高效液相色谱法同时测定清热祛瘀液中丹皮酚、木香烃内酯、去氢木香烃内酯的含量

目的建立同时测定清热祛瘀液中丹皮酚、木香烃内酯和去氢木香烃内酯的反相高效液相色谱法。方法采用CAPCELL PAK C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(70:30),流速1.0 ml/min,检测波长:215 nm,柱温为30℃,进样量为10μl。结果丹皮酚在浓度范围0.7541~60.3291μg/ml(r=0.9996)、木香烃内酯在浓度范围1.1563~92.5074μg/ml(r=0.9999)、去氢木香烃内酯在浓度范围1.3818~110.5445μg/ml(r=0.9998),线性良好,三种物质检出限(LOD)为0.01~0.04μg/ml、定量限(LOQ)为0.03~0.13μg/ml;三种物质平均回收率为97.0%~103.5%,回收率RSD为1.3%~1.8%(n=6)。结论该方法操作简便,重复性好,准确度高,可用于清热祛瘀液的含量测定及质量控制。

达立通浸膏中延胡索乙素、川陈皮素和木香烃内酯在大鼠体内的药代动力学及组织分布研究

目的:研究达立通浸膏给药后大鼠体内主要药物成分及药代动力学特点。方法:建立同时检测延胡索乙素、川陈皮素和木香烃内酯的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)方法,应用于测定大鼠血浆和组织中药物浓度及药代动力学特征。结果:建立了同时定量测定延胡索乙素、川陈皮素和木香烃内酯方法,单次灌胃给予达立通浸膏后,延胡索乙素、川陈皮素和木香烃内酯可以快速吸收进入体内,在血中峰浓度(C_(max))分别为(13.73±7.50)、(27.01±17.69)、(66.73±29.94)ng/mL,曲线下面积(AUC_(0-t))分别为(80.43±40.03)、(41.30±28.69)、(303.90±136.69)ng·h·mL^(-1),消除半衰期(t_(1/2))分别为(5.82±2.22)、(1.08±0.01)、(4.95±2.53)h。多次给药能明显增加各物质体内暴露水平。各成分在大鼠的主要组织/器官中广泛分布,在胃肠道中暴露水平最高,其次是肝和肾。各成分存在明显的雌雄差异,在雌性大鼠中的暴露量(C_(max)和AUC)均显著高于雄性大鼠(P<0.05)。结论:UPLC-MS/MS测定延胡索乙素、川陈皮素和木香烃内酯的方法准确、灵敏、可靠。达立通浸膏中延胡索乙素、川陈皮素和木香烃内酯可吸收进入血液、广泛分布于体内组织、器官、较快代谢/消除,为达立通浸膏潜在的体内药代标记物。

木香烃内酯通过调控circ_0000285/miR-409-3p影响胃癌细胞恶性表型

目的探讨木香烃内酯对胃癌细胞恶性表型的影响及可能机制。方法体外培养胃癌细胞HGC-27,采用不同剂量(2.5、10、40μmol·L^(-1))木香烃内酯干预HGC-27细胞24 h,或转染circ_0000285小干扰RNA至HGC-27细胞后培养24 h。采用40μmol·L^(-1)木香烃内酯干预转染circ_0000285过表达载体的HGC-27细胞24 h。CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕实验和Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blotting检测细胞中Bcl-2、Bax、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达,RT-qPCR检测circ_0000285和miR-409-3p表达,双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000285和miR-409-3p的调控关系。结果木香烃内酯可降低HGC-27细胞的OD值、集落形成数、迁移距离、侵袭数,以及Bcl-2、N-cadherin蛋白表达水平,提高细胞凋亡率及Bax、E-cadherin蛋白表达水平,并呈剂量依赖性。木香烃内酯可抑制HGC-27细胞中circ_0000285的表达,促进miR-409-3p表达。干扰circ_0000285表达可降低HGC-27细胞的增殖、迁移能力,并促进细胞凋亡。circ_0000285可靶向结合并负调控miR-409-3p。过表达circ_0000285可逆转木香烃内酯对HGC-27细胞恶性表型的影响。结论木香烃内酯可能通过调控circ_0000285/miR-409-3p轴抑制胃癌细胞的恶性生物学行为。

UPLC-MS/MS法测定心可舒胶囊中木香烃内酯与去氢木香内酯的含量

目的 建立超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定心可舒胶囊中木香烃内酯与去氢木香内酯的含量。方法 以Waters ACQUITY UPLC?BEH C18(1.7μm×2.1 mm×100 mm)为色谱柱,流动相为0.1%甲酸-乙腈(梯度洗脱),流速为0.3 ml/min,柱温35℃,进样量2μl;质谱采用电喷雾离子源(ESI)、正离子扫描模式,以多反应监测模式(MRM)进行数据采集,木香烃内酯的定量离子对为m/z 233→187,去氢木香内酯的定量离子对为m/z 231→185。结果 木香烃内酯与去氢木香内酯分别在0.0430~2.1498μg/ml、0.0439~2.1970μg/ml浓度范围内线性关系良好(r≥0.9913),平均加标回收率为102.60%和95.56%,RSD分别为3.6%与2.3%。3批样品木香烃内酯的含量范围为5.267~5.574 mg/g,去氢木香内酯的含量范围为4.822~5.191 mg/g。结论 所建方法能有效测定心可舒胶囊中木香烃内酯与去氢木香内酯的含量,可为完善该制剂的质量标准提供借鉴。

蒙药制剂亚玛熏药散中木香烃内酯的含量测定方法研究

目的:建立亚玛熏药散中木香烃内酯的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为ZORBOX SB-C_(18) 5μm 4.6 mm×250 mm;流动相为乙腈∶水(50∶50)洗脱;流速:0.8 mL/min;柱温:35℃;检测波长:225 nm。结果:木香烃内酯在8.59~85.91μg/mL的浓度范围内线性关系良好,r=0.9999,回收率为97.4%。结论:该方法经方法学验证准确可行,可用于亚玛熏药散的质量控制。

去氢木香烃内酯通过抑制SREBP2/PCSK9表达改善非酒精性脂肪肝大鼠脂代谢的实验研究

目的:研究去氢木香烃内酯改善非酒精性脂肪肝(NAFLD)脂代谢的作用机制。方法:使用斯泼累格·多雷(SD)大鼠构建NAFLD模型,并用去氢木香内酯干预,记录大鼠体质量、肝湿重、肝指数等指标;苏木精-伊红(HE)染色及马松(Masson)染色观察肝脏病理变化;比色法检测甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)等指标;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹(WB)实验检测胆固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)、前蛋白转化酶枯草溶菌素9蛋白(PCSK9)表达情况。结果:成功构建了大鼠NAFLD模型,HE及Masson染色显示模型组大鼠肝脏脂肪变性和炎性细胞浸润显著,去氢木香烃内酯干预后缓解。与模型组比较,药物低剂量组、高剂量组及阳性药物组肝指数、TC、TG、AST、ALT、MDA水平降低,SOD水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常组比较,模型组肝脏组织中SREBP2基因及SREBP2、PCSK9蛋白表达均有所升高(P<0.05);而低剂量给药组、高剂量给药组、阳性药物组肝脏组织中SREBP2基因及SREBP2、PCSK9蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,低剂量给药组、高剂量给药组、阳性药物组肝脏组织中SREBP2基因及SREBP2、PCSK9蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:去氢木香烃内酯能显著减轻NAFLD大鼠脂代谢异常,与抑制SREBP2和PCSK9表达相关,为NAFLD治疗提供新理论依据。

木香烃内酯抗肿瘤活性研究进展

近年来,中药抗肿瘤作用的研究呈现逐年增加的趋势,无论是中药有效提取成分或是复方制剂在肿瘤治疗方面都具有显著的疗效及优势。中药木香中的活性成分木香烃内酯是一种天然倍半萜内酯,具有多种药理作用,如抗氧化、抗炎、降血糖、抗微生物等。近年来,越来越多的体内外实验研究表明,该成分具有抗肿瘤活性,可抑制乳腺癌、胃癌、黑色素瘤、前列腺癌、白血病、肝癌、肺癌、卵巢癌、食管癌、结直肠癌、骨肉瘤等多种肿瘤的生长。其抗肿瘤的机制主要是通过调控PI3K/AKT/mTOR、AKT-MDM2-p53、ROS-AKT/GSK3β、Bcr/Abl和Stat5等信号通路,影响活性氧、细胞凋亡相关蛋白和自噬相关蛋白、细胞周期蛋白等方面,从而诱导细胞凋亡、介导自噬及导致细胞周期阻滞在G2/M期、G1期、S期。此外,木香烃内酯与伊马替尼、阿霉素联用可以起到减毒增效、增强抗肿瘤作用,并且还能逆转肿瘤耐药。笔者通过查阅和整理国内外相关研究文献,对木香烃内酯抗肿瘤作用及机制、联合用药、逆转肿瘤耐药的研究进展进行综述,以期为该成分新药开发与利用提供理论依据。

木香烃内酯通过抑制NLRP3缓解咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型中炎性因子的表达

目的探讨木香烃内酯(Cos)通过抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体在咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样模型中的作用及可能的机制。方法选取50只雄性小鼠,随机分为5组,每组10只。正常对照组:涂抹等量凡士林,同时灌胃0.2 mL的0.9%氯化钠溶液;模型组:涂抹60 mg咪喹莫特,同时灌胃0.2 mL的0.9%氯化钠溶液;实验组:涂抹60 mg咪喹莫特,同时灌胃0.2 mL的浓度分别为5、10和20μmol/L的Cos。用咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型,建模后第6天开始给药,连续7 d,第8天取材。进一步实验,将NLRP3的小分子干扰核糖核酸(si-NLRP3)转染至建模后的小鼠皮肤细胞,再用Cos或MCC950(10μmol/L)处理细胞,分别作为si-NLRP3组、Cos组和MCC950组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测NLRP3、胱天蛋白酶-1(caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blotting)检测NLRP3的蛋白表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-17(IL-17)及IL-1β的含量。结果与正常对照组比较,模型组NLRP3 mRNA、caspase-1 mRNA、ASC mRNA和NLRP3蛋白表达显著升高(均P<0.05);与模型组比较,5、10和20μmol/L的Cos可显著降低NLRP3、caspase-1、ASC mRNA和NLRP3蛋白表达(均P<0.05)。与正常对照组比较,模型组TNF-α、IL-17、IL-1β含量显著升高(P<0.05);与模型组比较,5、10和20μmol/L的Cos可显著降低TNF-α、IL-17、IL-1β含量(P<0.05)。与模型组比较,si-NLRP3组NLRP3 mRNA和蛋白表达显著降低,TNF-α、IL-17、IL-1β含量显著降低(P<0.05);而Cos或MCC950未显著影响NLRP3 mRNA、蛋白表达和炎性因子TNF-α、IL-17、IL-1β含量(均P>0.05)。结论Cos通过抑制NLRP3炎性小体减轻咪喹莫特诱导的小鼠银屑皮肤病。

HPLC法测定越鞠保和丸中苍术素、木香烃内酯和去氢木香内酯的含量

目的:建立HPLC法测定越鞠保和丸中苍术素、木香烃内酯和去氢木香内酯的含量。方法:使用C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇作为流动相A,0.2%磷酸水溶液作为流动相B,梯度洗脱;检测波长为木香烃内酯、去氢木香内酯225 nm,苍术素340 nm;柱温40℃;流速1.0 ml/min;进样量为10μl。结果:苍术素在1.036 79~103.679μg/ml范围内线性良好(r=1.000 0),木香烃内酯在2.951 17~118.046 8μg/ml范围内线性良好(r=1.000 0),去氢木香内酯在3.034~303.4μg/ml范围内线性良好(r=1.000 0)。苍术素平均回收率为103.20%,RSD为0.84%;木香烃内酯平均回收率为103.06%,RSD为0.52%;去氢木香内酯平均回收率为91.80%,RSD为0.72%。结论:本方法操作简单,专属性强,可以用于越鞠保和丸中苍术与木香两味药材的质量控制。

HPLC同时测定肠康片中吴茱萸碱、吴茱萸次碱、木香烃内酯和去氢木香内酯的含量

目的建立肠康片中吴茱萸碱、吴茱萸次碱、木香烃内酯和去氢木香内酯的HPLC含量测定方法。方法色谱柱为岛津Eclipse-XDB-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.02%磷酸(40∶60),流速1.0 mL·min^(-1),柱温为35℃,检测波长为225 nm。结果吴茱萸碱y=102097.5127x+1168.9695(r=0.9999),线性范围为0.5016~5.0160μg·mL^(-1),平均回收率为101.52%,RSD=1.87%(n=6);吴茱萸次碱:y=524410184x-316.7073(r=0.9998),线性范围为0.5021~5.0209μg·mL^(-1),平均回收率为101.56%、RSD=2.06%(n=6);木香烃内酯:y=1757575.24234x-75774.20833(r=0.9996),线性范围为0.0299~0.2993 mg·mL^(-1),平均回收率为100.05%、RSD=1.26%(n=6);去氢木香内酯:y=1510424.60319x-66181.54167(r=0.9996),线性范围为0.0303~0.3027 mg·mL^(-1),平均回收率为99.78%,RSD=1.05%。结论本方法灵敏、准确可靠,可作为肠康片质量控制标准。

木香烃内酯对生长期大鼠骨强度的影响

目的研究木香烃内酯(CT)对生长期大鼠骨质量的影响。方法1月龄雌性SD大鼠30只,体质量(99±3)g,随机分为3组:对照组(Control),9 mg/(kg·d)的CT处理组(CT-9)和18 mg/(kg·d)的CT处理组(CT-18),每组10只。适应性饲养3 d后,灌胃给药,Control组每天灌服等体积蒸馏水,每周称一次体质量,每4周检测一次全身骨密度(BMD)。8周后安乐死所有大鼠,检测股骨和椎骨离体BMD、进行micro CT扫描和骨生物力学实验。结果各组大鼠实验过程中体质量未出现统计学意义,8周时CT-9组和CT-18组的全身BMD及离体股骨、椎骨BMD均显著高于Control组,CT-18组的股骨弹性模量和最大载荷显著高于Control组,CT-9组和CT-18组的相对骨体积、骨小梁数和体积骨密度均显著高于Control组,骨小梁分离度显著低于Control组。结论CT能提高生长期大鼠的骨质量,具有开发预防和治疗骨质疏松药物的潜力。

基于p53信号通路探讨木香烃内酯对H9C2心肌细胞过氧化损伤的保护作用

目的:研究木香烃内酯对于心肌细胞氧化损伤的保护作用及其与凋亡相关通路的相关性。方法:培养H9C2心肌细胞,分3组,分别为:正常组(Control)、氧化损伤组(Oxidative Damage Group, ODG)、木香烃内酯组(Costunolide);其中氧化损伤组H9C2心肌细胞通过双氧水构建氧化损伤模型,木香烃内酯组在氧化损伤组的基础上使用木香烃内酯预处理;通过CCK8实验测定各组细胞活力值,流式细胞仪检测各组细胞培养基上清液氧化应激及抗氧化应激指标的表达,Western blot检测各组p53通路蛋白的表达。结果:与Control组相比,ODG组与Costunolide组细胞活力值均明显下降(均P<0.05),ROS、MDA表达量均明显上升(均P<0.05),SOD、GSH表达量均明显下降(均P<0.05);与ODG组相比,Costunolide预处理后,细胞活力值明显提升(P<0.05),ROS、MDA表达量均明显下降(均P<0.05),SOD、GSH表达量均明显上升(均P<0.05),Caspase-3、p53的表达量明显降低(均P<0.05),Bcl-2表达量明显上升(P<0.05)。结论:木香烃内酯预处理可有效发挥对双氧水致心肌细胞氧化损伤的保护作用,其机制可能与p53相关信号通路相关。

药物化学综合性开放实验项目的构建——以“木香烃内酯衍生物的制备”为例

为了提高学生的实践能力、创新能力,合理利用实验室的资源,构建以药物化学为核心的药学综合性开放实验项目,作为传统实验教学的补充。以“木香烃内酯衍生物的制备”为例:从山玉兰根皮中提取分离得到木香烃内酯,筛选Brown硼氢化反应条件以48%的产率得到1位羟基衍生物2,并通过Mosher法确定了其绝对构型。确定该课题后,学生查阅文献,设计方案,再经教师审核和指导完成实验内容,最后形成实验总结和报告。该项目融合多个相关学科,有助于提高学生综合能力,实践中获得了学生较好的评价。

丛枝菌根真菌对云木香根产量及其木香烃内酯和去氢木香烃内酯含量的影响

目的:研究丛枝菌根(AM)真菌在人工栽培条件下对云木香根产量及其有效成分含量的影响。方法:采用室温盆栽方法,设不种接AM真菌组为CK组,设接种阿密蔻菌根组为AM组,每组5个重复,每个重复1盆,共5盆,每盆栽种云木香3株。采用文献方法计算菌根侵染率和侵染强度,采用称重法测定云木香根产量,采用高效液相色谱法测定木香烃内酯、去氢木香烃内酯的含量。结果:AM组与CK组的侵染率分别为(86.22±3.28)%、0(P<0.05),侵染强度分别为(52.12±2.14)%、0(P<0.05);两组间根增质量率和木香烃内酯、去氢木香烃内酯及总内酯的含量比较差异有统计学意义(P<0.05)。与CK组比较,AM组云木香根产量提高了(50.96±2.12)%,云木香根中木香烃内酯、去氢木香烃内酯及总内酯的含量分别增加了65.55%、97.42%、85.42%,内酯类成分间的结构比有所改变。结论:外源性AM真菌的加入能明显提高云木香根的品质。

香黄通便胶囊中木香烃内酯、去木香烃内酯含量测定的研究

目的采用高效液相色谱法，对香黄通便胶囊中木香烃内酯、去木香烃内酯进行含量测定研究。方法①高效液相色谱法：检测木香烃内酯、去木香烃内酯的含量。参考文献选择合适的固定相，调整流动相组成、配比、流速以及柱温，在最大吸收波长下测定，使指标峰分离完全，理论塔板数符合要求。②线性范围考察：配制系列浓度的对照品溶液．以色谱峰的峰面积为纵坐标，以进样浓度为横坐标，进行线性回归，得回归曲线并考察线性范围。③方法学考察：分别考察测定方法的重复性、重现性、耐用性、稳定性和加样回收率。④样品含量测定：取三批样品分别按上述方法测定指标成分的含量。结果香黄通便胶囊中木香烃内酯、去木香烃内酯色谱条件为：AgilentZorbaxSB—C13色谱柱，流动相：甲醇-水（65：35，V/V），流速：0．8mL／min，柱温：25clC，检测波长：225nm。木香烃内酯、去木香烃内酯分别在14．4-216．0txg／mL、28．0-421．2μg／mL范围内线性关系良好，r分别为0．9996、0．9999。该方法重复性、重现性、耐用性、在12h内稳定性的RSD分别为0．77％、03晚，0．05％、0．59％，0．88％、1．30％，1．54％、0．43％。三个浓度（80％、100％、120％）的加样回收率为99．2％、102．9％，100．9％、101．8％，97．5％、100．5％，RSD分别为0．84％、0-31％，0．20％、1．70％，0．18％、0．12％。样品中木香烃内酯、去木香烃内酯总含量不低于4．22m∥粒。结论以木香烃内酯、去木香烃内酯作为含量测定指标，采用高效液相色谱法进行检测，准确度高，专属性强，重现性好。

不同产地木香中木香烃内酯和去氢木香内酯的HPLC测定

目的建立木香中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量测定的HPLC方法。方法色谱柱Zorbax SB-C18（4.6 mm×150mm,5μm）,流动相为甲醇-水（65：35）;检测波长225 nm;流速1.0 ml.min-1。结果木香烃内酯和去氢木香内酯的回归方程分别为A I=14.59C-13.28（=0.999 8）和AⅡ=11.27C-14.27（=0.999 4）。木香烃内酯浓度在5.2~41.6 mg.L-1和去氢木香内酯在7.4~59.2 mg.L-1与峰面积的线性关系良好。加样回收率分别为101.9%和100.4%,RSD为1.25%和0.99%。结论不同产地的木香烃内酯和去氢木香烃内酯的含量差别较大,该方法简便易行、准确可靠,可用于控制不同产地木香的质量。

舒心片薄层色谱鉴别及木香烃内酯和去木香烃内酯的含量测定

目的制定舒心片质量标准方案,控制制剂成品质量。方法采用薄层色谱法对舒心片中的沉香、莪术等进行鉴别。采用HPLC法测定木香中木香烃内酯和去氢木香烃内酯总含量。色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-水(58∶42)为流动相;检测波长为225 nm。结果 TLC法对制剂中鉴别药材专属性强、斑点分离清晰、重现性好,阴性无干扰;HPLC测定木香烃内酯在0.023 7~0.237 0μg范围内呈良好的线性关系,去氢木香烃内酯在0.158 8~1.588 0μg范围内呈良好的线性关系,回收率为96.27%,RSD为1.17%。结论 TLC操作方便、分辨力高;HPLC法专属性强,重复性好,可作为舒心片制剂的质量控制标准。

HPLC测定肉桂、木香中桂皮醛、木香烃内酯和去氢木香内酯

目的:建立以高效液相色谱法测定肉桂、木香CO2超临界萃取物中桂皮醛、木香烃内酯和去氢木香内酯含量的方法。方法:色谱柱为Agilent HC-C18(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),检测波长210nm,流速1.0mL/min,柱温30℃。结果:桂皮醛进样量在148.5～1732.5ng与峰面积有良好的线性关系,平均回收率为99.65%,RSD为0.72%;木香烃内酯进样量在69.42～809.9ng与峰面积有良好的线性关系,平均回收率为99.57%,RSD为1.28%;去氢木香内酯进样量在70.32～820.4ng与峰面积有良好的线性关系,平均回收率为98.90%,RSD为0.81%。结论:本方法简便、准确、重复性好,可用于肉桂、木香CO2超临界萃取物的质量控制。

木香烃内酯的药理作用及构效关系研究进展

木香烃内酯（costunolide,CT）为倍半萜内酯类化合物,主要来源于木香（Saussurea lappa C.B.Clark）[1]、月桂树（Laurus nobilis）[2]、荷花玉兰（Magnolia grandiflora）[3]、多花含笑（Michelia floribunda）[4]等植物,是中药木香的主要化学成分和质量控制成分之一。