暖心康通过“代谢-炎症”网络调控巨噬细胞极化对心肌梗死后小鼠心室重构的影响

目的探究暖心康(红参、毛冬青)通过“代谢-炎症”网络调控巨噬细胞极化改善心肌梗死后小鼠心室重构的作用机制。方法(1)将30只C57BL/6J雄性小鼠随机分为3组:假手术组、模型组、暖心康组(1.65 g·kg^(-1)),每组10只;采用左前降支冠状动脉结扎术复制心肌梗死小鼠模型;灌胃给药,每日1次,连续4周。采用Masson染色法检测心肌组织胶原沉积情况;超声检测小鼠心功能:左室射血分数(LVEF)、收缩末期左室前壁厚度(LVAWS)及舒张末期左室前壁厚度(LVAWD);流式细胞术检测小鼠心脏巨噬细胞分布情况;qPCR法检测心脏组织乳酸脱氢酶A(LDHA)、肉碱棕榈酰转移酶1(CPT-1)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、异柠檬酸脱氢酶(IDH)、琥珀酸脱氢酶(SDHa)mRNA表达。(2)按照1.15 g·kg^(-1)剂量给予大鼠暖心康混悬液灌胃,每日2次,持续5 d,制备暖心康含药血清。采用脂多糖(LPS)诱导RAW 264.7细胞构建促炎型巨噬细胞模型。细胞分组:空白血清对照组(含5%空白血清+5%胎牛血清的培养基)、暖心康含药血清组(含5%暖心康含药血清+5%胎牛血清的培养基)、脂多糖组(含5%空白血清+5%胎牛血清的培养基+200μg·mL^(-1)脂多糖)、暖心康含药血清+脂多糖组(含5%暖心康含药血清+5%胎牛血清的培养基+200μg·mL^(-1)脂多糖),干预16 h。采用糖酵解压力测试实验检测RAW 264.7细胞糖酵解水平;qPCR法检测RAW 264.7细胞线粒体丙酮酸转运载体(MPC1)mRNA表达;MitoSox Red荧光染色法检测RAW 264.7细胞线粒体氧化应激损伤程度。结果(1)与假手术组比较,模型组小鼠的心脏胶原纤维蓝染面积明显增加,并伴有室壁变薄,左心室腔增大;LVEF、LVAWS、LVAWD等心功能指标水平均显著降低(P<0.01,P<0.001);小鼠心脏组织中LDHA、CPT-1 mRNA表达明显上调(P<0.05),GLUT4、IDH、SDHa mRNA表达显著下调(P<0.05,P<0.01),CD86染色阳性细胞数量显著增加(P<0.001)。与模型组比较,暖心康组小鼠的心脏胶原纤维沉积明显减少,且室壁厚度增加;LVEF、LVAWS、LVAWD等心功能指标水平均显著升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001);小鼠心脏组织中LDHA、CPT-1 mRNA表达显著下调(P<0.01,P<0.001),GLUT4、SDHa、IDH mRNA表达显著上调(P<0.01),CD86阳性细胞数量显著减少(P<0.001)。(2)与空白血清对照组比较,暖心康含药血清组巨噬细胞的糖酵解水平、ROS水平均无明显变化(P>0.05),而脂多糖组巨噬细胞的糖酵解水平、ROS水平均显著升高(P<0.01),MPC1 mRNA表达显著下调(P<0.001)。与脂多糖组比较,暖心康含药血清+脂多糖组的巨噬细胞糖酵解水平、ROS水平均显著降低(P<0.05,P<0.01),MPC1 mRNA表达显著上调(P<0.001)。结论暖心康能够减轻小鼠心肌梗死后的心肌纤维化及心室重构,改善心功能,其作用机制可能与下调心脏组织LDHA mRNA表达,上调GLUT4 mRNA表达,改善心肌梗死后心脏葡萄糖摄取能力,抑制促炎型巨噬细胞糖酵解,增加SDHa及IDH的表达以减轻琥珀酸与柠檬酸堆积,减少活性氧(ROS)生成,从而减少促炎型巨噬细胞过度极化有关。

基于中性粒细胞胞外诱捕网探讨暖心康改善缺血性心力衰竭小鼠心功能的机制

目的探讨暖心康通过干预中性粒细胞胞外诱捕网形成,抑制炎症反应,改善心肌细胞内环境稳态,减少心肌细胞损伤,从而改善缺血性心衰小鼠心室重塑,提高心功能的作用机制。方法将30只成年健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为3组:假手术组、模型组、暖心康组,模型组与暖心康组结扎冠状动脉左前降支建立缺血性心衰小鼠模型,假手术组仅开胸但不结扎冠状动脉。暖心康组给予暖心康灌胃,假手术组和模型组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃,1次/d,持续4周。对每组小鼠行心脏彩超检测左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室缩短分数(left ventricular fractional shortening,LVFS);苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色、天狼星红染色检测心肌结构及纤维化程度,RT-PCR检测各组心肌组织脑钠肽(Brain Natriuretic Peptide,BNP)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor-alpha,TNF-α)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的表达;免疫组化染色(immunohistochemistry,IHC)观察MPO在心脏中的表达情况,酶联免疫吸附测定法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠外周血瓜氨酸化组蛋白3(citrullinated histone 3,CitH3)水平。结果与假手术组比较,模型组小鼠室壁运动幅度减弱,LVEF、LVFS显著降低(P<0.01),心脏组织炎性细胞浸润增多,心肌细胞肥大、排列紊乱,胶原纤维增多,心衰标志物BNP与炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表达水平升高(P<0.01),心脏组织中MPO的蛋白表达明显增多,mRNA表达水平显著升高(P<0.001),外周血CitH3含量显著升高(P<0.001);与模型组比较,暖心康组小鼠室壁运动幅度增大,左室射血分数、左室缩短分数升高(P<0.05),心脏组织炎性细胞浸润减少,心肌细胞结构与排列改善,心衰标志物BNP与炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表达水平降低(P<0.05),MPO的蛋白表达明显减少,mRNA表达水平显著下降(P<0.001),CitH3含量显著减少(P<0.001)。结论暖心康可改善缺血性心衰小鼠心功能,其作用机制可能是通过干预中性粒细胞胞外诱捕网形成,抑制炎症反应,改善心肌细胞内环境稳态,减少心肌细胞损伤,进而改善缺血性心衰小鼠心室重塑。

基于巨噬细胞极化调控心肌细胞代谢重塑探讨暖心康改善心肌梗死小鼠心肌纤维化的机制

目的基于巨噬细胞极化调控心肌细胞代谢重塑探讨暖心康(红参、毛冬青)改善心肌梗死小鼠心肌纤维化的机制。方法(1)将C57BL/6J雄性小鼠随机分为3组:假手术组、模型组、暖心康组(1.65 g·kg^(-1)),每组10只。采用结扎冠状动脉术复制心肌梗死小鼠模型。灌胃给药,每日1次,连续4周。采用Masson染色法检测心肌组织纤维化;qPCR法检测心脏组织中LDHA、HK2、CD36、CPT-1A、PPAR-γ、PGC-1α、Ndufa8、SDHd、Cyc1、Cox4i2、CD86、iNOS、TNF-αmRNA表达水平;ELISA法检测血清炎症因子IL-1β的水平。(2)采用脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞向促炎型巨噬细胞极化,制备促炎型巨噬细胞上清液,将其作用于HL-1心肌细胞模型。HL-1心肌细胞分组与RAW264.7巨噬细胞分组相同:空白血清对照组(含5%空白血清+5%胎牛血清的培养基)、暖心康含药血清组(含5%暖心康含药血清+5%胎牛血清的培养基)、脂多糖组(含5%空白血清+5%胎牛血清的培养基+200μg·mL^(-1)脂多糖)和暖心康含药血清+脂多糖组(含5%暖心康含药血清+5%胎牛血清的培养基+200μg·mL^(-1)脂多糖),均干预24 h。采用油红O染色检测心肌细胞中脂质分布情况;DCFH-DA荧光探针检测细胞ROS水平。结果(1)与模型组比较,暖心康组小鼠心脏组织胶原沉积面积显著减少(P<0.01),且梗死区域局部室壁损伤程度减轻;心脏组织中LDHA、HK2、CD36、CPT-1A、PPAR-γ、Ndufa8、SDHd、Cyc1、Cox4i2、CD86、iNOS、TNF-αmRNA表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),PGC-1αmRNA表达水平明显升高(P<0.05);血清IL-1β水平显著降低(P<0.001)。(2)与脂多糖组比较,暖心康含药血清+脂多糖组HL-1心肌细胞胞浆内的脂滴沉积明显减少(P<0.05),ROS水平显著降低(P<0.001)。结论暖心康能够减轻心肌梗死小鼠的心肌纤维化及心室重构,其作用机制可能与抑制促炎型巨噬细胞极化,降低炎症水平,减少ROS生成,降低心脏组织糖酵解水平,改善氧化磷酸化和脂肪酸代谢有关。

暖心康抑制内皮间充质转化减轻阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征合并动脉粥样硬化小鼠斑块形成

目的探讨暖心康(毛冬青、红参)通过抑制内皮间充质转化(EndMT)减轻阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)合并动脉粥样硬化(AS)小鼠斑块形成的作用及机制。方法将雄性ApoE^(-/-)小鼠随机分为6组:对照组、模型组、阿托伐他汀组(2.6 mg·kg^(-1))以及暖心康低、中、高剂量组(生药量3.5、7.0、14.0 g·kg^(-1)),每组8只。采用将小鼠长期在睡眠期间暴露于慢性间歇性缺氧(CIH)环境,联合高脂饲料喂养,复制OSAHS合并AS小鼠模型。采用油红O染色法观察小鼠主动脉内壁斑块形成情况;Masson三色染色法评估小鼠主动脉根部粥样斑块的胶原含量;免疫荧光法检测主动脉斑块中内皮细胞标志物CD31及EndMT标志物Vimentin的表达情况;ELISA法测定血脂水平;qPCR法检测主动脉组织中EndMT标志物α-SMA、Cdh2 mRNA表达水平。结果与对照组比较,模型组小鼠的主动脉粥样斑块面积显著增加(P<0.01),主动脉根部斑块胶原沉积面积显著增加(P<0.01);斑块处CD31阳性表达细胞数量显著减少(P<0.01),Vimentin阳性表达细胞数量显著增多(P<0.01);血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(T-CHO)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平显著升高(P<0.01),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著降低(P<0.01);主动脉组织中α-SMA、Cdh2 mRNA表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,暖心康各给药组的主动脉粥样斑块面积均显著减少(P<0.05,P<0.01),主动脉根部粥样斑块的胶原沉积面积均明显缩小(P<0.05,P<0.01);暖心康高剂量组小鼠斑块处CD31阳性表达细胞数量明显增加(P<0.05),暖心康中、高剂量组小鼠斑块处Vimentin阳性表达细胞数量明显减少(P<0.05,P<0.01);暖心康高剂量组小鼠的血清TG水平显著降低(P<0.01),暖心康各给药组小鼠的血清T-CHO、LDL-C水平显著降低(P<0.05,P<0.01),暖心康中、高剂量组小鼠的血清HDL-C水平显著升高(P<0.01);暖心康各给药组小鼠主动脉组织中α-SMA、Cdh2 mRNA表达水平显著降低(P<0.01)。结论暖心康可以有效减轻OSAHS合并动脉粥样硬化小鼠的斑块形成,可能与其抑制EndMT,减少胶原纤维形成有关。

暖心康抑制线粒体分裂对心肌缺血再灌注小鼠的保护作用

目的探究暖心康(红参、毛冬青)通过调节线粒体分裂对缺血再灌注致慢性心力衰竭小鼠的保护机制。方法将30只SPF级C57BL/6J雄性小鼠随机分为假手术组、模型组和暖心康组,制备缺血再灌注致慢性心力衰竭模型。超声心动图用于检测各组小鼠心功能,qPCR法检测各组小鼠心脏组织线粒体动力相关蛋白(Drp1)mRNA表达水平,线粒体超氧化物红色荧光探针(MitoSOX)检测线粒体活性氧水平,Seahorse能量代谢检测仪检测线粒体氧化磷酸化。结果与假手术组比较,模型组小鼠心功能明显减弱(P<0.0001),线粒体分裂蛋白Drp1 mRNA表达水平明显升高(P<0.0001),心肌细胞氧化应激水平升高(P<0.001)。与模型组比较,暖心康能够改善缺血再灌注致慢性心力衰竭小鼠心功能(P<0.0001),抑制线粒体分裂蛋白Drp1 mRNA的表达(P<0.0001),同时减轻线粒体氧化应激(P<0.01),增加线粒体氧化磷酸化水平,改善心力衰竭心肌细胞能量代谢。结论暖心康通过抑制线粒体过度分裂,减轻心肌细胞氧化应激和改善线粒体能量代谢,发挥保护缺血再灌注致慢性心力衰竭小鼠心功能的作用。

基于单细胞数据挖掘、转录组学及网络药理学探讨暖心康防治慢性心力衰竭的机制

目的医院院内制剂暖心康在治疗慢性心力衰竭中取得良好效果,但其潜在的防治慢性心衰的具体分子机制尚不十分明确,拟通过单细胞数据挖掘、转录组学、网络药理学及动物实验等探讨暖心康防治慢性心力衰竭的机制。方法随机将40只C57/BL6雄性小鼠分成4组,假手术组(Sham)10只、模型组(TAC)10只、生理盐水组(Vehicle)10只、暖心康组(NXK)10只。动物模型制作采用主动脉弓缩窄术,先后予小动物超声心功能检测、HE染色、Masson染色、钙黄绿染色、实时荧光定量PCR(qPCR)验证暖心康防治慢性心衰。再予GEO数据库下载人源单细胞数据集(GSE95140)进行下游分析以得到慢性心衰差异基因,将暖心康药物-慢性心力衰竭疾病进行网络药理分析得到相应的药物-疾病靶点,联合转录组学所得关键靶基因进行网络互作,得到三者交集基因及相关GO条目和通路,将得到的预测基因予WB进行验证。结果在各项验证中TAC组与Vehicle组数据比较无统计学意义。而与Sham组相比,心脏体质量及质量联合超声显示TAC组、Vehicle组的HW/BW值明显升高(P<0.01),而EF值、FS值明显降低(P<0.01),HE、Masson染色、钙黄绿染色显示TAC组、Vehicle组心肌纤维化明显、心肌细胞排列紊乱及心肌细胞变大(P<0.01),qPCR显示TAC组、Vehicle组ANP、BNP、Myh7、Collagen I、Collagen III等基因的表达升高(P<0.01);与TAC组、Vehicle组比较,NXK组HW/BW值降低(P<0.05),而EF值、FS值均明显升高(P<0.01),HE、Masson染色、钙黄绿染色显示NXK组心肌纤维化、心肌细胞排列及心肌细胞大小改善明显(P<0.01),qPCR显示TAC组、Vehicle组ANP、BNP、MYH7、Collagen I、Collagen III等基因的表达降低(P<0.01);经单细胞数据挖掘所得差异基因、课题组前期心衰小鼠转录组数据所得差异基因及暖心康网络药理所得潜在治疗慢性心衰靶基因三者进行网络互作分析得到3个治疗慢性心力衰竭的核心基因,分别为SLC8A1、RYR2、NFIB;桑基图显示GO富集所得条目与钙流、跨膜转运、能量代谢、氧化磷酸化、氧化应激、凋亡等生物过程相关。WB验证实验显示,与Sham组相比,TAC组、Vehicle组RYR2、p-RYR2(ser2808)、Calpain1、Calpain2、NF-κB p65的蛋白表达量明显升高(P<0.01);与TAC、Vehicle组相比,NXK组RYR2、p-RYR2(ser2808)、Calpain1、Calpain2、NF-κB p65的蛋白表达量降低(P<0.01)。结论暖心康可改善慢性心力衰竭心室重构,其可能通过RYR2调控钙泄漏激活钙蛋白酶(Calpain1、Calpain2),进而激活NF-κB通路来发挥作用。

暖心康调控CD72hi巨噬细胞对压力负荷致心力衰竭小鼠的作用和有效成分

目的:探究暖心康通过CD72hi巨噬细胞(CD72hi-CMφs)治疗慢性心力衰竭小鼠的作用和有效成分。方法:采用主动脉弓缩窄术(TAC)建立慢性心力衰竭小鼠模型,治疗6周后综合评估暖心康对TAC小鼠心脏和炎症的影响。使用单细胞测序标记物检测多种心力衰竭病理和心力衰竭小鼠模型中新型炎症亚群CD72hi-CMφs信号,通过转录组联合反卷积算法评估暖心康对CD72hi-CMφs的影响,并基于关键靶点筛选暖心康调控CD72hiCMφs的有效成分。通过体外研究暖心康有效成分对CD72hi-CMφs分化以及相关细胞因子的影响。结果:与模型组比较,暖心康改善心力衰竭小鼠模型心功能和心室重构,减少炎症。单细胞数据结果显示CD72hi-CMφs在各种心力衰竭病理和心力衰竭动物模型中均有显著升高(P<0.01)。生物信息分析和实验结果显示暖心康降低CD72hiCMφs水平(P<0.01),且调控CD72hi-CMφs的转录因子Rel。分子对接结果显示暖心康有效成分果糖精氨酸能与c-Rel活性区域结合。荧光素酶报告基因检测显示果糖精氨酸减少了由CD72启动子Rel驱动的荧光素酶活性(P<0.01)。细胞实验显示果糖精氨酸能够抑制CD72hi-CMφs分化及相关炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的表达(P<0.01)。结论:暖心康可能通过果糖精氨酸抑制CD72hi-CMφs改善慢性心力衰竭。

暖心康通过抑制内质网应激改善心力衰竭小鼠心功能的作用

目的:基于内质网应激(ERS)探究暖心康治疗小鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤所致慢性心力衰竭(CHF)的作用和机制。方法:24只SPF级C57BL/6J雄性小鼠随机分为假手术组、模型组、暖心康组,采用结扎小鼠冠状动脉左前降支建立I/R心力衰竭模型,术后1天起,暖心康组给予暖心康灌胃(1.65 g·kg^(-1)·d^(-1)),假手术组及模型组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃,每日1次,持续6周;采用超声心动图检测小鼠心功能、天狼猩红染色观察小鼠心肌纤维化、TUNEL染色检测心肌细胞凋亡、qPCR检测心肌ERS相关基因mRNA表达水平。结果:与假手术组比较,模型组左室射血分数(EF)、缩短分数(FS)显著降低(P<0.01),表明I/R心力衰竭模型构建成功,与模型组比较,暖心康组EF、FS得到显著改善(P<0.01);天狼猩红染色提示暖心康能改善I/R小鼠心肌纤维化;TUNEL染色显示暖心康能减少I/R小鼠心肌细胞凋亡;检测心肌ERS相关基因mRNA表达水平,与假手术组比较,模型组葡萄糖调节蛋白78(Grp78)、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(Chop)、c-Jun氨基末端激酶1(Jnk1)、半胱天冬酶12(Caspase 12)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达水平升高,B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)m RNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01),而与模型组比较,暖心康组Grp78、Chop、Jnk1、Caspase 12、Bax mRNA表达水平下降,Bcl-2 mRNA表达水平升高(P<0.05,P<0.01)。结论:暖心康可能通过下调心肌细胞ERS,减少心肌细胞凋亡,从而减轻I/R心力衰竭小鼠的心肌纤维化,改善心功能。

暖心康调节线粒体相关内质网膜保护缺血再灌注致小鼠心肌损伤的机制

目的:探究暖心康通过调节线粒体相关内质网膜(MAMs)抑制心肌细胞凋亡对缺血再灌注致心肌损伤小鼠的保护机制。方法:将21只SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组和暖心康组,每组7只。模型组和暖心康组建立小鼠心肌缺血再灌注损伤模型。术后暖心康组灌胃给予暖心康溶液1.65 g·kg-1·d-1,其余两组灌胃给予等量0.9%氯化钠溶液,连续4周。超声心动检测小鼠心功能情况,天狼猩红染色、HE染色分别检测小鼠心脏胶原纤维沉积和心肌细胞形态变化,Western blot检测小鼠心脏Mfn2蛋白表达水平,荧光染色检测小鼠原代心肌细胞MAMs共定位情况,TUNEL染色检测小鼠心肌细胞凋亡情况。结果:与假手术组比较,模型组小鼠心功能明显下降,心脏胶原纤维面积明显增多,心肌细胞肥大、排列紊乱,炎性细胞增多,心脏中Mfn2蛋白表达水平显著升高(P<0.01),MAMs耦联部分显著增多(P<0.01),心肌细胞凋亡数量亦显著增多(P<0.01);与模型组比较,暖心康组小鼠心功能在2、4周得到显著改善(P<0.01),心脏纤维化程度和病理形态改变减轻,心脏中Mfn2蛋白表达水平显著降低(P<0.01),MAMs耦联部分和心肌细胞凋亡数量均显著减少(P<0.01)。结论:暖心康可改善心肌缺血再灌注心脏心室重构,其作用机制可能是通过下调Mfn2蛋白表达,从而减少MAMs耦联,抑制心肌细胞凋亡实现的。

基于线粒体动力学探讨暖心康改善心力衰竭小鼠心功能的作用及机制

目的:探索暖心康如何通过调控线粒体动力学改善小鼠心肌缺血再灌注损伤(IR)后心力衰竭小鼠心功能的作用和机制。方法:选取成年健康雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为3组:假手术组、心肌缺血再灌注组、暖心康组,通过可逆性的结扎冠状动脉左前降支建立模型,假手术组行同样手术但不结扎冠状动脉。暖心康组给予暖心康灌胃,假手术组和心肌缺血再灌注组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃,均1次/d,持续6周。然后分别对每组小鼠的心功能进行测定。使用H9c2心肌细胞建立缺氧复氧(H/R)模型,Mito-Tracker Green荧光染色观察心肌细胞内线粒体形态变化。Real-time PCR及Western Blot检测心脏内DRP1、FIS1、MFN1、MFN2 mRNA及蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,心肌缺血再灌注组心功能下降,EF、FS显著减少(P<0.01),与心肌缺血再灌注组比较,暖心康组小鼠EF、FS得到不同程度的改善(P<0.01)。随后,Mito-Tracker Green荧光染色观察到暖心康能调控线粒体动力学平衡,保护心肌细胞线粒体。同时,心肌缺血再灌注组小鼠心脏DRP1、FIS1 mRNA及蛋白表达水平较假手术组显著升高(P<0.01),而暖心康组较心肌缺血再灌注组得到显著抑制(P<0.01);暖心康组对促进线粒体融合的MFN1、MFN2在mRNA和蛋白水平同样存在同样的抑制作用(P<0.01)。结论:暖心康可能通过调控DRP1、FIS1、MFN1、MFN2的表达水平控制线粒体的融合、裂解,调节线粒体动力学平衡,进而对IR后的小鼠心功能起保护作用。

暖心康改善缺血再灌注后心肌纤维化的作用和机制研究

目的探索暖心康减轻缺血再灌注后心肌纤维化作用和机制。方法将30只小鼠分为假手术组(SHAM)、心肌缺血再灌注组(MIR)、暖心康中药组(NXK),每组各10只。MIR组和NXK组可逆性结扎冠状动脉左前降支建立动物模型,SHAM组进行同样开胸操作,不结扎冠状动脉。中药灌胃组予NXK每日一次灌胃,连续6周,其余两组予等体积的生理盐水。末次灌胃后,处死小鼠,进行心脏取材,分别对三组小鼠取材组织进行HE、Masson染色,观察心脏组织的病理学变化。Western Blot法检测三组小鼠心肌组织中CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白的表达水平。qPCR法检测心肌组织CollagenⅠmRNA、CollagenⅢmRNA、TGF-β1 mRNA、Smad2 mRNA、Smad3 mRNA、Smad7 mRNA的表达水平。结果HE、Masson染色显示NXK能够明显减轻MIR后的心肌损伤,减轻心肌纤维化面积。Western Blot、qPCR分别对CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白和mRNA的表达水平进行评定,MIR后两者表达水平均上调,而NXK对两者均显示出一定程度的抑制作用。随后qPCR对TGF-β1 mRNA、Smad2 mRNA、Smad3 mRNA、Smad7 mRNA的水平进行评定,NXK显著降低MIR损伤后TGF-β1 mRNA、Smad2 mRNA、Smad3 mRNA的表达水平,上调Smad7 mRNA转录水平。结论暖心康能够降低MIR损伤后胶原沉积,减少心肌纤维化面积,可能通过TGF-β1/Smads信号通路发挥作用。

暖心康对心肌缺血再灌注模型小鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨暖心康治疗心力衰竭的可能作用机制。方法30只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组、模型组、暖心康组,每组10只。暖心康组和模型组采用可逆性结扎冠状动脉左前降支的方法建立心肌缺血再灌注模型。暖心康组给予暖心康1.65 g/kg灌胃,模型组和假手术组给予生理盐水0.1 ml/10 g灌胃。各组每日灌胃1次,连续6周。采用超声评定小鼠心功能;qPCR法检测心脏组织心房钠尿肽(ANP)、B型钠尿肽(BNP)mRNA表达;HE染色观察心脏组织病理形态,TUNEL染色观察心肌细胞凋亡程度,计算心肌细胞凋亡率;Western blot法检测小鼠心脏组织凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达。结果与假手术组比较,模型组小鼠心功能左室射血分数(EF)、心输出量(CO)、左室舒张末期前壁厚度(LVAWd)及左室收缩末期前壁厚度(LVAWs)明显降低,心脏组织ANP mRNA、BNP mRNA及Bax、活化Caspase-3蛋白表达水平明显上升,Bcl-2、Bcl-2/Bax值下降,心肌细胞凋亡率明显增加(P<0.01);与模型组比较,暖心康组EF、CO、LVAWd及LVAWs明显升高,心脏组织ANP mRNA、BNP mRNA表达水平及Bax、活化Caspase-3蛋白表达明显降低,Bcl-2、Bcl-2/Bax值显著升高,心肌细胞凋亡率明显下降(P<0.05或P<0.01)。HE染色结果显示,与模型组比较,暖心康组小鼠心肌细胞轻微肿胀,细胞边界相对清晰,心肌纤维排列相对整齐,炎性细胞浸润减少。结论暖心康可能通过下调心脏组织Bax、活化Caspase-3蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,抑制ANP、BNP基因表达,而减少心肌细胞凋亡,从而改善心力衰竭。