微量动态显色法用于细菌内毒素检测的可行性研究

目的:建立微量动态显色法,并验证其用于细菌内毒素检查的可行性。方法:建立鲎试剂、样品分别为25、25μL的加样体系,通过考察准确度和精密度、线性和范围、最低检测限、试剂耐用度进行方法学验证,并采用动态显色法和微量动态显色法两种方法比较对39个不同品种进行方法适用性研究。结果:0.03、0.3、3.0 EU·mL^(-1)3个浓度6次重复实验的回收率分别为(96.19±16.68)%、(92.53±10.17)%、(89.54±25.84)%;6条标准曲线的相关系数(r)的绝对值为(0.9977±0.0023);鲎试剂最低灵敏度浓度0.01 EU·mL^(-1)时,反应时间为(3896.0±279.6)s,均小于阴性对照的反应时间;2个不同厂家鲎试剂的耐用度检查结果符合规定;品种适应性研究结果显示,39个品种的回收率在50%~200%之间,两种方法的有效性相同。结论:微量动态显色法的准确度和精密度、线性和范围、最低检测限、试剂耐用度均符合方法验证要求,品种适用性与传统的动态显色法相等,该方法可用于常规样品的细菌内毒素检测。

动态显色法在注射用甲磺酸萘莫司他细菌内毒素检查的运用分析

目的:建立注射用甲磺酸萘莫司他细菌内毒素检查法。方法:按《中国药典》四部通则1143细菌内毒素检查法进行动态显色法干扰试验。结果:采用加碱性调节剂作用一定时间处理供试液并进行稀释的方式,可有效消除甲磺酸萘莫司他的干扰作用。结论:注射用甲磺酸萘莫司他可采用细菌内毒素动态显色法进行细菌内毒素检查。

微量动态显色法细菌内毒素检查方法研究

目的通过研究确定微量动态显色法能否满足《中国药典》的要求,作为现有细菌内毒素检查法的补充。方法使用微量动态显色法鲎试剂,每孔样品和鲎试剂加样量各为25μL,检测波长405 nm,预设OD值0.05,使用半孔酶标板检测。依据《中华人民共和国药典》2020年版第四部“9101药品质量分析方法验证指导原则”的规定,按照其项下“杂质测定”中“定量”项目的具体要求,进行专属性、准确度、精密度、定量限、线性、范围、耐用度7项内容的方法学验证,并对48个药品品种共74批样品开展了品种适用性研究,对76个药品品种共143批样品(包括133批阴性样品和10批阳性样品)进行日常检验,并将结果与传统显色法检验结果进行了比对分析。结果经过方法学验证,表明微量动态显色法符合《中华人民共和国药典》对定量方法的要求;经过品种适用性与一致性比对研究,结果表明微量动态显色法与传统显色法相比,具有较好的等效性。结论微量动态显色法可以作为现有细菌内毒素的补充方法推广使用。

微量动态显色法定量检测胎牛血清中细菌内毒素含量

目的 探讨微量动态显色法定量检测胎牛血清中的细菌内毒素的可行性,并与凝胶法结果比较。方法 采用微量动态显色法鲎试剂,建立标准曲线,通过预干扰试验确定稀释倍数,测定供试品外加内毒素回收率进行干扰试验,对供试品进行定量检测,并与凝胶法试验结果进行比较。结果 标准曲线的线性范围为0.02~20 EU·mL^(-1),回归方程为lgT=2.9334-0.2883 lgC,相关系数| r |=0.9992,供试品在稀释200倍时无干扰作用,细菌内毒素回收率在50%~200%内,其中3批供试品的内毒素定量检测结果小于规定限值,1批高于限值,检测结果与凝胶法一致。结论 本品可采用微量动态显色法定量检测细菌内毒素含量,进行质量控制。

动态显色法定量检测泊沙康唑原料药中细菌内毒素的含量

目的:以动态显色法定量检测不溶于水的泊沙康唑原料药中细菌内毒素的含量。方法:根据注射液临床用量从严拟订沙康唑原料药限值为0.25 EU·mg^(-1),以稀释液(二甲基亚砜∶RIPA强裂解液=1∶1)为溶剂处理泊沙康唑原料,采用两个不同厂家的动态显色法鲎试剂,依据《中国药典》2020年版四部通则1143(方法2光度测定法之动态显色法)要求,确定样品不干扰的浓度,最后对3批样品的细菌内毒素进行定量检测。结果:两个厂家的鲎试剂标准曲线|r|均大于0.980;样品质量浓度≤0.02 mg·mL^(-1)时,细菌内毒素回收率在范围内;3批样品的细菌内毒素定量检测结果均符合要求。结论:以0.25 EU·mg^(-1)为限值,动态显色法用于不溶于水的泊沙康唑原料药细菌内毒素定量检测,方法可行,过程可控。

微量动态显色法(mKC)检测抗体药物中细菌内毒素含量方法验证及对比实验

目的:采用微量动态显色法(mKC)对抗体药物中的细菌内毒素含量进行检测,并对方法进行验证,同时与凝胶法的检测结果进行对比。方法:使用两个厂家的微量动态显色鲎试剂,对3个批号的样品,分别从标准曲线线性及范围、定量下限、检测限、干扰实验、精密度等方面进行方法学验证,同时进行微量动态显色法和凝胶法结果比对。结果:标准曲线相关系数的绝对值(|r|)均大于0.980,线性范围为10~0.1 EU/m L,定量下限为0.1 EU/m L,检测限为0.025 EU/m L,确定供试液的无干扰质量浓度为0.2 mg/m L,同一厂家试剂RSD小于25%,两个厂家试剂共计6次结果 RSD小于30%,微量动态显色法和凝胶法结果一致。结论:微量动态显色法可以用于抗体药物的细菌内毒素含量检测,并且可以替代传统的凝胶法用于抗体药物放行检测和稳定性考察。

擦拭-显色法快速测定日用陶瓷中铅溶出量的探讨

以二甲酚橙钠盐(XO)为显色剂,探讨试纸擦拭-显色法快速测定日用陶瓷中铅的擦拭量,并实验分析了与国家标准GB/T3534-2002测定铅溶出量之间的线性关系。分别从显色剂选择、显色剂的浓度、显色剂溶液的pH值以及干扰试验等方面对显色方法进行了优化。实验结果表明,当选择二甲酚橙为显色剂,显色剂的浓度为0.025%,采用醋酸-醋酸钠缓冲体系控制溶液pH为6.00,采用邻菲罗啉为掩蔽剂,该显色体系对铅的容量为300 mg/L,在浓度范围为0~50 mg/L呈良好的线性关系。试验了擦拭量与溶出量之间的关系,结果表明两者之间符合线性关系,曲线方程为y=0.108x-0.682相关系数r2=0.9993。

碘显色法测定烟草中的淀粉含量

淀粉是较难测定的烟草组分之一。为了快速准确地测定烟草中的淀粉含量,借鉴食品中淀粉的测定,建立了碘显色法测定烟样中淀粉含量的方法。即在600nm处测定淀粉-碘反应液的吸光度,再根据淀粉标准曲线计算出烟草中的淀粉含量。该方法的平均回收率96 8%,CV=0 97%。与传统的酸解法和酶解法进行了比较,并采用该方法测定了18种烤烟烟叶和15种市售卷烟的淀粉含量。

微孔板Alamar Blue显色法检测结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼耐药性研究

目的评价微孔板Alamar Blue显色法检测结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼耐药性的可行性。方法用微孔板Alamar Blue显色法对41株和70株结核分枝杆菌临床分离株分别检测利福平和异烟肼的最小抑菌浓度,记录获得结果时间,利用ROC曲线确定利福平和异烟肼的最佳耐药阈值,并和传统的药物敏感性实验罗氏比例法进行比较。结果微孔板Alamar Blue显色法获得结果平均时间为8d,利福平和异烟肼的最佳耐药阈值均为0.5μg/mL,以罗氏比例法为金标准,利福平的灵敏度和特异度均为100.0%,异烟肼的灵敏度和特异度分别为96.6%和100.0%。结论微孔板Alamar Blue显色法是一种简便、敏感、快速的药物敏感性检测方法,可用于结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼耐药性的快速检测。

微生物显色法快速检测水产品中恩诺沙星残留

针对水产品中恩诺沙星残留,通过筛选药物敏感菌株和显色剂,建立了一种基于显色反应来判断结果的微生物检测方法。以腾黄八叠球菌(Sarcina ureae)为指示菌株,以氯化三苯四氮唑显色为显色剂,阳性样品呈肉眼可辨的红色,阴性样品呈无色,最低检测限可达50μg/kg。经酶联免疫法(最低检测限可达12μg/kg,回收率在74.25%～93.38%之间)和高效液相色谱法(最低检测限可达5.0μg/kg,回收率在78.20%～91.27%之间)验证,该方法准确、可靠。不同于传统的方法,该方法更为快速、便捷、易于结果判定,是对现有检测方法的一种有益的补充和完善,极其适合在生产、销售、流通等非实验室条件下作为初筛方法使用。

淀粉含量测定的一种简便方法──碘显色法

本文介绍用80％Ca（NO3）2提取淀粉，用碘显色法测定植物组织中淀粉含量，在淀粉含量为0～100μg／ml范围时，该法工作曲线线性良好。显色受Ca（NO3）2浓度的影响。该法操作简便、需时短、显色稳定，实验误差较小。

动态显色法检测4种清热解毒类中药注射液中细菌内毒素含量

目的:建立定量检测4种清热解毒类中药注射液中细菌内毒素的试验方法。方法:采用动态显色法,测定温度为(37±0.5)℃,检测波长为405 nm,预设吸光度(A)值为0.1,反应时间为3 600 s。依据2015年版《中国药典》(四部)通则细菌内毒素检查法中的光度测定法及其指导原则,进行标准曲线可靠性试验和干扰试验,确定4个品种(清开灵注射液、复方半边莲注射液、茵栀黄注射液、双黄连注射液)的最大不干扰浓度并进行细菌内毒素定量检测。结果:可靠性试验中标准曲线的相关系数r为0.999;清开灵注射液、复方半边莲注射液、茵栀黄注射液、双黄连注射液分别在原液200、125、75、12.5倍及以下稀释倍数时对鲎试剂检测无干扰作用;干扰试验中回收率均在50%~200%;样品中细菌内毒素含量分别小于1.66、1.04、0.62、0.104 EU/m L,均低于各样品规定的限值。结论:采用动态显色法可检测这4种中药注射液的细菌内毒素,且方法简单快捷,结果稳定可靠。

MTT显色法在肿瘤细胞生物学研究中的应用

用MTT显色方法对体外传代K562,SW1116,Bcap-37和HR8348细胞分别进行了抗癌药物敏感性、抗癌药物调变,激素和激光光动力学作用的研究,均得到较稳定的结果。各项研究带有共性的结果是K562等细胞在一定范围内与理化作用的强度及作用时间长度呈正相关。因而,在实际应用中,可根据不同的实验对象和目的,对MTT法的实验条件作各种特定性设计。本文提出成功的MTT试验对照孔OD值宜超过0.5。并就理论最高血药浓度C_(max)、1/10 C_(max)及由Cmax降至30％抑瘤时药物浓度的倍减次数的价值进行了讨论。

硝酸银显色法变色边界处氯离子浓度的影响因素

研究了砂浆的碱度和AgNO3溶液指示剂的浓度对测量砂浆变色边界Cl-浓度的影响。将AgNO3,NaOH及NaCl 3种物质混合,发现溶液中生成的沉淀反应产物中的AgCl的质量分数随溶液中OH-浓度的增加而减少、沉淀反应产物的颜色随AgCl的含量而变化。用0.100mol/L和0.035mol/L的AgNO3指示剂喷洒到按北欧标准NTBuild492进行电迁移试验之后的砂浆试件上,并测试试件变色边界Cl-浓度,结果表明:0.035mol/L的AgNO3指示剂比用0.100mol/L的AgNO3指示剂测试试件变色边界的Cl-浓度小,因此,0.035mol/L的AgNO3指示剂检测到的变色深度大些;变色边界处的Cl-浓度随砂浆的pH值升高而增大。

高通量微生物显色法快速检测动物源性食品中抗生素残留

建立一种采用高通量微生物显色法对动物源性食品中抗生素残留进行筛检,再结合高效液相色谱-串联质谱(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)法对阳性样品进行复测的分析检验方法。本方法利用嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus sterothermophilus)作为指示菌,制备96微孔板,可同时对不同类别多种抗生素进行联合检测。结果表明:该微生物显色法操作简便、快捷,成本低,结果准确且易判断,选取pH 7.4磷酸盐缓冲液进行提取,以反应液150μL、菌液50μL(初始OD_(600 nm)为0.4左右)、样品提取液100μL作为检测体系,检测效果最佳,对动物源性食品中氨基糖苷类检出限为60μg/kg,β-内酰胺类检出限为20~40μg/kg,大环内酯类检出限为60~80μg/kg,四环素类检出限为40~60μg/kg,符合国内外对抗生素残留限量的要求。对60份动物源性样品进行检测,其结果与HPLC-MS/MS复测结果一致,说明该微生物法稳定性良好,可用于动物源性食品中抗生素残留的初筛检测。

G试验显色法与浊度法对深部真菌感染诊断的比较分析

目的国内有关G试验显色法与浊度法的比较分析报道不多,文中旨在探讨真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测试剂盒(显色法)的临床应用价值。方法收集解放军总医院海南分院89例样本,其中病例组32例(深部真菌感染患者)、对照组57例(正常健康者),分别用真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测试剂盒(浊度法)和真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测试剂盒(显色法)进行样本检测,比较分析2种方法的灵敏度、特异度、准确度等指标。结果与浊度法比较,显色法试剂盒对深部真菌感染诊断的灵敏度、特异度明显升高(53.1%vs 81.2%、75.4%vs 91.2%、67.4%vs 87.6%),2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。显色法检测结果与其他系统(呼吸系统外)深部真菌感染的阳性符合率明显高于浊度法(92.8%vs 57.1%,P<0.05)。显色法试剂盒对差异样本检测结果与临床诊断结果的阳性符合率及总符合率显著高于浊度法(88.9%vs 22.2%,80.0%vs 33.3%,P<0.05)。结论显色法试剂盒较浊度法试剂盒检测准确度与临床诊断符合率更高,可更好服务于临床。

23种致癌芳香胺的显色法测定

为了减少禁用芳香胺检测过程对大型色谱仪的依赖,提高检测速度,降低检测成本,建立了23种致癌芳香胺的邻甲氧基苯酚显色测定方法。根据芳香胺的结构特征,引入重氮化偶合反应机制,有效考察优化了23种芳香胺重氮化反应和偶合反应过程中的各项条件,得到最佳的反应条件:在室温下,23种芳香胺和亚硝酸钠在pH值为2.56时反应生成重氮盐,加入氨基磺酸铵除去多余的亚硝酸钠后,加入邻甲氧基苯酚与重氮盐偶联显色,显色的最佳pH值范围为10～11,显色反应可以迅速完成,生成的偶氮化合物可稳定180 min以上。方法的线性范围为1～50 mg/L。该方法操作简单易行,可有效地应用于纺织品中23种致癌芳香胺的同时定性筛选检测。

微量动态显色法与动态显色法的等效性评价

目的评价微量动态显色法与动态显色法的等效性,为替代方法的使用提供数据支持。方法检测条件:采用微量动态显色法和动态显色法鲎试剂,每孔样品和鲎试剂加样量25μL(动态显色法100μL),检测波长405 nm,预设OD值0.03,使用半孔酶标板检测(动态显色法使用普通酶标板)。在国内的4个实验室协作研究,以等效性检验等多种统计方法,评价两种方法的等效性。结果单因素方差分析、配对t检验和等效性检验的结果较为一致,均显示出不同厂家的现有动态显色法之间存在一定差异,而每个厂家的试剂采用微量或常规的量之间并不存在显著性差异。结论微量动态显色法在准确度回收率方面是与现有试剂等效的。

靛酚蓝显色法直接测定血浆氨

建立了血浆氨的靛酚蓝直接显色测定新方法 ,研究了介质酸度、显色时间、共存物质及抗凝剂等的影响。结果表明 ,以柠檬酸钠作抗凝剂 ,在pH 10 . 5～ 11 .2的磷酸盐缓冲体系中显色强度高 ,干扰小。有色化合物最大吸收波长位于 6 30nm ,表观摩尔吸光系数为 2 . 4 8× 10 .4L·mol-1·cm-1。血浆氨浓度在 0～ 15. 0 0μmol·L-1范围线性关系良好 (r =0 .9999) ,检测下限为 1 7μmol·L-1,相对标准偏差RSD为 1 13% (n =11) ,回收率为 93. 6 %～ 10. 1 6 % ,平均回收率 97 .0 %。用本法测定 4 3例正常人和 97例各型肝病患者血浆氨含量均获得满意结果。

苯酚-硫酸显色法测定葡萄酒中总糖

采用苯酚-硫酸显色,分光光度法测定了葡萄酒中总糖含量。结果表明,样品红葡萄酒中总糖含量平均为81.7 g/L,RSD为0.37%,平均回收率98.4%;样品白葡萄酒中总糖含量平均为71.1 g/L,RSD为0.16%,平均回收率97.5%。