柚皮苷对废用性肌萎缩的影响

目的探讨柚皮苷对小鼠废用性肌萎缩的影响,并分析其潜在机制。方法将32只清洁健康雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、后肢悬吊(HS)组、HS+低剂量柚皮苷组和HS+高剂量柚皮素组。对照组小鼠可进行正常活动,腹腔注射生理盐水,HS组小鼠进行后肢悬吊和腹腔注射生理盐水,HS+低剂量柚皮苷组和HS+高剂量柚皮素组的小鼠进行后肢悬吊,并分别以每天100、200 mg/kg的剂量腹腔注射柚皮苷,每天注射1次,共14天。干预完成后,使用DXA、Micro-CT检测,以及后续进行HE染色、western blotting检测。结果DXA检测结果表明,吊尾组的瘦组织含量较对照组显著降低,而经过柚皮苷干预的两组小鼠的瘦组织含量较吊尾组显著提高。Micro-CT检测结果也证实了柚皮苷可显著改善吊尾引起的瘦组织含量的降低。取材后发现,柚皮苷显著提高了吊尾引起的胫前肌、腓肠肌及股四头肌占体重的比重的减少。同样地,HE染色的结果也证明了吊尾可引起腓肠肌肌纤维横截面积的下降,而柚皮苷干预可以改善这一情况。Western blotting结果表明,柚皮苷干预可缓解吊尾引起的MHC及Myogenin表达水平的下降,同时降低吊尾引起的Mu RF-1及atrogin-1表达水平的升高。结论柚皮苷可以通过调节骨骼肌分化及降解水平从而对废用性肌萎缩发挥保护作用。

柚皮苷制备柚皮苷二氢查尔酮的氢化工艺优化

为探讨柚皮苷二氢查尔酮的制备合成工艺,本文通过单因素试验和响应面试验优化制备过程中的氢化工艺,并对氢化产物进行纯化鉴定研究。得到优化氢化工艺为:反应温度25℃、反应压力0.5 MPa、柚皮苷添加量5.8 g/L、NaOH用量为0.21%、反应溶剂为水、反应时间为7.90 h、催化剂为10%的Pd/C、催化剂用量为0.16%。在此条件下,柚皮苷二氢查尔酮的合成产率为93.11%。对合成产物进行结晶纯化,结晶产物经HPLC分析以及核磁共振技术鉴定为柚皮苷二氢查尔酮,纯度为92%。本研究的优化工艺具有反应温度低、反应压力小、反应时间短、柚皮苷二氢查尔酮产率高、产物容易纯化制备等优点,为工业化生产柚皮苷二氢查尔酮提供了高效的氢化工艺参考。

蒸制和发酵法对化州柚花中柚皮苷柚皮素含量的影响研究

目的:研究蒸制、发酵法对化州柚花中柚皮苷、柚皮素含量的影响,以提升化州柚花的应用价值。方法:采用蒸制、食用菌发酵法炮制化州柚花;以柚皮苷和柚皮素含量为考察指标,采用高效液相色谱法进行定量分析。结果:蒸制2 h、平菇发酵8天、酵母发酵12天时化州柚花中柚皮苷和柚皮素含量均增高;毛霉发酵时柚皮苷含量降低,柚皮素含量升高。柚皮苷和柚皮素的质量在0.09~0.54μg(r=0.9997)、0.05~0.5μg(r=0.9997)范围内与峰面积线性关系良好。结论:适当的蒸制可提高化州柚花中的柚皮苷和柚皮素含量;平菇、酵母、毛霉发酵可改变其柚皮苷、柚皮素含量。为了减缓其寒性,可采用适当的食用菌发酵或蒸制法炮制化州柚花。

负载柚皮苷AKE/GB30网箱在脊柱骨缺损模型修复中的作用及对BMPs-VEGF信号通路的影响

目的:观察负载柚皮苷的AKE/GB30网箱在脊柱骨缺损模型中的修复作用,并基于骨形成蛋白(BMPS)-血管内皮生长因子(VEGF)信号通路探讨该生物材料的作用机制。方法:用牙钻在30只新西兰雄兔L5与L6椎间制作一个7mm×5mm×4mm的缺损,建立脊柱骨缺损模型,制备AKE/GB30网箱。测试负载柚皮苷的AKE/GB30网箱生物力学性能,检测其体外释药行为。将造模成功的新西兰兔随机数字表法分为3组,即空白组、自体骨移植组、骨移植生物材料+柚皮苷联合组,除空白组外分别予以自体骨移植、负载柚皮苷的AKE/GB30网箱进行修复。术后6周、12周每组各取5只兔,微计算机断层扫描(Micro CT)检测骨修复情况[包括骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)和骨小梁数目(Tb.N)];实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨形成蛋白2(BMP2)、VEGF、Runt相关转录因子2(RUNX2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)信使核糖核酸(mRNA)表达;免疫印迹法(WB)检测骨组织BMP2、VEGF、RUNX2、ALP、OCN蛋白表达。结果:AKE/GB30网箱制作成功,且其特性检测结果符合脊柱骨缺损修复要求;负载柚皮苷的AKE/GB30网箱最大抗压强度为28MPa,最大抗压力为15N,6周时其累积释药率达(98.15±1.47)%;各组术后12周时BV/TV、Tb.Th和Tb.N,骨组织BMP2、VEGF、RUNX2、ALP、OCN的mRNA与蛋白表达均高于术后6周时(P<0.05),且自体骨移植组、骨移植生物材料+柚皮苷联合组上述指标均高于空白组(P<0.05),自体骨移植组、骨移植生物材料+柚皮苷联合组上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:负载柚皮苷的AKE/GB30网箱在脊柱骨缺损模型修复的效果等同于自体骨移植,可能是通过促进BMP2、VEGF、RUNX2、ALP、OCN表达实现的。

柚皮中柚皮苷提取工艺优化及贮藏条件

为了获得柚皮苷提取工艺优化参数及找到可靠的贮藏条件,以新鲜沙田柚皮为原料,通过对超声辅助提取柚皮苷的影响因素进行分析,在单因素试验基础上,进行响应面试验优化,并探究贮藏条件对柚皮苷稳定性的影响。结果表明,柚皮苷最佳提取条件如下:液料比为20∶1(mL∶g),超声提取时间为42 min,乙醇体积百分比为65%。在此条件下,柚皮苷得率为(9.96±0.14)%。为减少贮藏过程中柚皮苷损耗,不宜采用干燥条件,而应在-18℃条件下冻藏,但时间应以不超过6个月为宜。

骨碎补总黄酮及其成分柚皮苷促进牵张成骨新骨愈合作用比较

目的中药骨碎补是中医骨伤科的常用药,现代研究表明,骨碎补总黄酮及其成分柚皮苷均能促进牵张成骨过程。通过动物体内实验,观察比较骨碎补总黄酮和柚皮苷对牵张成骨骨愈合的影响。方法取雄性新西兰兔15只,按前期研究造模步骤完成牵张成骨模型兔造模;将模型兔分为3组(n=5),在术后第2天开始分别予生理盐水、骨碎补总黄酮[200 mg/(kg·d)]和柚皮苷[100 mg/(kg·d)]灌胃给药。术后第56天处死动物,观察各组骨标本牵张区骨缺损修复情况,并行显微CT(Micro computed tomography,Micro-CT)检查、生物力学检测。结果与柚皮苷组相比,骨碎补总黄酮组骨骼矿物质密度(Bone mineral density,BMD)、骨表面积组织体积比值(Bone volume to tissue volume,BV/TV)、骨小梁厚度(Trabecular thickness,Tb.Th)、骨小梁数量(Trabecular number,Tb.N)更高,差异有统计学意义(P<0.05),而骨碎补总黄酮组骨小梁分离度(Trabecular separation,Tb.Sp)更小,差异有统计学意义(P<0.05)。与柚皮苷组相比,骨碎补总黄酮组骨标本能承受的最大应力(Maximum stress,N/mm^(2))和最大载荷(Maximum loading,N)均更大(P<0.05)。结论本研究表明,骨碎补总黄酮和柚皮苷对牵张成骨骨愈合均有促进作用,而总黄酮比其成分柚皮苷更显著。

柚皮苷防治骨质疏松症的分子机制

背景:近年研究表明,柚皮苷抗骨质疏松的研究大多停留在体内外实验当中,了解相关信号通路的作用机制以及相关蛋白与某些特定基因的表达是深入了解柚皮苷发挥抗骨质疏松症的重要途径。目前,中医药已被证实在抗骨质疏松方面具有显著作用,柚皮苷是骨碎补中的主要有效成分之一,其抗骨质疏松的有效性及作用机制逐渐得到学者们认可,其临床与基础研究逐渐被大家重视。目的:分析总结柚皮苷在体内外发挥抗骨质疏松作用的研究进展,为下一步研究其相关的作用机制提供一些思路。方法:检索中国知网、万方、维普数据库及PubMed数据库收录的相关文献,中文检索词为“柚皮苷,骨质疏松症,中药单体,发病机制,信号通路,骨髓间充质干细胞,成骨细胞,破骨细胞”等;英文检索词为“Naringin,Osteoporosis,Chinese medicine monomer,pathogenesis,Signal path,Bmscs,Osteoblast,Osteoclast”等,并根据研究需要确立相应的标准,对最终所得文献进行筛选,最终纳入69篇文献进行综述。结果与结论:(1)柚皮苷阻断了富含果糖饮食引起的破骨细胞和脂肪细胞数量的增加以及骨细胞和骨钙素(+)细胞数量的减少、并且通过促进成骨细胞和骨细胞分泌Sema3A,从而激活Wnt/β-catenin信号通路局部增强成骨细胞骨形成,同时抑制破骨细胞生成。(2)柚皮苷通过诱导成骨细胞自噬是一种重要的形式,然而自噬相关蛋白参与成骨细胞分化和骨形成,当成骨细胞缺乏自噬会降低矿化能力,并导致成骨细胞和破骨细胞数量不平衡,从而导致骨量丢失,骨密度下降。(3)搭载柚皮苷的复合支架可为骨缺损修复提供必要的载体,并且柚皮苷还能增加局部骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子的含量,从而加速新生骨组织的生长,具备优异的骨修复性能。(4)柚皮苷可调控ERK、PI3K/Akt和Wnt等相关信号通路来发挥调节骨代谢以及抑制氧化应激等作用,进而调控骨质疏松症,对该病起到良好的防治作用,但目前相关研究深度和广度不足,在未来应基于目前的机制研究,深入探究柚皮苷调控该病不同通路的具体机制及通路间相互作用,将有利于运用柚皮苷治疗骨质疏松症的多元发展。

超高压处理对柚皮海绵层不溶性膳食纤维理化性质、结构和抗氧化活性的影响

该研究解析了超高压处理(600 MPa, 15 min)对3种柚皮海绵层不溶性膳食纤维(insoluble dietary fiber, IDF)理化性质、结构以及抗氧化活性的影响规律。结果表明,超高压处理显著提高了3种柚皮海绵层IDF的溶胀力,其中琯溪蜜柚柚皮海绵层IDF的溶胀力(78.03 mL/g)最高。然而过高的压力会严重破坏膳食纤维的内部结构,导致柚皮海绵层IDF持水力和持油力下降。超高压处理后柚皮海绵层IDF微观结构更加疏松,并显著提高了柚皮海绵层IDF葡萄糖、木糖、阿拉伯糖和半乳糖的含量。通过X-射线衍射发现超高压处理后柚皮海绵层IDF的结晶度降低;傅里叶变换红外光谱显示,超高压处理对柚皮海绵层IDF活性基团种类影响较小,但对其特征峰的吸收强度影响较大。此外,柚皮海绵层IDF经超高压处理后ABTS阳离子自由基和DPPH自由基清除率均有所下降,表明其抗氧化活性降低。以上研究结果表明,超高压处理可改变柚皮海绵层IDF的理化性质、结构和抗氧化活性。该研究为柚皮海绵层IDF的多元化利用提供理论和技术支撑。

柚皮苷通过抑制ERK1/2活化和DRP1表达减轻棕榈酸处理后脂肪细胞炎症

目的探讨柚皮苷(Nar)对棕榈酸(PA)处理后成熟脂肪细胞炎症反应的影响及机制。方法3T3-L1前脂肪细胞经成脂化诱导为成熟脂肪细胞后采用不同浓度(0、25、50、100、200μmol·L^(-1))PA处理细胞48 h,CCK-8检测细胞活力,ELISA检测细胞上清IL-6水平,确定后续实验最佳PA浓度。不同浓度(0、12.5、25、50、100μmol·L^(-1))Nar处理成熟脂肪细胞,CCK-8检测细胞活力,确定后续实验最佳Nar浓度。单独PA处理实验分为2组:Ctrl组、PA组;联合Nar处理实验分为4组:Ctrl组、PA组、Nar组、PA+Nar组;western blotting法检测各组p-ERK1/2和DRP1蛋白表达水平。联合线粒体裂变抑制剂Mdivi-1处理实验分为7组:Ctrl组、PA组、Nar组、Mdivi-1组、PA+Nar组、PA+Mdivi-1组、PA+Nar+Mdivi-1组,ELISA和western blotting法分别检测7组细胞上清IL-6水平和p-ERK1/2、DRP1蛋白表达水平。结果后续实验PA和Nar分别选择50和25μmol·L^(-1)。与Ctrl组比较,PA组p-ERK1/2和DRP1表达水平均升高(P<0.001)。与PA组比较,PA+Nar组、PA+Mdivi-1组、PA+Nar+Mdivi-1组IL-6水平、p-ERK1/2和DRP1表达均更低(P<0.05);与PA+Nar组比较,PA+Nar+Mdivi-1组IL-6水平差异无统计学意义(P>0.05),但p-ERK1/2和DRP1表达水平均降低(P<0.05)。结论Nar可减轻PA处理后成熟脂肪细胞的炎症反应,其机制是通过抑制ERK1/2激活和DRP1表达实现的。

柚皮苷可通过多种途径修复猪胸膜肺炎放线杆菌诱导的小鼠肺上皮屏障损伤

旨在研究柚皮苷(naringin,NAR)对猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)感染引起小鼠肺上皮屏障损伤的防治效果。将40只6~8周龄的雄性昆明小鼠随机分为5组,分别为对照组、模型组、NAR低剂量组、NAR中剂量组以及NAR高剂量组。连续灌胃给药8 d,空白组和模型组给予生理盐水。在第7天,小鼠以气管插管灌注的方式感染APP(1×10^(8)CFU·mL^(-1),100μL·只^(-1)),空白组灌注等体积无菌生理盐水,各组小鼠于造模后48 h处死,采样并评估NAR的防治作用。通过X射线图像表明,NAR可降低小鼠肺泡灌洗液中APP载菌量,并且能够缓解肺部病理损伤;此外,NAR干预后,可逆转由于APP诱导的小鼠肺组织中ZO-1、Occludin-1和Claudin-1紧密连接蛋白的表达降低,从而促进肺上皮屏障修复。为进一步探讨NAR促进肺上皮屏障修复的机制,研究发现NAR不仅减少小鼠肺组织中促炎因子IL-6和TNF-α的分泌,还增加了抑炎因子IL^(-1)0表达,同时能够增加抗氧化酶SOD2和Hmox1表达,表明NAR能够增强机体抗炎及抗氧化能力;此外,NAR可抑制TGF-β1/Smad2/3通路,减少由APP诱导的肺纤维组织增生;通过分析凋亡相关关键蛋白和Tunel荧光标记发现,NAR可呈剂量依赖性的减少细胞凋亡。综上所述,NAR可通过抗炎、抗氧化、抗纤维化和抗凋亡等途径,修复小鼠肺上皮屏障损伤,从而有效逆转APP诱导的肺部炎症损伤、发挥防治APP的功效。

柚皮苷调节NAFLD小鼠脂代谢紊乱机制研究

目的探讨柚皮苷(nar)对高脂饮食(HFD)诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠肝组织脂代谢紊乱的影响。方法将24只C57BL/6J小鼠随机分为对照组(n=8)、高脂饮食组(HFD组,n=8)和柚皮苷干预组(HFD/Nar干预组,n=8)。采用转录组测序寻找药物干预差异基因富集通路,采用qPCR和Western Blot法检测肝组织脂代谢相关基因及其蛋白表达。结果与对照组比,模型组小鼠体质量增加了57.8%(P<0.01),而经柚皮苷干预后,小鼠体质量较模型组降低了13.5%(P<0.01);模型组小鼠肝组织TG和TC水平分别为(3.5±0.4)mmol/g protein和(3.1±0.5)mmol/g protein,均显著高于对照组[分别为(1.0±0.3)mmol/g protein和(0.8±0.1)mmol/g protein,P<0.01],而HFD/Nar干预组肝组织TG和TC较模型组显著下降[分别为(2.1±0.4)mmol/g protein和(1.11±0.3)mmol/g protein,P<0.05];转录组测序KEGG富集分析显示柚皮苷对与脂代谢通路相关的9条通路有显著影响,表现为柚皮苷干预可显著下调肝组织固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、过氧化物酶体增殖激活受体(PPAR-γ)、CD36和肝型脂肪酸结合蛋白1(FABP1)表达(P<0.05),而上调PPAR-α和重组肉毒碱棕榈酰转移酶1a(CPT-1A)表达(P<0.05)。结论柚皮苷可明显改善NAFLD小鼠肝内脂质沉积,可能影响了有关基因表达而减少了脂质摄取、合成,加快脂肪酸氧化有关。

柚皮苷对哮喘模型小鼠气道炎症细胞凋亡的促进作用及其机制

目的探讨柚皮苷对哮喘模型小鼠气道炎症细胞凋亡的调节作用及其与苦味受体(Tas2rs)的关系。方法36只BALB/c小鼠随机分为6组(n=6):空白对照组、卵清蛋白模型组(OVA)、地塞米松组(10 mg·kg^(-1),阳性对照药物)、柚皮苷低、中、高剂量组(10、20、40 mg·kg^(-1))。除空白对照组外,各组小鼠均采用OVA诱导气道哮喘。溶媒、地塞米松或柚皮苷连续灌胃6天,测定小鼠呼吸功能及肺泡灌洗液细胞数量,观察小鼠肺及气道形态,测定呼吸系统阻力(Rrs)、肺的弹性阻力(Ers)和呼吸顺应性(Crs),测定肺组织相关促凋亡因子mRNA表达水平,测定Tas2rs及其下游基因mRNA表达水平。结果与OVA模型组比较,柚皮苷可以剂量依赖性降低Rrs和Ers,增加Crs,降低白细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数量;与OVA模型组比较,柚皮苷高剂量组小鼠肺组织炎性细胞浸润显著减少,肺、气道组织的Tas2r108、Tas2r135和Tas2r143及其下游靶基因α-gust和Trpm5的mRNA表达水平显著降低,促凋亡因子P53、Bax和Casp3的mRNA表达水平均增加,而凋亡抑制因子Bcl2的mRNA表达水平降低。结论柚皮苷预防性给药可促进哮喘小鼠气道Tas2rs信号活化,降低气道炎性细胞数量,减轻气道损伤。柚皮苷作为Tas2rs激动剂可作为潜在的抗哮喘药物进行开发。

高效液相色谱法测定橘红枇杷片中柚皮苷的含量

(目的)建立用高效液相色谱法测定橘红枇杷片中柚皮苷含量的方法;(方法)除去橘红枇杷片糖衣后,研细,加入甲醇,加热回流,放冷,补足损失质量,过滤,取滤液进样。色谱仪为安捷伦HP-1100型,色谱柱为Agilent ZORBAX C 18柱,紫外测定检测波长选定为283 nm,流动相为乙腈-0.1%磷酸(体积比20∶80),流速为1 mL/min。结果表明,在柚皮苷质量浓度为7.237~115.8μg/mL范围内,线性关系良好(r=0.99994,n=6),方法回收率为98.68%(n=6)。(结论)本方法准确、灵敏度高,重现性好,可作为橘红枇杷片质量控制的检测方法。

柚皮素介导Ras同源基因家族成员A/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1通路对人结直肠癌HT-29/奥沙利铂耐药细胞株的影响

目的探讨柚皮素介导Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(ROCK1)通路对人结直肠癌细胞株HT-29对奥沙利铂(L-OHP)化疗敏感性的作用。方法取人结直肠癌细胞株HT-29,建立稳定的耐药细胞株HT-29/L-OHP,接种至96孔板中,调整细胞浓度至1.0×10^(5)个/mL,设置4组,分别为空白组、L-OHP组、柚皮素组、柚皮素+L-OHP组,每组6个复孔。L-OHP组予以5μmol/L L-OHP 2μL,柚皮素组予以100μmol/L柚皮素2μL,柚皮素+L-OHP组予以100μmol/L柚皮素2μL+5μmol/L L-OHP 2μL,空白组仅予以无菌0.9%氯化钠注射液。噻唑兰(MTT)法检测各组细胞活力和半抑制浓度(IC50);实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测各组细胞RhoA、ROCK1、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、抗凋亡因子B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)mRNA表达;蛋白免疫印迹法检测各组细胞RhoA、ROCK1、MRP1、Bcl-2蛋白表达。结果成功构建人结直肠癌耐药细胞株HT-29/L-OHP;与空白组和L-OHP组比,柚皮素组和柚皮素+L-OHP组细胞增殖能力下降,IC50值降低,RhoA、ROCK1、MRP1、Bcl-2 mRNA及蛋白表达降低,比较差异均有统计学意义(P<0.05),且空白组上述指标与L-OHP组比较、柚皮素组上述指标与柚皮素+L-OHP组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论柚皮素能显著降低人结直肠癌耐药细胞株HT-29/L-OHP的增殖能力,提高其对L-OHP的化疗敏感性,推测与抑制RhoA、ROCK1、MRP1、Bcl-2的表达有关。

柚皮苷对老龄广西麻鸡种公鸡繁殖性能的影响

试验旨在探究基础日粮中添加不同浓度的柚皮苷对老龄广西麻鸡种公鸡繁殖性能的影响。随机选取60只健康、体况相近的70周龄广西麻鸡种公鸡,随机分为4组,每组15只鸡。对照组饲喂基础日粮,对照组、N1组、N2组、N4组分别在基础日粮中添加0.1%、0.2%、0.4%柚皮苷。正式试验期60d。结果显示:试验第30d后,各试验组种公鸡精液量、精子密度、精子直线运动率及精子活率均显著高于对照组(P<0.05)。试验第60d,N2、N4组种公鸡精子的曲线运动速率(VCL)、平均运动速率(VAP)、直线运动速率(VSL)、头部摆动振幅(ALH)均显著高于对照组(P<0.05)。N2组的受精率显著高于对照组(P<0.05),各试验组的健雏率均显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,试验第30d时,3个试验组种公鸡血清促黄体素(LH)、睾酮(T)水平均显著提高(P<0.05),N2组促卵泡激素(FSH)水平显著提高(P<0.05);试验第60d时,N2组种公鸡血清FSH、LH水平显著提高(P<0.05),3个试验组种公鸡血清T水平均显著增加(P<0.05)。研究表明,柚皮苷可通过提高老龄广西麻鸡种公鸡的生殖激素水平,改善精液品质及精子运动性能,从而改善其繁殖性能,其中柚皮苷添加量为0.2%时对老龄广西麻鸡种公鸡繁殖性能改善的效果相对更好。

处红柚和翡翠柚杂交后代叶片中柚皮苷和野漆树苷的检测与分析

为不同用途的柑橘育种及进一步从分子水平探明柑橘中类黄酮物质的合成与代谢情况提供参考,以浙江丽水市多年实生选种选育出的处红柚和翡翠柚优良株系及其杂交后代为材料,使用高效液相色谱法检测不同样品中类黄酮物质的含量,分析亲本与杂交后代的柚皮苷与野漆树苷积累情况及二者间的合成关系,促进柚皮苷及野漆树苷药用资源的综合开发利用。结果表明:样品中柚皮苷含量为20.75~3556.32μg/g,野漆树苷含量为64.90~585.00μg/g,杂交后代中野漆树苷含量和柚皮苷含量差异较大,其柚皮苷含量大多低于亲本,而野漆树苷含量大多高于亲本。柚皮苷含量与野漆树苷含量之间相关性不显著,二者的合成相对比较独立。

柚皮苷诱导卵巢癌细胞凋亡的机制研究

目的:探究柚皮苷在卵巢癌中的抗肿瘤活性并评估其潜在信号传导机制。方法:⑴将雌性Balb/c裸鼠随机分为6组:阴性对照组(PBS溶液)、0.5 mg·kg^(-1)柚皮苷组(柚皮苷0.5 mg·kg^(-1))、1.0 mg·kg^(-1)柚皮苷组(柚皮苷1.0 mg·kg^(-1))、2.0 mg·kg^(-1)柚皮苷组(柚皮苷2.0 mg·kg^(-1))、阳性对照组(顺铂25.0 mg·kg^(-1))、联合用药组(顺铂25.0 mg·kg^(-1)、柚皮苷2.0 mg·kg^(-1)),取对数生长期的SKOV3细胞皮下注射Balb/c裸鼠,当肿瘤大小达到50 mm3时,按照分组情况在腹膜内注射相应试剂。给药10 d后处死并切除小鼠整个肿瘤,测量肿瘤大小及体积并通过RT-PCR检测各组肿瘤凋亡相关基因mRNA的表达。⑵将SKOV3细胞随机分为4组:阴性对照组(PBS溶液)、10μmol·L^(-1)柚皮苷组、20μmol·L^(-1)柚皮苷组、40μmol·L^(-1)柚皮苷组。ELISA检测各组相关蛋白表达。⑶取对数生长期SKOV3细胞,以每孔2×10^(5)个细胞接种于6孔板中。将SKOV3细胞随机分8组:空白对照组(不导入质粒及siRNA)、空质粒对照组、siRNA对照组、NF-κB过表达组、NF-κB siRNA组、P38MAPK过表达组、P38MAPK siRNA组、PKC抑制剂组。RT-PCR检测各组细胞P-gp和ERK mRNA表达。⑷对NF-κB过表达组和P38MAPK过表达组SKOV3细胞进行柚皮苷干预,测量各组细胞P-gp和ERK mRNA表达。结果:⑴给药10 d后,肿瘤体积及重量由大到小依次为阴性对照组、0.5 mg·kg^(-1)柚皮苷组、1.0 mg·kg^(-1)柚皮苷组、2.0 mg·kg^(-1)柚皮苷组、阳性对照组、联合用药组,且与阴性对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。⑵与阴性对照组相比,2.0 mg·kg^(-1)柚皮苷组、阳性对照组、联合用药组Caspase-3和Caspase-7 mRNA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与阴性对照组相比,0.5 mg·kg^(-1)柚皮苷组、1.0 mg·kg^(-1)柚皮苷组、2.0 mg·kg^(-1)柚皮苷组、阳性对照组、联合用药组Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与阴性对照组相比,2.0 mg·kg^(-1)柚皮苷组、阳性对照组、联合用药组Cyclin D1、C-Myc和Survivin mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。⑶与阴性对照组相比,40μmol·L^(-1)柚皮苷组PKC、P38MAPK、ERK、NF-κB、P-gp、COX-2蛋白表达降低,Caspase-3和Caspase-7蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。⑷与空白对照组相比,空质粒及siRNA对照组的ERK和P-gp mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),P38MAPK过表达组ERK mRNA表达增加,P38MAPK siRNA组及PKC抑制剂组ERK mRNA表达降低,NF-κB过表达组P-gp mRNA表达增加,NF-κB siRNA组及P-gp mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。⑸与空质粒组比较,柚皮苷+P38MAPK过表达组PKC、ERK、COX-2 mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),P38MAPK mRNA无明显差异;柚皮苷+NF-κB过表达组PKC、NF-κB、P-gp表达降低,Caspase-3、Caspase-7表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:柚皮苷能够通过抑制PKC所介导的不同信号路径调控卵巢癌细胞凋亡与生长,并具有剂量依赖性。

柚皮总黄酮提取工艺优化及抑菌研究

以福建琯溪蜜柚柚皮为材料,以复合酶辅助超声波法对柚皮中的总黄酮进行提取工艺的探究,并采用十字交叉法研究其抑制效果。以总黄酮提取率为指标进行单因素试验,探究复合酶(纤维素酶∶果胶酶)配比、复合酶用量、pH值、酶解温度、酶解时间、超声时间和料液比这7个单因素因子对柚皮中总黄酮提取率的影响。在此基础上,根据总黄酮提取率的最大值选定具有显著影响的4个因子依次为:复合酶用量、超声时间、酶解时间、料液比。采用正交试验法,对柚皮中总黄酮的最优提取工艺进行研究。结果显示,采用复合酶辅助超声波法提取柚皮中总黄酮的最优工艺为:复合酶(纤维素酶∶果胶酶)配比为2︰1、复合酶用量为2%、pH值为4.0、酶解温度为50.0℃、酶解时间为45 min、超声时间为20 min、料液比为1︰25 g/mL,在此条件下,柚皮中总黄酮提取率为1.80%;柚皮中总黄酮对玉米大斑病菌、兰花尖子孢病菌、兰花炭疽病菌、辣椒疫霉菌均有抑菌作用,抑制作用由大到小依次为:玉米大斑病菌>辣椒疫霉菌>兰花尖子孢病菌>兰花炭疽病菌,对玉米的抑制率最高达83.14%。

柚皮苷对激素性股骨头坏死大鼠VEGF表达的影响

针对激素性股骨头坏死(SANFH)模型大鼠,本文研究旨在分析柚皮苷对VEGF表达产生的影响。 方法 40只大鼠按照随机的方法分成五个小组,第一组为SANFH模型组,第二组为空白对照组,剩余为柚皮苷高、中、低剂量不等的三个组。对高、中、低剂量不等的3个组的大鼠分别灌胃,在此过程中分别使用6.44,9.66,12.88 g/kg的柚皮苷混悬液,模型组与空白对照组均灌服剂量对等的蒸馏水,灌服之后的第8周将所有的大鼠处死,然后对血浆VEGF以及股骨头的水平分别进行测定。结果 与空白对照组相比,SANFH模型组VEGF表达相对更低,与SANFH模型组相比,低、中、高剂量组的VEGF表达全部更高,剂量不断增加后,VEGF的表达明显增高,并且柚皮苷低、中、高剂量组组间比较有统计学意义(p<0.05)。结论 柚皮苷可以通过调节VEGF的表达,促进血管的新生,达到防治SANFH的效果。

柚皮苷抑制骨质疏松大鼠骨组织的铁沉积及细胞凋亡

背景:有研究发现,铁代谢异常诱发的骨组织细胞异常凋亡在骨质疏松进展中发挥重要作用。目的:探讨柚皮苷对骨质疏松大鼠骨组织铁代谢与细胞凋亡的影响。方法:取50只2月龄雌性SD大鼠,采用随机数字表法分成5组,每组10只:除假手术组外,骨质疏松组、柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组均通过切除双侧卵巢建立骨质疏松模型。造模8周后,柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组分别灌胃给予100,400 mg/(kg·d)的柚皮苷,柚皮苷高剂量+DKK-1组灌胃给予400 mg/(kg·d)的柚皮苷+皮下注射25 mg/(kg·d)的Wnt1信号通路抑制剂DKK-1,连续给药7 d。给药结束后进行相关指标的检测。结果与结论:①与骨质疏松组相比,柚皮苷可提升大鼠骨密度及血清钙、超氧化物歧化酶水平(P<0.05),降低血清中骨钙素、丙二醛、磷水平(P<0.05),DKK-1可部分抑制柚皮苷的干预作用(P<0.05);②Micro-CT扫描、苏木精-伊红与TUNEL染色显示,与骨质疏松组相比,柚皮苷可显著改善大鼠骨微结构、降低细胞凋亡率,DKK-1可部分抑制柚皮苷的干预作用;③免疫荧光染色显示,与骨质疏松组相比,柚皮苷可降低胫骨组织内活性氧含量、抗酒石酸酸性磷酸酶的表达,提升碱性磷酸酶的表达(P<0.05),DKK-1可部分抑制柚皮苷的干预作用(P<0.05);④普鲁士蓝染色、免疫组化染色显示,与骨质疏松组相比,柚皮苷可降低骨组织与肝组织内的铁沉积、骨组织铁吸收相关蛋白受体1的表达(P<0.05),提升骨组织膜铁转运蛋白1的表达(P<0.05),DKK-1可部分抑制柚皮苷的干预作用(P<0.05);⑤胫骨标本PCR与Western blot检测显示,与骨质疏松组相比,柚皮苷可降低抗酒石酸酸性磷酸酶、铁吸收相关蛋白受体1和Bax的表达(P<0.05),提升碱性磷酸酶、膜铁转运蛋白1、Bcl-2、Wnt1和β-catenin的表达(P<0.05),DKK-1可部分抑制柚皮苷的干预作用(P<0.05);⑥结果表明,柚皮苷可通过减少骨组织中的铁沉积及细胞凋亡率抑制骨质疏松的进展,这可能与激活Wnt1信号通路有关。