过表达kojR高产曲酸米曲霉的转录组差异分析

曲酸是一种真菌次生代谢产物,在化妆品、食品和制药工业中有多种用途。为揭示米曲霉发酵生产曲酸的生物合成机制,该研究利用基因工程的手段获得一株kojR过表达菌株T58号,摇瓶发酵曲酸产量最高达到29.54 g/L,较原始米曲霉菌株3.042的10.12 g/L提升191.9%。将发酵过程中获得的菌株T58与3.042菌丝体进行转录组分析,发现两者之间存在2450个显著差异表达基因,其中1203个基因表达上调,1247个基因表达下调。菌株T58差异性表达量最高的前20个基因中,上调基因主要为不同类别的氧化还原酶,与氮源利用相关基因的转录水平显著下调。基因本体数据库分析显示,与转运活性相关的差异基因数量最多。

曲酸三氮唑氨基硫脲席夫碱的合成及抑制酪氨酸酶活性研究

本研究基于蘑菇酪氨酸酶晶体结构特点,设计并合成了11个曲酸三氮唑氨基硫脲席夫碱衍生物。抑制酪氨酸酶活性研究发现,所有化合物均能一定程度抑制酪氨酸酶活性,其中化合物7j抑制效果最好,其IC_(50)为1.584μM,优于阳性对照曲酸(IC_(50)为22.230μM);作用机制研究表明,该化合物为混合型抑制剂,不仅能与游离酶结合,还能与酶-底物复合物相结合,其K_(I)和K_(IS)分别为0.059 3μM和0.100 6μM;进一步的荧光猝灭和实际抗褐变结果表明该化合物不仅对酪氨酸酶有很好的动态猝灭作用,其实际抗褐变效果也优于曲酸和抗坏血酸;上述研究结果为开发安全、高效的酪氨酸酶抑制剂提供了理论依据。

顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法测定面包中曲酸的含量

本文建立了顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法测定面包中的曲酸含量,并优化顶空条件以及进行方法学验证测定。结果表明,当平衡温度为90℃、平衡时间为30 min时,曲酸的标准曲线方程为Y=0.1903X+0.0046,r^(2)为0.9996,保留时间为12.175 min。曲酸的平均加标回收率为92.51%~96.49%,相对标准偏差为9.0%~10.2%。该方法具有线性关系良好、回收率和精密度高等优点,可用于面包中曲酸的定量检测。

曲酸双棕榈酸酯的制备和性能

研究了新型美白剂曲酸双棕榈酸酯的合成。该合成由棕榈酸的酰氯化和棕榈酰氯与曲酸的缩合两步反应完成。对棕榈酰氯制备过程中棕榈酸与PCl3的摩尔比、反应时间等工艺条件进行了考察,获得了适宜的棕榈酰氯的制备方法。采用了正交实验法对曲酸与棕榈酰氯的缩合反应(酯化反应)的工艺条件进行了优化,获得酯化反应的最佳工艺条件为:n(曲酸)/n(棕榈酰氯)为1 0/2 5,反应温度为35℃,反应时间为2h,丙酮用量为18mL/g曲酸,吡啶用量为3mL/g曲酸。在此条件下,酯化转化率可达88 9%,重结晶纯化得熔点为92℃～94℃的白色固体产品。

双硬脂酸曲酸酯的制备及应用

介绍了以硬脂酸 ,氯化亚砜 ,曲酸等为原料制备双硬脂酸曲酸酯的方法。着重研究了原料、温度、时间与产物收率的关系 ,找到了合成双硬脂酸曲酸酯的较佳反应条件 ,反应温度 2 0°C,反应时间 2 h,产率达到 85 %。

曲酸产生菌激光诱变效应的研究

采用经紫外线(UV)、60Co、亚硝基胍(NTG)复合诱变得到的黄曲霉曲酸产生菌(UCN7-12),进行激光诱变处理。研究证实在经过UV、60Co、NTG诱变处理后,黄曲霉突变株用He-Ne激光与YAG激光进行诱变处理仍能提高产酸率,其中He-Ne激光辐照处理20min,正变率为12.1%,产量提高约13%。YAG激光辐照处理300sec,正变率16.7%,产量提高18.3%。说明上述两种激光对黄曲霉曲酸产生菌有一定的诱变效应。

普鲁兰多糖-曲酸复合涂膜在水蜜桃保鲜中的应用

针对水蜜桃采后因生理代谢、病原菌侵染等造成的损耗大、品质下降、贮藏时间短等问题,以普鲁兰多糖为成膜剂,以曲酸为抗氧化剂和抑菌剂,以山梨酸钾和氯化钙为助剂研制水蜜桃复合保鲜涂膜,并通过单因素试验和正交试验,确定复合保鲜涂膜最优配方。结果表明,复合涂膜保鲜剂的最佳配方为普鲁兰多糖1.5%,曲酸0.4%,山梨酸钾0.15%,氯化钙2%。在该配方下,水蜜桃的腐烂率较对照组降低了80.95%,贮藏时间由14 d延长至30 d,具有良好的保鲜效果。同时,水蜜桃的硬度、可溶性固形物及维C含量等指标分别为对照组的3.60倍,1.88倍和2.59倍,在延缓水蜜桃腐烂的同时,较好地维持了水蜜桃的品质,具有较好的推广应用价值。

曲酸及氯曲酸衍生物的合成及抑菌活性

以曲酸为原料，设计合成了16个曲酸衍生物（QI-01-QI-16）和10个氯曲酸衍生物（QII-01～QII-10），通过核磁共振氢谱及元素分析对其结构进行了表征。初步抑菌活性测定结果表明：所有供试化合物对苹果炭疽病菌Glomerellacingulata和番茄灰霉病菌Botrytiscinerea的菌丝生长均有不同程度的抑制作用，其中化合物QI-07和QI-11对苹果炭疽病菌活性最高，50μg／mL时的抑制率分别为79．3％和86．2％；化合物QII-04、QII-08和QII-09对番茄灰霉病菌活性最高，50μg／mL时的抑制率分别为70．0％、70．0％和76．7％。

曲酸及其衍生物在美容和药物制剂中的应用

本文概述了曲酸及其衍生物在国内外美容和药物制剂中的应用现状,重点阐述曲酸及其衍生物在医学上基于其生物相容性、抗菌和抗病毒、抗肿瘤、抗癌、抗斑点、抗寄生虫以及杀虫和杀虫特性的应用,并介绍其在美容产品中用作抗氧化剂、抗增殖、抗炎、辐射防护和皮肤美白剂的进展,另外还综述了曲酸及其衍生物作为化学增敏剂,提高商业抗真菌药物或杀真菌剂的疗效的研究,并对其应用研究方向做出展望。

曲酸双棕榈酸酯的合成

以棕榈酸、氯化亚砜为原料,在60~65℃下卤化合成棕榈酰氯;再以吡啶为催化剂、N,N-二甲基甲酰胺为溶剂,与曲酸酰化合成标题化合物,反应温度为15~25℃,收率88.0%。该方法具有操作简单、成本低等优点,适合工业化生产。

富勒烯[60]-曲酸衍生物的合成

富勒烯[60]是由相邻的六元环和五元环组合而成的中空状球形分子,环中含有30个双键,具有缺电子烯烃性质,易发生加成反应。文章通过对甲苯磺酰肼与曲酸缩合反应生成曲酸对甲苯磺酰腙,再与富勒烯[60]发生环加成反应合成了富勒烯[60]-曲酸衍生物,产率32%。目标产物的结构经IR、1H NMR、MS确认。

曲酸对小菜蛾酚氧化酶抑制作用的研究

研究了曲酸对小菜蛾酚氧化酶的单酚酶和二酚酶活力的影响并初步探讨了其抑制作用机理,结果表明,曲酸对小菜蛾酚氧化酶的单酚酶和二酚酶活力均有抑制作用,其I50分别为0.07 mmolL-1和1 mmolL-1。曲酸对单酚酶活力表达的迟滞时间有明显的延长效应,对二酚酶的抑制作用表现为典型的可逆竞争型抑制类型,其抑制常数Ki为0.47 mmolL-1。曲酸与酚氧化酶中催化氧化反应活性中心的Cu2+鳌合可能是其产生抑制作用的重要原因。金属铁离子可明显地缩短单酚酶的迟滞时间,但对单酚酶的活力无明显影响。

曲酸处理对鲜切西兰花品质及生理变化的影响

为了探讨曲酸对鲜切西兰花的保鲜作用,为曲酸在鲜切西兰花保鲜研究中提供理论基础,本研究以西兰花为试材,采用2.5%曲酸浸泡鲜切西兰花15 min,并贮藏于4℃条件下12 d。研究曲酸处理对鲜切西兰花失重率、可滴定酸(TA)、维生素C(VC)、叶绿素、丙二醛(MDA)含量和多酚氧化酶(PPO)活性的影响。结果表明:曲酸处理可有效减少鲜切西兰花贮藏期间水分的散失,延缓TA、VC和叶绿素含量的下降,减缓MDA的积累,抑制PPO的活性。曲酸浸泡处理可显著提高鲜切西兰花的贮藏品质。

曲酸对动物的毒性研究及安全性评价

目的:研究曲酸对动物的毒性作用及安全性评价。方法:急性毒性实验、105d喂养实验。结果:曲酸对小鼠有明显的急性毒性作用,LD50为2571mg/kgbw,在105d大鼠喂养实验中,曲酸对大鼠生长发育、总食物利用率、血液生化指标、多个脏器的脏器系数,以及部分血液指标均无显著影响,但曲酸使雌、雄鼠白细胞数、淋巴细胞数明显下降,中性粒细胞数明显增加,各剂量组之间有剂量-效应关系,T3、T4有下降趋势,500mg/kgbw组少数动物出现了睪丸发育不良、甲状腺间质增生、肾脏和肝脏部分病理改变。结论:曲酸属低毒物质,长期高剂量使用可能会影响实验动物的生长发育及器官的结构和功能改变。

高效液相色谱-串联质谱法测定食品中曲酸

建立了食品中新型防腐剂曲酸的高效液相色谱-串联质谱的定量测定方法。动物禽肉、鱼虾甲壳类、酱菜类、水果蔬菜、面制品等固体样品经乙腈提取;酱及酱油、醋、酒、饮料、糖浆等液体样品经水稀释,乙酸锌和亚铁氰化钾沉淀蛋白;以C18柱为分离柱,流动相为乙腈和5 mmol/L乙酸铵甲酸溶液,采用电喷雾串联四极杆质谱进行检测。选择1个母离子和2个子离子进行选择反应监测,以13C6-曲酸作为内标,选择信号最强的子离子进行定量测定。固体类基质中的定量限(按信噪比(S/N)大于10计)为0.1 mg/kg;液体类基质中的定量限为2.5 mg/kg。在0.1～2.0 mg/L范围内呈现良好的线性关系,相关系数r>0.99。各种基质在3个添加水平的平均回收率在72.6%～114%之间,相对标准偏差均小于11.4%。本方法简单实用,准确可靠,适用范围包括了食品中可能使用曲酸这种食品添加剂的大部分基质,可以满足进出口食品中曲酸的定性和定量要求。

曲酸生产菌的复合诱变选育

以黄曲霉 (Aspergillusflavus )为出发菌株 ,经 3次紫外线、 1次 60 Co、 3次亚硝基胍多重复合诱变处理 ,选育获得曲酸生产菌UCN7- 1 7,配以最佳培养条件 ,发酵 7d,曲酸产量由原来的 0 92 6% ,提高到 6 3%。实验证明采用多因子复合诱变 ,能有效改变菌株对诱变因素敏感性 ,提高变异率 。

曲酸与阿魏酸对酪氨酸酶的抑制作用研究

本实验采用Lineweaver-Burk双倒数法探讨了曲酸与阿魏酸对蘑菇酪氨酸酶催化L-DOPA氧化的抑制作用并推测其抑制机理。通过对曲酸与阿魏酸的IC50与抑制常数KI的测定可知,曲酸对酪氨酸酶的抑制作用明显高于阿魏酸。分别采用分光光度法和ImageJ图像分析与处理软件定量地测定曲酸与阿魏酸对虾血淋巴和苹果褐变的抑制作用。曲酸对虾血淋巴褐变的抑制作用优于阿魏酸;对于苹果褐变,阿魏酸的抑制作用则高于曲酸。

曲酸遗传毒性的研究

目的:研究曲酸遗传毒性及有关作用机制。方法:采用小鼠骨髓细胞微核实验检测染色体损伤。用不同质量浓度曲酸(0、500、1000、1500、2000、2500μg/mL)诱导CHO-K1细胞,单细胞凝胶电泳实验检测CHO-K1细胞DNA损伤。结果:1/2LD50、1/4LD50和1/8LD50不同剂量曲酸诱导昆明小鼠微核实验结果显示,各质量浓度受试组与阴性对照组差别无显著性。单细胞凝胶电泳结果显示:曲酸作用质量浓度为1000μg/mL,作用时间为6h时,即出现轻微DNA损伤;当曲酸作用质量浓度增大到2500μg/mL时,出现明显的DNA损伤。在24h内,或其他同一作用时间段,随着曲酸作用质量浓度增加,DNA损伤也呈增加趋势。实验未发现有明显的时间-效应关系。结论:体内小鼠骨髓细胞微核实验未观察到曲酸明显的遗传毒性,但体外实验高质量浓度曲酸在一定时间可导致DNA损伤。

曲酸对马铃薯酪氨酸酶的抑制作用研究

曲酸等几种化合物对马铃薯酪氨酸酶的抑制作用表明:巯基类化合物、抗坏血酸和曲酸具有较强的抑制作用。预水浴温度和时间对曲酸的抑制作用并没有显著影响,曲酸通过延长L-tyrosine加氧羟化的迟滞时间,从而抑制单酚酶活性,以L-DOPA为底物测得曲酸为竞争性抑制,抑制常数Ki为0.17mM。紫外光谱表明曲酸能将二酚酶催化的产物o-醌还原成二酚,从而抑制黑色素的生成。

曲酸对南美白对虾酚氧化酶活性和结构的影响

为研究曲酸对南美白对虾酚氧化酶(phenol oxidase,PO)活性和结构的影响,以南美白对虾头胸部分离纯化出的PO为原料,研究不同浓度曲酸(0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3、1.5 mmol/L)对PO活性的抑制,确定曲酸作用PO的抑制类型;通过测定不同浓度曲酸(0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1 mmol/L)处理的PO蛋白内源荧光光谱、表面疏水性和二级结构类型含量的变化,研究曲酸对PO空间结构的影响。结果表明:随着作用PO曲酸浓度的增加,PO的剩余酶活逐渐减少,当曲酸浓度达到1.5 mmol/L时,PO的剩余酶活仅为9.8%,参与的反应体系褐变指数变化值为3.02,抑褐变效果明显;曲酸能够有效的抑制PO活性,曲酸作用PO的抑制类型属于竞争性抑制剂;随着作用PO曲酸浓度的增加,PO的内源荧光强度不断降低,最大发射波长发生红移,PO蛋白表面疏水性先增加后降低;随着作用PO曲酸浓度的增加,二级结构类型α-螺旋和β-折叠含量降低,无规则卷曲和β-转角增加。可以推测,曲酸与PO结合后,酶蛋白空间结构发生了改变。