伊氏锥虫感染的昆明小鼠血常规变化和病理组织学观察

为了解伊氏锥虫感染昆明小鼠的血常规和病理组织学变化,人工感染昆明小鼠、制作血液涂片、检测血常规、分子生物学(PCR)鉴定、病理组织切片,结果显示伊氏锥虫对小鼠具有较高的致病性,随着感染天数的增加,白细胞(WBC)、中性粒细胞计数(NEU)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)、血小板计数(PLT)值逐渐降低,淋巴细胞百分数(LYM%)、红细胞平均体积(MCV)、红细胞分布宽度的标准差(RDWR-SD)、血小板平均容积(MPV)值在死亡时明显升高,健康小鼠血常规正常。对比试验和对照小鼠各器官大小,感染小鼠脾脏、肝脏,心脏均明显变大,肺脏及肾脏变化较小。PCR鉴定在799 bp处出现目的条带,与预期片段大小相符。病理组织学观察,试验小鼠脾脏淤血,髓质间可见大量红细胞,出现较多形态改变的淋巴滤泡;肝脏中央静脉、小叶间静脉淤血,肝细胞肿胀,肝窦间隙变窄;肺脏肺泡肿胀较明显,肺泡壁增宽,支气管出现纤维化,间质可见炎症细胞;心脏中心肌纤维稍肿胀,颗粒变性,颜色加深,并伴有较多的伊氏锥虫虫体;肾小囊间隙变窄,肾小管上皮细胞肿胀,管腔变窄;对照组小鼠均未出现病理变化。研究结果可为伊氏锥虫病的诊断与预防提供理论依据。

C57BL/6J小鼠与昆明小鼠NIAAA法酒精性肝病造模效果的比较

为了对比C57BL/6J小鼠和昆明小鼠酒精性肝病模型建造效果及建模完成后续肝脏生化指标变化情况,为酒精性肝病的治疗研究提供基础依据,试验选择雌性C57BL/6J小鼠和昆明小鼠各36只,随机分为对照组(液体饲料+麦芽糊精)、建模16 d组与建模19 d组(液体饲料+酒精,n=12)。利用NIAAA法建造酒精性肝病小鼠模型,并分别于建模第16 d、建模第19 d取其血清及肝组织进行生化指标检测及病理切片观察。结果显示,C57BL/6J小鼠建模16 d组和建模19 d组与昆明小鼠建模16 d组的小鼠血清ALT、AST含量,肝脏MDA、TG含量均分别显著高于其对照组小鼠(P<0.05);而血清ALB含量、肝脏SOD活力显著低于其对照组小鼠(P<0.05)。C57BL/6J建模16 d组和建模19 d组小鼠的肝脏GSH含量和肝脏系数显著高于其对照组小鼠(P<0.05),但昆明小鼠建模19 d组除了肝脏SOD活力显著低于其对照组小鼠(P<0.05),其他指标均与其对照组小鼠无显著差异。病理切片结果表明,与对照组相比,建模16 d组2种小鼠肝细胞排列紊乱,肝细胞索断裂,肝细胞出现炎性浸润和脂肪液滴。C57BL/6J小鼠建模19 d组肝组织仍呈现病变,而昆明小鼠建模19 d组肝细胞已逐渐恢复正常排列。与昆明小鼠相比,C57BL/6J小鼠对于酒精的肝脏氧化应激损伤更严重,酒精性肝病模型更稳定。

Ⅱd亚型微小隐孢子虫感染昆明小鼠模型的初步建立

为建立稳定、可靠的Ⅱd亚型微小隐孢子虫感染的小鼠模型,本研究以1×10^(6)个/只剂量的Ⅱd亚型微小隐孢子虫卵囊感染3周龄雌性昆明小鼠,对感染前后小鼠粪便样品进行显微镜观察和隐孢子18S r RNA和GP60基因的套式PCR检测、以及对小鼠的排卵囊规律、临床症状变化、体质量变化、回肠组织病变特征和回肠绒毛指数进行分析。结果显示:通过形态学和PCR方法均能在粪便样品中检测到微小隐孢子虫;感染组小鼠较对照组在排卵囊高峰期体质量的增加略微减少,但总体增加趋势一致,在排卵囊高峰期时感染组小鼠饮水量减少、反应迟钝、粪便变稀,高峰期后小鼠精神状态逐渐恢复良好;通过对感染后7 d小鼠的回肠组织制备病理切片并经HE染色后观察发现,与对照组相比,感染组小鼠回肠组织中出现微小隐孢子虫附着,部分区域杯状细胞数量减少,上皮细胞排列轻微紊乱且部分脱落,黏膜层可见少量炎症细胞;回肠绒毛长度显著变短、变钝,隐窝深度变浅,但绒毛直径和黏膜厚度未见显著变化。上述结果与动物临床感染隐孢子虫的症状、病理变化等基本一致,表明本研究首次建立了Ⅱd亚型微小隐孢子虫感染昆明小鼠的模型。本研究该模型的建立为研究微小隐孢子虫的致病性、宿主的免疫调节机制以及药物和疫苗的筛选提供研究基础。

昆明小鼠Lewis肺癌细胞种植后对心率变异的影响

目的:研究Lewis肺癌小鼠心率变异性(HRV)指标的变化规律,探索与肺癌诊断相关的心率变异指标。方法:将70只雄性昆明小鼠随机分为对照组(正常小鼠)20只和实验组(Lewis肺癌建模组)50只,实验组在建模之后根据是否成瘤分为未成瘤组和成瘤组。在建模后分别记录各组小鼠的HRV指标数值和统计分析。结果:建模后成瘤组有36只小鼠,未成瘤组14只,包括对照组在内各组小鼠均存活。由单因素ANOVA检验和Kruskal-Wallis检验得到差异具有统计学意义(P<0.05)的指标有sdnn、rmssd、lf、hf,且在三组的两两比较中,sdnn的差异均具有统计学意义(P<0.05)。进行Spearman相关分析得:sdnn、rmssd、lf、hf与肿瘤都具有一定的负相关关系(P<0.05)。多项Logistic回归分析得sdnn和rmssd在对照组和成瘤组、未成瘤组和成瘤组中产生显著性影响(P<0.05)。在决策树模型中,sdnn的特征重要性在差异具有统计学意义的4个指标中都是最高的,rmssd次之。在三组中进行ROC曲线分析,sdnn和rmssd对于成瘤均有很高的诊断价值,得到sdnn截止水平为37.49 ms,敏感性为97.2%,特异性为91.2%;rmssd的截止水平为52.82 ms,敏感性为94.4%,特异性为79.4%。结论:低水平的sdnn和rmssd可能是Lewis肺癌移植瘤的独立危险因素,HRV中sdnn、rmssd、hf等下降能够反映自主神经紊乱,后者会影响肿瘤的进展。

脑心肌炎病毒(EMCV)感染昆明小鼠模型的建立

目的:建立EMCV感染昆明小鼠模型。方法:6~8周龄昆明小鼠,雌雄各半,分为空白对照组和EMCV高(100TCID50/20 g)、中(10 TCID_(50)/20 g)、低(1 TCID50/20 g)剂量组。分别于EMCV感染5 d、7 d、9 d、11 d、13 d、15 d称重,眼眶采血后,断颈处死。取心、脑、肝和脾组织,计算各器官脏器指数;qRT-PCR检测心、脑、脾、肝和外周血病毒载量;qRT-PCR检测心和脑IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA表达量;取心和脑,HE染色后观察组织病理损伤。结果:与空白对照组相比,高剂量的EMCV感染小鼠5 d时,能显著提高心脏指数(P<0.05)和极显著提高脾脏指数(P<0.01);qRT-PCR结果显示EMCV感染9 d时,小鼠心、脑、肝、脾和外周血病毒载量最高,中、低剂量EMCV感染小鼠各脏器中的病毒载量很低;高剂量的EMCV感染小鼠9 d时,心和脑IL-1β(P<0.01)、IL-6(P<0.001)和TNF-α(P<0.01)极显著升高;9 d时,高剂量EMCV引起心脏组织炎症细胞浸润和空泡化病变;5~9 d时,高剂量EMCV引起脑组织脑膜增厚、脑膜下血管扩张和出血、脑白质血管扩张形成血管套。结论:EMCV攻毒剂量为0.2 ml 100 TCID_(50)/20 g时,成功建立EMCV感染昆明小鼠模型。

几种克服昆明小鼠 2- 细胞胚胎发育阻滞的培养液研究

比较了几种培养液对克服昆明小鼠胚胎 2 细胞发育阻滞的效果。实验 1的结果表明 ,在M16及CZB培养液基础上 ,加减几种成分得到的改进M16培养液 (用mM 16表示 )和改进的CZB培养液 (用mCZB表示 )均能有效克服 2 细胞阻滞现象。除去M 16和CZB培养液中的葡萄糖和磷酸盐后添加 5 5 5mmol/L (1g/L)果糖、2 5mmol/L牛磺酸、 10 0或110 μmol/LEDTA、 2mmol/L谷氨酰胺和 2 %必需氨基酸 (EAA)及 1%非必需氨基酸(NEA) ,均可支持体外培养的昆明小鼠 1 细胞胚胎发育到囊胚和孵化囊胚阶段。实验结果同时证明 ,TE培养液也具有良好的培养效果。 1 细胞胚胎在mM 16、TE和mCZB中培养后发育到囊胚的比率分别为 85 %、 85 %和 6 8%。实验 2的结果表明 ,在M 16培养液中单独添加 2 5mmol/L的牛磺酸也可支持体外培养的昆明小鼠 1 细胞胚胎发育到囊胚。在M16中同时添加 2 5mmol/L牛磺酸和 10 0 μmol/LEDTA两种成分可使 1 细胞胚胎的囊胚发育率达到 6 7%。通过比较分析我们认为牛磺酸对克服昆明小鼠胚胎 2 细胞阻滞起关键作用 。

昆明小鼠焦虑与抑郁动物模型相关性研究:明暗箱实验与悬尾实验

目的探讨明暗箱实验(light/dark box,LDB)和悬尾实验(tail suspension test,TST)作为动物模型评价昆明小鼠焦虑与抑郁情绪的相关性。方法成年♂昆明小鼠先后放入明暗穿梭箱和悬尾箱,摄像系统分别记录5 min和6 min内的行为变化,实验间隔1周,实验参数如下:LDB首次由明区进入暗区潜伏期(LDB_Latence)、明区停留时间百分率(LDB_Ltime%)、明区水平运动百分率(LDB_Lcross%)、明区垂直运动百分率(LDB_Lrear%),TST首次出现不动状态潜伏期(TST_Latence)、不动状态百分率(TST_Immobil-ity%);采用因子分析、聚类分析、相关分析、一致性检验和生存分析等多种统计方法进行数据处理。结果①因子分析和聚类分析提示,LDB参数反映焦虑情绪,TST参数反映抑郁情绪。②相关分析提示,LDB与TST参数组内具有较好相关性,而组间相关性较差;ICC和Kappa统计参数提示,LDB与TST评价焦虑与抑郁情绪一致性较差。③生存分析提示,LDB与TST半数生存期差异无统计学意义。结论LDB与TST相关参数各自独立反映了焦虑与抑郁情绪,但两者评价结果的相关性和一致性较差;在解决"特质焦虑与状态焦虑动物模型相关性"及"焦虑与抑郁动物模型相关性"科学问题时,可以考虑建立新型动物模型及综合评价方法或者筛选特质种属实验动物;而在进行药物效应评价时,可以考虑将多种动物模型联合组成"行为组学",根据不同结构维度进行"模式识别"评价。

贝类麻痹性毒素的昆明小鼠测定法若干问题探讨

探讨了昆明小鼠用于贝类麻痹性毒素测定的 3个问题：（1）石房蛤毒素（Saxitoxin简称STX）剂量和昆明小鼠死亡时间为曲线关系，其曲线方程为Y=7．1271X-0.7497。（2）把死亡时间t变为时间的倒数 l／t，STX的毒性 MU取对数为 1og MU，再进行回归分析得斜率和截距分别为140和0．2，相关系数为0．97，直线回归方程Y=140X-0．2。所得直线回归方程与AOAC方法中Sommer' s表之STX──小鼠死亡时间直线回归方程Y＝145X－0．2比较相近。（3）通过系列实验，求得昆明小鼠一个鼠单位所代表的毒素剂量为 0．189 μg STX。

猪圆环病毒2型感染昆明小鼠模型的建立

将SPF级昆明小鼠随机分为3组,即一次攻毒组(S组)12只、连续攻毒组(M组)3只和对照组(C组)12只。S组和C组小鼠于第1d分别接种RPMI1640培养液和猪圆环病毒2型(PCV2)细胞培养毒,M组小鼠于第1、7、14、28、35d连续进行PCV2接种。S组和C组小鼠分别在接种后第7、14、28和42d各处死3只,M组小鼠在接种后第42d全部处死,分析其增重、病毒组织分布、抗体水平、病理组织学变化。结果,C组小鼠体重增长速率大于S组和M组,S组又明显高于M组;S组和M组小鼠体内存在病毒复制,而C组小鼠体内无病毒复制;S组和M组小鼠均产生PCV2抗体,但M组小鼠抗体水平明显高于S组,C组小鼠未检测到PCV2抗体;S组和M组小鼠有明显的病理损伤,其中淋巴结损伤最严重,C组未发现病理损伤。结果表明PCV2可以成功感染SPF昆明小鼠。

猪链球菌2型感染昆明小鼠模型的建立及评价

为建立稳定的猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)人工发病模型,本试验以天津某发病猪场分离的SS2 Y15293株为研究对象,经腹腔注射感染昆明小鼠,测定其LD_(50),确定造模感染剂量,通过观察感染后小鼠的临床症状和病理变化,测定试验期间各组小鼠体重和采食量的变化及细菌回归等试验对模型进行评估。结果显示,SS2 Y15293株致昆明小鼠的LD_(50)为6.7×10~7 CFU/mL。以1个LD_(50)的剂量攻毒,与对照组相比,试验小鼠主要发病表现为攻菌后24 h出现精神沉郁、被毛逆立、眼睛有分泌物,72～96 h出现头颈歪斜、翻滚、震颤等神经症状,死亡高峰在48～72 h。3次重复试验中,试验组小鼠的发病率均为100%,死亡率为50%～70%,神经症状小鼠出现比率20%～30%。与对照组相比,试验组小鼠采食量和体重显著下降(P<0.05),临床症状分值显著升高(P<0.05)。组织病理检查发现,试验组小鼠心脏、肺脏组织均有不同程度出血、炎性细胞浸润;脑膜炎,脑室出血,充满炎性细胞。细菌回归试验结果表明,试验组死亡小鼠脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏均有细菌定植,且形态、染色和分子生物学特性与攻毒菌一致。以上结果证实,SS2 Y15293株能感染昆明小鼠并致其发病,感染动物发病规律性强,重复性好,临床症状典型,说明SS2 Y15293株感染昆明小鼠可作为SS2的候选人工感染模型。

ToxoDB#17型弓形虫卵囊对昆明小鼠致病性的研究

目的为探究ToxoDB#17型弓形虫对昆明小鼠的致病特点。方法分别选择<1个,1个,101个,102个,103个,104个,105个,106个ToxoDB#17型弓形虫卵囊灌胃小鼠,观察小鼠的临床症状,采用改良凝集试验、HE和IHC方法研究弓形虫的感染率,小鼠生存率及其大脑内的包囊数量。结果≥104个卵囊组小鼠在攻虫后出现一过性的精神沉郁,弓背,被毛逆立现象,其余组精神状态正常;≥102个卵囊可引起小鼠100%感染,感染小鼠的成囊率为2.38%(1/42),感染小鼠生存率为85.71%(36/42),存活时间≥360DPI。结论 ToxoDB#17型弓形虫对昆明小鼠的致病力弱,包囊形成率低。

不同培养液对昆明小鼠体外受精率及早期胚胎体外发育的影响

在TYH受精液中添加促卵泡素(FSH)和苯甲酸雌二醇(E2),检测不同浓度的FSH和E2对昆明小鼠的体外受精率的影响;检测在M16、CZB两种培养液中添加胎牛血清(FCS)与否对昆明小鼠早期胚胎体外发育的影响.结果表明:在TYH中添加1.0 IU/mL FSH,受精率和2-细胞胚率显著高于对照组;在TYH中添加0.1μg/mL E2,受精率和2-细胞胚率也显著高于对照组.在CZB中添加体积分数为10%FCS,可显著减少2-细胞期体外发育阻断,并显著提高小鼠胚胎体外发育的囊胚率,可见,以TYH添加1.0 IU/mL FSH和0.1μg/mL E2为受精液,以含体积分数为10%FCS的CZB为胚胎培养液,小鼠胚胎可获得较高的囊胚率.葡萄糖并不是小鼠胚胎形成囊胚所必需的.

影响昆明小鼠和BALB/c小鼠胚胎干细胞分离、克隆、传代的若干因素

对昆明小鼠和BALB/c小鼠2种胚胎的研究表明,2种品系小鼠胚胎均可用作胚胎干细胞(ES)分离建系的材料,两者在ES分离、传代上无显著差异(P>0.05);大鼠心肌细胞条件培养液与添加L IF的ES常规培养液相比,显著提高了小鼠ES细胞F1、F2出现率(P<0.05);采用低浓度消化液使形成ES克隆的比率分别从14%、16%提高到35%、32%,使ES传到第5代的比率分别从1.7%、0提高到5%、7.1%;而采用连续消化法使形成ES克隆的比率从15%、17%提高到40%、50%,使ES传到第5代的比率从0、1%提高到10%、20%;对ES进行伊红染色、核型分析、AKP染色及体外分化能力检测,证实所分离的ES符合小鼠ES的一系列特征。

用昆明小鼠定量测试河豚毒素的研究

为建立昆明小鼠定量测定河豚毒素(TTX)方法,选用雄性昆明小鼠进行研究,结果显示TTX致昆明小鼠的LD50为0165μg,TTX剂量在045～256μg之间与昆明小鼠平均死亡时间成线性关系;当河鱼样品提取液TTX浓度低于045μgml时,腹腔注射1ml提取液致小鼠平均死亡时间大于4min,在此范围内与ICR小鼠进行比较,毒素检测结果基本一致。此外对该传统实验方法进行了无需小鼠体重校正、利用平均数计算等项改进。用昆明小鼠定量测试河豚毒素既方便又可靠。

不同日龄昆明小鼠外部形态数量性状与肥满度的关系

随机抽取我国不同地区6个群体28、56和112日龄的昆明小鼠,称其体重,并对其全长、头长、体长和尾长进行测量,计算肥满度。发现KM小鼠外部形态数量性状随生长发育时间延长而增加(P<0.05),其中28和56日龄增长最快。头长和体重在性别上的差异出现较早(28日龄),而体长和尾长出现较晚(112日龄)。逐步回归分析发现,年龄和体长对肥满度皆呈负性作用,全长和体重呈正性作用;对肥满度协同作用最大的数量性状雌性为头长和体重,雄性为体重和体长。提示在优化我国昆明小鼠时可因性别差异选择不同的外部形态数量性状参数。

昆明小鼠早期胚胎体外发育阻滞原因分析

为了分析小鼠早期胚胎在体外发育阻滞的原因 ,建立早期胚胎体外培养系统 ,应用几种不同的培养系统对昆明小鼠单细胞胚胎在体外培养了 96～ 12 0 h。结果表明 ,小鼠单细胞胚胎在 M1 6 和 BWW培养液中卵裂均受到阻滞 ,且两者之间差异不显著 (P>0 .0 5 ) ;CZB和 HTF培养液能有效地克服小鼠胚胎的 2 -细胞发育阻滞 ,与 M1 6 和 BWW相比 ,2 -细胞卵裂率和囊胚率均存在显著性差异 (P<0 .0 1) ;在 M1 6 培养液中添加牛磺酸对早期胚胎发育有促进作用 (P<0 .0 1) ;小鼠早期胚胎在 CZB和牛输卵管上皮细胞 (COEC)共培养体系中的卵裂率较对照组明显提高 (P<0 .0 5 )

旋毛虫对昆明小鼠最小感染剂量的实验研究

为观察旋毛虫感染昆明小鼠的最小剂量,将70只雄性昆明小鼠随机均分7组,每只鼠分别经口感染旋毛虫肌幼虫30、25、20、15、10、5及3条,感染后6周剖杀。取完整膈肌,压片、镜检、计数虫荷。小鼠全身肌肉经人工胃液消化后计数肌肉虫荷。结果,压片镜检法和人工消化法的幼虫检出率,感染30、25、20、15及10条旋毛虫肌幼虫的小鼠均为100%(10/10);感染5条旋毛虫肌幼虫的小鼠,两种方法幼虫检出率分别为70%(7/10)和100%(10/10);感染3条旋毛虫肌幼虫的小鼠,两种方法均未检出幼虫。感染旋毛虫的小鼠膈肌和肌肉虫荷与感染剂量均呈正相关(r=0.759,P<0.05;r=0.638,P<0.05)。旋毛虫经口成功感染昆明小鼠的最小剂量为5条幼虫。

昆明小鼠胃肠道钙离子跨膜吸收途径相关基因表达模式分析

本研究旨在分析钙离子(Ca2+)跨膜吸收途径相关基因在昆明小鼠胃肠道中的表达模式。选取12只8周龄、平均体重(30.71±2.93)g的雌性昆明小鼠,取胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠组织样品,利用实时定量PCR法检测维生素D依赖性钙结合蛋白(CaBP-D9k)、瞬时性受体电位通道香草酸受体6(TRPV6)和维生素D受体(VDR)mRNA表达量。结果表明:1)CaBP-D9k、TRPV6和VDR mRNA在胃内属低水平表达,而在盲肠内表达量较高;2)随着小肠的延伸,CaBP-D9k、VDR mRNA表达量逐渐降低,而TRPV6 mRNA则在回肠内高水平表达;3)CaBP-D9k(P<0.05)、VDR(P<0.05)、TRPV6 mRNA的表达量(P>0.05)随着大肠肠段的延伸而不同程度地下降。结果提示,CaBP-D9k、TRPV6和VDR mRNA表达量与胃肠道Ca2+跨膜吸收能力存在关联性。

黄豆对昆明小鼠生长繁殖性能的作用

了解黄豆对昆明小鼠生长繁殖性能的影响,为提高昆明小鼠生长繁殖性能提供依据。采用雌性昆明小鼠80只,分成4组,每组20只,雌性鼠与雄性鼠合笼交配7d后取出雄性鼠,分别记录黄豆1组、黄豆2组、黄豆3组和空白组雌性昆明小鼠的孕期、分娩母鼠数、产子窝重、产子数、哺乳仔鼠1周龄个数及窝重、哺乳仔鼠2周龄个数及窝重、哺乳仔鼠3周龄个数及窝重,其中黄豆1组～3组合笼后每笼每周两次分别饲喂黄豆4、8、16g。结果发现,黄豆1组～3组分别与空白组在离乳数指标上存在显著性差异,黄豆3组与空白组在1周龄～2周龄体重指标上存在显著性差异,其他指标在黄豆组间均没有显著性差异。表明在昆明小鼠生产繁殖过程中,每笼每周2次各饲喂4g黄豆可提高仔鼠的离乳数。