枳椇子多糖的酸提取工艺优化及其理化性质与抗氧化活性研究

为优化枳椇子多糖的提取工艺,并对其理化性质和抗氧化活性进行研究。该研究采用酸溶剂提取枳椇子粗多糖,经单因素考察和正交试验优化提取工艺参数,通过Sevag法除蛋白、DEAE-52阴离子交换柱对多糖进行分离纯化,得到枳椇子精制多糖。采用高效液相色谱、紫外光谱、傅里叶变换红外光谱、刚果红实验、碘-碘化钾和扫描电镜等方法对枳椇子多糖进行理化性质分析;对枳椇子多糖的体外抗氧化活性进行评价。结果表明,枳椇子多糖的最佳提取工艺为温度90℃,料液比为1∶100(g∶mL),时间2.5 h,盐酸浓度0.2 mol/L,在此条件下多糖得率为(4.07±0.07)%。经分离纯化后获得分子质量为3.03×10^(5)Da的均一性枳椇子精制多糖(Hovenia dulcis polysaccharide,HDP),HDP由甘露糖、氨基葡萄糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖组成,摩尔百分比为10.46%、1.44%、8.19%、9.79%、4.54%、4.61%,、38.02%、9.95%、13.01%。结构鉴定HDP为吡喃环型酸性多糖,具有无规则螺旋的空间构象且含有较多分支,并表现出片层状的微观形态。HDP清除ABTS阳离子自由基、DPPH自由基和羟自由基的IC_(50)值分别是0.867、1.178、2.112 mg/mL。该研究通过优化酸提枳椇子多糖工艺,获得一种精制的酸性多糖HDP,并揭示HDP具有潜在的抗氧化活性,该研究结果将为枳椇子多糖的功能食品开发提供理论依据。

枳椇子不同溶剂提取物对黄嘌呤氧化酶的作用及动力学研究

目的:探讨不同溶剂提取枳椇子对黄嘌呤氧化酶(XOD)的影响及其动力学模型,为研究高尿酸血症提供实验依据。方法:用水、50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇提取枳椇子,测定各提取液中黄酮类成分的含量,采用紫外分光光度法分析不同溶剂提取液对XOD的作用及动力学模型。结果:枳椇子不同溶剂提取液对XOD均有抑制作用,其中50%乙醇提取液和70%乙醇提取液的抑制作用较强,其提取液中黄酮类成分含量也较高,抑制效果呈剂量依赖性;95%乙醇提取物黄酮总量较低,但也显示出较好的抑制作用。动力学分析显示,不同溶剂提取液对XOD的亲和力值α均大于1,70%乙醇提取液对XOD的亲和力值为134.40,更易与XOD结合,各提取液均表现为混合型抑制。结论:枳椇子提取液具有抑制XOD的作用,效果以50%乙醇提取液和70%乙醇提取液为著,95%乙醇提取物对XOD的抑制效果与提取液中的其他成分相关。枳椇子提取液的抑制作用类型属于混合型抑制,即竞争性-非竞争性抑制,且竞争性抑制占主导地位。

人参枳椇子口服液的解酒保肝作用研究

目的:研究人参枳椇子口服液(GROL)的解酒保肝作用。方法:将50只小鼠随机分空白组、模型组、GROL高剂量组、GROL低剂量组和阳性药联苯双酯对照组,每组10只。灌胃给药4周后用50%乙醇一次灌胃建立小鼠急性醉酒模型,考察GROL对小鼠基本生理活动、小鼠血清及肝组织中相关指标,观察肝组织病理切片,评价其解酒保肝作用。采用乙醇诱导AML12肝细胞损伤模型,检测GROL干预后对乙醇刺激的AML12细胞上清液中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、活性氧(ROS)水平的影响。结果:GROL组小鼠醉酒时间显著延长,睡眠、醒酒时间显著缩短;血清中乙醇浓度、GPT、GOT水平显著降低;肝细胞损伤情况有所改善;GROL组肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)水平明显提高,丙二醛(MDA)含量明显降低。对体外培养的AML12肝细胞,GROL可以逆转乙醇引起的肝细胞ALT和AST活性的升高以及过度生成的ROS量。结论:GROL具有良好的防醉、解酒和保肝作用,其发挥作用的途径可能与促进体内乙醇代谢、增强内源性抗氧化酶的活性有关。

枳椇子黄酮的含量测定及其抗氧化作用的分子机制

为了测定枳椇子黄酮的含量并探究其抗氧化作用的潜在机制。本试验以枳椇子为原料,采用醇提法提取其黄酮成分,通过紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量,并进一步采用CavityPlus和分子对接分析枳椇子黄酮与超氧化物歧化酶(SOD)相互作用的位点、氨基酸残基和化学键。结果显示:枳椇子总黄酮含量为8.23 mg/g;枳椇子黄酮主要成分可能结合于SOD同源二聚体交界面且靠近锌离子的一凹陷区域,其5个主要成分,即双氢杨梅素、双氢槲皮素、槲皮素、双氢山萘酚和山萘酚与SOD的结合能范围为-8.5~-8.3 kcal/mol,且上述5个主要成分均与SOD的A链的Gly147和B链的Gly147有直接作用,并通过氢键、疏水作用力和静电作用力等非共价键相连。结果表明,枳椇子富含黄酮,可通过其黄酮成分与SOD直接结合以增加SOD活性,本试验为枳椇子抗氧化作用机制的研究及其产品的开发提供了科学依据。

枳椇子现代研究进展

枳椇子是我国传统的药食同源中药材,具有清热利尿、止渴除烦、解酒毒等功效。有多种化学成分从枳椇子里被分离得到,分别为生物碱、黄酮、葡萄糖、皂苷、有机酸类等成分。黄酮是枳椇子的主要活性成分,未来在枳椇子总黄酮的提取研究中发展空间巨大。现代药理研究显示,枳椇子具有保肝、抗癌突变、抗肿瘤、解酒毒、抗疲劳、增强综合体能、保护神经、利尿、甜味抑制、保健等多种活性。本文将从枳椇子的化学成分、提取黄酮的工艺及其药理作用等方面的研究进行了综述,为以后人们对枳椇子在临床上的合理用药和产品开发利用提供参考。

枳椇子总黄酮的抗氧化及降糖活性研究

枳椇子是一种传统药食同源资源,黄酮类化合物是其主要活性成分之一,具有多种生理功能,有关其降糖活性的研究却非常有限。以枳椇子总黄酮(SHTFs)为材料,通过自由基清除、还原能力和消化关键酶活性抑制等体外试验方法研究SHTFs的抗氧化活性和降糖活性。结果表明:在试验浓度范围内,SHTFs具有较高DPPH·自由基清除能力、羟基自由基清除能力和还原能力,其最大清除率和吸光度值分别为68.92%、99.15%和0.525;SHTFs对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制率分别为64.32%和96.10%。说明SHTFs具有较强的抗氧化和抑制消化关键酶的活性,表明枳椇子是一种具有应用潜力的降糖植物资源。

葛根枳椇子洛神花本草酵素的解酒护肝作用研究

以葛根、枳椇子、洛神花为原料,通过益生菌发酵制备本草酵素。筛选菌种比例,分析酵素营养成分,并建立小鼠醉酒模型,考察小鼠醉酒后的醒酒时间、血液乙醇浓度、肝组织抗氧化酶活性含量的变化,探究酵素解酒护肝作用。结果表明,植物乳植杆菌(Lactobacillus plantarum)、罗伊氏粘液乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、鼠李糖乳酪杆菌(Lactobacillus rhamnosus)以5∶4∶1比例进行发酵,本草酵素中总酸、粗多糖、游离氨基酸、γ-氨基丁酸、多酚、总黄酮含量分别为21.29 g/kg、12.95 mg/g、3.61 mg/g、86.66μg/g、4.32 mg/g、0.06 mg/g。酵素实验组小鼠醉酒时间和醒酒时间明显缩短;酒后3 h内小鼠血液乙醇浓度显著降低(P<0.05);对比模型组和未发酵提取液组,中、高剂量组小鼠肝组织匀浆中乙醇脱氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽水平均显著升高,丙二醛含量显著降低(P<0.05),表明葛根枳椇子洛神花本草酵素具有解酒护肝功能。

枳椇子、葛花对小鼠酒精性肝损伤及胃溃疡的保护作用研究

目的 探究葛花和枳椇子提取物对小鼠急性酒精性肝损伤及胃溃疡的保护作用。方法 将60只小鼠适应性饲养,1周后随机分为5组(n=12),分别为模型组、空白组、葛花组、枳椇组、枳葛组。除空白组外,其余各组小鼠每日给予相应干预药物4h后用50%乙醇10g/kg灌胃,连续14d,末次乙醇灌胃6h后,将小鼠麻醉,取血清分别进行谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性检测,另取肝、胃组织进行病理组织学观察。结果 各给药组血清中ALT和AST均显著低于模型组(P<0.01),略高于空白组。枳椇子葛花组小鼠较模型组小鼠肝脏组织细胞形态结构较规则,细胞核形状规则且排列整齐,炎症细胞浸润明显减少。枳椇子葛花组小鼠胃部形态较模型组完整,细胞形态良好,胃黏膜断层或破裂情况明显减少。结论 枳葛提取液对小鼠酒精性肝损伤及胃溃疡有保护作用。

不同产地枳椇子的检查、鉴别及含量分析

目的:建立枳椇子HPLC指纹图谱,比较不同产地枳椇子样品,并对其中特征性成分进行定性分析,鉴定不同产地枳椇子的真伪。方法:通过建立HPLC指纹图谱,对药材水分、总灰分、浸出物及成分进行测定,并进行相似度评价、聚类分析和主成分分析。结果:10批枳椇子样品均为正品,水分含量为8.57%~12.83%;总灰分含量为1.924%~3.915%;水溶性浸出物含量为4.26%~17.07%。通过建立其指纹图谱,确定了14个共有峰,指认了其中4个成分,分别为二氢杨梅素、二氢槲皮素、杨梅素、芦丁。结论:该方法操作简便,重复性好,可为评价枳椇子的质量提供依据。

枳椇子抑制黄嘌呤氧化酶关键质量属性研究

目的:研究枳椇子降尿酸作用的有效成分,为确定枳椇子降尿酸提取物关键质量属性提供依据。方法:用水、50%乙醇、70%乙醇及95%乙醇提取枳椇子药液后,分别采用单级萃取和多级萃取制备不同萃取部位,测定各部位黄酮类成分含量,考察各部位对黄嘌呤氧化酶的抑制作用。结果:除了95%乙醇提取液抑制黄嘌呤氧化酶的作用较弱外,其他三种溶剂提取液抑制作用均较好。单级萃取水饱和正丁醇部位、乙酸乙酯部位和石油醚剩余水部位对黄嘌呤氧化酶抑制率高,相应部位黄酮类成分含量也较高;多级萃取乙酸乙酯部位抑制率高,黄酮类成分的含量也较高。另外,无论单级萃取还是多级萃取,残留的水液仍然具有一定的黄嘌呤氧化酶抑制作用,而多级萃取残留的水液中无黄酮类成分。结论:枳椇子降尿酸的成分为极性较大的一类成分,黄酮类成分可以成为枳椇子降尿酸提取物的关键质量属性之一,还有极性大、水溶性好的抑制黄嘌呤氧化酶作用的成分需要继续研究。

枳椇子营养成分和总黄酮含量分析及评价

以枳椇子为试材,分析研究枳椇子的常规理化成分、氨基酸组成、矿物元素含量、枳椇子油的脂肪酸组成及黄酮类物质含量。结果表明,枳椇子中含有丰富的碳水化合物(12.08%)、粗蛋白(13.96%)、粗脂肪(9.45%)和粗纤维(53.91%),15种氨基酸总含量为12.63 g/100 g,7种必需氨基酸含量占氨基酸总量的35%,必需氨基酸和非必需氨基酸含量的比值为0.54。AAS与CS值显示,蛋氨酸为枳椇子蛋白质第一限制氨基酸;元素含量从高到低依次为K、Ca、Mg、Na、Fe、Mn、Cu、Zn;枳椇子油中脂肪酸主要由不饱和脂肪酸组成(89.74%),以亚麻酸含量最高(40.26%)。枳椇子中黄酮类物质的含量为27.61 mg/g。枳椇子富含人体必需的营养成分,属营养和保健功能兼具的新资源食品。

响应面法优化枳椇子总黄酮超声波提取工艺

为了更好开发和利用枳椇子资源,以枳椇子为原料,利用响应面设计对超声波法提取枳椇子总黄酮工艺进行优化。结果表明:在提取温度65℃、提取时间60min条件下,影响提取率的主次因素依次为乙醇体积分数>液料比>超声波功率,最佳超声波提取条件为超声波功率374.4W、液料比69.4:1(mL/g)、乙醇体积分数64.5%。验证总黄酮得率达到(0.819±0.003)%,接近于预测值0.823%。研究表明,优化得到的回归模型是可行的,具有良好预测能力。

葛花枳椇子配伍对酒精性肝损伤大鼠肝脏功能及病理形态的影响

目的探讨葛花枳椇子2∶1比例配伍后解酒保肝的作用,明确使用的最佳条件。方法采用56°红星二锅头白酒灌胃建立酒精性肝损伤动物模型,并给予实验动物含生药量3、6、12 g/kg葛花枳椇子2∶1配伍药物,4、8、12周服药疗程,通过检测肝脏指数,谷氨酸转氨酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、碱性磷酸酶（ALP）等血清肝功能相关指标及肝脏病理形态,观察葛花、枳椇子2∶1比例配伍防治慢性酒精性肝损伤的作用。结果葛花枳椇子配伍各剂量组给药4周对慢性酒精性肝损伤没有治疗作用。给药8周后配伍各剂量组的ALT均明显降低,与模型组相比有显著性差异（P〈0.05-0.01）。给药12周后,配伍各剂量组AST明显下降,配伍低、高剂量组ALT下降,配伍低剂量组TP升高,配伍不同剂量组ALB升高,与模型组相比有显著性差异（P〈0.05-0.01）;肝脏病理形态的变化也与肝功能指标相一致。结论葛花枳椇子配伍各剂量组在给药8周和12周显示出一定解酒保肝作用,并随着治疗时间的延长,可以不同程度地改善相关指标,其中低剂量组较中、高剂量组效果好。

枳椇子的化学成分

采用硅胶、ODS和Sephadex LH-20等色谱技术,从枳椇子的体积分数为70%乙醇提取物的正丁醇萃取部位分离得到7个化合物,通过光谱数据和理化性质鉴定其化学结构,分别为:3',5'-二-C-β-D-葡萄糖-根皮素(1),异牡荆素2″-O-β-D-葡萄糖苷(2),牡荆素2″-O-β-D-葡萄糖苷(3),异斯皮诺素(4),杨梅素3-O-β-D-葡萄糖苷(5),L-色氨酸(6)和五倍子酸(7)化合物1-7均为首次从该植物分离得到.

枳椇子总黄酮提取工艺及其解酒作用

分别用水和乙醇作为溶剂加热提取枳椇子中的总黄酮,用比色法测定黄酮的含量,分别以提取时间、加热温度、料液比、提取次数等因素进行正交试验。对两种提取方法进行比较,确定各因素对提取效果的影响并对其解酒作用进行研究。水提取法的最优条件是:100℃,料液比1 g∶8mL,加热0.5 h,回流提取3次;醇提取法的最佳条件:80℃,料液比1 g∶6 mL,加热1.5 h,以体积分数50%的乙醇回流提取3次。实验结果显示,醇提取法比水提取法效果更好,枳椇子提取液具有一定的解酒作用。

枳椇子有效部位的初步研究

目的:提取分离枳(木具)似的有效部位。方法:甲醇提取、聚酰胺柱色谱分离、急性乙醇肝损伤小鼠模型,寻找出枳(木具)子中的有效部位。结果:分离出三种组分,分别是生物碱组分、黄酮类组分和其他组分,其中生物碱组分能明显拮抗乙醇所致肝损伤。结论:枳(木具)子中的生物碱可能为其有效部住;黄酮可能为其辅助组分。

葛花枳椇子不同比例配伍对酒精性肝损伤大鼠肝组织病理形态影响的实验研究

为了观察葛花、枳椇子不同比例配伍对酒精性肝损伤大鼠肝组织病理形态的影响。采用白酒灌胃的方法复制酒精性肝损伤的模型,将Wistar大鼠160只,按体重随机分为空白组,模型组,东宝肝泰对照组,葛花组,枳椇子组,葛花枳椇子配伍1∶1,1∶2和2∶1八组。连续灌胃8周,于8周末取材,摘取肝脏,制成病理切片,在光镜下观察大鼠肝脏的病理形态变化。结果显示:光镜下模型组可见肝小叶结构遭到破坏,肝细胞索排列紊乱,肝血窦间隙增大,肝细胞肿大出现水样变,炎性细胞侵润及纤维组织增多,葛花与枳椇子配伍组肝细胞索排列紊乱、肝细胞水样变较模型组减轻,纤维结缔组织无明显增生。由此得出结论:大量饮酒可以导致肝损伤,葛花与枳椇子不同比例配伍对酒精性肝损伤大鼠肝细胞具有保护作用。

优化枳椇子的提取工艺

目的 确定枳椇子干浸膏的最佳提取工艺?椒ā∫愿山嗟寐屎透山嘀凶芑仆课副?,对索式提取器提取的方法、渗滤法和浸渍法进行筛选。结果 渗滤法出膏率和干浸膏中黄酮含量最高,索式提取次之,浸渍法出膏率和干浸膏中黄酮含量最低。结论 渗滤法提取干浸膏简单易行,成本低廉,适合批量生产。

酸枣仁、理枣仁及枳椇子的显微鉴别

目的采用性状鉴别、显微鉴别的方法鉴定酸枣仁及主要伪品理枣仁、枳椇子,为酸枣仁药材的鉴定提供依据。方法采用体视显微镜和石蜡切片法观察种子的外观形态、解剖结构和显微结构并拍照。结果酸枣、理枣仁、枳椇子在表面颜色、纵线纹有无、种皮质地等特征上有显著差异,可作为三者的性状鉴别特征;种皮栅状细胞大小、光辉带、晶体有无及晶体的种类可作为显微鉴别特征。结论可通过上述鉴别特征区分酸枣仁及其伪品理枣仁和枳椇子,为酸枣仁药材鉴别提供科学依据。