心肌灌注显像对复合杂合子家族性高胆固醇血症患者全因死亡的预测研究

目的评估心肌灌注显像(MPI)对复合杂合子家族性高胆固醇血症(CHFH)患者全因死亡风险的预测价值。方法对经基因检查确诊为CHFH,且在2010年6月至2022年3月于首都医科大学附属北京安贞医院核医学科行负荷+静息MPI检查的患者进行回顾性随访。图像分析采用17节段5分法获得左心室心肌血流灌注参数负荷灌注总积分(SSS)、静息灌注总积分(SRS)、灌注积分差值(SDS)。随访患者全因死亡事件,采用Cox回归方法分析与全因死亡风险有关的预测因子。通过受试者工作特征(ROC)曲线分析预测因子的效能。采用Kaplan-Meier分析和Log-rank检验比较不同组CHFH患者全因死亡发生率的差异。结果45例CHFH患者入选,中位随访时间6(4,9)年。随访期间共11例(24.4%)患者发生全因死亡。左心室心肌血流灌注参数SSS、SRS、SDS在死亡组与存活组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。Cox回归分析显示SRS(风险比=1.362,95%置信区间:1.029~1.802,P=0.031)是与CHFH患者全因死亡风险相关的独立预测因子。ROC分析确定预测患者死亡的最佳截断值为SRS≥2.5分,曲线下面积为0.749。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,SRS≥2.5分组患者全因死亡发生率明显高于SRS<2.5分组患者(Log-rankχ^(2)=14.991,P<0.001)。结论MPI是对CHFH患者进行全因死亡风险评估的重要影像学手段,参数SRS是预测此类患者发生死亡的重要因素。

一个罕见的复合杂合子β地中海贫血家系的遗传学分析

通过对一罕见的复合杂合子β地中海贫血家系进行分析,探索其分子基础与临床表型的关系。先证者常规地中海贫血基因检测结果为IVS-Ⅱ-654(C>T)纯合子突变,血液学表型符合其基因型;先证者母亲常规地中海贫血基因型为β654M/βN,血液学表型符合其基因型;先证者哥哥常规地中海贫血基因型为βN/βN,血液学表型符合其基因型;先证者父亲常规地中海贫血基因型为βN/βN,血液学表型与基因型不相符。由于该家系基因结果不符合孟德尔遗传规律,进一步对先证者父亲及先证者进行了缺失型HPFH基因检测。综合常规地中海贫血基因检测和缺失型HPFH基因检测的结果,先证者父亲及先证者的地中海贫血基因型分别为βSEA-HPFH/βN和βSEA-HPFH/β654M。临床上仍然要重视β地中海贫血表型分析,当表型与基因型不一致时,需要重新检测或采用多种方法联合检测以避免假阴性的发生。

一轮复习时分离定律中杂合子的表现型分析

对分离定律复习的拓展,总体上离不开杂合子表型分析。一对等位基因决定的相对性状中,杂合子表现出什么样的表型,既受基因型控制,同时也受到环境的影响。在一轮复习教学中,可以杂合子的表型为主线,整合相关题目,引导学生进行深度学习。

新型ISSR分子标记鉴别香菇双单杂合子

杂合子的鉴别是香菇杂交育种中的关键步骤,为了快速准确地鉴别香菇双单杂交后代,本研究设计一种基于区分供体亲本双核的新型ISSR分子标记技术,采用该技术对香菇野生双核菌株YX7为供体和菌株808孢子单核体为受体杂交获得的40个杂交菌株进行鉴别,并以传统的显微观察与拮抗试验和传统ISSR分子标记技术为对照。新型ISSR分析结果表明:仅拥有供体菌株YX7一个核的特异性条带的菌株有27个,可判定为杂合子;其余13个菌株均判定为非杂合子,其中有11个菌株同时拥有供体菌株YX7两个核的特异性条带,是菌株YX7自身;有2个菌株不含供体菌株YX7两个核的任何特异性条带,属于菌株808的孢子单核体。与传统显微观察和拮抗试验方法相比,新型ISSR技术鉴定出的杂合子菌株更全面,不仅包含前者鉴定出的全部19个杂合子,还包括其无法判断的菌株6个和错判为非杂合子的菌株2个。新型ISSR技术采用单个引物就可确定全部27个杂合子菌株和13个非杂合子菌株,并能根据导入的供体细胞核类别将杂合子归为2类,而传统ISSR技术需采用4个引物才能鉴别出27个杂合子,并且不能确定剩余13个菌株为非杂合子,也不能对杂合子进行分类。综上,新型ISSR技术能更快速、全面和精准鉴别香菇双单杂交菌株的杂合子和非杂合子,可为香菇杂交选育和遗传分析提供技术支撑。

β-地中海贫血复合缺失型α-地中海贫血双重杂合子的分子检测及血液学分析

本研究对β-地中海贫血复合缺失型α-地中海贫血双重杂合子进行分子检测及血液学表型分析,以了解其检出情况及基因分布状况。采用单管多重gap-PCR技术检测3种常见的缺失型α-地中海贫血基因;采用PCR结合反向点杂交法检测β-珠蛋白基因17个位点的18种突变;进行血细胞常规分析。结果表明:81例β-地中海贫血杂合子中有15例复合缺失型α-地中海贫血,占18.52%。共有9种基因型,包括6例(7.41%)β-地中海贫血杂合子携带α-地中海贫血-1基因(--SEA/αα);8例(9.88%)携带α-地中海贫血-2基因,其中6例(7.41%)为右侧缺失型(-α3.7/αα),2例(2.47%)为左侧缺失型(-α4.2/αα);1例(1.23%)携带缺失型HbH基因(--SEA/-α3.7)。β-地中海贫血复合缺失型α-地中海贫血双重杂合子的各项红细胞参数与单纯β-地中海贫血杂合子比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:梧州市β-地中海贫血复合缺失型α-地中海贫血双重杂合子的发生率很高,而血液学指标缺乏特异性。采用gap-PCR作为临床上地中海贫血筛查的一线方法,可以有效减少β-地中海贫血复合α-地中海贫血双重杂合子漏检的可能,对遗传咨询和准确进行产前诊断具有重要意义。

苯丙酮尿症杂合子高危人群基因型与生化表型相关性

目的:用分子生物学方法对可疑PKU/HPA杂合子进行PAH突变基因分析,以验证生化筛查PKU/HPA杂合子方法的可行性。方法:利用PCR、SSCP和DNA测序等方法对152例已知PKU/HPA杂合子(阳性组)和29例可疑PKU/HPA杂合子(可疑组)的PAH基因部分外显子进行分析。并与健康体检者对照(对照组)结果:152例已知PKU/HPA杂合子中发现26种基因突变,突变检出率为80.9%(123/152)。29例可疑“PKU/HPA杂合子”发现5例突变,检出率为17.2%(5/29)。对照组与可疑PKU/HPA杂合子组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:生化方法与分子生物学方法有一定相关性,提示生化筛查法用作PKU杂合子的初筛是可行的。

G6PD比值法检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变女性杂合子影响因素的研究

目的确定G6PD/6PGD比值法在检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏的女性杂合子时的最佳实验条件,提高对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏的女性杂合子的检出率。方法(1)应用突变特异性扩增系统确定女性杂合子的基因突变型。(2)G6PD/6PGD定量比值法。结果根据试验结果进行统计分析及ROC曲线得出最佳实验条件为孵育温度为37℃,底物浓度为0.78mmol/LG6PNa2及0.195mmol/LNADP+,反应时间为10min。结论G6PD/6PGD比值法在最佳实验条件下,能大大提高对G6PD基因突变女性杂合子的检出率。

采用ROC曲线评价β珠蛋白生成障碍性贫血杂合子血液学指标诊断价值

目的采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价β珠蛋白生成障碍性贫血(β地中海贫血,简称β地贫)杂合子血液学指标,确定平均红细胞体积(MCV)、红细胞脆性(EF)、血红蛋白(Hb)A2及HbF的最佳截断值(cutoff值)。方法以基因诊断结果为金标准,采用ROC曲线分析MCV、EF、HbA2及HbF最佳cutoff值;评价单项及多项指标联合检测的诊断价值。结果与健康对照组比较,β地贫组MCV、EF明显降低,HbA2、HbF明显增高(P<0.05)。HbA2、EF、MCV、HbF的ROC曲线下面积依次为0.989、0.926、0.919、0.734,最佳cutoff值分别为3.45%、63.5%、68.25fl、0.45%,灵敏度分别为98.00%、91.10%、87.10%、77.20%;特异度分别为100.00%、81.10%、84.90%、65.10%。HbA2灵敏度和特异度最高(P<0.05)。与单项检测比较,平行联合检测明显提高诊断灵敏度,系列联合检测明显提高特异度(P<0.05)。结论以ROC曲线分析得到的MCV、EF、HbA2最佳cutoff值对β地贫杂合子筛查具有较好的诊断价值,HbA2诊断价值最高。联合检测法可提高诊断灵敏度和特异度。

散发神经鞘瘤22号染色体杂合子丢失

目的 分析神经鞘瘤 2 2号染色体 (CHR2 2 )杂合子丢失及其与临床行为之间的关系。方法 选择 4个具有高度多态性的微卫星标记物 ,通过变性聚丙烯酰胺凝胶、银染观察 3 6例神经鞘瘤CHR2 2杂合子丢失 (LOH)频率 ;以免疫组织化学方法检测Ki 67、PCNA的增殖指数。结果 3 6例神经鞘瘤中 15例发生CHR2 2杂合子丢失 (41.6% ) ,4个微卫星标记物缺失的频率分别为 19.4% (D2 2S2 68)、2 2 .2 % (D2 2S2 64 )、19.4% (D2 2S2 80 )、16.7% (CRYB2 ) ;发生CHR2 2缺失的神经鞘瘤的增殖指数高于无缺失者 (P <0 .0 5 )。结论 CHR2 2杂合子丢失是神经鞘瘤发生中的常发事件 ,缺失的区域包括NF2基因 ,CHR2 2杂合子丢失与听神经瘤的临床行为有一定的关系 ,CHR2

血管内皮细胞敲除Rheb基因杂合子小鼠模型建立及意义

目的建立血管内皮细胞敲除Rheb基因杂合子小鼠模型,旨在进一步研究Rheb基因在胚胎血管形成中的作用。方法将5只Rheb^(flox/flox)雄鼠与15只Rheb^(flox/+)雌鼠进行交配,共繁殖出子代小鼠76只(基因型为Rheb^(flox/flox)或Rheb^(flox/+))。将76只子代小鼠与20只血管内皮细胞特异性表达Tek-Cre重组酶的小鼠(以下称Cre小鼠)进行交配,得到基因型为Tek-Cre×Rheb^(flox/+)及单纯Rheb^(flox/+)子代小鼠共140只。采用PCR法对140只小鼠鼠尾组织Rhebflox及Tek-Cre基因型进行鉴定,并记录其2月龄体长及体质量;采用Western blotting法检测Tek-Cre×Rheb^(flox/+)小鼠与单纯Rheb^(flox/+)小鼠肝组织Rheb蛋白表达。结果共得到基因型为Tek-Cre×Rheb^(flox/+)小鼠72只、单纯Rheb^(flox/+)小鼠68只,其体长分别为(18.50±0.13)、(18.80±0.10)cm,体质量分别为(29.50±0.15)、(30.10±0.21)g,二者比较P均>0.05;肝组织Rheb蛋白相对表达量分别为0.21±0.17、0.66±0.12,二者比较P<0.05。结论成功构建血管内皮细胞敲除Rheb基因杂合子小鼠模型,将为研究Rheb基因在胚胎血管形成中的作用奠定基础。

β-地中海贫血杂合子携带α-地中海贫血1基因发生率

【目的】研究广东地区人群中 β 地中海贫血 (β 地贫 )杂合子携带α 地中海贫血 (α 地贫 ) 1基因的发生率。【方法】采用反向点杂交法检测 β 地贫基因。采用跨越缺失区断裂点PCR法检测α 地贫 1基因。【结果】在 5 0 0例 β 地贫杂合子DNA标本中 ,共检出 43例合并α 地贫 1,检出率为 8.6 %。【结论】广东地区 β 地贫杂合子中合并α 地贫 1的发生率为 8.6 % ,在遗传咨询和产前诊断过程中需要引起重视。

海湾扇贝混交家系中优先受精以及自然选择压力下杂合子过剩的研究

以中国海湾扇(Argopecten irradians)贝养殖群体为亲本分别构建了5个配对混交的海湾扇贝混交系,通过5对微卫星分子标记为手段对海湾扇贝卵子在同一个体和不同个体精子间的优先受精问题和不同生命阶段的海湾扇贝混交系杂合子比例的变化进行了研究。结果发现在受精后6 h的担轮幼虫期3个混交系中有2个混交系杂合子显著过剩。5个混交系的1d D形幼虫、20d稚贝、40d稚贝、3个月稚贝以及成贝在自然选择压力下杂合子比例逐渐上升,以壳长计算的杂交优势率也呈逐渐上升趋势,并且各个阶段的杂合子比例同杂交优势率的变化成显著正相关。

猪氟烷基因型的PCR检测及杂合子氟烷阳性猪的发现

对１４７头猪进行了氟烷测验，测得氟烷阳性猪３头，阳性率为２．０４％。运用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析法对氟烷阳性猪及其同胞进行了基因型检测，结果４头被测猪中有２头为隐性纯合子，２头为杂合子。结合氟烷测验结果，２头隐性纯合子表现为氟烷阳性，符合一般规律；而２头杂合子中发现１头为氟烷阳性，此前尚未见报道。

3种少见α地中海贫血点突变杂合子与双重杂合子的临床特征

目的:了解3种少见α地中海贫血点突变[血红蛋白Constants Spring(Hb CS),血红蛋白Westmead(Hb WS)和血红蛋白Quong Sze(Hb QS)]杂合子与双重杂合子的临床特征。方法:收集135例上述3种α-地中海贫血点突变的杂合子与双重杂合子患者和正常对照男女各20例,进行血常规参数分析、血红蛋白分析、等位基因特异性寡核苷酸探针反向斑点杂交方法(RDB)和多重跨越断裂点聚合酶链反应(PCR)方法检测基因型。结果:杂合子组、Hb CS和Hb WS双重杂合子(αCSα/αWSα)组均无临床表现,但Hb QS杂合子(αQSα/αα)组的红细胞平均体积(MCV)和红细胞平均血红蛋白(MCH)值小于其余杂合子组(P<0.05)。Hb CS和Hb QS双重杂合子(αCSα/αQSα)组有轻微的临床表现,MCV和MCH值低于Hb CS杂合子和Hb WS杂合子组(P<0.05)。结论:Hb CS杂合子组和Hb WS杂合子组表现为静止型地中海贫血,Hb QS杂合子组更接近轻型地中海贫血。双重杂合子表型多样,Hb CS和Hb WS双重杂合子表现接近于静止型地中海贫血,而Hb CS和Hb QS双重杂合子表现类似中间型α地中海贫血(Hb H病),在遗传咨询中需注意。

利用Cre/loxp技术构建血管内敲除cdc42基因杂合子小鼠

目的:利用Cre/loxp条件性基因敲除技术构建血管内敲除cdc42基因杂合子小鼠,并进行鉴定,为进一步在整体动物水平研究cdc42在维持微血管屏障中的作用提供研究平台。方法:将引进的cdc42flox/flox小鼠和血管内皮细胞特异性表达Cre重组酶的小鼠分别进行繁殖和鉴定,然后两种小鼠进行杂交,并对其子代小鼠的基因型进行鉴定,其子代基因型为Cdc42flox/+Cre+的小鼠即为本实验所构建的血管内敲除/-cdc42基因杂合子小鼠。结果:从引进这两种小鼠开始繁殖5个月,共繁殖cdc42flox/flox小鼠40只,取其21只进行鉴定,均为cdc42flox纯合的子小鼠。血管内皮细胞特异性表达Cre重组酶的小鼠和野生型C57小鼠杂交后繁殖,共得到子代小鼠36只,其中表达Cre重组酶的小鼠17只,基因型为cdc42flox/flox与表达Cre重组酶的杂合子小鼠杂交并繁殖,得到基因型为Cdc42flox/+Cre+的小鼠10只,基因型为Cdc42/-flox/+Cre-13只。这/-两种基因型小鼠其身高、体重无明显差异。结论:本研究利用Cre/loxp技术成功构建了血管内敲除cdc42基因杂合子小鼠,为进一步构建血管内敲除cdc42基因小鼠奠定基础,为在整体动物水平研究cdc42在维持微血管屏障中的作用提供研究平台。

散发神经鞘瘤22号染色体杂合子丢失发生的研究

目的探讨散发神经鞘瘤病人22号染色体(CHR22)杂合子丢失(LOH)情况及其与肿瘤增殖的关系。方法选取4个与NF2基因密切相关的多态性微卫星标记物,应用PCR方法研究54例神经鞘瘤的LOH情况。采用Ki-67和增殖细胞核抗原(PCNA)评估增殖指数。结果23例(42.6%)CHR22发生LOH,听神经鞘瘤发生率显著性高于脊神经鞘瘤(χ2=5.14,P<0.05)。发生LOH者增殖指数明显高于无LOH者(Pki-67=0.0079,PPCNA=0.0021)。结论在散发神经鞘瘤中,CHR22LOH是常发事件;听神经瘤与脊神经鞘瘤LOH发生率有显著性差异,CHR22LOH与神经鞘瘤的增殖活动性有关。

杂合子长期变化的计算机模拟试验——群体中长期保存杂合子的可能性分析

本文运用计算机模拟的方法,在随机交配、随机留种的情况下,分析了群体中长期保存杂合子的可能性。从模拟试验结果验证了群体遗传学理论的一个重要结论:群体中长期保存杂合子是不可能的。因此在畜禽保种工作中以减少基因纯合而保存群体全部基因为目的,来控制近交是不一定必要的。

乙酸镁对氟烷基因杂合子育肥猪肌肉加工品质的影响

育肥猪屠宰前饲粮中短期添加乙酸镁,研究其对氟烷基因杂合子育肥猪肌肉加工品质的影响。选用体重相近的氟烷基因杂合子(HalNHaln)大长猪(大白猪×长白猪)36头随机分为2组,即对照组、乙酸镁组,每组18头。乙酸镁组在屠宰前5 d,基础日粮中添加镁1 500mg/kg(以乙酸镁形式),对照组饲喂基础日粮。试验表明:在猪屠宰前饲粮中短期添加1 500 mg/kg水平的镁对试验猪的平均日采食量没有明显影响(P>0.05);可以显著降低肌肉的滴水损失(P<0.05),提高猪肉的熟肉率,从而提高猪肉的加工品质。

半乳糖激酶杂合子与白内障——一家系研究

半乳糖激酶(galactokinase,GK)是催化半乳糖代谢的关键酶。当其活性降低或缺乏时,体内蓄积的半乳糖可被醛糖还原酶(aldose reductase,AR)还原为半乳糖醇(dulcitol),后者蓄积于晶体纤维内。