞并在内体中逃逸从而避免被宿主天然免疫系统“追踪”。为探究NDV中等毒力疫苗株Mukteswar感染鸡巨噬细胞(HD11)的入胞和胞内转运途径,本研究利用Dynasore、CPZ、MβCD、Baf A1预处理细胞,然后感染NDV Mukteswar株,通过Westem blot和IFA检测NDV NP蛋白的表达变化。结果显示Dynasore、MβCD和Baf A1处理后NP的表达水平降低,表明NDV入侵HD11细胞是利用小窝蛋白介导的内吞途径,且依赖动力蛋白、胆固醇和pH。通过过表达和干扰试验检测调节不同内体囊泡类型运输的Rab蛋白(Rab5、Rab7、Rab11)对NDV感染HD11细胞的影响,结果发现Rab7的表达对NDV感染无影响,而过表达Rab5和Rab11促进NDV感染,表明是由Rab5、Rab11而不是Rab7调节NDV的转运。本研究丰富了NDV入侵宿主免疫细胞的途径及胞内转运的研究,并为全面阐明NDV感染机制提供了理论基础。

碳纳米管对鸡禽流感、新城疫的免疫增强效果研究

为探究碳纳米管(CNT)对鸡免疫禽流感-新城疫二联灭活苗免疫应答的影响,将制备的CNT-二联灭活苗混合物免疫鸡,利用血凝抑制试验对鸡免疫后产生的抗体进行持续检测,并对平均抗体效价及抗体阳性率进行统计学分析。抗体效价结果显示:免疫后7 d,高剂量CNT组鸡新城疫、禽流感抗体效价均高于对照组;免疫后14~130 d,高剂量组鸡抗体效价均稳定在8.00 Log2以上;免疫后7~31 d,中、低剂量CNT组鸡平均抗体效价逐渐升高,但与对照组鸡差异不显著;免疫后42~130 d,中、低剂量组鸡平均抗体效价呈下降趋势,但对照组鸡下降更为明显。抗体阳性率结果显示,中剂量对照组鸡新城疫、禽流感抗体阳性率分别在免疫42、70 d后开始下降,而CNT组鸡抗体阳性率仍为100%;至监测后期(90~130 d),低剂量CNT组鸡抗体阳性率显著高于对照组,二者具有统计学差异(P<0.05)。结果说明:CNT作为免疫增强剂,在增快免疫应答,维持抗体效价水平,降低免疫原用量等方面具有明显效果。本研究为动物免疫增强剂研发和应用提供了新思路。

表达鸡传染性喉气管炎病毒gD蛋白的重组嵌合型新城疫病毒La Sota株的构建

为构建表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白D(gD)的重组新城疫病毒(NDV)La Sota株,本研究将ILTV强毒株gD基因胞外域与NDV F基因信号肽、跨膜域和胞质尾区融合,并插入到含有NDV基因VII型F和HN基因的嵌合型La Sota株感染性cDNA克隆pLa Sota-VIIF/HN的P和M基因之间,将获得的重组感染性克隆pLa Sota-VIIF/HN-gD与辅助质粒pCIneo-NP-P-L共转染BHK-21细胞,拯救出表达gD蛋白的重组嵌合型NDV La Sota株rLaSota-VIIF/HN-gD,并采用血凝试验鉴定正确后,将重组病毒在9日龄SPF鸡胚中连续传至10代,提取10代重组病毒基因组RNA,反转录成c DNA作为模板,以ILTV gD基因插入位点两侧的鉴定引物进行PCR鉴定;采用第10代重组病毒感染BHK-21细胞,以ILTV gD蛋白多克隆抗体作为一抗进行间接免疫荧光试验(IFA);分别对鸡红细胞吸附的重组病毒感染的鸡胚尿囊液上清和从红细胞上解离下来的纯化的重组NDV病毒粒子经western blot鉴定,并对重组病毒对鸡胚的致病性和在鸡胚中的复制动态进行初步研究。PCR结果显示ILTV gD基因能够在重组病毒中稳定存在;IFA和western blot鉴定结果显示,重组病毒能够正确表达ILTV的gD蛋白,而且gD蛋白嵌合表达在重组病毒颗粒上。鸡胚致病性试验和鸡胚中的复制动态试验结果显示,重组病毒保持了La Sota疫苗株的低致病性和良好的复制特性,rLaSota-VIIF/HN-gD的鸡胚平均死亡时间(MDT)为168 h,1日龄雏鸡脑内接种该重组病毒的致病指数(ICPI)为0.20,鸡胚半数感染量(EID_(50))峰值可达10^(-8.66)/100μL。本研究所制备的重组病毒r LaSota-VIIF/HN-gD为研制基因VII型NDV和ILTV的二联活疫苗奠定了基础。

高致病性新城疫病毒的分离和生物学特性分析

为鉴定导致黑龙江省肇源县2022年某养殖场鸭大量死亡的病原,并分析其生物学特性,本研究将病死鸭组织病料样品处理后接种9日龄SPF鸡胚连续传代分离出病毒后,利用PCR检测临床症状相似的各类禽源病毒,结果显示,除新型新城疫病毒(NDV)外未检测到其他病原。通过测定鸡胚半数致死量(ELD_(50))、平均致死时间(MDT)、1日龄雏鸡脑部致死指数(ICPI)及7日龄雏鸭的感染试验,评估分离株的毒力及致病性;对分离株F基因测序并进行遗传进化分析。结果显示,该病毒株的ELD_(50)为1×10^(-2)ELD_(50)/m L,MDT为58.6 h,ICPI为1.625,致病性试验结果显示,雏鸭全部死亡且解剖发现内脏组织等出现剖检病变;测序结果显示该分离株F基因全长1662 bp,其编码氨基酸裂解位点区序列为^(112)RRQRRF^(117),具有典型强毒力特性;F基因遗传进化树结果显示,该分离病毒属于Class II基因III型,与2000年~2017年在中国家禽中持续流行的病毒株聚为一大分支,且它们F基因序列的一致性为99.8%~99.9%,分离病毒与疫苗株Mukteswar、B1、La Sota、clone30、VG/VA、V4和中国标准嗜内脏速发型强毒株F48E8 F基因的一致性分别为99.6%、88.6%、88.4%、88.6%、88.4%、91.3%、92.1%。本研究为鸭新城疫的防控和疫苗的研制奠定了基础。

重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗和鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒病(Ⅰ群4型)三联灭活疫苗联合免疫效果研究

为评价重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗和鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒病(Ⅰ群4型)三联灭活疫苗混合后的联合免疫效果,试验将120只11日龄健康商品代黄羽肉鸡随机分成4组,设混苗联合免疫组、分点免疫组和单苗免疫组,分别接种疫苗,检测免疫前和免疫后14、21、28和35 d鸡血清中特异性抗体水平,评估两种疫苗混合后联合免疫的安全性和免疫效果。结果显示:免疫后1周内各组鸡精神、食欲、呼吸等生理活动均无异常;混苗联合免疫组免疫后14 d,6种病原抗体滴度均升高,免疫后21 d均达到理想水平,免疫后28 d抗体滴度均高于5 log2;混苗联合免疫组抗体水平和抗体消长规律与其他组基本一致。研究表明,两种禽流感疫苗混合后联合免疫的安全性和免疫效果与单苗免疫相当,无干扰现象,可减少鸡群应激,节省人工,为养禽场免疫程序优化提供参考。

六株鹅源新城疫病毒全基因序列分析及对雏鹅的致病性

为了解广东地区鹅源新城疫病毒(NDV)遗传进化及致病性情况,于2019年从广东肇庆、佛山地区疑似NDV感染鹅的组织病料中进行鹅源NDV分离鉴定并选取一株MDT最小的毒株进行病毒对雏鹅的致病性试验。结果显示:共分离6株Ⅻb亚型鹅源NDV毒株,6株毒株间核苷酸和氨基酸相似性最高,但与基因Ⅶ型、La Sota等常用疫苗株相似性较低。F蛋白和HN蛋白部分功能位点氨基酸残基出现不同程度的变异。致病性试验结果表明基因Ⅻb亚型Goose/GD/F424/2019毒株对雏鹅有较强的致病性,死亡率高达87.5%,并出现脾脏肿大,呈“树枝状”样充血、腺胃乳头出血、十二指肠黏膜出血、胰脏变性出血、脑组织充血及水肿等典型病理变化症状。研究表明:从广东地区分离的6株鹅源NDV均是Ⅻb亚型且对雏鹅有较强的致病性,为进一步研究广东地区鹅源NDV流行、进化及相关疾病的防控奠定基础。

鸽新城疫病毒可视化LAMP检测方法的建立与应用

为建立一种简便、快速,适用于基层检测鸽Ⅰ型副黏病毒的方法,研究针对鸽Ⅰ型副黏病毒全基因组保守序列,设计了1组可检测基因Ⅵ、Ⅶ、ⅩⅩ、ⅩⅪ型分离株的环介导等温扩增(LAMP)引物,通过优化反应条件及体系,建立鸽Ⅰ型副黏病毒可视化LAMP检测方法。结果显示:建立的鸽Ⅰ型副黏病毒可视化LAMP检测方法可检测基因Ⅵ、Ⅶ、ⅩⅩ、ⅩⅪ型鸽新城疫病毒,与H9亚型禽流感病毒、马立克病病毒、禽网状内皮组织增殖病病毒、小鹅瘟病毒以及禽白血病病毒以及新城疫病毒La Sota疫苗株均无交叉反应,最低检测限为10^(1)copies/μL。研究表明所建立的鸽Ⅰ型副黏病毒可视化LAMP检测方法快速、简便,特异性强,灵敏度高,可应用于基层快速检测鸽Ⅰ型副黏病毒。

共表达膜结合型与可溶性H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的重组基因Ⅶ型新城疫病毒的构建及免疫效果评价

旨在构建能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的重组基因Ⅶ型新城疫病毒,有望开发抗新城疫和H9N2亚型禽流感病毒的二联疫苗,为控制H9N2 AIV和NDV提供新的防御思路,对NDV疫苗载体的构建和优化有重要的参考意义。利用反向遗传技术,以rDHN3-mF为骨架,在病毒基因组的P和M之间的非编码区插入全长膜结合HA和另外一个带有截短跨膜结构域的可溶性HA蛋白,获得了能高效稳定表达H9N2 AIV的HA蛋白的基因Ⅶ型NDV减毒株重组病毒rDHN3mF-HA和rDHN3mF-2HA。通过鸡胚接种、Western blot、血凝效价(HA)及平均鸡胚致死时间(MDT)等试验来检测重组病毒的稳定性以及生物学特性,将重组病毒以10~6 EID_(50·)只^(-1)剂量免疫7日龄SPF鸡并测定血凝抑制(HI)抗体,在免疫后28 d对各组进行攻毒保护试验。结果显示:重组病毒在鸡胚中连续传至十五代后HA基因无突变发生;Western blot证明重组病毒可稳定高效地表达特异性的HA蛋白;重组病毒的生长曲线说明了重组病毒与亲本毒株具有相似的复制特性和低毒力特征;重组病毒免疫组的SPF鸡均能产生针对NDV或者H9N2 AIV的特异性HI抗体;攻毒保护试验结果:重组病毒均能对攻毒后的鸡产生100%保护效果;喉、肛拭子检测结果说明重组病毒可显著减少NDV与H9N2 AIV的体外排毒;气管与肺qPCR检测结果显示攻毒后3 d, rDHN3mF-2HA较rDHN3mF-HA更显著地降低了脏器中H9N2 AIV含量。本研究成功构建了共表达膜结合型与可溶性H9N2亚型禽流感HA蛋白的基因Ⅶ型重组NDV,为H9N2 AIV和NDV的一种新型重组基因工程二联活载体疫苗的研制与应用奠定了基础。

重组新城疫病毒rL-RVG抑制Nrf2-GCLC-GPX4通路诱导胃癌细胞铁死亡

目的探讨重组新城疫病毒(recombinant Newcastle disease virus,rL-RVG)是否通过Nrf2-GCLC-GPX4通路引发胃癌细胞铁死亡。方法培养人胃癌HGC-27细胞,分别用rL-RVG、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、PBS溶液(对照组)处理HGC-27细胞后,用CCK-8、Transwell侵袭、细胞划痕实验检测胃癌HGC-27细胞的增殖、侵袭、迁移能力。加入铁死亡促进剂(erastin)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)促进剂(TBHQ)及抑制剂(ML385)作为干预组,脂质氧化试剂盒检测各组丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;DCFH-DA荧光探针及流式细胞仪检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量;Western blot、免疫荧光法检测Nrf2-GCLC-GPX4通路相关蛋白表达情况。结果与对照组比较,rL-RVG和NDV处理后,细胞的存活率均下降,呈剂量、时间依赖性,且rL-RVG处理组较为显著(P<0.05);NDV和rL-RVG处理组胃癌HGC-27细胞迁移、侵袭能力均受到抑制,后者较前者抑制更明显(P<0.05);与对照组比较,病毒组Nrf2、GCLC、SLC7A11、GPX4蛋白表达下降(P<0.05),MDA水平、ROS相对表达量上升(P<0.05),rL-RVG组上升或下降的趋势较NDV组明显,且erastin组SLC7A11、GPX4蛋白表达下降(P<0.05);与对照组比较,TBHQ组、ML385组Nrf2、GCLC、SLC7A11、GPX4蛋白表达分别上升、下降(P<0.05),MDA水平、ROS相对表达量分别下降、上升(P<0.05);与rL-RVG组比较,rL-RVG+TBHQ组、rL-RVG+ML385组Nrf2、GCLC、SLC7A11、GPX4蛋白表达分别上升、下降(P<0.05),MDA水平、ROS相对表达量分别下降、上升(P<0.05)。结论重组新城疫病毒(rL-RVG)可通过Nrf2-GCLC-GPX4通路诱导胃癌细胞铁死亡的发生,抑制肿瘤细胞的生长。

鸡新城疫-传染性支气管炎-禽流感(H9亚型)-鸡滑液囊支原体四联灭活疫苗免疫效果研究

为探讨制备的鸡新城疫-传染性支气管炎-禽流感(H9亚型)-鸡滑液囊支原体四联灭活疫苗(以下简称新支流滑四联灭活疫苗)免疫效果,试验采用新城疫病毒(NDV)La Sota株接种BHK-21-sc悬浮细胞,用易感鸡胚增殖传染性支气管炎病毒(IBV)M41株,H9亚型禽流感病毒(AIV)ML01株接种MDCK-sc悬浮细胞,用改良Frey氏培养基发酵培养鸡滑液囊支原体(MS)ML-MS1株,收获抗原液,制备新支流滑四联灭活疫苗,并对疫苗进行安全性和效力测定;以0.05、0.1、0.3 mL/只的剂量接种30日龄SPF鸡,免疫后7、14、21 d采血测定NDV HI和AIV(H9亚型)HI抗体,并于免疫后21 d进行NDV和AIV攻毒;30日龄SPF鸡首免H120株,免疫后21 d采血测定IBV HI抗体效价,并以0.05、0.1、0.3 mL/只的剂量进行二免,免疫后7、14、21、28 d采血测定IBV HI抗体;以0.05、0.1、0.3 mL/只的剂量接种30日龄SPF鸡,免疫后7、14、21、30 d采血测定MS ELISA抗体,并于免疫后30 d进行MS攻毒。结果显示:制备的新支流滑四联灭活疫苗安全性良好、效力合格;免疫后21 d NDV HI效价为6.6~8.8 log2,AIV HI效价为7.0~9.7 log2;免疫后28 d IBV HI效价为5.6~7.8 log2,且二免是首免的3.2~14.9倍;免疫后30 d MS ELISA效价为3 164~6 847;攻毒试验结果显示,0.05 mL/只剂量组对ML-MS1攻毒保护率为80%(8/10),其余组均为100%(10/10)保护。研究表明,新支流滑四联灭活疫苗对SPF鸡安全、有效,以0.1 mL/只剂量免疫SPF鸡可获得较好的免疫效果。