苦参碱体外对胃癌细胞的杀伤作用

目的 研究苦参碱对不同分化程度的胃癌细胞株在体外的杀伤作用及其机制。方法 用不同剂量的苦参碱分别作用于中、低分化胃癌细胞株SGC-7901和AGS 24、48、72h,以MTT法检测药物对肿瘤细胞的杀伤作用;透射电镜和流式细胞术检测苦参碱诱导SGC-7901凋亡的作用。结果 随药物浓度的增加和作用时间的延长,苦参碱对胃癌细胞的杀伤作用逐渐增强(P<0.01);低分化的AGS较中分化的SGC-7901更为敏感。透射电镜、流式细胞术检测均显示苦参碱能够诱导胃癌细胞凋亡。结论苦参碱在体外对胃癌细胞具有杀伤作用,且呈明显的量效和时效关系;低分化的胃癌细胞株AGS对苦参碱更为敏感;苦参碱对胃癌细胞株的体外杀伤作用与其诱导胃癌细胞凋亡有关。

甘遂和贯众不同提取液对蚊幼虫的杀伤作用

目的 了解甘遂 (EuphorbiakansuiLiouMass)和贯众 (Dryopteriscrossirhizomz)不同提取液对蚊幼虫杀伤的作用。方法 分别采用乙醚、乙醇、丙酮、水提取两种草药干样品植物成分。用 2 %的浓度 (2g生药 / 10 0ml溶液含 )浸渍法处理致倦库蚊、白纹伊蚊敏感株Ⅲ龄末～Ⅳ龄初幼虫。结果 2 %甘遂和贯众草药的乙醚、乙醇提取液对致倦库蚊幼虫的杀伤分别高达 95 0 %± 4 4 % ,90 0 %± 3 5 % ,83 0 %± 0 6 %与 75 0 %± 2 0 %。贯众对白纹伊蚊幼虫的杀伤力强度明显优于甘遂 ,乙醚、乙醇提取液分别为 6 1 6 %± 0 6 %与 2 3 2 %±及 6 6 6 %± 1.0与30 0 %± 1 0 %。贯众丙酮的粗提物的杀伤力较差 ,均低于 10 % ,水提液对致倦库蚊、白纹伊蚊幼虫无杀伤作用。结论 甘遂和贯众的提取液对致倦库蚊有显著的杀伤作用。贯众乙醚、乙醇提取液对白纹伊蚊幼虫的杀伤作用较甘遂草药提取液的杀伤作用强。两种草药对蚊虫的毒力主要成分溶于醚及醇。

^(125)IUdR对人脑胶质瘤细胞SHG44的杀伤作用

为评价12 5IUdR对人脑胶质瘤细胞SHG4 4的杀伤作用 ,把12 5IUdR加入到SHG4 4细胞的培养基中 ,孵育后测量细胞摄取12 5IUdR的放射性活度 ;采用克隆形成法测定12 5IUdR对SHG4 4细胞生长抑制的效果。结果表明 ,培养基中12 5IUdR浓度增加时 ,SHG4 4细胞对12 5IUdR的摄取量也相应增加 (相关系数r =0 .9917)。SHG4 4细胞摄取12 5IUdR后生长受到明显抑制 ,细胞存活分数与培养基中12 5IUdR浓度呈直线负相关 (r =- 0 .9736 ) ,其半数致死剂量LD50 为 (8.7± 0 .12 )kBq/mL ,12 5IUdR组的SHG4 4细胞存活分数明显低于Na12 5I组 (P <0 .0 0 1)。结果提示 ,12 5IUdR能够掺入到SHG4 4细胞中 ,12 5IUdR对SHG4 4细胞有明显的杀伤作用 ,说明12 5IUdR可望成为治疗脑胶质瘤的潜在的一种放射性药物。

板蓝根多糖促进NKG2D配体表达增强NK细胞对食管癌细胞的杀伤作用及机制研究

目的:研究板蓝根多糖(RIP)影响NK细胞对食管癌细胞杀伤作用的分子机制。方法:MTT法检测细胞增殖率,Western blot检测增殖相关蛋白CyclinD1、p21和p27的表达,ELISA法检测培养上清中IFN-γ和TNF-α的表达,流式细胞术检测NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1和ULBP2的表达,钙黄绿素释放法(CARE-LASS)检测NK细胞对食管癌细胞的杀伤率。结果:RIP可促进NK-92细胞增殖,抑制食管癌Eca-109细胞增殖,且具有显著剂量依赖性。食管癌可促进NK细胞中TNF-α和IFN-γ的表达。RIP可促进食管癌细胞Eca-109中NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1和ULBP2的表达,促进与食管癌细胞联合作用后NK细胞中TNF-α和IFN-γ表达,提高NK-92细胞对食管癌Eca-109细胞的杀伤活性。结论:RIP通过提高食管癌Eca-109细胞中NKG2D配体表达,促进NK-92细胞中TNF-α和IFN-γ表达,增强NK-92细胞对食管癌细胞的杀伤作用。

28种中草药乙醇提取液对蚊幼虫的杀伤作用

目的了解丁香等28种中草药的乙醇提取液对蚊幼虫杀伤作用,寻找和开发安全有效的植物性杀虫剂。方法用乙醇分别提取28种中草药干样品植物成分。用2%的药物(每100ml溶液含2g生药)浸渍法处理致倦库蚊、白纹伊蚊敏感株Ⅲ龄末～Ⅳ龄初幼虫24h。结果13种中草药可致白纹伊蚊幼虫半数以上死亡;17种中草药可致致倦库蚊幼虫50%以上死亡,其中12种对两种幼虫都有50%以上的致死率。藜芦、漏芦和蛇床子3种药物可致白纹伊蚊幼虫全部死亡;百部等8种中草药可致库蚊幼虫全部死亡,其中藜庐等3种中草药可致两种蚊虫幼虫全部死亡。结论两种蚊虫幼虫对28种中草药的敏感性不同,其中藜芦、漏芦和蛇床子等中草药在蚊虫防治方面具有进一步开发利用的价值。

柞蚕杀菌肽D对人直肠癌细胞的杀伤作用及机制

柞蚕杀菌肽D在0．05～200μg／mL浓度范围内对直肠癌细胞的生长有明显抑制作用；用氚标记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）对癌细胞的掺入试验，发现能抑制细胞DNA的合成．导致3H-TdR掺入率明显下降。钙离子螯合剂Indo-1-AM能与癌细胞内钙离子螯合而产生特异性荧光，通过粘附细胞激光定量分析及筛选议的观察，发现杀菌肽能破坏细胞的钙离子通道，钙离子迅速逸出细胞外。采用电子显微镜观察直肠癌细胞超微结构的变化，发现杀菌肽首光破坏细胞膜致微绒毛收缩、融合，继而导致细胞器的破坏，最终细胞崩解死亡。正常猴肾细胞CV1，在1.00μg／mL浓度杀菌肽D作用48h，尚未发现不良影响。

CD-TK和HSV-TK两种自杀基因体系对前列腺癌细胞的杀伤作用

背景与目的:自杀基因治疗是一种有前景的基因治疗方法,本实验通过观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplexvirus-thymidinekinase,HSV-TK)和CD-TK两种自杀基因体系对前列腺癌细胞PC-3m的杀伤效果,探讨该基因治疗在前列腺癌治疗中的应用价值。方法:应用逆转录病毒载体将HSV-TK基因和CD-TK融合基因分别转染PC-3m细胞,经RT-PCR鉴定后,MTT法检测丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)、5-氟胞嘧啶(5-flucytosine,5-FC)前体药物单一或联合应用对转染后PC-3m细胞的杀伤作用,以未转染的PC-3m细胞作对照。结果:GCV对转染后PC-3m细胞有较强的细胞毒作用,半数抑制浓度为8.34μg/ml,但旁观者效应不明显;5-Fc则有显著旁观者效应,当混育细胞中转染细胞比例是5%时即可出现;联合用药具有协同作用,两药相互作用指数小于1.0。结论:CD-TK自杀基因体系对前列腺癌细胞具有显著杀伤作用,明显优于单用HSV-TK基因体系,深入研究意义较大。

10-羟基喜树碱对人膀胱癌细胞系杀伤作用的机理研究

１０－羟基喜树碱对人膀胱癌细胞系杀伤作用的机理研究夏溟臧美孚中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院泌尿外科（北京市１００７３０）１０－羟基喜树碱（１０－Ｈｙｄｒｏｘｙｌｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｅ，ＨＣＰＴ）是从我国特有的喜树（珙垌科植物）中分离的...

超声激活血卟啉对SW-480癌细胞的杀伤作用

采用1.1MHz,0.9W/cm2低强度超声,结合血卟啉对体外培养的人肿瘤细胞SW-480进行声照处理,通过噻唑蓝(MTT)法、PI,HO双荧光染色等方法,根据癌细胞形态结构和功能的变化,探讨超声激活血卟啉对肿瘤细胞的杀伤作用。结果表明:血卟啉对癌细胞无明显的损伤,超声加血卟啉处理30s是引起SW-480细胞受损的敏感位点,90s为杀伤癌细胞的优选时间段;杀伤作用呈癌细胞显微结构逐步破坏的变化,并随声照时间的延长而加剧;声照时间在30s至90s区间细胞具有明显凋亡特征,提示超声激活血卟啉杀伤癌细胞机制中可能存在诱导肿瘤细胞凋亡的作用。

CD/5-FC系统对结肠癌细胞的杀伤作用

目的:探讨组织特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosinedeaminase,CD)/5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)系统对不同分泌癌胚抗原(carcinoembryonicantigen,CEA)的大肠癌细胞LoVo和SW480的靶向杀伤作用.方法:脂质体法将CEA基因顺式转录调控序列(TRS)驱动CD基因的组织特异性逆转录病毒载体G1CEACDNa及非组织特异性逆转录病毒载体pCD2分别转导入大肠癌细胞LoVo和SW480,以G418筛选阳性克隆扩增后给予前药5-FC进行敏感试验.结果:LoVo-CEACD及LoVo-CD比LoVo对5-FC的敏感性明显提高(P<0.01,t=5.688,n=9;P<0.01,t=3.136,n=9),SW480-CEACD及SW480-CD比SW480对5-FC的敏感性明显提高(P<0.01,t=3.437,n=9;P<0.01,t=3.516,n=9),LoVo-CEACD比LoVo-CD对5-FC的敏感性明显增强(P<0.05,t=2.183,n=9),而SW480-CEACD对5-FC的敏感性小于SW480-CD,SW480-CEACD对前药5-FC的敏感性低于LoVo-CEACD(P<0.05,t=2.504,n=9),转CD基因之LoVo和SW480细胞体外实验均可观察到明显的旁观者效应.结论:组织特异性CD/5-FC系统对LoVo和SW480细胞均有明显的靶向杀伤效果,但对SW480细胞的杀伤作用小于LoVo细胞.

光动力对金黄色葡萄球菌的杀伤作用及其AFM观察

通过细菌菌落计数以及原子力显微镜图像研究了血啉甲醚对金黄色葡萄球菌的光动力杀伤作用。结果表明:HMME在金黄色葡萄球菌菌液中的最强吸收峰为392nm,溴钨灯光源波长范围350～2500nm,能满足HMME所需的波长;HMME浓度为5μg/mL接受溴钨灯光源光照30min能杀死82.2%的金黄色葡萄球菌;原子力显微镜图像显示其灭菌机制是HMME在光照条件下导致菌体破裂,细胞内容物大量外泄;无光照条件下,HMME对金黄色葡萄球菌杀伤效果不显著。

新城疫病毒对癌细胞的杀伤作用

目的 探讨新城疫病毒NDV对癌细胞的直接杀伤作用。方法 将NDV与各组细胞的混悬液一起加入细胞培养板中三孔法 ,同时设不加NDV的对照孔 ,经 8、16、2 4、36和 48小时五个时相观测细胞生长情况和病毒复制情况。结果 成纤维细胞和对照组细胞生长良好 ,而实验孔的各组癌细胞逐渐减少 ,出现融合、裂解。 48小时癌细胞组的上清液病毒效价较高而成纤维细胞的上清液病毒效价为 0。结论 NDV对癌细胞有较强的亲和力 ,可在癌细胞内大量复制 ,具有直接杀伤癌细胞的作用 。

低强度超声激活血卟啉对S180细胞的杀伤作用

为探讨低强度超声激活血卟啉对在体 S1 80肉瘤细胞的杀伤作用 ,对荷瘤小鼠采用声动力疗法处理 ,分别从癌组织生长状况、显微结构及超微结构等方面进行研究。结果表明 :超声激活血卟啉对肿瘤生长的抑制作用明显大于其他实验组 ,癌细胞在处理后的不同时间段 。

gp96多肽复合物介导的细胞毒性T淋巴细胞对食管腺癌细胞的免疫杀伤作用

目的 :研究肿瘤细胞来源的gp96多肽复合物介导的对同一类型肿瘤的免疫治疗作用。方法 :提取纯化食管腺癌细胞系SEG 1裸鼠成瘤组织的gp96蛋白多肽复合物 ,与外周血单个核细胞 (PBMNC)诱导培养的树突状细胞(DC)结合 ,制备gp96 DC疫苗 ;台盼蓝拒染法测定淋巴细胞增殖率 ;ELISA方法检测细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)培养上清液的γ干扰素 (IFN γ)含量 ,MTT法检测CTL对靶细胞SEG 1的杀伤率。结果 :5 5g瘤组织提取纯化gp96蛋白12 0 μg ;单独DC、单独gp96及gp96 DC均能刺激淋巴细胞增殖 ,产生CTL ,释放IFN γ ,对靶细胞SEG 1均显示一定的杀伤作用 ,以gp96 DC的作用最明显 ,在效靶比 4 0∶1时 ,杀伤率为 6 8%。单独DC诱导的CTL对SEG 1、K5 6 2的杀伤作用与非抗原刺激的淋巴细胞比较 ,统计学差异无显著性。结论 :肿瘤来源的热休克蛋白gp96可使DC具有更强的刺激T淋巴细胞增殖的能力 ,所产生的CTL对靶肿瘤细胞有明显的特异杀伤作用。

激活的脐血树突状细胞对肿瘤细胞的直接杀伤作用

探索脐血树突状细胞 (DC)在γ干扰素 (IFN γ )及细菌脂多糖 (LPS )激活前后对肿瘤细胞杀伤活性的差异。分离健康脐血单核细胞 ,用重组粒单细胞集落刺激因子 (GM CSF )、白介素 4 (IL 4 )和α肿瘤坏死因子α (TNF α )诱导为DC。于诱导第11天在合成培养基中加入LPS或IFN γ继续培养 12h ,将其激活。用流式细胞仪检测DC表面共刺激分子的改变 ,以明确LPS或IFN γ对DC的不同刺激作用 ;同时 ,以恶性血液病细胞株Jurkat及Daudi为靶细胞 ,以不同效靶比 (E∶T )与DC共同培养 18h ,采用51Cr释放试验检测DC激活前后抗肿瘤活性的差异。结果 (1)LPS及IFN γ可不同程度地上调DC表面CD86、CD80、CD83及CD1a的表达 ,尤以LPS刺激组明显 ;(2 )DC在未加刺激因子前能有效杀伤Jurkat细胞 ,在效靶比为 2 0∶1时 ,LPS或IFN γ可使其杀伤活性进一步提高至 5 0 0 %、 36 9% ,均与未加刺激因子前有显著差异 (P <0 0 0 1,P <0 0 2 5 ) ;(3)在效靶比为 2 0∶1时 ,LPS可使DC对Daudi的杀伤率提高至 19 8% (P <0 0 2 5 ) ,而未加刺激因子组及IFN γ刺激组DC对Daudi在任何效靶比均未显示明显的杀伤作用。LPS或IFN

慢病毒携带的双自杀基因对淋巴瘤细胞杀伤作用的实验研究

背景与目的:慢病毒载体具有可感染非分裂细胞、目的基因整合至靶细胞基因组长期表达、免疫原性低等优点,适于体内基因治疗。本研究探讨慢病毒介导的双自杀基因对淋巴瘤细胞Raji的杀伤作用。方法:将表达慢病毒的3种质粒,即包装结构基因质粒pCMVΔ8.2、包膜基因质粒pCMV.VSVG、目的基因质粒pHR'CS.GFP或pHR'CS.CDglytk分两组(pHR'CS.Cdglytk为实验组、pHR'CS.GFP为对照组),经脂质体导入病毒包装细胞293T,包装成病毒后,收集病毒上清,浓缩后转染Raji细胞,用荧光显微镜及RT-PCR检测基因的表达。给予前体药物5-氟胞嘧啶(5-FC)和/或无环鸟苷(GCV),用MTT法测定Raji细胞的生长抑制率,检测CD和HSV-tk双自杀基因对Raji细胞的作用。结果:表达慢病毒的3种质粒可高效转染入293T细胞。荧光显微镜下观察可见大量的绿色荧光,透射电镜下观察可见富集的病毒颗粒。慢病毒介导的双自杀基因在Raji细胞中高效、稳定表达。单独使用GCV或5-FC对细胞的生长抑制率分别为51%、50%,与未转染组Raji细胞比较,差异有显著性(P<0.01);联合使用5-FC和GCV对细胞的生长抑制率为73%,明显高于单独使用5-FC或GCV(P<0.01)。结论:慢病毒介导的双自杀基因可高效稳定转染淋巴瘤细胞;双自杀基因系统较单一自杀基因系统(CD/5-FC或HSVtk/GCV)对淋巴瘤细?

重组腺病毒-胸苷激酶基因对多种肿瘤细胞的杀伤作用

背景与目的:以腺病毒为载体的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(adenovirusvector-mediatedherpessimplexvirus-thymidinekinasegene,ADV-TK)重组体是肿瘤基因治疗应用的主要方法之一,本文旨在鉴定自行构建的ADV-TK重组体的体外抗肿瘤活性。方法:利用腺病毒载体将TK导入体外培养的14种不同组织源性的肿瘤细胞,再加入更昔洛韦(ganciclovir,GCV),用MTT法观察对肿瘤细胞的抑制效应。结果:ADV-TK剂量为每孔1×109病毒颗粒,在100μg/mlGCV底物浓度条件下,它对14种肿瘤细胞中的11种杀伤率达74%以上,而对人喉上皮癌细胞Hep-2、人肝癌细胞Bel-7402和人结肠癌细胞HCT-8敏感性稍差,分别为(55.3±2.0)%、(61.3±2.0)%和(63.7±2.5)%,ADV-TK对肿瘤细胞的抑制率除人喉上皮癌细胞Hep-2外,与相当于组织峰值药物浓度(5μg/ml)的化疗药物顺铂的效率相近。结论:ADV-TK重组体具有明确的体外抗肿瘤活性,有潜在临床应用价值。

低能超声对人肺癌细胞的体外杀伤作用

目的 探讨低能超声对人肺癌细胞的影响。方法 用低能量连续波超声处理小细胞肺癌细胞系SM、腺癌细胞系A2 及人肺纤维母细胞FB ,用胎盘蓝染料排斥试验及克隆存活试验判定效果。结果 低能量 ( 0 .8W /cm2 )超声 3分钟对各种人肺癌细胞及人肺纤维母细胞有杀伤作用 (P <0 .0 5 ) ,10分钟可杀死全部细胞 (P <0 .0 0 1)。细胞浓度越高 ,杀伤作用越低。超声 10分钟后含细胞悬液的试管内温度未见显著上升。声强 0 .8W /cm2 的超声使阿霉素对肺癌细胞SM的杀伤作用增加 10 0倍 (P <0 .0 0 1)。结论 低能连续波超声可杀伤肺癌细胞 ,并能显著增加阿霉素对肺癌细胞的细胞毒性。

紫杉醇脂质体对子宫内膜癌Ishikawa细胞的体外杀伤作用

目的探讨注射用紫杉醇脂质体对人子宫内膜癌细胞系的体外杀伤作用。方法以不同浓度含紫杉醇脂质体的培养基作用于人子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞，并设对照（普通培养基），通过MTT、倒置显微镜观察细胞增殖状况及形态，流式细胞分析技术检测该药对细胞生长的影响。结果经不同浓度紫杉醇脂质体作用24～96h，细胞存活率显著下降（P〈0．05）；镜下观察显示部分细胞皱缩变形，崩解坏死，细胞脱壁悬浮；流式细胞术结果显示细胞凋亡率逐渐增加，细胞周期各时相中，S期比例减少。结论紫杉醇脂质体可抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的生长。