无创性产前诊断染色体非整倍体的研究进展

染色体非整倍体是胎儿最常见的染色体畸形，也是胎儿出生缺陷疾病最常见的病因之一，其中以唐氏综合征最为常见。唐氏综合征又名21-三体综合征（21-trisomy syndrome）或先天愚型，在新生儿中发病率约为1／800。所以对先天性遗传病的产前检查、诊断是优生优育的重要保证。目前，唐氏综合征的产前检查对孕妇和胎儿都易造成危险，且检测指标也受多种因素影响。

通过富集母血浆中胎儿游离DNA无创性产前诊断β地中海贫血

目的:评价富集母血浆中胎儿游离DNA的实验平台在母血浆中富集、鉴定胎儿游离DNA的适用范围。方法:(1)筛选与父源性β地中海贫血基因连锁的单核苷酸多态性(SNP)位点:利用Haploview软件对20例β地中海贫血患者(其中CD41-42型11例,IVS-II-654型9例)的β地中海贫血基因(HBB基因)进行SNP与单倍型自动化分析,检索出HBB基因内杂合度较高的SNP位点并检测与CD41-42位点及IVS-II-654位点连锁的SNP位点。(2)选取4例孕妇外周血标本,且夫妇双方为不同的β地中海贫血基因类型,利用快速耐受温度-低变性温度共扩增PCR技术(TT-FAST-COLD-PCR)检测父源性β地中海贫血基因类型为IVS-II-654型的孕妇外周血标本,若未直接检测到IVS-II-654位点,则检测仅与IVS-II-654位点连锁的SNP位点;同样的原理,利用完全耐受温度-低变性温度共扩增技术(TT-FULL-COLD-PCR)检测父源性β地中海贫血基因类型为CD41-42型的孕妇外周血标本;同时利用普通PCR技术对上述标本进行检测。结果:(1)检测出IVS-II654位点与rs7480526位点连锁9例;CD41-42位点与rs10768683位点连锁11例;(2)通过TT-FAST-COLD-PCR技术在孕妇外周血中检测出1例父源性致病突变基因(IVS-II-654位点),另外1例未直接检测到父源性致病突变基因,但检测到与其连锁的SNP位点(rs7480526位点),与羊水细胞培养检测结果一致,检出率为100%(2/2);通过TT-FULL-COLD-PCR技术在孕妇外周血中检测出2例父源性致病突变基因(CD41-42位点),与羊水细胞培养检测结果一致,检出率为100%(2/2);而普通PCR技术均未检测到上述父源性致病突变基因及与父源性等位基因连锁的SNP位点。结论:TT-COLD-PCR技术适用于富集母血浆中胎儿游离DNA突变,可用于无创性产前诊断单基因遗传病。

基于纳米技术从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞并进行无创性产前诊断的可行性

目的建立一种基于纳米技术从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞并进行无创性产前诊断的方法。方法 Percoll 1.077单密度梯度离心法之后,选用抗体CD147修饰到以玻璃为载体的纳米羟基磷灰石基底上,对新生儿脐血中的胎儿有核红细胞进行捕获,利用胎儿特异性抗体HbF、红细胞表面特异性抗体CD71以及细胞核染色剂DAPI对捕获到的新生儿脐血中有核红细胞进行染色标记,进而实现分选。对正常不同孕周孕妇外周血、未孕健康妇女外周血及新生儿脐血中抗体CD147捕获到的有核红细胞进行染色标记分选。抽取10例行常规产检时发现高危因素的孕妇外周血2 m L,用抗体CD147捕获胎儿有核红细胞并用X、Y、18、21染色体探针进行荧光原位杂交。结果用HbF+CD71双标记染色法的胎儿有核红细胞阳性率与HbF单染和CD71单染标记的细胞阳性率相比差异有统计学意义(P<0.05);HbF单染和CD71单染标记的阳性细胞率之间相比差异无统计学意义(P>0.05);在孕16~20周时孕妇外周血中阳性细胞数目达到顶峰,之后随孕周增加而呈下降趋势。10例高危孕妇外周血标本均成功分离出胎儿有核红细胞,并经过FISH鉴定,本方法对男性胎儿诊断的灵敏度为85.71%,特异度为100.00%,对女性胎儿诊断的灵敏度为100.00%,特异度为85.71%,同时诊断出1例非整倍染色体胎儿,所有结果均经后期随访证实。结论用纳米材料为基底,抗体CD147捕获,HbF+CD71双染色标记法对孕妇外周血中的胎儿有核红细胞进行识别和富集,可提高胎儿有核红细胞的检出率,可为进一步产前诊断奠定基础,最佳时机应该在孕16~20周。

孕妇血浆中胎儿游离DNA在唐氏综合征无创性产前诊断中的应用研究

目的探讨应用孕妇血浆中游离胎儿高通量基因测序技术在无创性产前诊断中的可行性。方法对3368例孕妇进行中孕期血清学筛查的同时，筛查出的高风险病例平行进行cffDNA高通量测序；对需进行产前诊断者，同时进行胎儿染色体核型以及MLPA分析。结果中孕期三联血清学筛查3368例，血清学筛查21三体高危共347例，经高通量基因测序技术检测后结果为唐氏高危20例；经MLPA分析，结果得出347例标本中21-三体病例为20例；最后通过羊水细胞核型分析证实20例与无创基因检测结果一致。应用孕妇血浆中游离胎儿DNA高通量基因测序技术诊断胎儿的21号染色体非整倍体异常的敏感度为100．00％（20／Z0），特异性为100．00％（347／347），假阳性率为0．00％（0／347）。结论无创性产前诊断技术具有无创、准确、快速的诊断优势，该技术具有良好的临床应用前景。

基于胎源遗传物质的唐氏综合征无创性产前诊断研究进展

唐氏综合征是常见且严重的染色体异常类出生缺陷,迄今无有效治疗方法,在产前进行筛查与诊断,减少和避免患儿出生是唯一预防措施。目前常用的侵入性诊断方式因存在诸多弊端而被部分孕妇拒绝接受,因此寻找并建立准确且无创的唐氏综合征产前诊断方法是亟待解决的重要临床问题。利用存在于母体外周血中的胎儿遗传物质是近年来开展的无创性产前诊断新途径,本文就利用母血中的胎儿游离核酸进行唐氏综合征的产前诊断作一综述。

基于游离RNA的无创性产前诊断研究进展

孕妇血浆血清中游离RNA作为一种新的胎儿遗传信息材料给无创性产前诊断带来了新的契机。已经证实,游离胎儿RNA分子主要来源于胎盘,且稳定存在于母体血循环中,易于检测。同时,其由于无需依赖胎儿性别或父源性多态性位点而具有十分明显的应用优势。目前,已经有研究将血浆血清中游离RNA与胎儿非整倍体、宫内发育迟缓以及子痫前期等妊娠相关疾病联系起来,并且取得了十分可喜的研究成果。

无创性产前诊断技术应用于21-三体综合征筛查的进展

无创性产前诊断技术在近10年取得了较快的进展,通过母体外周血获取胎儿细胞、游离DNA或mRNA,利用表观遗传学手段,对胎源性信息进行产前筛查,获得对21号染色体非整倍体信息的判断。该项技术具有无创、快速、高效的优点,但目前应用仍存在一定的局限性。随着该技术的不断成熟,它的应用前景是非常广阔的。

母血中胎儿遗传物质与无创性产前诊断

经过10余年的发展,利用母体外周血中胎儿遗传物质进行无创性产前诊断的技术正逐步面向临床。本文综述了目前较为广泛被研究的母血中的胎儿遗传物质,着重阐述了使用无创的方法获得母血中胎儿遗传物质的方法及其优缺点。

母血循环胎儿DNA在无创性产前诊断中的应用

孕妇外周血中游离胎儿DNA的发现为无创性产前诊断开辟了崭新的途径。随着有关研究的深入和检测手段的发展，母血循环胎儿DNA被越来越多地应用到对病理性妊娠和胎儿疾病的研究中，为预防和控制新生儿发病率及死亡率提供了一条快速、安全、灵敏度高、特异性强的非损伤性产前诊断方法，对优生优育、提高人口素质具有明显的社会意义。

无创性产前诊断的研究进展

妊娠孕妇外周血中或宫颈管内存在有胎儿细胞或遗传物质，利于各种方法富集它们并进行遗传分析，检测胎儿遗传病及染色体病，可达到无创性产前诊断的目的。

从胎儿循环的角度分析培养孕妇外周血中胎儿有核红细胞用于无创性产前诊断的可行性

目的从胎儿循环的角度分析培养孕妇外周血中胎儿有核红细胞(FNRBC)用于无创性产前诊断是否可行。方法取22例孕7～9周人工流产者胚胎绒毛组织(胎儿循环组)和外周血30ml(外周血组),经MACS-GPA+富集后进行体外培养,胎儿特异的ε血红蛋白抗体标记,比较胎儿循环组和外周血组ε血红蛋白抗体阳性细胞克隆的比例。瑞氏-吉姆萨染色分析胎儿循环中和外周血中具有增殖能力的FNRBC比例。结果外周血组ε-血红蛋白抗体阳性细胞克隆比例为0,胎儿循环组为98.4%。胎儿循环中具有增殖能力的原、早幼红细胞占6.9%,中晚幼红细胞占93.1%;外周血中原、早幼红细胞为0,中晚幼红细胞占100%。结论在目前的条件下培养孕妇外周血中FNRBC很难。主要原因可能在于进入母体内可增殖的胎儿有核红细胞比例太低。

无创性产前诊断单基因病的研究进展

经过10余年的发展,利用母体外周血游离胎儿DNA进行无创性产前诊断的技术正逐步面向临床。目前无创性产前诊断单基因病正得到越来越多的研究和关注。本文综述了无创性产前诊断单基因病的思路及研究进展,着重阐述了游离胎儿DNA富集技术、基因突变位点的扩增及检测技术等研究热点。

表观遗传学甲基化的方法在无创性产前诊断中的应用

表观遗传是指DNA序列不发生变化但基因表达却发生了可遗传的改变，即基因型未发生变化而表型却发生了改变，且这种改变在发育和细胞增殖过程中能稳定传递。DNA甲基化是最常见的表观遗传修饰方式，DNA甲基化是在DNA甲基化转移酶（DNMTs）的作用下使CpG二核昔酸5’端的胞嘧啶转变为5甲基胞嘧啶，它并不改变基因序列，而是通过甲基化或去甲基化控制相应基因的时间、空间特异性表达。近年来，DNA甲基化检测技术有了很大的发展和完善，将其应用领域扩大到非创伤性产前诊断中，本文就表观遗传学在无创性产前诊断中的应用进展加以综述。

孕妇外周血分离胎儿有核红细胞与FISH分析技术在无创性产前诊断中的应用分析

目的探讨孕妇外周血分离胎儿有核红细胞与FISH分析技术在无创性产前诊断中的应用。方法选取于2018年1月至2019年1月期间,20例11~24周妊娠高危孕妇,对外周血均按照常规密度梯度法,对单个核细胞进行分离,并选择红细胞特异性抗体CD71,HbF结合运用流式细胞仪设备行FACS分选富集NRBC,并行FISH分析技术。结果完成20例孕妇的外周血标本NRBC分选,达100%的分选率,其中CD71及HbF双阳性细胞(3.46±1.65)×10-2;对其中18例孕妇运用FISH分析技术均成功分析,未发现任何异常问题。结论经孕妇外周血内分离富集所得胎儿有核红细胞,运用FISH分析技术对胎儿特定染色体进行检测,能够实现无创性产前诊断及时发现遗传性疾病,可为临床改善母婴分娩预后结局提供指导。

无创性产前诊断单基因病的研究进展

经过十余年的发展,利用母体外周血游离胎儿DNA进行无创性产前诊断的技术正逐步面向临床。目前无创性产前诊断单基因病正得到越来越多的研究及关注。本文综述了无创性产前诊断单基因病的思路及研究进展,着重阐述了游离胎儿DNA富集技术、基因突变位点的扩增及检测技术等研究热点。

孕妇外周血中游离胎儿DNA富集与分离方法及在无创性产前诊断中的应用

在我国，每年新生儿出生缺陷多达80万至120万，尽早进行产检筛查和诊断是最有效的应对措施，然而目前常规的诊断方法皆为有创性方法，对胎儿和孕妇都有一定的危险性，因此发展新的无创性产前诊断具有重要的临床意义。1997年Lo等发现在孕妇血浆中存在着少量的游离胎儿DNA（Cell-freefetalDNA，effDNA），为无创性产前诊断方法提供了新的途径。

胎儿有核红细胞与无创性产前诊断

自妊娠妇女外周血中发现并分离到XY核型的胎儿细胞以来,发现运用母体外周血中胎儿细胞可以进行无创性产前诊断,目前发现妊娠妇女外周血中的胎儿细胞有:胎儿有核红细胞(nucleated red blood cells,NRBCs)、滋养细胞、胎儿淋巴细胞和粒细胞。越来越多的研究发现,胎儿有核细胞,尤其是NRBCs以其独特的细胞学特点倍受关注,就近十年来无创性产前诊断的最佳候选细胞———胎儿NRBCs的细胞学特点、富集、分离和鉴定方法、在临床产前诊断中的应用等综述。

利用孕妇血浆中胎儿DNA进行无创性产前诊断的研究进展

产前诊断对于预防及控制新生儿发病率具有十分重要的意义。目前,大多数的产前诊断方法对孕妇和胎儿具有潜在的损伤,所以临床医生一直在寻找新的无创性产前诊断技术。研究表明胎儿细胞存在于孕妇外周血中,但由于其数量较少,而且存在个体差异,因此很难应用于临床。最近的研究发现母体血浆或血清中存在高浓度的游离胎儿DNA。近年来,随着分子生物学技术的发展,从孕妇血浆或血清中检测胎儿DNA并应用于临床成为可能,为无创性产前诊断开辟了一种新途径。本文着重介绍游离胎儿DNA的来源、特点及在无创性产前诊断中的应用。