MTT法检测羟基喜树碱对兔晶体上皮细胞生长的作用

目的：检测羟基喜树碱(Hydroxycamptothecine，HCPT)对体外培养的兔晶体上皮细胞（rabbit lens epithelial cells，RLECs）增殖的影响。方法： 取2～3代的RLECs在96孔板中培养24h后，用不同浓度的HCPT分别作用24及72h，用甲基噻唑基四唑（Methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）测定法观察HCPT对RLECs增殖及贴壁的影响。结果：HCPT既能抑制RLECs的增殖，还可抑制RLECs的贴壁，24h的半数抑制量（IC50）为96.041μg/ml，72h的IC50为1.34μg/ml。 结论： 一定浓度的HCPT能有效抑制RLECs的生长。

MTT比色法测定药物对晶体上皮细胞增殖的影响

目的筛选防治后囊混浊的药物。方法进行人胚胎晶体上皮细胞（ｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ，ＬＥＣ）的培养并用ＭＴＴ比色法检测了肝素、氟脲嘧啶、双氯灭痛、顺铂对人胚胎晶体上皮细胞增殖的影响。结果肝素１００～２５００Ｕ／ｍｌ，氟脲嘧啶０．１～１００μｇ／ｍｌ，顺铂１０～５００μｇ／ｍｌ作用２４ｈ和７２ｈ对胚胎晶体上皮细胞增殖有明显抑制作用（Ｐ＜０．０５）。作用７２ｈ抑制率高于２４ｈ（Ｐ＜０．０５）。双氯灭痛和对照组相比无明显差异（Ｐ＞０．０５）。结论肝素、氟脲嘧啶、顺铂均为剂量依赖型和时间依赖型药物，均能有效抑制晶体上皮细胞的生长；双氯灭痛对晶体上皮细胞增殖无明显抑制作用。

反义bcl-2寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞的抑制作用

目的 :探讨反义bcl 2寡核苷酸 (bcl 2ASODN)对半乳糖诱导的兔晶体上皮细胞 (LEC)生长的影响 .方法 :人工合成与bcl 2基因翻译起始区序列互补的寡核苷酸 ,用半乳糖和反义寡核苷酸处理培养的晶体上皮细胞 ,应用细胞计数法和MTT法观察反义bcl 2寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞增殖的影响 .结果 :2 .5～ 1 0 .0 μmol/L反义bcl 2寡核苷酸能抑制半乳糖诱导的晶体上皮细胞的增殖 ,1 0 .0μmol/L时作用较显著 .结论 :反义bcl

人类晶体上皮细胞的体外培养与观察

目的：建立人类晶体上皮细胞培养的简便方法并观察原代和传代细胞的生物学特征和组织学变化。方法：将人工晶体植入术中取下的前囊膜分割成小碎片，吸管转移至培养瓶底部进行原代培养，7—10d后常规方法进行传代培养，采用相差显微镜观察活体细胞的增殖活动和形态学变化。结果：人类晶体上皮细胞在体外培养时可以存活并传代，但是其生存能力与供体年龄有关。传代后期细胞发生纤维化改变。结论：本方法简便，有效。可用于实验研究。

维拉帕米、肝素、地塞米松抑制后囊混浊的细胞学基础:对晶体上皮细胞增殖和细胞内 Ca^(++)的影响

通过观察维拉帕米、肝素、地塞米松在体外对牛晶体上皮细胞(BLEC)增殖和细胞内 Ca^(++)的影响评价了它们抑制后囊混浊的价值。结果维拉帕米呈浓度依赖性抑制 BLEC 增殖[P<0.05(10mg/L)或 P<0.01(≥20mg/L)]和降低细胞内 Ca^(++),并能增强肝素的增殖抑制作用;肝素500mg/L 时可明显抑制增殖(P<0.01)和降低细胞内 Ca^(++),500mg/L 以上抑制作用不随浓度增加而增强;地塞米松对 BLEC 的增殖无明显影响,浓度为250～500mg/L 时细胞内 Ca^(++)浓度增高,再加入维拉帕米80mg/L 可使细胞内 Ca^(++)浓度明显下降。为临床选择药物和剂量提供了理论依据。

甘糖酯对体外培养的晶体上皮细胞增殖的影响

后发性白内障主要是由于术后残留的晶体上皮细胞移行到后囊并增殖所致。用培养的新生大鼠晶体上皮细胞实验,以结晶紫染色和~3H-TdR掺入作指标,表明甘糖酯(0.2～0.8mg/ml)对细胞增殖有明显抑制作用,且比同浓度肝素作用略强。提示甘糖酯对防治后发性白内障可能有效。

Genistein抑制兔晶体上皮细胞膜酪氨酸蛋白激酶及蛋白激酶C磷酸化的研究

目的 :研究 genistein对兔晶体上皮细胞增殖及胞膜酪氨酸蛋白激酶 (TPK)、蛋白激酶C(PKC)活性的影响 ,探索使用 genistein防治后发性白内障。 方法 :兔晶体上皮细胞培养 ,应用Casnetllie改良法检测不同浓度genistein及bFGF作用后 ,兔晶体上皮细胞膜TPK活性的变化 ;同位素掺入法检测 genistein及bFGF作用后 ,兔晶体上皮细胞胞膜及胞浆PKC活性的变化。结果 :不同浓度 genistein作用后兔晶体上皮细胞TPK活性均较对照组明显下降 ,genistein可抑制bFGF诱导的TPK活性升高 ,genistein对PKC活性无明显抑制作用 ,但可抑制bFGF诱导的PKC活性升高。结论

兔晶体上皮细胞培养的技术改进

对兔晶体上皮细胞培养方法作了改进,为探讨后发性白内障的预防提供实验手段。取新西兰家兔晶体前囊膜作细胞培养。在原代培养中,以吸管转移囊膜。细胞融合后,用胰酶消化转代。结果:原代培养48～72小时后,可见晶体上皮细胞长出,以后细胞呈贴壁单层,铺砌型向外生长。传代后6～8小时细胞贴壁生长。方法经济简便,可为各种实验提供兔晶体上皮细胞。

Giemsa染色比色法检测晶体上皮细胞增殖

建立了一种简便、精确检测晶体上皮细胞增殖的方法──Giemsa染色比色法，基本步骤为：（1）在24孔培养板培养细胞并做影响增殖的实验；（2）75％酒精4℃固定细胞30min；（3）Giemsa染色30min；（4）10％醋酸250μl／孔脱色并转移至96孔培养板或酶标板；（5）用酶标仪540nm进行比色，吸光值（A值）高低反映细胞多少。该方法也适用于其它上皮细胞增殖的检测。

碱性成纤维细胞生长因子对兔晶体上皮细胞的增殖作用

观察碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)对兔晶体上皮细胞 (rabbitlensepithelialcells,RLECs)的促增殖作用 ,以及增殖细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)的表达。用第 2～ 3代培养细胞 ,用MTT法测定细胞增殖 ,用免疫组织化学法观察PCNA的表达 ,流式细胞仪观察细胞周期的变化。结果显示bFGF可促进兔晶体上皮细胞的增殖 ,尤其是浓度为 10 μg/L作用最明显 ;正常细胞组PCNA表达呈阴性 ,添加bFGF组PC NA表达呈强阳性 ;并显示进入S期的细胞明显增加。

反义c-myc寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞生长的抑制作用

目的 探讨反义c myc寡核苷酸 (ASODN)对半乳糖诱导的兔晶体上皮细胞 (LEC)生长的影响。方法 人工合成与c myc基因第二外显子翻译起始区序列互补的寡核苷酸 ,用半乳糖和反义寡核苷酸处理培养的晶体上皮细胞 ,应用细胞计数法和MTT法观察反义c myc寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞增殖的影响。结果 2 5～ 10 0 μmol/L反义c myc寡核苷酸能抑制半乳糖诱导的晶体上皮细胞的增殖 ,10 0 μmol/L时作用较显著。 结论 反义c myc寡核苷酸对半乳糖诱导的白内障晶体上皮细胞的生长增殖有抑制作用。

大鼠外伤性白内障晶体上皮细胞NF-κB mRNA表达的实验研究

目的 观察大鼠外伤性白内障形成过程中晶体上皮细胞NF κBmRNA的表达 ,探讨NF κBmR NA在外伤性白内障发病过程中的作用。方法 以大鼠晶体穿通伤建立外伤性白内障模型 ,用原位杂交方法检测晶体上皮细胞中NF κBmRNA的表达 ,并进行相关的统计分析。结果 晶体损伤后 3小时NF κBmR NA的表达开始增强 ,2 4小时达到高峰 ,随后逐渐下降。结论 晶体损伤后晶体上皮细胞NF

细胞外基质蛋白介导晶体上皮细胞粘附的作用

目的探讨纤粘连蛋白、层粘连蛋白、I型胶原3种细胞外基质蛋白促牛晶体上皮细胞（LEC）的粘附作用，以阐明后囊膜混浊（PCO）发生的组织病理学机制。方法应用3H-TDR掺入法研究纤粘连蛋白、层粘连蛋白、I型胶原和鸡卵白蛋白对体外培养的牛LEC的粘附作用。结果牛LEC能够粘附到包被有不同浓度的料粘连蛋白、层粘连蛋白、I型胶原培养板表面上，呈现出浓度和时间效应特点肥牛LEC不能够粘附到包被有不同浓度的鸡卵白蛋白培养板表面上。给哈构成晶体囊膜的层粘连蛋白和I型胶原，以及白内障摘除术后进入眼房水的纤粘连蛋白能够介导LEC粘附到后囊膜上，在PCO发生过程中起到重要的促进作用。

晶体上皮细胞单克隆抗体的动物实验研究第一部分晶体上皮细胞的培养

试图以免疫学方法制备特异性晶体上皮细胞膜单克隆抗体来抑制晶体上皮细胞的生长，以探索防止后发障的发生。共分四部分：１．晶体上皮细胞的培养；２．晶体上皮细胞膜单克隆抗体的制备；３．抗体的免疫学检测；４．所制备的单克隆抗体对动物和人的晶体上皮细胞的抑制作用。报告家兔晶体上皮细胞的原代和继代培养的方法并进行讨论。

细胞因子对小牛晶体上皮细胞增殖和胶原合成的影响

目的 :研究白介素 6 (IL 6 )、白介素 1受体拮抗剂 (IL 1ra) ,γ干扰素 (IFN γ)对小牛晶体上皮细胞 (BELC)增殖和胶原合成的影响 ,探讨它们在后囊浑浊形成中的作用。方法 :采用MTT比色法测定不同浓度的IL 6、IL 1ra及IFN γ对体外培养的BLEC增殖的影响 ;用3H 脯氨酸掺入法检测这些细胞因子对体外培养的BLEC胶原合成的影响。结果 :IL 6 10 2 ～ 10 4 U/ml显著促进细胞增殖和胶原合成 ,IL 1ra 10 2 ～ 10 4 μg/L显著抑制细胞增殖而对胶原合成无影响 ,IFN γ 10 2 ～ 10 5U/ml显著抑制细胞增殖 ,10 3～ 10 5U/ml显著抑制胶原合成。结论 :这些细胞因子可能参与了后囊浑浊的形成 ;IFN γ和IL

层粘蛋白、纤维连接蛋白对兔晶体上皮细胞粘附和移行的影响

目的 探讨层粘蛋白 (laninin ,LN)、纤维连接蛋白 (fibronectin ,FN)对兔晶体上皮细胞 (RLECs)粘附性和移行性的影响。方法 观察外源性FN、LN对兔晶体上皮细胞粘附、移行及其细胞骨架的影响。结果 随着FN、LN浓度升高 ,RLECs在相应的细胞外基质上粘附和移行能力增强 ,低浓度时增加幅度较大 ;加入相应抗FN、LN抗体 ,RLECs在相应基质上的移行产生不同程度的抑制作用 ,细胞骨架也不能充分铺展 ,并且这一变化与细胞粘附性和移行性呈正相关。结论 FN、LN可诱导RLECs移行、粘附 。

兔眼人工晶体植入术后TIMPs在晶体上皮细胞的表达及其意义

目的 观察白内障囊外摘除及人工晶体植入 (ECC +IOL)术后基质金属蛋白酶抑制因子 (TIMPs)在晶体上皮细胞的表达 ,探讨TIMPs以ECCO +IOL术后后囊膜混浊的影响。方法 2 5只健康成年家兔 ,均一只眼行晶体囊外摘除及人工晶体植入术 ,另一只未手术眼作为对照组。每 5兔为一组 ,分别于术后 1、3、7、1 4、30d取出晶状体后囊膜 ,用RT -PCR检测各标本中的TIMPsmRNA的表达 ,对扩增产物用凝交成像系统进行定量分析 ,以TIMP/GAPDH的比值表示TIMPsmRNA的相对表达水平 ,并用羟脯氨酸试剂盒检测晶体囊膜羟脯氨酸量的变化。结果 在常晶体上皮细胞组织均有TIMP - 1、- 2、- 3和 - 4mNA的表达 ;术后第 1天 ,TIMP - 1、- 2、- 3和- 4mRNA均明显升高 ,术后第 7天 ,TIMP - 1、- 2和 - 3RNA的表达量达到最大 ,此后表达式量逐渐下降 ,术后第30天的表达量仍高于对照组 ,术后TIMP - 4mRNA则表现为下降 ;结论 白内障囊外摘除及人工晶体植入术后TIMPsmRNA在晶体上皮细胞的表达均明显升高 ,提示TIMPs可能是抑制白内障囊外摘除及人工晶体植入术后细胞外基质降解的主要因素 ,TIMPs可能是后囊膜混浊的形成和纤维化的重要原因之一。

添加晶体皮质提高晶体上皮细胞原代培养成功率

目的介绍一种提高晶体上皮细胞原代培养成功率的方法。方法基本步骤为将一晶体前囊膜剪碎后加纯胎牛血清０．５ｍｌ和冰冻过的新生牛晶体皮质０．５～１ｍｌ，密封培养２４～４８ｈ后添加约３ｍｌ含１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ培养液继续培养。结果用该方法原代培养新生牛、幼年兔和人胚胎及角膜移植后的中青年供体标本，成功率为１００％，老年白内障手术取出标本成功率为８７％。结论添加晶体皮质可提高晶体上皮细胞原代培养成功率。

晶体上皮细胞单克隆抗体的动物实验研究──第二部分 晶体上皮细胞膜单克隆抗体的制备

通过将免疫小鼠的脾细胞与HGPRT缺陷的NS－1骨髓瘤细胞进行细胞融合，并经HAT培养液对融合的杂交瘤细胞进行选择培养，再经二次限界稀释法对此杂交瘤细胞进行克隆化。采用无血清细胞培养技术，得到较高浓度而且较纯化的抗家兔晶体上皮细胞膜单克隆抗体。为进一步研究晶体上皮细胞的特性，以及利用免疫学方法抑制白内障术后晶体上皮细胞增殖奠定了基础。

外源过氧化氢酶基因在晶体上皮细胞中的表达及其抗氧化能力

目的:构建外源过氧化氢酶基因表达载体并使其在晶体上皮细胞中稳定表达,从而提高晶体上皮细胞的抗氧化能力减少白内障的发生。方法:克隆过氧化氢酶基因,测序确定。构建过氧化氢酶基因pIRESneo3表达载体。利用转染的方法将过氧化氢酶基因导入晶体上皮细胞SRA01/04中,筛选稳定表达克隆。以SRA01/04细胞和稳定转染过氧化氢酶基因的SRA01/04细胞为研究对象,使用过氧化氢为处理因素,MTT方法测定过氧化氢对晶体上皮细胞的半数致死量。结果:经上述方法处理后,获得过氧化氢酶高表达晶体上皮细胞SRA01/04-CAT,其过氧化氢酶的表达水平是SRA01/04细胞的3.5倍。过氧化氢对SRA01/04细胞的IC50是32.24μmol/L,对SRA01/04-CAT的IC50是85.32μmol/L,转染过氧化氢酶基因后SRA01/04细胞对过氧化氢的耐受能力提高2.65倍。结论:外源过氧化氢酶基因能够在晶体上皮细胞中稳定表达并使晶体上皮细胞的抗氧化能力提高。