暗褐脉柄牛肝菌产淀粉水解酶最适温度及最适初始pH研究

以20113和21014暗褐脉柄牛肝菌菌株为试材,采用刚果红、卢戈氏碘液变色圈法,研究了温度、pH对暗褐脉柄牛肝菌产淀粉水解酶能力的影响,以期为研发暗褐脉柄牛肝菌淀粉高效利用方案提供参考依据。结果表明:刚果红变色圈试验中,随着温度升高,菌丝生长速率、淀粉水解酶指数逐渐升高,并在28℃达到最大值,随后逐渐下降;卢戈氏碘液变色圈试验中,随着温度升高,菌丝生长速率、淀粉水解酶指数逐渐升高,并分别在30℃和28℃达到最大值,随后逐渐降低;随着初始pH逐渐升高,淀粉水解酶指数逐渐升高并在pH 6.5时达到最大值,pH 7.0~8.0变化不显著;随着pH升高,21014菌株生长速率逐渐降低,20113菌株生长速率无显著变化。综上,暗褐脉柄牛肝菌产淀粉水解酶最适宜温度为30℃,最适初始pH为6.5。

暗褐脉柄牛肝菌林下高效栽培管理技术

通过多年来对暗褐脉柄牛肝菌林下高效栽培技术的研究,提出林下暗褐脉柄牛肝菌高效栽培管理技术措施,对适宜区选择、林地条件、接种、林地及水肥管理、采收及病虫害防控等技术要点进行阐述,旨在为暗褐脉柄牛肝菌的林下大面积栽培推广提供参考。

暗褐脉柄牛肝菌发酵液多糖的分离纯化与结构表征

[目的]高效利用暗褐脉柄牛肝菌资源,开发其多糖功能性食品。[方法]取暗褐脉柄牛肝菌菌丝发酵培养,低温减压浓缩,乙醇沉淀,DEAE-52纤维素柱色谱分离纯化,透析袋透析除去小分子杂质制备多糖。总糖含量采用苯酚—硫酸显色法测定,液质联用法测定单糖组成,紫外分光光度法判断是否存在核酸和蛋白等杂质;通过红外光谱和核磁共振波谱,对多糖的结构进行分析。[结果]制备的多糖总糖含量为84%,主要单糖种类有:葡萄糖、甘露糖、半乳糖和阿拉伯糖,其物质的量比为2.07∶1.95∶1.00∶1.58。红外光谱和核磁共振波谱分析具有多糖吸收峰,含α型吡喃糖。[结论]从暗褐脉柄牛肝菌发酵液中制备的多糖主要由4种单糖组成,结构中含α型吡喃糖。

暗褐脉柄牛肝菌子实体多糖的分离纯化、结构表征及体外降血糖活性

为研究暗褐脉柄牛肝菌多糖的结构特性及生物活性,本研究以暗褐脉柄牛肝菌子实体为研究对象,采用水提醇沉法制备粗多糖,Sevag试剂脱蛋白,大孔吸附树脂脱色,DEAE-52纤维素柱色谱分离,丙烯葡聚糖凝胶S-400HR纯化制备均一多糖。采用高效凝胶渗透法测定分子质量、PMP柱前衍生法结合高效液相色谱测定单糖组成、紫外光谱分析是否含蛋白或核酸、红外光谱分析官能团种类、核磁共振波谱初步分析多糖的结构,扫描电子显微镜观察多糖的形貌。利用α-葡萄糖苷酶抑制实验筛选出活性较好的多糖组分并进一步研究其酶动力学,初步阐明暗褐脉柄牛肝菌多糖的体外降血糖作用机制和类型。结果表明,筛选的4种大孔树脂(HP 2MGL、HP 20、SP 850、SP 825)中,SP 825大孔树脂综合脱色效果最好;活性组分(PPP-0)重均分子质量为31 059 Da,含有α和β构型糖苷键,是一种由半乳糖Gal、葡萄糖Glc、岩藻糖Fuc、甘露糖Man组成的杂多糖;体外降血糖活性实验表明粗多糖和3种均一多糖组分均对α-葡萄糖苷酶有抑制作用,其中PPP-2抑制率最高,PPP-0次之,且在酶动力学上属于竞争性可逆抑制。本研究可为暗褐脉柄牛肝菌多糖在降血糖相关功能食品和药品方面的开发提供理论依据。

暗褐脉柄牛肝菌同核菌株交配型的分子鉴定

以暗褐脉柄牛肝菌异核体及其担孢子萌发所得的同核菌株为试材,采用基于β-flanking基因和ste3.2基因开发分子标记的方法,研究了暗褐脉柄牛肝菌同核菌株分子鉴定的手段,以期为提高其杂交育种的工作效率提供参考依据。结果表明:用于扩增β-flanking基因区域的5对引物,产物叠加覆盖该基因91%的区域。用于扩增ste3.2基因区域的5对引物,产物叠加覆盖该基因71%的区域。10对引物在2个异核亲本中均能扩出,但可用序列长度及SNP位点数目有差异。根据第一轮PCR扩增结果,选择beta2和3.22引物对HZ19110的同核菌株进行第二轮PCR扩增并分型,交配型为A_(1)B_(1)、A_(2)B_(2)、A_(1)B_(2)、A_(2)B_(1)的同核菌株分别有5、4、4、4株。选择beta5和3.25引物对HZ20029的同核菌株进行第二轮PCR扩增并分型,交配型为A_(3)B_(3)、A_(4)B_(4)、A_(3)B_(4)、A_(3)B_(4)的同核菌株分别有4、3、3、3株。上述分型结果与两两对峙培养、镜检锁状联合验证交配型结果一致。该研究中开发的分子鉴定方法能够快速、准确地对来源不同异核亲本的暗褐脉柄牛肝菌同核菌株进行交配型鉴定,具有一定的通用性,可有效提升杂交育种工作效率。

响应面法优化暗褐脉柄牛肝菌粗多糖提取工艺

以暗褐脉柄牛肝菌子实体粗多糖提取率为指标,在单因素试验基础上,利用Box-Behnken Design中心组合试验设计,考察液料比、浸提温度、提取时间3个因素对暗褐脉柄牛肝菌子实体粗多糖提取率的影响,优化暗褐网柄牛肝菌子实体粗多糖的提取工艺。得到最佳提取工艺条件:液料比20︰1 mL/g,浸提温度78.72℃,提取时间77.76min。调整最佳浸提温度为79℃,最佳提取时间为78 min,在此条件下所得暗褐脉柄牛肝菌子实体粗多糖提取率为15.95%,与模型预测值15.99%偏差较小,表明响应面优化的模型参数准确可靠。