中国健康成人外周血自然杀伤细胞及其亚群的正常值范围流式细胞学分析

目的:研究中国健康人外周血中自然杀伤(natural killer, NK)细胞及其亚群的比例和数量,初步确定其正常值范围作为临床检验的参考数值。方法:选取200例健康成年人,年龄范围为18~87岁,所有受试者被分成6个年龄组:18~30、31~40、41~50、51~60、61~70、71~87岁,收集外周血,以CD16、CD56、CD3、CD19等作为表面标记,使用流式细胞术检测NK细胞及亚群的相对比例及绝对计数。采用SPSS 27.0软件分析数据,计量资料用均数±标准差表示,同时进行t检验、方差分析或秩和检验比较各年龄组和性别组的差异,检验水准α=0.05,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:200例健康成人受试者CD3^(-)CD56^(+)NK细胞的范围为(13.14±7.56)×10^(6)/L,CD56^(dim)CD16^(+)NK细胞的范围为(5.23±3.12)×10^(6)/L,CD56^(bright)NK细胞的范围为(85.61±7.40)×10^(6)/L,NK T细胞的范围为(4.16±3.34)×10^(6)/L,NK B细胞的范围为(0.46±0.24)×10^(6)/L。CD3^(-)CD56^(+)NK和NK T细胞在和年龄的相关性方面差异无统计学意义(P=0.417,P=0.217);随着年龄的增长,NK B和CD56^(dim)CD16~+NK细胞的数量有一定的下降趋势(r=0.234,P<0.001;r=0.099,P<0.001),尤其是在50岁以后更加明显;CD56^(bright)NK则随着年龄增长有上升趋势(r=0.143,P<0.001)。结论:NK细胞及其亚群的检测对于自身免疫病、感染性疾病和肿瘤的诊断、治疗和预后分析具有重要参考价值;本研究为临床检测NK细胞亚群提供了初步的参考范围,但尚需扩大例数,进行多中心试验以进一步明确。

自然杀伤细胞2组成员A、程序性死亡因子配体1表达检测对PD-L1阻断免疫治疗肌层浸润性膀胱癌反应性的预测价值

目的:探究自然杀伤细胞2组成员A(NKG2A)及程序性死亡因子配体1(PD-L1)表达检测对PD-L1阻断免疫治疗肌层浸润性膀胱癌反应性的预测价值。方法:选取100例肌层浸润性膀胱癌患者作为研究对象,对其行PD-L1阻断免疫治疗后,根据治疗反应性将其分为缓解组和未缓解组;对缓解组患者随访3个月,将其分为复发组和未复发组。比较两组患者NKG2A和PD-L1在CD4^(+)和CD8^(+)上的表达水平,采用ROC曲线分析NKG2A和PD-L1预测膀胱癌患者治疗反应性的价值。结果:100例研究对象中,缓解组患者72例(72.00%),未缓解组患者28例(28.00%),两组性别、年龄比较无统计学差异(均P>0.05),但缓解组患者肿瘤直径小于未缓解组,NKG2A、PD-L1/CD4^(+)和PD-L1/CD8^(+)表达水平均低于未缓解组(均P<0.05)。膀胱癌患者NKG2A、PD-L1/CD4^(+)和PD-L1/CD8^(+)表达预测免疫治疗后缓解的AUC值分别为0.771、0.724、0.710;联合诊断的AUC为0.836。72例缓解患者中,出现复发29例(40.28%),未出现复发43例(59.72%),两组性别、年龄以及肿瘤直径比较无统计学差异(均P>0.05),但复发组NKG2A、PD-L1/CD4^(+)和PD-L1/CD8^(+)表达水平均高于未复发组(均P<0.05)。NKG2A、PD-L1/CD4^(+)和PD-L1/CD8^(+)表达预测膀胱癌患者缓解后复发的AUC值分别为0.775、0.740、0.728;联合诊断的AUC为0.874。结论:NKG2A、PD-L1/CD4^(+)和PD-L1/CD8^(+)在不同治疗反应性肌层浸润性膀胱癌患者外周血中表达水平不同,三者对于膀胱癌患者PD-L1阻断免疫治疗反应性均有一定的预测价值,且三者联合预测效能最佳。

侵袭性自然杀伤细胞白血病伴噬血细胞综合征1例

患儿,男,14岁,因反复咳嗽、咳痰1月余,加重伴发热2 d入院。入院后呼吸急促,经皮血氧饱和度明显减低,急诊胸部CT平扫示双肺大片状渗出、实变影,立即行气管插管、有创呼吸机辅助通气,积极对症治疗后,病情好转。入院第10天患儿再次发热,辅助检查示EB病毒阳性及支原体抗体IgM阳性、全血细胞减少、甘油三酯升高、纤维蛋白原降低、铁蛋白和可溶性CD25水平明显升高,确诊为噬血细胞综合征。完善骨髓穿刺可见不典型淋巴细胞,依据患儿的临床表现及流式细胞术免疫表型高度考虑侵袭性自然杀伤细胞白血病。因此,当患儿出现严重感染合并全血细胞减少,病情进展快时,应警惕噬血细胞综合征,同时需排查血液系统恶性肿瘤,及早行骨髓穿刺检查,尽早明确诊断,及时治疗。

全反式维甲酸对肝纤维化氧化应激损伤自然杀伤细胞的保护作用

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对肝纤维化氧化应激损伤NK细胞功能的保护作用。方法:采用CCl_(4)制备肝纤维化小鼠模型,通过生化及病理检测评价小鼠肝脏受损及纤维化程度,观察小鼠肝组织NK细胞变化及氧化应激损伤;体外采用H_(2)O_(2)诱导的NK92细胞株氧化应激损伤模型评价ATRA对NK92细胞的保护作用。结果:ATRA可以改善CCl_(4)模型小鼠肝功能,抑制肝脏炎症及纤维化,增加肝脏SOD活性和GSH含量,促进肝内NK细胞比例和数量;体外实验证实ATRA可以保护H_(2)O_(2)诱导的NK细胞氧化损伤及凋亡。结论:ATRA可以改善CCl_(4)引起的肝损伤及纤维化,可能与其保护NK细胞氧化应激损伤有关。

细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的基础与临床研究新进展

随着肿瘤对人类生存健康的威胁日益严重,应对肿瘤的治疗模式也发生着日新月异的变化,各种肿瘤治疗的新药物、新技术、新方法层出不穷,其中细胞生物治疗已经初露锋芒,成为肿瘤生物治疗中重要的发展方向。继淋巴因子激活杀伤细胞 （LAK）、肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）及CD3单抗激活的杀伤细胞（CD3AK）后，细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine—induced killer，CIK）的杀瘤作用日益受到重视。

肿瘤浸润性自然杀伤细胞在免疫治疗中的研究进展

自然杀伤(NK)细胞是一种具有强大细胞毒性和活性的先天淋巴细胞。基于NK细胞的免疫疗法在血液系统肿瘤的治疗中取得显著疗效,但在实体恶性肿瘤的治疗中疗效较低。该文就NK细胞的功能、表型及其肿瘤免疫治疗的研究进展作一综述。

动脉灌注化疗联合细胞因子诱导杀伤细胞治疗晚期卵巢癌疗效及对患者血清癌胚抗原、糖类抗原125、可溶性B7-H4蛋白水平的影响

目的:探讨卵巢癌动脉灌注化疗联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)治疗晚期卵巢癌疗效及对患者血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、可溶性B7-H4蛋白(sB7-H4)水平的影响。方法:选择103例晚期卵巢癌患者,随机分为两组,对照组(n=52)行动脉灌注化疗,观察组(n=51)行动脉灌注化疗联合CIK治疗。评价两组患者治疗效果,比较治疗前后卵巢血流参数指标搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、收缩期峰值流速(PSV)变化及血清癌胚抗原CEA、CA125、sB7-H4水平变化,随访3年,记录两组患者3年生存率。结果:观察组总有效率88.23%高于对照组的61.54%(P<0.05)。治疗后观察组PI、RI值较对照组升高,RSV值较对照组降低(均P<0.05)。治疗后观察组血清CEA、CA125、sB7-H4水平低于对照组(均P<0.05)。观察组3年生存率为78.43%高于对照组3年生存率为57.69%(P<0.05)。结论:卵巢癌患者行髂内动脉灌注化疗联合CIK治疗是一种安全、有效的治疗手段,但对于化疗中药物的使用及剂量大小仍需进一步研究,以确定选择最优药物和制定最佳治疗方案。

中医药调控自然杀伤细胞防治肺癌转移的研究进展

综述固有免疫紊乱与肺癌转移的关系,自然杀伤(NK)细胞的肿瘤免疫机制,以及靶向NK细胞防治肺癌转移的临床应用策略。中药单体、中药复方以及中医外治方法通过多层次、多途径和多靶点的作用机制,可有效调节免疫功能,抑制肿瘤细胞的增殖与转移。

机械通气诱导自然杀伤细胞功能耗竭研究

目的机械通气(MV)是临床上常用的代替人体自主通气的医疗手段。MV可导致呼吸机引起的肺损伤(VILI)和呼吸机相关性肺炎(VAP),引起约11.11%的患者死亡。研究VILI和VAP的分子机制,对于安全使用呼吸机,减轻不良反应和减少死亡具有重要意义。自然杀伤(NK)细胞是人体重要的先天免疫细胞,可有效浸润至肺组织,发挥天然免疫作用并引发适应性免疫应答。为揭示机械通气引起的机械损伤导致免疫失调的潜在机制,作者针对MV患者的NK细胞的活性与功能开展了研究。方法采集MV患者外周血和肺泡灌洗液(BALF),检测其中NK细胞占比。随后利用柔性基底应变加载系统对人肺上皮细胞进行体外拉伸处理,研究肺上皮细胞来源外泌体的数量变化及对NK细胞功能的影响。结果MV患者外周血中NK细胞数量减少,BALF中NK细胞比例增加;张应变刺激可增加肺上皮细胞外泌体的释放水平。将NK细胞与张应变刺激的肺上皮细胞共培养后发现NK细胞趋化能力上调,促炎因子分泌增加;而细胞毒活性下降。结论张应变刺激使肺上皮细胞通过改变分泌组(secretome)介导NK细胞趋化能力上调,增加至肺部的浸润;并将NK细胞编辑为功能耗竭的表型,影响其清除病变细胞的效率;同时,上调NK细胞对炎症因子的分泌,破坏肺部免疫平衡引起VAP。

结直肠癌中自然杀伤细胞表型及功能初探

目的·初步探究结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者肿瘤组织中免疫微环境的组成,分析自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)在CRC中的比例、表型及功能特征。方法·收集CRC患者肿瘤组织及配对的癌旁组织和匹配的CRC患者外周血样本,消化组织制备成单细胞悬液,使用流式细胞术检测各类免疫细胞比例,通过t-SNE(t-distributed stochastic neighbor embedding)降维与统计学分析,描述CRC肿瘤免疫微环境的特征。运用流式细胞术检测肿瘤组织和癌旁组织中NK细胞表面活化分子的表达情况,包括CD16、CD27、CD69、晚期活化标志人类白细胞抗原-DR(human leukocyte antigen-DR,HLA-DR)、细胞耗竭标志T细胞免疫球蛋白与黏蛋白结构域3(T cell immunoglobulin domain and mucin domain-3,TIM-3)。运用流式细胞术探究CD38分子在NK细胞上的表达水平,描述CD38highNK细胞的表型特征。利用细胞刺激试剂盒激活NK细胞,通过流式细胞术胞内染色检测NK细胞的功能,包括细胞因子γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)的表达水平。结果·收集25例CRC患者肿瘤组织及配对的癌旁组织和15例匹配的CRC患者外周血样本。CRC肿瘤组织中包含T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞及髓系细胞等免疫细胞。与癌旁组织相比,肿瘤组织中T淋巴细胞(P=0.000)和髓系细胞(P=0.026)的比例显著升高,NK细胞(P=0.007)的比例显著降低,B淋巴细胞比例差异无统计学意义。与癌旁组织相比,肿瘤组织中NK细胞表面CD27(P=0.000)、CD69(P=0.001)表达水平显著降低,同时CD16(P=0.008)、HLA-DR(P=0.000)和TIM-3(P=0.024)的表达水平显著升高,呈现晚期活化和耗竭表型。NK细胞按CD38的表达水平可分为CD38highNK和CD38lowNK 2个亚群。与癌旁组织相比,肿瘤组织CD38highNK(P=0.003)比例显著降低,CD38lowNK比例差异无统计学意义。相比CD38lowNK,CD38highNK的CD27高表达,CD16、NKp46、CD57、CD94、HLA-DR和CD158a低表达(均P=0.000),处于早期分化和未活化的状态。肿瘤浸润的NK细胞与癌旁组织相比,分泌细胞因子IFN-γ(P=0.032)、TNF-α(P=0.042)和GM-CSF(P=0.019)的水平显著降低,表明NK细胞杀伤功能受损。结论·CRC患者肿瘤组织中NK细胞浸润减少,早期分化状态的CD38highNK细胞亚群下降,分泌细胞因子的能力下降并呈现耗竭表型。这些结果提示NK细胞在CRC中功能受损,介导的抗肿瘤免疫应答下降。

低氧预适应对小鼠自然杀伤细胞活性的影响

目的:探讨低氧预适应(hypoxic preconditioning,HPC)条件下对小鼠自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)杀伤活性与功能的影响。方法:将小鼠分对照组(A组)、急性低氧组(B组)和HPC组(C组)3组,通过MTT比色法分别检测3组小鼠NK细胞的杀伤活性,通过EILSA检测NK细胞分泌干扰素-γ,Real-time PCR检测穿孔素、颗粒酶的表达量,并采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析。结果:低氧预适应组与急性低氧组相比NK杀伤力较强(P<0.05),其中12 h时NK细胞活性明显增强(P<0.05)。小鼠NK细胞分泌IFN-γ从4 h到16 h均逐渐下降(P<0.05),显示低氧预适应组随着时间的延长较低氧组更能适应低氧;HPC组与B组相比低氧损伤减轻,分泌穿孔素、颗粒酶表达多于低氧组(P<0.05)。结论:初步确定NK细胞在HPC与低氧组相比,NK细胞杀伤功能有所恢复;IFN-γ、穿孔素、颗粒酶蛋白的分泌量均有所升高。

卵巢癌免疫逃逸过程中自然杀伤细胞功能与机制的研究进展

卵巢癌的肿瘤微环境能通过多种途径抑制免疫细胞,促进卵巢癌细胞的免疫逃逸,最终导致卵巢癌的高转移和高复发。手术和铂类-紫杉醇类联合化疗是卵巢癌的一线治疗,但约70%的患者会经历复发,因此迫切需要新的治疗手段来为患者提供新的治疗选择。自然杀伤(NK)细胞是天然免疫系统的重要组成部分,其抗肿瘤功能的激活主要依赖于表面激活性受体和抑制性受体信号间的平衡,但是在卵巢癌的肿瘤微环境中NK细胞的抗肿瘤功能被显著抑制。本文重点分析了卵巢癌免疫逃逸过程中NK细胞功能改变的分子机制和相关治疗进展,以寻求解除NK细胞免疫抑制、改善卵巢癌患者预后的有效策略。

子宫自然杀伤细胞在复发性流产中的研究进展

复发性流产(RSA)是一种早期妊娠并发症,其病因复杂,包括遗传、内分泌、解剖异常、感染和免疫等因素。其中,T淋巴细胞、树突状细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)等免疫因子在RSA发生发展中的作用受到广泛关注,尤其是NK细胞,是人体免疫系统的重要组成部分。子宫NK细胞(uNK细胞)是着床时子宫内膜中数量最多的免疫细胞,在妊娠早期蜕膜血管生成、滋养层侵袭和胎盘螺旋动脉重塑中发挥重要作用。随着研究的进展,了解uNK细胞的起源、分类、功能及与RSA的关系可能为RSA的治疗和预防提供靶点。

反复种植失败患者种植窗期子宫自然杀伤细胞功能相关参数的分析及其临床意义

目的 探究种植窗期子宫自然杀伤(uNK)细胞的发育和功能状况与不明原因反复种植失败(RIF)的关联。方法 收集2021年9月至2023年8月在石家庄市第四医院生殖医学中心行IVF-ET助孕的61例患者的临床数据及其黄体中期内膜样本,根据移植周期结果分为RIF组(种植失败≥3个周期,n=39)和对照组(助孕1个周期即获得临床妊娠,n=22)。采用免疫组织化学(IHC)法检测uNK细胞并计算百分比,采用逆转录多聚合酶链式反应(RT-PCR)测定子宫内膜白介素15(IL-15)、成纤维细胞生长因子诱导分子14(Fn-14)、白介素18(IL-18)及肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)的mRNA水平,并计算IL-15/Fn-14 mRNA和IL-18/TWEAK mRNA比值,比较两组患者的一般资料和妊娠结局,分析uNK细胞功能参数间的差异。结果 RIF组和对照组间的年龄、体质量指数(BMI)、基础窦卵泡数(AFC)、移植日内膜厚度、不孕年限、不孕类型、抗苗勒管激素(AMH)和基础性激素水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。RIF组的移植周期数及胚胎移植数目显著高于对照组(P<0.05);两组间的移植胚胎种类比较无显著性差异(P>0.05)。RT-PCR结果显示,IL-15、Fn-14、IL-18及TWEAK的mRNA水平在两组间无显著差异(P>0.05),但RIF组中的IL-15/Fn-14 mRNA及IL-18/TWEAK mRNA比值均显著高于对照组(P<0.05)。uNK细胞功能分析中,与对照组相比,RIF组黄体中期子宫内膜uNK细胞百分比显著升高(4.0%vs.3.0%,P<0.05),且IL-18/TWEAK mRNA比值紊乱比例显著上升(56.4%vs.45.5%,P<0.05),其中过度激活占51.3%,低激活占5.1%。结论 RIF可能与种植窗期uNK细胞的过度激活和激活不足有关。

自然杀伤细胞在抗肿瘤免疫中的应用

自然杀伤细胞是具有细胞毒性的淋巴样细胞,能够直接和间接发挥抗肿瘤作用。既往研究证明过继自然杀伤细胞治疗肿瘤具有一定的可行、安全及有效性,深入研究自然杀伤细胞过继疗法的抗实体瘤潜力成为现今研究热点之一。本文对当前自然杀伤细胞抗肿瘤免疫及细胞过继疗法中的研究进展作一综述。

蜕膜自然杀伤细胞在胎盘形成过程中作用机制的研究进展

蜕膜自然杀伤(dNK)细胞占妊娠早期蜕膜免疫细胞的70%,是蜕膜中发现的最大的淋巴细胞亚群。在胎盘形成过程中,dNK细胞可以通过多种功能促进绒毛外滋养层细胞(EVTs)迁移到母体子宫并改变其血管,其中EVTs对子宫螺旋动脉的重塑对胎盘形成至关重要;dNK细胞还可以通过其细胞毒性作用防御胎盘感染,进而保证胎儿的健康生长和发育。本文就dNK细胞在胎盘形成过程中作用机制的最新研究进展进行简要总结,希望为日后的临床诊断和治疗提供理论依据。

诱导多能干细胞来源自然杀伤细胞的生物学特性

目的:利用诱导多能干细胞(iPSCs)建立体外扩增分化体系并进一步诱导分化为自然杀伤(NK)细胞。探讨iPSCs来源分化体系诱导分化来的NK细胞的生物学特性。方法:获取iPSCs,通过流式细胞术检测细胞分化功能的水平。结果:iPSCs经扩增和筛选,最后获得了可稳定未分化增殖的iPSCs,利用iPSCs成功分化NK细胞。结论:利用iPSC源分化体系成功在体外诱导出NK细胞,可产生大于90%CD45^(+)CD56^(+)细胞,有统计学差异(P<0.05)。NK细胞分化基本完全完成。其免疫表型的比例差异提示iPSCs-NK细胞具有不同的生物学特性。

流体剪切力通过NKG2D促进自然杀伤细胞对循环肿瘤细胞的胞毒性

目的肿瘤细胞主要通过血液循环系统进行转移。在血管中,自然杀伤细胞(NK细胞)是负责杀伤循环肿瘤细胞的主要免疫细胞,而血流剪切力这一循环系统特有的力学因素对NK细胞杀伤循环肿瘤细胞的影响尚不清楚。方法本研究利用体外循环系统模拟血流剪切微环境,在NK细胞和乳腺癌肿瘤细胞进行共培养时探究流体剪切力对NK细胞胞毒性的影响以及NK细胞感知流体剪切力的方式。结果研究发现,流体剪切力通过促进颗粒酶的释放增强NK细胞的胞毒性。NK细胞通过膜受体NKG2D感知流体剪切力,进而促进NK细胞的活化和脱颗粒。进一步的研究发现,逃逸NK细胞杀伤的肿瘤细胞表现出独特的器官转移偏好性。这种偏好性依赖于膜张力改变引起的下游信号通路的启动,从而促进了相关转移基因的表达。结论流体剪切力通过作用于NK细胞表面膜受体NKG2D促进其活化和对肿瘤细胞胞毒性,抑制肿瘤细胞通过循环系统进行转移。

自然杀伤细胞及其免疫激活对防治新型冠状病毒感染机遇与挑战

新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)是由严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)引起的急性传染病。SARS-CoV-2新变异株不断出现,且COVID-19在全世界范围内仍然处于散发和流行状态,亟需研发一种新的、高效的治疗性药物或疫苗。自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)可直接杀伤被病毒感染的靶细胞,其分泌的细胞因子发挥的免疫调节功能在炎症反应中发挥着重要作用,目前回输NK细胞治疗感染性疾病的安全性和有效性已经得到证实。NK细胞有望成为防治COVID-19非常有潜力的新型药物。本文通过对NK细胞及其免疫激活在COVID-19中的作用进行综述,以寻求防治COVID-19的新思路。

嵌合抗原受体自然杀伤细胞疗法研究进展及展望

自然杀伤(NK)细胞是先天免疫系统的主要组成部分。基于其对肿瘤细胞的有效杀伤能力和对健康细胞的良好耐受性,NK细胞已成功地用于过继细胞疗法以治疗肿瘤患者。近年来,嵌合抗原受体(CAR)-T细胞的临床成功,证明了基因修饰的免疫细胞在抗肿瘤领域的巨大潜力。NK细胞凭借优越的低免疫原性也迅速成为基于CAR修饰疗法的新型免疫工具细胞。目前已经开展的多项临床试验中,多种来源的CAR-NK细胞均展现出较为优越的治疗效果和安全性,但靶向实体瘤CAR-NK细胞治疗仍处于初始阶段。本文系统梳理了CAR-NK细胞在临床上取得阶段性进展,同时也指出CAR-NK细胞疗法的局限性,旨在为进一步优化和升级CAR-NK细胞疗法提供参考。