时差成像胚胎培养系统观察精子DNA碎片化指数对卵胞浆内单精子显微注射的胚胎发育及临床结局的影响

目的使用时差成像(time-lapse imagining,TLI)胚胎培养系统观察精子DNA碎片化指数(DNA fragmentation index,DFI)对卵胞浆内单精子显微注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)的胚胎发育指标及临床结局的影响。方法选取2023年1月至6月在上海交通大学医学院附属国际和平妇幼保健院辅助生殖科接受ICSI技术助孕的392对夫妇为研究对象,分为常规培养组284周期和TLI组108周期,再根据DFI≤15%、>15%~<30%、≥30%进一步分为正常组、临界组、异常组。比较各组的临床资料以及临床妊娠结局。统计学方法采用t检验、单因素方差分析、χ^(2)检验或Fisher确切概率法。结果6组的女方年龄、基础促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)、身体质量指数(body mass index,BMI)及获卵数比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05);男方精液常规指标中,浓度和正常形态率比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05);常规正常组、常规临界组、常规异常组、TLI正常组、TLI临界组和TLI异常组的前向运动精子率分别为(46.5±16.5)%、(31.0±14.2)%、(14.8±8.4)%、(41.6±16.2)%、(32.5±14.4)%、(19.3±11.1)%,常规异常组和TLI异常组的前向运动精子率分别低于常规正常组、常规临界组、TLI正常组和TLI临界组(P值均<0.05)。6组的卵裂率和囊胚形成率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。常规正常组、常规临界组、常规异常组、TLI正常组、TIL临界组和TLI异常组的受精率分别为(77.3±18.6)%、(78.6±17.1)%、(68.3±22.7)%、(77.4±14.5)%、(74.5±13.1)%、(63.1±25.4)%;常规异常组的受精率低于常规正常组、常规临界组、TLI正常组(P值均<0.05);TLI异常组的受精率低于常规正常组、常规临界组、TLI正常组、TLI临界组(P值均<0.05)。常规正常组、常规临界组、常规异常组的妊娠率分别为57.4%(39/68)、54.5%(24/44)、27.3%(6/22),异常组低于正常组和临界组(P值均<0.05)。TLI正常组、TLI临界组和TLI异常组3组的妊娠率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。常规组3组之间以及TLI 3组之间的早期流产率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论精子DFI值的升高会影响精子前向运动率,还会影响胚胎的受精率,高DFI精子进行ICSI助孕时使用TLI胚胎培养系统可以获得稳定的妊娠率。

分阶段聚焦护理模式对重度少弱精子症患者焦虑抑郁和卵胞浆内单精子显微注射结局的影响

目的探讨分阶段聚焦护理模式对患者焦虑抑郁和卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)结局的影响。方法选取2020年6月至2022年6月在福建省妇幼保健院接受ICSI助孕的140例重度少弱精子症患者作为研究对象。采用随机数字表法,将患者分为对照组(70例)和试验组(70例)。对照组接受常规模式护理,试验组采用分阶段聚焦模式护理。比较两组在情绪变化、满意度和ICSI结局方面的差异。结果试验组护理后的抑郁自评量表(SDS)和焦虑自评量表(SAS)评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组护理总满意度高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组的临床妊娠率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论分阶段聚焦护理模式能够显著提升重度少弱精子症患者治疗满意度,有利于积极改善情绪状态,且不会影响ICSI的妊娠结局。

纺锤体观测仪在高龄患者卵胞浆内单精子显微注射术中的应用价值

目的:探讨纺锤体观测仪在高龄患者卵胞浆内单精子显微注射术(ICSI)中的临床价值。方法:选取2022年1月至2023年6月九江市妇幼保健院辅助生殖中心收治的高龄女性患者ICSI共121例,根据ICSI助孕方法的不同分为对照组(49例)和观察组(72例)。对照组采用传统方法(ICSI进针位置与第一极体呈90°夹角),观察组使用纺锤体观测仪引导ICSI进针位置。比较两组患者获卵平均数、MⅡ卵平均数、胚胎各项指标。结果:两组患者获卵平均数、MⅡ卵平均数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组患者2PN受精率、2PN受精卵裂胚胎率、优质胚胎率、囊胚形成率、临床妊娠率均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:在高龄患者中,使用纺锤体观测仪下进行ICSI助孕,其胚胎各项指标要优于传统ICSI助孕。

深圳二院于2024年7月9日顺利通过“常规体外受精-胚胎移植及卵胞浆内单精子显微注射技术”国家级正式运行评审!我们这里,既种——试管婴儿,又保——免疫保胎,实现孕前调理,试管取卵移植,成功后及时保胎的闭环管理!一深圳市第二人民医院生殖医学科

深圳市第二人民医院生殖医学科建于2005年,为医院重点发展科室,2007开展夫精人工授精(AIH)技术,2023年5月获准开展常规体外受精-胚胎移植及卵胞浆内单精子显微注射技术试运行。作为中华志愿者协会中西医结合专家志愿者委员会生殖免疫专业组组长单位、广东省女医师协会生殖免疫专业委员会主委单位和生殖免疫专科联盟牵头单位(现有25家,省内16家,省外9家),目前生殖医学科设有生殖免疫品牌亚专科和特色门诊,连续举办5届国家级继续教育(每年在线点击量3-7万),获国家基金5项,发表3篇影响因子15分以上SCI文章。

对前次体外受精失败患者行部分卵胞浆内单精子显微注射的临床结局分析

目的探讨体外受精(IVF)失败患者后续性治疗时行部分卵胞浆内单精子显微注射(half-ICSI)以及ICSI治疗的结局差异。方法回顾性分析在我中心进行辅助生殖技术,选取前次IVF受精失败(包括完全受精失败和受精低下即受精率为0和低于25%),在随后周期中行half-ICSI治疗的8个周期作为研究组(后续性half-ICSI组),同时因前次IVF受精失败在随后治疗周期采取全部卵行ICSI方法受精的16个周期(后续性ICSI组)的治疗结局作为对照组。结果后续性half-ICSI组总的受精率显著低于后续性ICSI组(51.79%vs67.81%,P<0.01),后续性half-ICSI组卵裂率、优胚率、植入率、妊娠率、流产率与后续性ICSI组相比均差异无统计学意义。妊娠率两组分别为50%、25.0%,流产率分别为0、6.2%。后续half-ICSI组中IVF受精率显著低于ICSI的受精率(29.82%vs 74.55%)(P<0.001)。结论 IVF受精失败将影响后续性IVF治疗的受精率,但是IVF受精失败并不是ICSI治疗的绝对指征,考虑到安全性,half-ICSI治疗优于ICSI治疗。

新建体外受精实验室显微注射系统操作改进探究

针对新建成的体外受精实验室中显微注射操作系统不稳定,导致卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)卵膜刺破效果不佳或过程中损伤卵子纺锤体等问题,对连接了显微注射针的Eppendorf CellTram vario油压式手动显微注射仪的整体通道进行调整,提高卵子破膜及单精子注射的稳定性。通过增加显微注射仪管道内矿物油的更换频次并调节活塞相对位置,保证液压系统的通畅,通过控制显微注射针内介质从针尖至针尾依次为聚乙烯吡咯烷酮、培养油、空气、矿物油,保证针尖不污染、不堵塞,同时控制回吸、破膜、注射和退针的节奏,使ICSI操作得以顺利实施。经过分析及改进,ICSI后卵子退化率显著下降(P<0.05),而受精率、优质胚胎形成率以及临床妊娠率均有所提高。

卵细胞浆单精子显微注射(ICSI)治疗不育67个周期分析

目的 :分析卵细胞浆内单精子显微注射授精 (ICSI)治疗因少弱精及梗阻性无精症所致之不育症的临床效果。方法 :采用 Gn RH-α+ FSH/ h MG+ h CG促排卵 ,对成熟卵细胞 (M )进行显微注射授精 ,受精卵体外培养 3天后移植回子宫腔。结果 :6 7个周期获成熟卵 (M ) 5 86个 ,受精率 76 .2 8%。临床妊娠率 2 5 .37%。结论 :ICSI是治疗不育的有效方法。

卵母细胞第一极体形态与卵胞浆内单精子显微注射受精率和胚胎质量的关系

目的:了解人卵母细胞第一极体形态与卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)后正常受精率、卵裂率和优质胚胎率的关系。方法:选择行ICSI治疗的110个周期中1017枚人卵母细胞。将卵母细胞第一极体分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四种类型,采用3种来源的精子[手淫取精精子、附睾穿刺/睾丸活检(PESA/TESA)取精精子、冷冻精液精子]授精。ICSI操作后,了解各型第一极体卵母细胞受精率、卵裂率和优质胚胎率。结果:手淫取精患者:各型第一极体卵母细胞正常受精率和卵裂率比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中Ⅲ、Ⅳ型正常受精率低于Ⅰ和Ⅱ型,Ⅱ型卵裂率低于Ⅰ和Ⅲ型。PESA/TESA取精患者:各型第一极体卵母细胞正常受精率和取卵后第3天优质胚胎率比较,差异有统计学意义(χ2=8.488和6.789,P=0.044和0.034),Ⅰ型正常受精率低于Ⅱ和Ⅲ型,Ⅰ和Ⅲ型第3天优质胚胎率高于Ⅱ型。冷冻精液取精患者各指标比较,差异无统计学意义。结论:排除精子来源对受精的影响,正常受精可能和卵母细胞第一极体形态有关。

黏性卵鱼类受精卵一种快速高效的显微注射方法

黏性卵鱼类受精卵遇水后产生的黏性和卵壳变硬的现象严重影响着大批量显微注射操作的速度和随后的取材。研究建立了一种高效的黏性受精卵快速脱黏显微注射方法,并利用荧光标记葡聚糖Alex-Fluor488-dextran评估了消化脱黏、直接注射和脱壳注射三种方法的技术特点和适用范围。结果表明:在23℃,用0.25%胰蛋白酶(p H=7.1—7.4)消化4min可获得脱黏受精卵。与直接注射和脱壳注射方法相比,研究建立的消化脱黏方法兼具二者的优点:在受精后5min可以开始显微操作,无黏性,容易进针,胚盘清晰便于观察、注射后容易培养和取材。实验方法适用于研究与黏性卵鱼类卵子发生、卵-胚转换和早期胚胎发育密切相关基因的功能,亦可满足追踪受精过程中核质细微变化研究的需要。

显微注射生长激素基因导入中国对虾（Penaeus chinensis）受精卵的研究

本实验采用显微微量注射方法，将羊生长激素基因导入中国对虾受精卵，受精卵发育到状幼体第三期后采样检测。ＰＣＲ检测结果表明：７个样品共９３尾幼体，有３个样品呈现阳性信号，基因转移比率至少在３％以上。同时斑点杂交结果也证明有两个明显阳性斑点。

用显微注射法将绿色荧光蛋白基因导入金鱼受精卵中表达

采用显微注射法将绿色荧光蛋白 (GFP)基因重组表达质粒导入金鱼受精卵中 ,以期获得能发绿色荧光的金鱼。结果显示 ,在注射的 3批金鱼受精卵中 (第一批 4 310粒 ,第二批 395 2粒 ,第三批 4 0 5 6粒 ) ,分别孵出鱼苗 5 4 3、2 82和 2 6 6尾 ,出苗率为 17.0 2 %、12 .5 3%和 13.5 2 % ,其中表达绿色荧光的金鱼分别为 2 3、2 4和18尾 ,表达率为 4 .2 4 %、8.5 1%和 6 .77%。荧光表达检测发现 。

通过双原核显微注射提高转基因小鼠研制效率的实验研究

目的建立高效的转基因小鼠制备技术,为开展遗传工程动物模型研究奠定技术基础。方法通过向小鼠受精卵原核中注入不同浓度的DNA分子,筛选最适注射用DNA浓度;将K14/hCTLA4-Ig基因表达载体分子通过显微注射分别导入小鼠受精卵雌、雄原核,并设立单原核注射对照组;利用输卵管腹壶部穿刺移植法将注射后的小鼠受精卵移植于同期发情的受体母鼠;利用PCR对出生的转基因首建小鼠进行筛选。结果最适DNA分子浓度为10ng/μl;在单、双原核注射组胚胎2细胞卵裂率分别为52.3%(132/253)和45.0%(108/240),差异有显著性(P<0.05);注射胚胎移植后体内存活率分别为18.1%(24/132)和16.7%(18/108),差异无显著性;转基因首建小鼠阳性率分别为3/24和5/18,转基因阳性小鼠占总注射胚胎的比例为1.2%(3/253)和2.08%(5/240),差异有极显著性(P<0.01)。结论尽管双原核注射对胚胎的2细胞卵裂率有一定影响,但通过双原核注射可有效提高转基因小鼠的制备效率。

生物工程中自动化显微注射技术研究进展

阐述了现有显微注射系统的结构组成与功能特征,介绍了自动化显微注射技术的国内外研究现状。分析了显微注射中各项自动化操作研究的技术组成及其优缺点,涉及图像处理、微机械加工、智能材料、自动控制、气动、激光与计算机等技术或方法。指出了研究基于手工细胞注射技术路线的全自动显微注射技术的关键问题和困难。展望了自动化显微注射技术的发展方向,并从三方面简要介绍了各方向的研究进展,包括自动化显微注射系统结构、微注射针进针机构和基于仿生微通道的微注射量精确控制技术。

小鼠精子和球形精子细胞显微注射受精研究

目的研究动物受精机理。方法以昆明白鼠为实验动物，利用显微注射技术，对精子和球形精子细胞的显微注射受精进行了研究。结果１．带下注射受精，注射４～６个精子的卵的受精率（３２．５％）和卵裂率（２５．０％）显著高于注射单个精子的卵的受精率和卵裂率（分别为１２．５％和６．３％）（Ｐ＜０．０５）。２．带下注射４～６精子后，有第１极体卵母细胞的存活率（６９．６％）、受精率（３２．５％）和卵裂率（２５．０％）分别高于无第１极体卵母细胞的存活率、受精率和卵裂率（分别为６４．４％、２０．７％和１３．８％），但两者无显著差异（Ｐ＞０．０５）。３．胞质内精子注射卵的存活率（２１．４％）极显著低于带下注射卵的存活率（６９．６％）（Ｐ＜０．０１）；而胞质内精子注射卵的受精率（３５．５％）、卵裂率（３２．３）％和囊胚率（２０．０％）则高于带下注射卵的受精率（３３．３％）、卵裂率（２５．０％）和囊胚率（１０．０％），但无显著差异（Ｐ＞０．０５）。４．将球形精子细胞注入经电活化处理的卵母细胞的透明带下，注射卵的存活率为９０．５％，电融合率为３４．６％，２－细胞分裂率为２８．３％。结论１．注射精子的数量对小鼠带下注射的受精率和卵裂率有显著影响?

用显微注射法建立转bcl-x_l基因小鼠

建立转bcl xl基因小鼠 ,继而传代建系 ,用于缺血性脑血管疾病的研究。采用显微注射法 ,将人bcl xl基因注入昆明小白鼠受精卵获得子代鼠 ,然后作PCR ,Southern blot ,mRNA ,Western blot检测以获得阳性鼠。实验中注射受精卵 16 5 4枚 ,移植卵数 14 4 8枚 ,受体鼠 4 9只 ,怀孕鼠 7只 ,子代鼠 13只 ,整合数 4只并均有表达 ,植入受精卵的存活率 83% ,受精卵的总存活率 0 .78% ,移植鼠的怀孕率 14 .3% ,整合效率 30 .7% ,总有效率为 0 .2 4 %。初步获得了转bcl

卵胞浆内单精子显微注射-胚胎移植治疗不育症57例报告

目的 :研究卵胞浆内单精子显微注射 -胚胎移植 (intracytoplasmicsperminjectionandembryotransfer,ICSI-ET)技术治疗严重少弱畸精症、梗阻性无精症及不明原因不育的应用价值。方法 :应用ICSI-ET技术治疗5 7对 (6 0个周期 )严重少弱畸精症、梗阻性无精症及不明原因不育夫妇。按常规超排卵 ,经阴道B超介导采卵 ,行成熟卵母细胞单精子显微注射受精 ,受精卵体外培养 2～ 3d后移植入子宫腔。结果 :6 0个周期获成熟卵母细胞 5 38个 ,受精率 84 .6 6 % ,卵裂率 88.2 1% ,优质胚胎率 6 7.4 0 % ,临床妊娠率 2 6 .6 7%。严重少弱畸精症、梗阻性无精症、不明原因不育组在受精率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率方面不存在显著性差异。结论 :应用ICSI -ET治疗严重男性因素不育及不明原因不育是有效的。

避免常规体外受精失败-部分卵子单精子卵泡浆内显微注射364周期分析

目的：探讨部分卵子单精子卵泡浆内显微注射（Half intracy toplasmic sperm injection，half-ICSI）的适应征及half-ICSI对于挽救试管受精（In vitro fertilization，IVF）失败的意义。方法：对2002年～2005年7月364周期half-ICSI中IVF受精失败（受精率为0）和受精率低下（受精率〈30％）的指征与half-ICSI中IVF受精率正常（受精率〉65％）的指征进行比较。结果：half-ICSI组IVF受精率低于常规IVF受精率。受精率低下组和受精率失败组中男性边缘因素占51．2％和63.3％，与受精率正常组比较，其指征有显著性差异（P〈0．05）。30例IVF受精率为0的患者中11例由于采用了half-ICSI的方式，获得ICSI受精的胚胎，进行了移植，而获得妊娠，占30例患者中36．7％。结论：男性边缘因素是half-ICSI的适应征。half-ICSI可以做为疑IVF受精困难者的选择，很好地预防IVF受精失败．以及低受精率的出现。

SHG－44细胞显微注射NDGA诱导分化的初步观察

采用显微注射系统对ＳＨＧ－４４细胞进行单细胞微量注射技术的探讨，并观察去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）注射后的作用。结果显示，体积较小的肿瘤细胞显微注射成功的关键在于注射参数的正确设定、细胞标记、注射针下限值的确定、注射过程中防污染以及操作细致、迅速；ＮＤＧＡ注射ＳＨＧ－４４细胞后的诱导分化作用较其在细胞外培养基中的作用更直接、迅速和显著，亦更持久。

显微注射技术在制备鱼类嵌合体和转基因海水鱼上的应用

以鱼类胚胎细胞和胚胎干细胞为核供体进行细胞移植构建鱼类嵌合体研究方面,现有的成功报道均采用显微注射方法;在转基因海水鱼类研究中,显微注射也是最为常用的技术,本实验室在花鲈胚胎干细胞嵌合体构建和外源基因向花鲈胚胎的转移研究中取得的结果也充分证实,显微注射技术是开展海水鱼类细胞移植和转基因研究的首选技术。

显微注射Ca^(2+)激活小鼠MⅡ期卵母细胞

胞质内显微注入Ｃａ２＋可以激活小鼠ＭⅡ期卵母细胞，且随着卵龄的增加，激活率明显升高。卵龄小于１６ｈ（ｈＣＧ注射后）注射Ｃａ２＋引起的激活率很低，卵龄超过１８ｈ，激活率达到５０％以上。卵龄小于１６ｈ的卵母细胞，卵内注入超纯水未能激活卵母细胞，而在１８～１９ｈ卵龄组，注射水的对照组激活率为３５％，但显著或极显著地低于注射Ｃａ２＋的试验组。激活前注射ＥＤＴＡ卵母细胞的激活率约为３０％，激活后注射ＥＤＴＡ卵母细胞的激活率高达５０％以上，二种处理激活率出现显著差异。胞质内注入肝素，无论有无外源Ｃａ２＋。