基于P2X7R/NLRP3通路探讨枳葛口服液改善大鼠酒精性肝损伤的作用机制

目的探讨枳葛口服液改善大鼠酒精性肝损伤的作用机制。方法60只大鼠随机分为正常组,模型组(白酒),枳葛口服液高、中、低剂量组(10、5、2.5 mL/kg),造模及给药12周后处死大鼠,计算肝脏指数,HE染色观察肝组织病理学改变,Western blot法检测肝组织P2X7R、NLRP3、caspase-1、ASC蛋白表达,免疫组织化学法检测肝组织NLRP3蛋白表达,ELISA法检测血清IL-6、IL-18、TNF-α、NF-κB水平。结果与模型组比较,枳葛口服液高剂量组大鼠肝脏指数降低(P<0.05),大鼠肝组织形态正常,基本无脂肪空泡及炎症细胞浸润,肝组织P2X7R、NLRP3、caspase-1、ASC、NLRP3蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),血清IL-6、IL-18、TNF-α、NF-κB水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论枳葛口服液可能通过降低P2X7R/NLRP3通路相关蛋白表达,减轻大鼠炎症因子产生,从而发挥改善酒精性肝损伤的作用。

基于内质网应激PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路探讨枳葛口服液含药血清对乙醇诱导BRL-3A损伤的保护作用及机制研究

目的基于内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)信号通路PERK/eIF2α/ATF4/CHOP探讨枳葛口服液含药血清对BRL-3A大鼠肝细胞损伤的保护作用及机制。方法(1)制备含药血清:SD雄性大鼠随机分为3组:枳葛口服液组、美他多辛组、正常组,分别予以枳葛口服液、美他多辛及生理盐水灌胃,连续干预5天,腹主动脉取血制备含药血清。(2)培养正常BRL-3A大鼠肝细胞,用不同浓度乙醇(1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%、5.0%、7.0%、10.0%)干预细胞24 h后用CCK-8法测定各组细胞存活率。(3)BRL-3A大鼠肝细胞分为正常组,模型组,美他多辛组,枳葛口服液低、中、高剂量组(后简称为低剂量组、中剂量组、高剂量组)。24 h后测定各组细胞上清液中γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,CCK-8检测BRL-3A细胞存活率,Real-time PCR及Western blot检测各组细胞内PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路相关mRNA及蛋白表达水平。结果(1)不同浓度乙醇(1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%、5.0%、7.0%、10.0%)干预细胞24 h后,细胞存活率随着乙醇浓度的升高呈逐渐下降趋势,当乙醇浓度为5%时,细胞存活率明显下降(P<0.05),故选择乙醇浓度为1.0%、1.5%、2.0%、2.5.0%、3.0%、5.0%进行后续实验。(2)与正常组相比,模型组上清液中GGT、LDH含量显著升高(P<0.05),PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路相关因子mRNA和蛋白的表达显著升高(P<0.05),呈现明显肝损伤状态。(3)与模型组相比,枳葛口服液组及美他多辛组以上指标均呈现不同程度的降低,其中枳葛口服高剂量组效果最显著(P<0.05)。结论枳葛口服液含药血清能够改善乙醇诱导的BRL-3A大鼠肝细胞损伤,其机制可能与抑制内质网应激PERK/eIF2α/ATF4/CHOP信号通路有关。

枳葛口服液通过Syk/Ras/ERK信号通路防治酒精性肝损伤机制研究

目的:基于Syk/Ras/ERK信号通路观察枳葛口服液含药血清对酒精性肝损伤大鼠BRL3A肝细胞炎症反应的影响,探讨枳葛口服液防治酒精性肝损伤的相关机制。方法:将正常大鼠BRL3A肝细胞接种于6孔板,贴壁后分为正常对照组、模型组(2.5%乙醇处理)、阳性对照组(美他多辛含药血清加2.5%乙醇)和不同浓度枳葛口服液含药血清(2.5%、5%、10%枳葛口服液含药血清加2.5%乙醇)干预组,24h后酶标法检测各组细胞上清液中GGT(γ-谷氨酰转肽酶)、LDH(乳酸脱氢酶)含量;RT-PCR法测定各组细胞内Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-Fos mRNA表达情况。结果:与正常对照组比较,模型组细胞上清液中GGT、LDH含量显著升高(P<0.01);Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-Fos mRNA表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各干预组以上指标均呈现不同程度的好转,其中10%枳葛口服液含药血清及阳性对照组作用最显著(P<0.01),二者之间未见明显差异(P>0.05)。结论:一定浓度的枳葛口服液含药血清对大鼠肝细胞酒精性肝损伤具有防治作用,其机制可能与抑制Syk/Ras/ERK信号通路活化,从而减轻肝脏炎症相关。

观察酒精性肝病患者应用枳葛口服液+多烯磷脂酰胆碱的疗效及对瘦素(LEP)与血清可溶性黏附分子(sVCAM-1)水平的影响

观察枳葛口服液+多烯磷脂酰胆碱对酒精性肝病的疗效,以及对患者瘦素(LEP)与血清可溶性黏附分子(sVCAM-1)水平的影响。方法 研究对象60例为酒精性肝病患者,入院后以电脑随机法分为A(n30,予多烯磷脂酰胆碱治疗)、B(n30,予枳葛口服液+多烯磷脂酰胆碱治疗)两组,并对比疗效,研究起止2020年6月-2022年6月。结果 临床疗效B组(96.67%)高于A组(80.00%),对比(x24.043,P<0.05)。血清LEP与sVCAM-1指标水平B组(1.35±0.31ng/mL、429.38±25.59ng/mL)均低于A组(1.54±0.39ng/mL、565.84±30.97ng/mL),对比(t2.088、18.604,P均<0.05)。肝功能ALT、AST、ALP及GGT指标水平B组(34.12±4.27U/L、29.38±5.91U/L、47.38±5.61U/L、41.11±5.33U/L)均低于A组(41.74±5.69U/L、38.84±5.97U/L、57.21±5.47U/L、49.01±6.47U/L),对比(t5.866、6.168、6.871、5.161,P均<0.05)。结论 枳葛口服液+多烯磷脂酰胆碱治疗酒精性肝病可有效降低人体血清LEP与sVCAM-1指标水平,并促使肝功能得到改善与修复,最终积极影响疾病预后,值得深入研究及推广应用。

枳葛口服液联合多烯磷脂酰胆碱对酒精性肝病患者肝功能的影响

分析酒精性肝病(ALD)患者使用枳葛口服液、多烯磷脂酰胆碱的效果。方法 从2021年2月-2022年2月的ALD患者中随机抽取62例,双盲法均分为A组(多烯磷脂酰胆碱)和B组(多烯磷脂酰胆碱+枳葛口服液),对比两组效果。结果 B组治疗有效率>A组差异有统计学意义(P<0.05);B组不良反应发生率>A组差异无统计学意义(p>0.05);B组治疗后肝功能指标[白蛋白(44.56±5.23)U/L、总胆红素(20.35±2.51)μmmol/L、丙氨酸转氨酶(41.06±4.23)U/L、谷氨酰转肽酶(42.58±6.74)U/L]、肝纤维化指标[透明质酸(145.31±18.12)μg/L、层黏蛋白(134.21±12.23)μg/L、Ⅲ型前胶原(129.81±15.64)μg/L、Ⅳ型胶原(87.23±25.12)μg/L]、肝脏脂肪含量(225.62±10.54)dB/m、血脂指标[总胆固醇(4.15±0.32)mmol/L、三酰甘油 (1.62±0.28)mmol/L]优于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ALD患者联合服用枳葛口服液、多烯磷脂酰胆碱,改善肝功能的效果更好,疗效更加显著,安全系数较高,值得推广。

枳葛口服液治疗酒精性肝病患者的临床疗效观察

目的:观察枳葛口服液治疗酒精性肝病(ALD)的临床疗效,探索其可能的作用机制。方法:收集120例ALD男性患者随机分为对照组(单纯戒酒)和观察组(戒酒+枳葛口服液)各60例,4周1疗程,共3个疗程。观察各组在治疗前后的临床症状、肝功能、血脂、肝脏脂肪含量,并动态分析血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、瘦素(LEP)、乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)等指标变化。结果:观察组总有效率显著高于对照组,血清ALT、ALP、TG、TC、ADH、ALDH、SOD、MDA、LEP水平改善显著优于对照组(P<0.01或P<0.05)。结论:枳葛口服液可通过增强乙醇代谢酶活性、减轻胰岛素抵抗、改善机体氧化应激反应等机制来实现ALD患者肝功能的改善。

枳葛口服液含药血清对乙醇诱导L-02肝细胞氧化损伤的抗氧化作用

目的探讨枳葛口服液含药血清对乙醇诱导L-02肝细胞氧化损伤的抗氧化作用及其机制。方法将接种于6孔板上的L-02肝细胞分为6组:对照组(10%正常大鼠血清培养)、模型组(2.5%乙醇处理)及4组不同浓度的含药血清组(2.5%乙醇+不同浓度枳葛口服液含药血清),24 h后测定各组细胞活力及细胞内氧化应激指标及抗氧化酶活力变化。结果与对照组比较,模型组的细胞活力、氧化应激指标丙二醛(MDA)、活性氧自由基(ROS)及抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)等指标差异均有统计学意义(P <0.05);与模型组比较,各枳葛口服液含药血清组的以上指标均有所逆转改善,且改善程度与枳葛口服液含药血清浓度呈负相关,即浓度最小组逆转效果最佳,且与对照组比较差异无统计学意义(P> 0.05)。结论一定浓度的枳葛口服液含药血清能显著降低L-02肝细胞中氧化应激指标MDA、ROS含量,增加胞内抗氧化酶SOD活力,从而减轻或抑制乙醇诱导的氧化应激损伤。

基于IRS-1/PI3K/AKT通路探讨枳葛口服液对酒精性肝病大鼠胰岛素抵抗的影响

目的探讨枳葛口服液对酒精性肝病大鼠胰岛素抵抗的影响及可能机制。方法SD雄性大鼠100只随机分为5组,正常组(蒸馏水)、模型组(52%老白干)、枳葛口服液高、中、低剂量组(52%老白干+不同剂量枳葛口服液)灌胃。各组大鼠每四周取尾静脉血测定FBG、FINS,持续16周后处死大鼠,取肝组织行HE染色、免疫组化,取肝脏总蛋白Western blotting检测IRS-1、PI3K、AKT、GLUT-2等IRS-1/PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组FBG、FINS明显升高(P<0.05),IRS-1/PI3K/AKT通路相关蛋白水平均显著降低(P<0.01),HE染色及免疫组化可见细胞内较多的脂肪空泡;与模型组比较,枳葛口服液高、中剂量组以上指标均有所改善(P<0.05),低剂量组以上指标无明显改善(P>0.05)。结论乙醇诱导的酒精性肝损伤大鼠存在着胰岛素抵抗及IRS-1/PI3K/AKT通路的改变,一定剂量的枳葛口服液可能通过IRS-1/PI3K/AKT信号通路改善胰岛素抵抗状态。

枳葛口服液防治大鼠酒精性肝病的相关机制

目的探讨枳葛口服液对酒精性肝病模型大鼠的防治作用及分子机制.方法以酒精灌胃加普通饲料造模酒精性肝损伤大鼠,干预组酒精灌胃同时给予不同剂量(高、中、低剂量)枳葛口服液,对照组酒精灌胃同时给予解酒灵口服液.12 wk后处死动物检测各组大鼠肝功、肝脏指数、脂质代谢、氧化应激及乙醇代谢酶活性等相关指标,同时观察各组肝组织病理学变化.结果相比正常组,除高剂量组外,各组大鼠肝脏指数、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆固醇、三酰甘油、乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)、乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)及CYP450 2E1含量均有明显变化(P<0.01或0.05),且各组肝组织HE染色可见不同程度大面积的泡性脂肪空泡,其中模型组和枳葛口服液低剂量组差异最大(P<0.01).相比模型组,各治疗组以上指标均呈现不同程度地逆转(P<0.01或0.05),其中高剂量组逆转最显著(P<0.01).枳葛口服液中剂量组疗效与解酒灵口服液对照组疗效近似(P>0.05).结论枳葛口服液解酒护肝之功效可能与逆转ADH、ALDH等乙醇代谢酶活性进而抑制自由基、乙醛生成,抑制机体氧化应激,改善大鼠脂质代谢紊乱等密切相关.

枳葛口服液对酒精性肝病大鼠脂质代谢的影响

目的:观察枳葛口服液对酒精性肝病大鼠脂质代谢的影响。方法:以酒精灌胃加普通饲料造模酒精性肝病大鼠,干预组酒精灌胃同时给予不同剂量枳葛口服液,对照组酒精灌胃同时给予解酒灵口服液。12周后处死大鼠,检测血清ALT、AST、TC、TG及肝组织TC、TG含量。结果:相比正常组,除高剂量组外各组肝脏指数、血清ALT、AST、TC、TG及肝组织TC、TG含量均显著升高(P <0.01或0.05),其中模型组和低剂量组升高最为明显(P <0.01)。相比模型组,以上检测指标在高、中、低剂量组及对照组均有所下降,且下降趋势均相同,即枳葛口服液高剂量组下降最为明显(P <0.01),其次是中剂量组及对照组(P <0.05),低剂量组降低最不显著。相比对照组,各指标仅高剂量组有显著性差异(P <0.05)。结论:一定剂量枳葛口服液可通过改善脂代谢紊乱而抑制或降低酒精性肝病的发生。

枳葛口服液含药血清对L-02肝细胞酒精性损伤乙醇代谢酶活性的影响

目的:观察枳葛口服液含药血清对酒精性损伤L-02肝细胞内乙醇代谢酶活性的影响,探讨枳葛口服液对酒精性肝病的防治机制。方法:将正常L-02肝细胞接种于6孔板,贴壁后分为正常对照组、模型组(2.5%乙醇处理)和不同浓度枳葛口服液含药血清(2.5%乙醇+2.5%、5%、10%枳葛口服液含药血清)干预组,24 h后测定各组细胞上清液中AST、LDH水平及细胞内ADH1、ALDH2 mRNA和CYP2E1蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型组上清液中AST、LDH含量及细胞内CYP2E1蛋白表达显著升高,细胞内ADH1、ALDH2 mRNA表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各干预组以上指标均呈现不同程度的逆转,其中10%枳葛口服液含药血清作用最显著(P<0.01)。结论:一定浓度的枳葛口服液含药血清可逆转或阻止酒精性损伤L-02肝细胞内ADH1、ALDH2、CYP2E1等活性的改变,从而抑制氧自由基、乙醛等毒性产物生成,避免肝细胞受损。

枳葛口服液抗大鼠酒精性肝损伤时细胞因子的表达

目的探讨枳葛口服液预防大鼠酒精性肝损伤(alcoholic liver injury,ALI)与体内细胞因子的相关性.方法以单纯酒精灌胃法造模ALI大鼠,干预组酒精灌胃同时给予不同剂量(高、中、低剂量组)枳葛口服液,阳性对照组酒精灌胃同时给予解酒灵口服液,正常组以蒸馏水灌胃.12 wk后腹主动脉取血检测肝功指标谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)及细胞因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-6、IL-10血清含量,同时处死大鼠观察其肝组织病理学变化.结果相比正常组,除高剂量组外,各组大鼠TNF-α、I L-6、I L-10、A LT、A S T血清含量均有明显变化(P<0.01或0.05),且各组肝组织病理学可见不同程度的肿胀肝细胞及红色脂滴.相比模型组,各治疗组以上指标均呈现不同程度地逆转(P<0.01或0.05),其中高剂量组逆转最显著(所有指标P<0.01),几乎接近正常组值;中剂量组疗效与阳性对照组近似(P>0.05).结论枳葛口服液可通过调节大鼠机体细胞因子水平,起到防治ALI发生发展的作用.

枳葛口服液基于AMPK/SREBP-1/Lipin-1通路调控酒精性肝病大鼠糖脂代谢

目的从腺苷酸活化蛋白激酶/固醇调节元件结合蛋白-1/脂素-1 (AMPK/SREBP-1/Lipin-1)通路探索枳葛口服液对酒精性肝病(alcoholic liver disease, ALD)大鼠糖脂代谢的影响机制。方法以单纯酒精灌胃法构建ALD大鼠模型,除正常组灌胃蒸馏水外,其余各组均给予酒精灌胃(1ml/100g),同时干预组灌胃不同剂量(高、中、低剂量)枳葛口服液,对照组灌胃解酒灵口服液,连续12周后取血测定各组大鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TC)、总胆固醇(TG)、空腹血糖(FBG)、胰岛素浓度(INS)含量;油红染色观察肝组织病理学变化,免疫荧光、免疫组化测定AMPK/SREBP-1/Lipin-1通路蛋白表达。结果与正常组相比,模型组ALT、AST、TC、TG、FBG、INS含量均明显升高,胰岛素敏感性(IS)降低,胰岛素抵抗(IR)显著(P<0.01),肝组织脂肪变性明显,AMPK蛋白表达明显抑制,其下游因子SREBP-1及Lipin-1表达增加(P<0.01);与模型组相比,枳葛口服液各剂量组及对照组以上指标均有不同程度的改善,胰岛素敏感性增强,胰岛素抵抗减轻,肝脂质沉积减少,AMPK蛋白激活,其中高剂量组疗效最明显(P<0.01),中剂量组与对照组疗效相当(P>0.05),低剂量组改善不显著(P>0.05)。结论枳葛口服液可能通过AMPK/SREBP-1/Lipin-1通路改善肝组织脂肪变性,增加肝脏对胰岛素的敏感性,减轻胰岛素抵抗,从而改善ALD大鼠糖脂代谢紊乱。