MTHFR C677T基因多态性方法学比较

目的评价比较实时荧光定量PCR法与PCR-金磁微粒层析法两种方法检测5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)C677T基因多态性的一致性、检测限、特异性。方法随机选取首都医科大学附属北京天坛医院采集的50例静脉抗凝全血,均通过磁珠法提取基因组DNA,依照最新版分子诊断检验程序性能验证指南(CNAS-GL039)要求对两种方法学的一致性、检测限、特异性进行性能评价。结果实时荧光定量PCR与PCR-金磁微粒层析具有高度的一致性,采用两种方法检测50例样本的一致性为100%;两种方法检测交叉反应中检测结果未受影响,基因型之间无交叉污染情况;检测限验证中前者的灵敏度更高,最低检测限可达0.078125ng/μL,后者的最低检测限为0.625ng/μL。结论实时荧光定量PCR法与PCR-金磁微粒层析法均具有操作简便、灵敏度高,特异性强的特点,可用于人类MTHFR基因多态性检测,同时能够对叶酸代谢作出有效的诊断,需根据临床实验室的需求,选择合理有效的检测方法。

“方法学比较”法评价临床检验定量测量方法正确度时应注意的问题与对策

探讨"方法学比较"法评价临床检验定量测量方法正确度时存在的问题,以帮助临床实验室正确评价这类方法的正确度。本文从实验方案的设计、实验准备、实验、数据处理、实验结果表述等五方面分析目前国内外临床实验室常用的"方法学比较"法在评价定量测量方法正确度时面临的问题,提出目前我国临床实验室采用该方法评价正确度时应注意的问题及解决的方法。严密的实验设计、恰当的实验样本、运行稳定的测量程序、训练有素的技术人员、适当的数据处理方法和评价标准是获得定量测量方法正确度评价正确结论的基础。行业标准的制定有助于临床实验室建立规范的评价定量测量方法正确度的"方法学比较"方法并获得可靠的评价结论。

两种家兔急性肾功能衰竭模型复制的方法学比较

目的 :探讨两种家兔急性肾功能衰竭 (ARF)模型的方法学差异。方法 :皮下注射 1 %HgCl2 (1 .5ml/kg .bw ,H组 )、肌肉注射 5 0 %甘油 (5 .6ml/kg .bw、8ml/kg .bw、1 0ml/kg .bw三种剂量 ,依次为G1组、G2 组、G3组 )复制家兔ARF模型 ,测定 2 4h和 4 8h血清尿素氮 (BUN)和肌酐 (Cre)水平 ,观察比较各组模型复制的成功率、存活率及稳定性。结果 :G1、G2 两组不能成功复制ARF模型 ;G3组BUN、Cre较H组降低 (P <0 .0 5 )。但G3组的存活率及稳定性均显著高于H组 (P <0 .0 5 )。结论 :两种模型复制方法各有优缺点 ,应根据不同研究目的选择相应的模型。

马尔尼菲青霉菌的分离鉴定方法学比较

目的:分析比较马尔尼菲青霉菌(PM)的四种常用分离鉴定方法,降低其误诊率。方法:以30例马尔尼菲青霉菌病患者为研究对象,从细菌学(呼吸道等标本常规细菌培养、血液标本增菌培养后于25℃/35℃双相培养检测)、骨髓染色、组织病理学染色四个检测方向鉴定马尔尼菲青霉菌。结果:四种常用马尔尼菲青霉菌分离鉴定方法中,呼吸道等标本常规培养检测检出率为10.0%、漏检率为90.0%;血液增菌培养后于25℃/35℃双相培养检测方法检出率为96.7%、漏检率为3.3%;骨髓染色检验方法检出率为76.5%、漏检率为23.5%;组织病理学常规染色和特殊染色检查方法检出率为57.1%、漏检率为42.9%。结论:监测结果显示呼吸道等标本常规培养漏检率最高,是导致PSM高死亡率的直接原因;血液增菌培养后于25℃/35℃双相培养分离鉴定方法检出率最高,应考虑为马尔尼菲青霉菌检测方法的金标准和首选方法,但仍应考虑合并采用骨髓染色检测或组织病理学检测方法,以防PSM漏诊。另外对于免疫力极度低下、抗生素治疗无效的感染性疾病患者应高度怀疑深部真菌感染的可能。

不同检测系统自细胞计数的方法学比较及偏差评估

目的:评价不同检测系统白细胞(WBC)计数结果的偏差及临床可接受范围.方法:根据NCCLSEP-9A2文件要求,每天选取8份标本,分别在三个检测系统上进行白细胞测定,共测定8天,记录结果.应用SPSS和Excel 2000软件包对所测结果进行统计分析,计算和评价其系统间的偏差.以Sysmex XE2100为比较检测系统,Sysmex SE9500和Coulter MAXM为实验检测系统进行方法学比较,以WBC医学决定水平浓度3×109/L、11×109/L、30×109/L几分别代人两方程,计算相对偏差,以1/3CLIA'88规定的允许误差为标准进行评估.结果:XE2100与SE9500的相关系数,r=0.998.回归方程为F=0.970x+0.0362;XE2100与MAXM的相关系数r=0.998,回归方程为F=1.031x+0.0113.结论:三种系统检测WBC的偏差在临床可接受范围内,结果具有可比性.

白细胞分类计数方法学比较

目的:探讨全自动五分类血细胞分析仪与手工分类计数方法的相关性。方法:随机选取住院患者新鲜抗凝全血标本143例,3h内经Sysmex XT-1800i全自动五分类血细胞分析仪计数后,制作成薄厚适宜的血涂片,经瑞氏-姬姆萨染液染色后进行手工分类镜检。结果:仪器法与手工分类法相关性比较,中性粒细胞、淋巴细胞差别无显著性(P>0.05),相关性以在正常范围内最佳,相关系数分别为0.860、0.851;嗜酸性粒细胞在<2%时差异有显著性(P<0.01),随着所占比例的增高,特别是>5%时差异无显著性,相关系数达到0.934;而单核细胞、嗜碱性粒细胞计数两种方法差异有显著性,相关性低,相关系数分别为0.487、0.108。结论:嗜酸性粒细胞分类计数仪器法优于镜检法;当单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞比例在正常范围内时可以仪器分类结果报告;由于血液中各种细胞的多形态、多变化性,仪器识别能力有限,因此不能完全取代显微镜检查,当单核细胞大于正常范围时,无论其他结果如何均应进行人工镜检。

不同检测系统检测白细胞、红细胞的方法学比较及偏差评估

目的:评价同一实验室不同检测系统检测WBC、RBC数、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(Hct)的偏差及临床可接受范围。方法:以Coulter LH750为比较检测系统,Sysmex XT-1800i为实验检测系统进行方法学比较,根据NCCLS EP9-A2文件要求,每天选取标本8份,在2个检测系统上分别进行WBC、RBC、HGB及Hct测定,共测定8 d,记录结果。采用Excel2000和SPSS13.0软件对所测结果进行统计分析,计算和评价两系统间的偏差。结果:两检测系统间WBC相关系数(r)=0.998,回归方程Y=0.970x+0.036 2;RBC r=0.997,Y=0.987x+0.009;HGB r=0.999,Y=0.992x+0.717;Hct r=0.998,Y=1.005x-0.002。结论:两检测系统对WBC、RBC、HGB及Hct的检测结果具有可比性。

POCT方法学比较的统计意义

检验方法是否可靠，除了以重复测定反映方法的精密度外，进行方法学比较仍然是研究方法准确度的主要手段。现今可用于ＰＯＣＴ检验的仪器、试剂已在医院中逐渐推广，但似乎都很少考虑检验结果的可靠性。其实，只要是检验，都必须对引入的新方法（包括仪器、试剂）作严格评...

改良浓缩集菌法查结核分支杆菌的方法学比较

目的 对改良浓缩集菌法和其他几种检测方法检测结核分支杆菌的优缺点进行评价。方法 收集疑为结核感染的 15 0例痰、体液和血液标本 ,采用 PCR法 ,结核抗体检测法 ,改良浓缩集菌法、离心沉淀法、直接涂片法进行检测。结果 敏感性 PCR和结核抗体法之间无差异 (P >0 .0 5 ) ;特异性除结核抗体法与 PCR法无差异外(P >0 .0 5 ) ,与其他方法间均有差异 (P <0 .0 5 ) ;准确性 PCR法、结核抗体法、改良浓缩集菌法间无差异 (P >0 .0 5 ) ,其他方法间存在差异 (P <0 .0 5 )。结论 改良浓缩集菌法的敏感性、特异性、准确性低于 PCR法和结核抗体法 ,但明显优于浓缩集菌法、离心沉淀和直接涂片法 ,对于基层条件受限的单位值得推广应用。

2种重叠延伸PCR技术构建5种立克次体融合基因的方法学比较

目的采用2种重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术将5种立克次体目的基因片段进行融合,同时对2种方法进行比较。方法采用一步法及两步法融合基因技术,对5种立克次体融合基因进行构建,并优化一步法中重叠引物浓度以及两步法中各靶基因产物加入量,以提高2种方法的融合效率。结果成功建立5种立克次体融合基因。一步法基因融合过程中重叠引物浓度在0.1~0.01μmol/L时,912 bp的融合基因条带亮度较高,且杂带较少;两步法基因融合过程中各靶基因产物加入量为0.1~0.25μL时,912 bp的融合基因条带亮度较高,且杂带较少。结论一步法基因融合技术操作简单、耗时短且耗材少,在掌控好退火时的温度及时间的情况下是一种经济、方便且高效的融合技术。为后续进行立克次体融合基因表达载体构建以及立克次体分子生物学多重检测提供实验模板。

胶乳增强免疫比浊法与高压液相色谱法测定糖化血红蛋白的方法学比较

目的对胶乳增强免疫比浊法与高压液相层析法(HPLC法)检测糖化血红蛋白(Hb A1c)进行方法学比较。方法收集陕西省渭南市中心医院门诊和住院的患者以及健康体检者的90份临床血液样本,通过糖尿病医学诊疗标准,将待检人员分为:糖尿病患者组(45例)和非糖尿病患者组(45例),同时采用HPLC法和胶乳增强免疫比浊法测定Hb A1c。对两种方法对两组受检者的Hb A1c测定结果进行精密度、准确度及相关性分析。结果同一组受检者的两种方法检测结果比较无明显差异(P>0.05);两种方法的批内变异系数(CV)均<2%,批间CV均<4%;r=0.982,回归方程:y=0.133+0.979x。结论胶乳增强免疫比浊法与HPLC法均能有效检测Hb A1c,且相关性良好,但胶乳增强免疫比浊法检测价格较低,操作简便,可以在中小型医院推广使用。

RPR和TPHA法检测梅毒的方法学比较

目的比较快速血浆反应素环状卡片试验(RLR)和梅毒密螺旋体血凝试验(TPHA)两种方法的灵敏度、特异性及在临床上的应用价值。方法应用快速血浆反应素环状卡片试验及梅毒密螺旋体血凝试验检测495例梅毒可疑患者血清。结果检测4195例，RLR阳性者201例，阳性率为40．6％；TPHA阳性者185例，阳性率为37．3％。其中RLR、TPHA均为阳性者174例，TPHA阴性而RPR阳性者27例，TPHA阳性而RPR阴性11例，TPHA和RLR均为阴性者283例。结论RLR、TPHA能快速检测梅毒螺旋体，灵敏度高，但TPHA结果更准确，假阳性率低。RPR为定量检测，TPHA为验证检测，两者结合可提高临床正确诊断率，减少误诊。

磁微粒化学发光法和免疫荧光法对预测子痫前期风险的方法学比较

目的:分析比较磁微粒化学发光法与免疫荧光法两种不同方法在预测子痫前期中的性能指标。方法:选取2020年12月至2021年12月期间本院就诊的自然怀孕孕妇110例作为研究对象。根据临床诊断结果将孕妇分为子痫前期组(44例)和健康对照组(66例)。用两种方法检测血清中可溶性酪氨酸激酶受体-1(sFlt-1)和胎盘生长因子(PLGF)的水平,计算sFlt-1/PlGF比值,比较两种检测方法对子痫前期的诊断价值。结果:磁微粒化学发光法检测sFlt-1/PlGF比值预测子痫前期的临界值取43.18时,曲线下面积(AUC)为0.986(95%CI:0.969,1.000),敏感性为95.45%(95%CI:0.833,0.992),特异度为92.42%(95%CI:0.825,0.971)。利用免疫荧光法检测sFlt-1/PlGF比值预测子痫前期的临界值取43.18时,AUC为0.933(95%CI:0.890,0.977),敏感性为90.91%(95%CI:0.774,0.970),特异度为84.85%(95%CI:0.734,0.921)。结论:磁微粒化学发光法比免疫荧光法敏感性高。磁微粒化学发光法诊断价值略高于免疫荧光法。

不同丙型肝炎病毒基因分型检测方法学的比较

目的通过丙型肝炎基因分型检测方法学的比较,为实验室选择提供依据。方法选取宁夏回族自治区人民医院2019年1月至2021年12月丙型肝炎确诊患者血清样本148份,使用PCR-荧光探针法、PCR-反向点杂交法及Sanger测序法进行丙型肝炎病毒基因分型检测,并采用卡方检验、Kappa检验对这三种检测方法进行比较分析。结果PCR-荧光探针法检出136例,检出率91.89%,共检出4种基因型,分别为1b、2+、3+和6+。PCR-反向点杂交法检出135例,检出率为91.22%,共检出5种基因型,分别为1b、2a、3a、3b和6a。Sanger测序法检出148例,检出率100%,共检出7种基因型,分别为1b、2a、3a、3b、6a、1g和6xa。PCR-荧光探针法未检出的12例样本中,Sanger测序法均已检出,其中包括1例6xa型,1例1g型。两种方法的检出率比较差异无统计学意义(χ^(2)=7.565,P>0.05)。两种方法比较一致性较高(k=0.871,P<0.001)。PCR-反向点杂交法未能测出的13例样本,Sanger测序法均已检出,其中包括1例1g型。PCR-反向点杂交法检出1例3b型,Sanger测序法检出为6xa型。两种方法的检出率比较差异无统计学意义(χ^(2)=8.696,P>0.05)。PCR-反向点杂交法与Sanger测序法一致性高(k=0.609,P<0.05)。结论PCR-荧光探针法和PCR-反向点杂交法操作简单,适合临床推广,Sanger测序法准确性高,可对其他方法进行补充,实验室可结合自身情况进行选择。

化学发光法与酶联免疫吸附法检测人类免疫缺陷病毒方法学比较

艾滋病是人类免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的一种有害传染病[1]。HIV攻击人体免疫系统,破坏大量淋巴细胞,使患者失去免疫功能,导致死亡[2]。因此,诊断和检测艾滋病毒的有效方法对控制病毒的传播、指导治疗和判断预后具有重要意义。本文比较分析化学发光法(CLIA)与酶联免疫吸附法(ELISA)在检测HIV中的作用,报告如下。1资料与方法1.1临床资料选取2019年2月—2020年1月于我院检查的9 000份血清样本作为实验分析样本,所有样本均严格按照标准操作规程采集并进行检测,均为合格样本。

面部蠕形螨检测方法学比较

目的比较3种面部蠕形螨检测方法的阳性率、感染度、虫体计数及形态构成,探讨不同检测方法的检测效果。方法选择开封地区不同年龄、不同性别、不同职业的居民500例作为研究对象,分别采用刮脂法、挤刮法和透明胶带法对每一研究对象进行面部蠕形螨检测。结果 500例受试者刮脂法阳性116例,其中轻度感染40例,中度感染36例,重度感染40例,检出虫数505只,包括成虫、若虫、幼虫和虫卵;挤刮法阳性98例,其中轻度感染36例,中度感染34例,重度感染28例,检出虫数315只,也包括各期虫体和虫卵;透明胶带法阳性68例,其中轻度感染28例,中度感染26例,重度感染14例,检出虫数205只,包括成虫和若虫,未检出幼虫和虫卵。结论 3种面部蠕形螨检测方法的检测效果不同,以刮脂法效果最好。

血清清蛋白不同方法学建立可比性分析

目的探讨溴甲酚绿法与溴甲酚紫法测定血清清蛋白（ALB）是否可以建立可比性。方法用RocheCobas8000（溴甲酚绿法）检测系统为靶机，建立BeckmanDXC800（溴甲酚紫法）检测系统。按照NCCLS的EP9-A2方案，分别测定患者血清ALB，分析测定结果并对数据进行统计学分析。以美国临床实验室修正法规（CLIA’88）规定的室间质量评价允许误差范围的1／2为临床接受范围，判断可比性。结果溴甲酚绿（BCG）法与溴甲酚紫（BCP）法测定结果相比，在线性范围内，两者差异无统计学意义（P〉0．05），二者呈高度相关（Y=1．053X—1．6l，r=0．993）。在医学决定水平为20，35和52g／L时，BCP法预期相对偏倚分别为-2．721％，0．73％和2．234％。结论临床接受性能评价结果显示，不同方法学测定血清清蛋白在精密度、正确度可接受、线性范围相同的情况下可以建立可比性，结果可以互认。