聚乙二醇修饰杨梅苷固体脂质纳米粒制备及其体内药动学研究

目的制备聚乙二醇修饰杨梅苷固体脂质纳米粒,并考察其体内药动学。方法高压均质法制备聚乙二醇修饰固体脂质纳米粒,测定包封率、载药量、粒径、Zeta电位,单因素试验优化处方,XRPD进行晶型分析,考察体外释药、稳定性。24只大鼠随机分为4组,分别灌胃给予杨梅苷、杨梅苷固体脂质纳米粒、杨梅苷固体脂质纳米粒+聚乙二醇硬脂酸酯、聚乙二醇修饰杨梅苷固体脂质纳米粒的0.5%CMC-Na混悬液(150 mg/kg),于不同时间点采血,HPLC法测定杨梅素血药浓度,计算主要药动学参数。结果最优处方为药脂比1∶15,单硬酯酸甘油酯与聚乙二醇硬脂酸酯比例10∶1,泊洛沙姆188浓度0.8%,均质次数8次,包封率为81.75%,载药量为5.04%,粒径为207.56 nm,PDI为0.092,Zeta电位为-14.79 mV。杨梅苷以无定型状态存在于聚乙二醇修饰固体脂质纳米粒中,18 h内累积释放度为64.71%,模拟胃液中2 h内、模拟肠液中12 h内稳定性良好。与原料药、固体脂质纳米粒比较,聚乙二醇修饰固体脂质纳米粒t_(max)延长(P<0.05),C_(max)、AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)升高(P<0.05,P<0.01),相对生物利用度与原料药相比增加至4.60倍。结论聚乙二醇修饰固体脂质纳米粒可改善杨梅苷稳定性,促进其口服吸收。

HPLC法测定杨梅树不同药用部位的杨梅苷含量

目的 建立一种测定杨梅树不同药用部位杨梅苷含量的HPLC方法,并对野生杨梅树不同药用部位的杨梅苷含量进行测定。方法 采收并加工3批杨梅树的不同药用部位,包括根木质部、根韧皮部、树韧皮部、枝韧皮部、枝木质部、叶和果,采用HPLC法,以Ultimate XB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸水溶液(20∶80)为流动相,流速1 mL/min,柱温40℃,进样量10μL,检测波长260 nm,建立测定杨梅树不同药用部位中杨梅苷含量的定量分析方法,并对杨梅树不同药用部位的杨梅苷含量进行测定。结果 杨梅苷在3.891 8~194.590 0μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 9),精密度、稳定性、重复性检测结果 RSD均低于3%,平均加样回收率为97.703 5%,RSD为2.271 3%。杨梅树不同药用部位的杨梅苷含量在0.043 0%~13.917 0%,其中以韧皮部和叶含量较高,杨梅苷含量由高到低的部位为:树韧皮部>根韧皮部>枝韧皮部>叶>枝木质部≈根木质部>果实。果实中杨梅苷含量随着果实成熟逐渐下降。结论 本研究建立的杨梅苷含量测定方法简便快速,专属性强,可用于杨梅树中杨梅苷的含量测定。该方法明确了杨梅树不同药用部位中杨梅苷含量的分布,其中以韧皮部和叶的含量最高,这为杨梅树修枝剪叶所产生的大量枝条再利用和杨梅树深入开发奠定实验基础。

杨梅苷对细菌性骨髓炎大鼠骨缺损的改善作用

目的 探究杨梅苷通过血管内皮生长因子A(VEGFA)/基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/C-X-C型趋化因子受体4(CXCR4)通路对细菌性骨髓炎(OM)大鼠骨缺损的改善作用。方法 将大鼠按随机数字表法分为假手术组、OM组、杨梅苷组[50 mg/(kg·d)杨梅苷]、PX-478组[25 mg/(kg·d)VEGFA/SDF-1/CXCR4信号通路抑制剂PX-478]、杨梅苷+PX-478组[50 mg/(kg·d)杨梅苷和25 mg/(kg·d)PX-478],每组18只。采用双侧胫骨近端骨缺损来构建细菌性OM大鼠模型。连续治疗12周后,观察大鼠创口愈合程度,测量大鼠肛温;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清炎性因子白细胞介素(IL)-6、IL-1β、IL-17以及骨代谢指标骨碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(BGP)、Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)水平;检测病灶周围组织细菌负荷情况;HE染色检测大鼠病灶周围组织病理变化;免疫荧光染色检测CD31阳性表达;Western blot检测VEGFA/SDF-1/CXCR4信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组相比,OM组达到甲级创口愈合程度的大鼠比例,BALP、BGP水平,CD31阳性区域面积,VEGFA、SDF-1、CXCR4蛋白水平下降(P<0.005或P<0.05);肛温,细菌负荷,血清IL-6、IL-1β、IL-17、CTX-Ⅰ水平升高(P<0.05)。与OM组相比,杨梅苷组BALP、BGP水平,CD31阳性区域面积,VEGFA、SDF-1、CXCR4蛋白水平升高;肛温,细菌负荷,血清IL-6、IL-1β、IL-17水平,CTX-Ⅰ水平降低(P<0.05);而PX-478组结果趋势相反。PX-478逆转了杨梅苷对细菌性OM大鼠骨缺损的改善作用。结论 杨梅苷可能通过激活VEGFA/SDF-1/CXCR4信号通路改善OM大鼠骨缺损。

HPLC法同时测定侧柏叶中杨梅苷等4种黄酮的含量

目的建立同时测定侧柏叶中杨梅苷、槲皮苷、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮含量的方法，为侧柏叶的质量控制和开发利用提供依据。方法采用HPLC法。色谱柱为WatersODSC18柱（150mm×4．6mm,5μm），流动相为甲醇-体积分数为0．5％乙酸溶液，梯度洗脱，流速为0．8mL·min-1，检测波长为340nm，柱温为室温。结果杨梅苷、槲皮苷、穗花杉双黄酮和扁柏双黄酮质量浓度分别在61．2-122．4mg·L-1（r=0．9998）、10．56—211．2mg·L-1（r=0．9998）、2．85～57．0mg·L-1（r=0．9999）和7．54—150．8mg·L-1（r=0．9998）内与峰面积呈良好的线性关系；平均加样回收率分别为97．0％（RSD=2．5％）、97．1％（RSD=2．3％）、96．8％（RSD=2．1％）和97．4％（RSD=3．4％）。结论此法操作简便、快速、灵敏、准确，样品处理简便易行，适于侧柏叶的质量控制。

杨梅苷的稳定性研究

采用HPLC和紫外分光光度法研究杨梅苷溶液在pH、温度、金属离子等不同条件下的稳定性。HPLC法采用Venusil MP-C18色谱分析柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈∶水(18∶82,体积比),流速1.0 mL/min,柱温25℃,检测波长352 nm;紫外分光光度法采用352 nm作为检测波长。结果表明杨梅苷在中性或弱酸性条件下稳定,温度升高及金属离子存在时不稳定。杨梅苷溶液应在中性或弱酸性条件下低温或常温保存,并避免接触金属离子。本研究为杨梅苷的贮藏和开发利用提供了理论参考。

杨梅苷对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究杨梅苷对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法 60只SD大鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、阳性给药组(维拉帕米100μg/L)和杨梅苷低中高剂量组(2.5,5,10 mg/L),每组10只。釆用Langendorff离体心脏灌流技术,停灌30 min,再灌45 min,造成心肌缺血再灌注损伤模型。记录杨梅苷对心脏血流动力学指标的影响,测定冠脉流出液中心肌三酶LDH、CK、AST的水平,心肌组织中抗氧化酶SOD、CAT的活性及脂质过氧化物MDA的含量。HE染色观察心肌组织病理学变化。Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果杨梅苷低中高剂量组大鼠心脏血流动力学指标显著改善,冠脉流出液中LDH、CK、AST的释放减少,心肌组织中SOD、CAT的活性增加且MDA的产生减少,不同程度地减轻缺血再灌注造成的心肌损伤。Western blot结果表明杨梅苷能上调Bcl-2的表达,下调Bax和Caspase-3、Caspase-9的表达,同时抑制ERK的磷酸化。结论杨梅苷对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,可以改善心肌收缩功能、增强抗氧化能力、抑制细胞凋亡等,其机制可能是通过抑制ERK信号转导通路缓解缺血再灌注引起的心肌细胞凋亡。

杨梅苷脂质体的薄膜超声法制备工艺研究

目的:为了充分发挥杨梅苷的药理作用和提高其稳定性,本实验制备杨梅苷脂质体并优化其制取工艺和考察其质量稳定性。方法:采用薄膜超声法制备杨梅苷脂质体,采用冷冻离心法分离脂质体和游离药物,采用高效液相色谱法测定脂质体中药物含量并计算其包封率,采用激光粒度仪测定脂质体的平均粒径。结果:采用薄膜超声法制备杨梅苷脂质体的最佳处方和工艺为:杨梅与卵磷脂的比例为1:7,卵磷脂与胆固醇的比例为4:1,磷酸盐缓冲溶液的pH值为7.0,浓度为0.005mol.L-1,超声时间为3min左右。结论:在最佳处方和工艺条件下制备的杨梅苷脂质体包封率较高、粒径分布良好,重现性亦较好,冷藏下渗漏率较低,稳定性较强。

二氢杨梅素和杨梅苷抑制HepG2细胞的协同作用

目的:探讨藤茶中的主要活性成分二氢杨梅素(DMY)和杨梅苷(MYT)抑制HepG2细胞增殖的协同作用。方法:通过对体外培养的细胞分别给予DMY、MYT和DMY:MYT为1:4、1:2、1:1、2:1、4:1、8:1的混合物,采用MTT法和荧光染色法测定其对HepG2细胞活力的影响,并用合用指数(CI)和等效曲线法分析二者的协同作用。结果:DMY和MYT能够抑制HepG2肿瘤细胞的增殖,且IC50分别为56.46和95.01μmol/L。当二者比例为1:4~8:1时,对HepG2肿瘤细胞增殖的IC50为40.90~73.00μmol/L,CI值为0.60~0.86,其中1:1时协同作用最强,等效线法也表明二者存在协同作用。结论:DMY和MYT联用能够有效提升单体化合物对HepG2细胞的抑制作用,呈现出协同作用,这为藤茶进一步的功能研究和应用提供了依据。

HPLC法测定杨梅叶中杨梅苷的含量

目的:建立HPLC法测定杨梅叶中杨梅苷含量的方法。方法:采用Diamonsil C18(150 mm×4.6 mm,5μm)柱,流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长358 nm,柱温30℃。结果:杨梅苷在0.088-0.880 mg/mL内与峰面积呈良好线性关系,A=36113C-401.56,r=0.9994;平均回收率为102.4%,RSD=1.9%(n=9)。测得杨梅叶中杨梅苷含量为1.43%。结论:该测定方法准确,可靠,对于杨梅的进一步开发利用具有重要的参考意义。

杨梅苷脂质体在动物体内药代吸收动力学初步研究

目的:以游离杨梅苷作对比,考察降解速率和半衰期,首次初步研究杨梅苷脂质体在大鼠体内的药代吸收动力学。方法:两组大鼠分别肌肉注射游离杨梅苷溶液和杨梅苷脂质体,间隔相同时间,分别眼球取血,高效液相色谱法(HPLC)测定药物残留含量。依据药物残留浓度和时间的关系,采用统计矩模型,利用3P97程序计算药代动力学参数,求出杨梅苷脂质体的降解速率和半衰期。结论:杨梅苷脂质体在肌肉注射的大鼠血浆中可较稳定的存在,具有载体和缓释的作用。大鼠体内的药代动力学数据表明,与游离杨梅苷溶液相比,脂质体使杨梅苷血药浓度能够维持更长的时间,给药8h后,血中仍保持一定的浓度分布,消除半衰期t1/2,α由64.3min增至243.6min,药时曲线下面积(AUC)为游离杨梅苷溶液溶液的3.41倍。

以金纳米粒子为共振光散射探针测定桑色素和杨梅苷含量

利用种子生长法合成金纳米粒子(AuNPs),提出了以AuNPs为共振光散射(RLS)探针测定桑色素和杨梅苷含量的方法。通过静电引力,AuNPs可与桑色素或者杨梅苷结合,形成二元复合物,使RLS强度增强。桑色素/杨梅苷-AuNPs体系的RLS强度增加值ΔIRLS与桑色素/杨梅苷的浓度呈线性关系,线性范围分别为0.40~10.0,0.10~10.0μmol·L^(-1),检出限(3S/N)分别为2.98,1.39μg·L^(-1)。应用该方法测定了合成样品中的桑色素和杨梅苷的含量,加标回收率在97.2%~103%之间,测定值的相对标准偏差(n=5)在0.7%~2.5%之间。

高效液相法测定杨梅苷脂质体的药物含量及包封率

本文建立了杨梅苷脂质体中药物含量及包封率测定的高效液相新方法。该方法使用C18色谱柱（150mm×4．6mm,5μm）；流动相为甲醇—瞵酸盐缓冲溶液（40：60）；流速为0．4mL／min；柱温为室温；紫外检测波长为367nm。采用冷冻离心法分离杨梅苷脂质体中的游离药物。结果表明在本色谱条件下杨梅苷与卵磷脂、溶剂峰能有效分离，杨梅苷在0．8-40μg／mL（r=0.9999，n=5）具有良好的线性关系，回收率100．9％-101．9％，日内RSD及日间RSD均〈2％（n：5）。该方法准确可靠、简单易行，可以用于杨梅苷脂质体含量及包封率的测定。

薄膜—均质法制备杨梅苷脂质体研究

研究制备杨梅苷脂质体并优化工艺方法;以薄膜―均质法制备杨梅苷脂质体,并用高效液相色谱法测定药物含量和包封率,激光粒度仪测定平均粒径。最佳制备工艺为:杨梅苷∶卵磷脂=1∶6,磷酸盐缓冲溶液pH7.0,浓度0.005mol/L,均质压力100Mpa,均质三次,卵磷脂∶胆固醇=3∶1,有机相与水相比为4∶1;包封率、粒度和电位检测表明质量指标较好。

HPLC法测定侧柏叶中杨梅苷的含量

目的建立测定侧柏叶中杨梅苷含量的HPLC方法。方法采用Inertsil ODS-3(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为:甲醇-0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液-冰醋酸(37:63:1.5),流速:1.0 mL·min^(-1),柱温:40℃,检测波长:254 nm。结果杨梅苷的线性范围为0.023 mg/mL～0.414 mg/mL,线性良好,r=0.9999(n=5)。结论该方法简便快捷、精密度高、结果准确。

杨梅苷对四氧嘧啶模型小鼠降血糖作用的初步研究

目的研究杨梅苷对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠的降血糖作用。方法用四氧嘧啶制造糖尿病小鼠模型、采用葡萄糖氧化酶法测定血糖。结果杨梅苷可显著降低四氧嘧啶所致糖尿病小鼠的血糖。结论杨梅苷对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠有降血糖作用。

高效液相色谱法测定二色补血草中杨梅苷、圣草酚、木犀草素、槲皮素的含量

目的建立二色补血草中杨梅苷、圣草酚、木犀草素、槲皮素4种化学成分含量测定的HPLC方法。方法采用Accurasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;0.2%磷酸溶液和乙腈进行梯度洗脱;柱温25℃;流速1 m L·min^(-1);检测波长254 nm。结果在HPLC法中,杨梅苷、圣草酚、木犀草素、槲皮素的线性范围分别是:0.2232~0.6696μg(r=0.9995)、0.2196~0.6588μg(r=0.9997)、0.0684~0.2052μg(r=0.9996)、0.0624~0.1872μg(r=0.9998);平均回收率分别为98.5%、97.8%、99.5%、99.7%,RSD值分别为1.3%、1.6%、0.8%、1.6%。结论所建立的方法专属性强,重复性好,可用于二色补血草的质量控制。

高效液相色谱法同时测定养心草中杨梅苷和槲皮苷的含量

目的采用高效液相色谱法(HPLC)分析养心草中有效成分杨梅苷和槲皮苷的含量。方法选用AgilentHC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液(22:78)作为流动相,流速为0.8 mL/min,柱温:30℃,检测波长:256 nm。结果杨梅苷和槲皮苷分别在0.81-16.20μg/mL和1.32-26.40μg/mL范围内有良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.3%、99.2%,RSD分别为1.57%、1.70%。结论本方法准确,简便,重复性好,可用于养心草中杨梅苷和槲皮苷的定量分析。

杨梅树皮中杨梅苷对照品制备及鉴定

目的:建立从杨梅树皮中制备杨梅苷对照品的方法。方法:采用聚酰胺柱层析和重结晶法对杨梅树皮甲醇提取物进行分离纯化,通过UV、IR、MS、1 H-NMR和13 C-NMR进行结构鉴定,通过TLC法和HPLC法对对照品进行纯度检测。结果:从杨梅树皮中分离纯化出的杨梅苷对照品质量分数>98.0%。结论:该方法制备的杨梅苷对照品符合中药化学对照品的相关要求,可用于含黄酮类中药及其相关制剂的质量控制。

萹蓄中杨梅苷和槲皮苷的含量测定

目的:采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)分析萹蓄中杨梅苷和槲皮苷的含量。方法:Agilent LC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液(18︰82)作为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长256 nm。结果:杨梅苷和槲皮苷分别在1.22～24.30μg/mL和0.77～15.40μg/mL范围内有良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.9%、99.6%,RSD分别为1.11%和1.09%。结论:该方法准确,简便,重复性好,可用于萹蓄中杨梅苷和槲皮苷的定量分析。

杨梅苷通过抑制线粒体功能障碍减轻MPP^+诱导的SN4741细胞凋亡

目的:研究杨梅苷(myricitrin,五羟基黄酮-3-鼠李糖,Myr)对1-Methyl-4-phenylpyridinium iodide(MPP+)诱导的SN4741细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:利用MPP+处理多巴胺能SN4741细胞,建立帕金森病体外细胞模型;4-甲基偶氮唑蓝(MTT)检测SN4741细胞活性;TUNEL法检测细胞凋亡断裂的DNA片段;Mitotracker观察线粒体形态;流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)。结果:MPP+(80μmol/L)作用于SN4741细胞24 h后,与对照组比较,细胞存活率降低(47.3±2.9)%(P<0.01),断裂DNA片段增多,线粒体碎片增多,ROS生成增多;杨梅苷(10、20μmol/L)预处理24h后,细胞存活率增加(69.3±3.2)%和(87.7±5.2)%(P<0.01),DNA断裂片段减少,线粒体碎片减少,ROS生成减少。结论:杨梅苷对MPP+诱导SN4741细胞凋亡具有浓度依赖性的保护作用,其作用机制可能与减轻线粒体功能障碍、抑制ROS生成有关。