禽白血病病毒斑点杂交检测方法的建立

为建立禽白血病病毒(ALV)斑点杂交检测方法,本研究采用RT-PCR技术扩增ALV群特异性p27抗原基因的部分片段,并以纯化的p27PCR产物为模板,合成地高辛标记探针,以此建立了ALV的斑点杂交检测方法。用该方法对4份疑似感染ALV的现地病鸡组织样品和18枚鸡胚进行检测,结果表明所有样品均为阳性,而且与PCR检测结果的符合率达到100%。该方法具有良好的特异性和敏感性,适应于ALV临床大规模检测。

铜绿假单胞菌oprI基因的反向斑点杂交检测法

目的建立一种早期快速检测铜绿假单胞菌的方法。方法根据铜绿假单胞菌特异的oprI基因设计引物,聚合酶链反应合成特异探针,光敏生物素标记细菌DNA,应用反向斑点杂交法检测铜绿假单胞菌。结果所合成的探针具有高度特异性,能鉴别铜绿假单胞菌,与其他细菌、病毒、真菌间无交叉反应。该方法能检测出100 ng细菌DNA。结论反向斑点杂交法具有快速、特异的优点,对铜绿假单胞菌的早期检测具有重要意义。

食管鳞癌人乳头状瘤病毒感染的原位杂交检测和观察

目的 :检测食管鳞癌中人乳头状瘤病毒 (HPV)的感染情况 ,探讨 HPV与食管癌发病的关系。方法 :用原位杂交技术及免疫组化方法对 33例食管鳞癌手术切除标本进行 HPV检测。结果 :用原位杂交方法检测食管鳞癌中 HPV DNA检出率为 4 5 .5 % (15 / 33)。HPV DNA阳性与食管鳞癌肿瘤细胞的分化程度无关 (P>0 .0 5 )。HPV衣壳蛋白的免疫组化检测均为阴性。结论 :HPV感染可能是引起食管上皮癌变的原因之一 ,与食管鳞癌的发生有关。即使在存在 HPV DNA的病例中 。

黏液性脂肪肉瘤中TLS-CHOP融合基因原位杂交检测研究

脂肪肉瘤是软组织中常见的恶性肿瘤，占软组织肉瘤的9．8％～16．0％，是软组织肿瘤中发病率较高的恶性肿瘤。瘤组织由分化各个阶段的不同异型程度的脂肪母细胞及原始间叶细胞组成。2002年版世界卫生组织（WHO）软组织肿瘤组织学分类中，根据组织学形态以及肿瘤的免疫组织化学、细胞和分子遗传学特征进行分型，将脂肪肉瘤分为3个亚型：即分化良好型和非典型性脂肪肉瘤、

转基因油菜地高辛标记DNA探针杂交检测方法的建立

通过PCR扩增法制备转基因油菜外源筛选基因FMV35S启动子的DIG-11-dUTP标记DNA探针,与该基因PCR扩增产物进行Southern杂交,通过显色反应对商品化转基因油菜进行检测。本研究对反应基片带正电荷的尼龙膜和硝酸纤维素膜进行了比较,并比较了不同固定条件和杂交条件下的杂交结果。尼龙膜较之硝酸纤维素膜可更好的结合DNA片段,经紫外线照射交联5 分钟,与含甲酰胺的杂交液在45℃杂交30 min结果较为理想。

原位核酸杂交检测膀胱癌中结核菌L型DNA的意义

目的 探讨结核菌L型DNA表达在膀胱移行细胞癌发生与发展中的意义。方法 改良抗酸 (IK)染色和免疫组化染色 (S P法 )检测 6 8例膀胱癌组织中抗酸菌L型和结核菌抗原 ;原位核酸杂交 (ISH)检测 2 0例膀胱癌细胞内结核菌L型DNA。结果 抗酸菌L型阳性率 35 .2 % ,结核菌抗体 (BCG)阳性表达率 36 .7%。 4 0 %膀胱癌细胞内有结核菌L型DNA阳性信号 ,膀胱癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级阳性表达率分别为 2 0 %、30 %、80 % (P <0 .0 5 ) ,随着膀胱癌级别的增加 ,结核菌L型感染率显著增高。改良抗酸 (IK)染色、免疫组化染色和原位核酸杂交结果具有一致性。结论 膀胱癌中常伴有结核L型感染 ,结核菌L型DNA可进入膀胱移行细胞内 ,引起细胞增生和癌变 ,提示结核菌L型感染在膀胱癌发生、发展中起重要作用。

多色荧光原位杂交检测尿沉渣诊断膀胱尿路上皮癌的可行性分析

目的研究分析多色荧光原位杂交检测尿沉渣诊断膀胱尿路上皮癌的可行性。方法选取膀胱尿路上皮癌患者30例,纳入对照组。选取30例正常人,纳入观察组。2组均进行荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridiza-tion,FISH)检测尿沉渣,统计并分析染色体畸变情况。结果观察组与对照组3、7、17、9p21染色体畸变数差异有统计学意义(P<0.05)。3探针敏感性为36.67%,7探针敏感性为43.33%,17探针敏感性为40%,9p16探针敏感性为50%,4组合用探针敏感性为70%显著高于单独使用,差异有统计学意义(P<0.05)。结论多色荧光原位杂交检测尿沉渣诊断膀胱尿路上皮癌诊断疗效显著,值得临床广泛推广及应用。

电化学发光分析法在核酸杂交检测和药物筛选中应用

该文简要介绍了电化学发光(ECL)核酸分析法的基本原理,评述了ECL分析法在核酸杂交检测和药物筛选中应用的研究进展。

提高乳腺癌HER2-双色荧光原位杂交检测质量的探讨

化学治疗是乳腺癌术后最重要的治疗方法之一,乳腺癌患者肿瘤HER2扩增对以注射用曲舀珠单抗（赫赛汀）为基础化学治疗的敏感性好,因此,HER2水平的检测对乳腺癌治疗具有重要的指导性意义,不准确的结果会造成不正确的治疗方案,导致患者遭受不必要的化学治疗或者使患者丧失有效的治疗良机.由于乳腺癌HER2-双色荧光原位杂交（FISH）检测存在很多步骤和环节,制作一张高质量的HER2-FISH切片并不是一件容易的事.笔者根据多年的实践经验,总结一些体会,现介绍如下.

RNA－RNA原位杂交检测和定量分析心肌中肠道病毒RNA

ＲＮＡ－ＲＮＡ原位杂交检测和定量分析心肌中肠道病毒ＲＮＡ上海医科大学中山医院上海市心血管病研究所彭天庆，杨英珍本研究以同位素Ｓ标记肠道病毒特异的柯萨奇Ｂ－３病毒（ＣＶＢ３）的负股ＲＮＡ为探针作原位杂交对多种心肌石蜡切片进行肠道病毒ＲＮＡ检测，同时结合...

免疫细胞内β-肾上腺素能受体mRNA的原位杂交检测

目的本研究旨在寻求免疫系统来源的细胞表面存在β-肾上腺素能受体的形态学证据,为进—步研究交感神经系统对免疫系统的调节提供证据。方法采用地高辛未端标记寡核苷酸探针原位杂交技术对淋巴组织的免疫细胞内3种β-肾上腺素能受体mRNA进行了定性检测。结果淋巴组织内存在3种β-肾上腺素能受体的阳性细胞,茁2受体阳性细胞数量较多;在淋巴结内大部分呈弥漫分布,在淋巴组织的淋巴管及小梁、网状支架分布区域有较密集的阳性细胞分布:β3和β1受体阳性细胞数量较少,在淋巴组织内呈弥漫分布,在淋巴组织内分布稀疏。3种β-肾上腺素能受体中β2受体的阳性细胞数量比β1和β3受体的阳性细胞数量多,具有显著的统计学意义(P<0.01),β1和β2受体的阳性细胞数比较无统计学意义(P>0.05)。结论在人类免疫细胞内存在3种β-肾上腺素能受体的mRNA。3种β-肾上腺素能受体亚型在免疫细胞上的分布有差别。

分子杂交检测HBVDNA的研究进展

乙型肝炎是严重危害人类健康的传染病。乙型肝炎病毒(HBV)主要侵犯肝脏,并认为是致癌病毒。此外,HBV 还侵犯许多肝外器官和组织(1—4)。为此,乙型肝炎实验诊断技术的研究日益受到人们的重视。 临床上常以免疫学方法检测HBV标志物,作为体内HBV存在的依据。随着分子生物技术的深入研究,使乙型肝炎病毒核酸诊断探针,在乙型肝炎病毒的检验中得到了广泛的应用。有资料表明,应用分子杂交技术检测血清和肝组织中HBVDNA,对乙型肝炎病毒感染的临床和基础研究,

荧光定量PCR及斑点杂交检测HBV DNA与血清HBV标志物的关系

目的 比较荧光定量PCR和斑点杂交检测血清HBVDNA与血清HBV标志物 (HBVM )的相互关系。方法 采用荧光定量PCR(FQ -PCR)、斑点杂交和酶联免疫吸附法 (ELISA)同时检测 2 13份肝炎患者血清 ,并对结果进行分析比较。结果 2 13份肝炎患者血清中FQ -PCR及斑点杂交法检测HBVDNA阳性数分别为 12 5例、80例 ,阳性检出率分别为 58.7%和 3 7.6% ,2种方法阳性检出率有显著性差异 (P <0 .0 5)。除HBsAg、HBeAg阳性组和HBsAb阳性组FQ -PCR和斑点杂交HBVDNA阳性检出率相同外 ,其余各组FQ -PCRHBVDNA检出率明显高于斑点杂交 (P <0 .0 5) ,HBeAg阳性 2组的 2种方法HBVDNA检出率明显高于HBeAg阴性各组 (P <0 .0 5)。随着FQ -PCR检测HBVDNA拷贝数的增加 ,斑点杂交法阳性检出率也明显增加。结论 FQ -PCR和斑点杂交法检测HBVDNA均可直接反映乙肝患者HBV感染、复制及病程变化 ,而FQ -PCR能真实地反映病毒的负荷量 。